專利名稱：旋光純腺甘甲硫氨酸制備的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物化學(xué)、微生物發(fā)酵、微生物藥學(xué)中有機化合物的制備方法，特別涉及一種旋光純腺甘甲硫氨酸制備的方法。
背景技術(shù)：
SAMe又名腺甘甲硫氨酸，腺甘蛋氨酸，活性甲硫腺甘，是生物體內(nèi)甲基化反應(yīng)的供體。具有抗氧化、保肝、抗抑郁、治療關(guān)節(jié)炎、癌癥等多種疾病的用途。已廣泛用于醫(yī)藥臨床、食品保健。
許多有機化合物以旋光性結(jié)構(gòu)形式存在，也就是，它們有能力使水平極化光的平面旋轉(zhuǎn)。在描述一種旋光性化合物時，前綴D和L或R和S用于表示分子手性中心的絕對構(gòu)造。具有旋光特性的化合物在生物活性方面具有較大的差異，一個典型的例子是β腎上腺素調(diào)節(jié)物的左旋結(jié)構(gòu)體，即心得安，已經(jīng)知道它的藥效是其右旋結(jié)構(gòu)體的100多倍。
SAMe具有(R，S)和(S，S)兩種光學(xué)結(jié)構(gòu)，試驗證明，(R，S)-SAMe不但沒有生物活性，而且對(S，S)-SAMe具有抑制作用美國專利 申請?zhí)?0020025926。因此，采用旋光純的(S，S)-SAMe在醫(yī)藥應(yīng)用上具有顯而易見的好處。
商業(yè)上使用的SAMe可以通過發(fā)酵技術(shù)獲得，其純度為60-80％。(即，最終產(chǎn)物包括60-80％活性成份或者(S，S)-SAMe和20-40％的非活性成份或者(R，S)-SAM e.)(Gross，A.，Geresh，S.，and Whitesides，Gm(1983)Appl.Biochem.Biotech.8，415.)。據(jù)報到生物酶合成方法可以集中產(chǎn)生超過60％的非活性異構(gòu)體。(Matos，JR，Rauschel FM，Wong，CH.S-Adenosylmethionine關(guān)于化學(xué)和酶催化合成的研究。Biotechnology and Applied Biochemistry 9，39-52(1987)。已有報到光學(xué)異構(gòu)體的分離技術(shù)可以解決活性異構(gòu)體SAMe的純度問題(Matos，JR，Rauschel FM，Wong，CH.S-Adenosylmethionine關(guān)于化學(xué)和酶催化合成的研究。Biotechnology and Applied Biochemistry 9，39-52(1987)；現(xiàn)有解決SAMe光學(xué)純度的技術(shù)由于成本太高而不具有商業(yè)價值。另外，可以想到運用立體選擇性合成方法合成生物活性異構(gòu)體但是這種方法現(xiàn)今還沒有成熟。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題是在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加B族維生素，改變微生物發(fā)酵的代謝過程，從而可以廉價獲得旋光純的(S，S)-SAMe的旋光純腺甘甲硫氨酸制備的方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是旋光純腺甘甲硫氨酸制備的方法，包括1、產(chǎn)SAMe的微生物培養(yǎng)基中加入0.2‰～1‰的B族維生素2、產(chǎn)SAMe的微生物在上述培養(yǎng)基中發(fā)酵3、發(fā)酵產(chǎn)物用酸提取4、提取液采用陽離子樹脂吸附5、吸附后的樹脂用1N對甲苯磺酸洗脫6、洗脫液經(jīng)過脫色介質(zhì)脫色7、濃縮液經(jīng)冷凍干燥或其它干燥工藝干燥，即得目的產(chǎn)物。
培養(yǎng)基可以是大腸桿菌標準培養(yǎng)基LB、酵母標準培養(yǎng)基YPD或其他微生物培養(yǎng)基，微生物可以是大腸桿菌、枯草桿菌、酵母、霉菌或其它可以產(chǎn)生SAMe的微生物。
本發(fā)明的有益效果是由于在在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加B族維生素，改變微生物發(fā)酵的代謝過程，使得本發(fā)明的制備方法簡單易行，而且成本低廉。
具體實施例方式
以下為本發(fā)明的2個應(yīng)用實例，2個實例是為了更好闡述本發(fā)明，而不僅僅是限于2個實例。
實施例1旋光純腺甘甲硫氨酸制備的方法，包括1、大腸桿菌菌株ATCC2385接種到LB斜面培養(yǎng)基，37攝氏度培養(yǎng)過夜。
2、從上述斜面接種ATCC2385到100毫升含0.5‰維生素B6的LB液體培養(yǎng)液中，37攝氏度振蕩培養(yǎng)36小時，(S，S)-SAMe含量為3mg/ml.
