專利名稱：一種降低人體血液中內(nèi)毒素水平的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物，具體為一種降低人體血液中內(nèi)毒素水平的藥物。
背景技術(shù)：
“腸源性內(nèi)毒素血癥學(xué)說”認(rèn)為各種致肝損傷因素(如肝炎病毒、乙醇、藥物與向肝性毒物等)除通過各自的病因及發(fā)病機(jī)制造成“原發(fā)性肝損傷”外，在肝病發(fā)生發(fā)展過程中機(jī)體大多出現(xiàn)腸源性內(nèi)毒素血癥(造成人體血液中內(nèi)毒素水平大幅度提高)。通過大量研究證明，腸源性內(nèi)毒素血癥在肝病發(fā)生發(fā)展中起著決定性的作用從而提出“腸源性內(nèi)毒素血癥學(xué)說”。此理論被評為1995年山西省科技成果一等獎(編號951011)，并在《健康報》(1994，8，17)頭版顯著地位作了報道，后被臺灣《醫(yī)藥導(dǎo)報》轉(zhuǎn)載，刊于《中華肝臟病雜志》(1995，3(3)134)“專論”欄內(nèi)，隨后多次被國內(nèi)一級刊物引用，同時也得到國際上的認(rèn)可，先后被《GUT》(2005，54(4)556和2005，54(2)289)、《AMERICAN JOURNAL OF PATHOLOGY》(2004，164(6)1959)和《WORLD JOURNAL OF GASTROENTEROENTEROLOGY》(2003，9(8)1824和2003，9(3)622)等三家影響力較大的世界級刊物引用。
腸源性內(nèi)毒素血癥導(dǎo)致肝損傷的作用大體可歸納為(1)可使患病機(jī)體的細(xì)胞免疫功能低下，對病毒性肝炎而言不利于病毒的殺滅與清除；(2)內(nèi)毒素可激活枯否細(xì)胞釋放大量細(xì)胞因子、炎性介質(zhì)、TNFα(腫瘤壞死因子)、NO(一氧化氮)、內(nèi)皮素等發(fā)揮其細(xì)胞毒作用直接損害肝細(xì)胞；(3)內(nèi)毒素可使肝臟發(fā)生微循環(huán)障礙，致使肝組織發(fā)生缺血缺氧而致肝細(xì)胞變性和壞死。由此可見，腸源性內(nèi)毒素血癥可由于上述作用使肝臟發(fā)生“繼發(fā)性肝損傷”，其對肝病的發(fā)展與轉(zhuǎn)歸有著重要的作用和影響。腸源性內(nèi)毒素血癥重者往往引起過度炎癥反應(yīng)，發(fā)生嚴(yán)重肝壞死，而導(dǎo)致重癥肝炎，甚至發(fā)生急性肝功能衰竭，輕者可出現(xiàn)反復(fù)與持續(xù)的肝細(xì)胞損傷和相伴隨的炎癥細(xì)胞浸潤，進(jìn)而發(fā)生肝纖維化，相繼發(fā)展為肝硬變以至肝癌，往往以慢性肝功能衰竭而告終。因此，在治療原發(fā)性肝損傷的同時應(yīng)注重腸源性內(nèi)毒素血癥的治療。病毒性肝炎或肝病患者往往都存在免疫耐受，而使病毒得不到清除，病情遷延不愈，臨床上多使用干擾素、拉米夫定抗病毒藥物，但通過多年的實(shí)踐，對干擾素的評價并不理想(轉(zhuǎn)陰率僅20％-40％)；拉米夫定通過臨床觀察服藥時間長易誘發(fā)HBV基因變異，也無抗肝纖維化作用，因此通過降低腸源性內(nèi)毒素血癥，使肝病患者自身細(xì)胞免疫功能得以改善，從而有利于肝炎病毒的清除，為肝炎的治療提供一條新的途徑。治療與肝病有關(guān)的內(nèi)毒素血癥臨床上過去使用新霉素作對癥治療，由于它對肝損傷無治療作用，是一種僅治標(biāo)而不治本的藥物，中斷服藥內(nèi)毒素即會升高，若長期服用又對肝、腎功能有損害作用，現(xiàn)已被淘汰。乳果糖口服可酸