3、5000rpm離心收集細胞，用飽和生理鹽水洗滌兩次。
4、加入1.5N的高氯酸10毫升，懸浮沉淀，提取細胞中的(S，S)-SAMe，注意要經(jīng)常振蕩，提取率為95％。
5、離心收集上清液，提取液用10g陽離子樹脂732吸附，用0.01N的醋酸洗到洗脫OD260＜0.1，用去離子水30毫升洗柱。
6、用1N的對甲苯磺酸洗脫，收集洗脫液致OD260＜0.1，得洗脫液50毫升，(S，S)-SAMe含量為5mg/ml，總收率為83％。
7、用5g活性碳對洗脫液脫色，洗脫液有淡黃色轉(zhuǎn)為無色，用去離子水25毫升分次洗活性炭，洗脫液合并為74毫升。
8、洗脫液中加入0.4g對甲基苯磺酸，冷凍干燥，得(S，S)-SAMe對甲苯磺酸鹽0.68g?？偸章蕿?0％。(S，S)-SAMe活性成份含量為35.3％實施例2菌種采用畢赤酵母，培養(yǎng)基為YPD，培養(yǎng)溫度為30度，時間為72小時，培養(yǎng)基中維生素B12含量為0.8‰，其余與實施例1相同。
權(quán)利要求
1.旋光純腺甘甲硫氨酸制備的方法，采用微生物發(fā)酵方法，發(fā)酵方法包括制造(S，S)-SAMe的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基可以是大腸桿菌標準培養(yǎng)基LB、酵母標準培養(yǎng)基YPD或其他微生物培養(yǎng)基，其發(fā)酵和發(fā)酵產(chǎn)物的后續(xù)處理工藝包括產(chǎn)SAMe的微生物在上述培養(yǎng)基中發(fā)酵；發(fā)酵產(chǎn)物用酸提取；提取液采用陽離子樹脂吸附；吸附后的樹脂用1N對甲苯磺酸洗脫；洗脫液經(jīng)過脫色介質(zhì)脫色；濃縮液經(jīng)冷凍干燥或其它干燥工藝干燥，即得目的產(chǎn)物，其特征是培養(yǎng)基中含有0.2‰～1‰的B族維生素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的旋光純腺甘甲硫氨酸制備的方法，其特征是優(yōu)選的B族維生素含量為0.5‰～0.8‰。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的旋光純腺甘甲硫氨酸制備的方法，其特征是微生物可以是大腸桿菌、枯草桿菌、酵母、霉菌或其它可以產(chǎn)生SAMe的微生物。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物化學(xué)、微生物發(fā)酵、微生物藥學(xué)中有機化合物的制備方法，特別涉及一種旋光純腺甘甲硫氨酸制備的方法。解決了已有的手性分離和選擇性合成旋光純腺甘甲硫氨酸成本太高的缺陷。技術(shù)解決方案是旋光純腺甘甲硫氨酸制備的方法，采用微生物發(fā)酵方法，發(fā)酵方法包括制造(S，S)－SAMe的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基可以是大腸桿菌標準培養(yǎng)基LB、酵母標準培養(yǎng)基YPD或其他微生物培養(yǎng)基，其發(fā)酵和發(fā)酵產(chǎn)物的后續(xù)處理工藝包括產(chǎn)SAMe的微生物在上述培養(yǎng)基中發(fā)酵；發(fā)酵產(chǎn)物用酸提??；提取液采用陽離子樹脂吸附；吸附后的樹脂用1N對甲苯磺酸洗脫；洗脫液經(jīng)過脫色介質(zhì)脫色；濃縮液經(jīng)冷凍干燥或其它干燥工藝干燥，即得目的產(chǎn)物，其特征是培養(yǎng)基中含有0.2‰～1‰的B族維生素。主要用于旋光純的(S，S)－SAMe的制備。
文檔編號C12N1/20GK1483828SQ0213701
公開日2004年3月24日 申請日期2002年9月16日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月16日
發(fā)明者黃曉惠 申請人:上海青瑞生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司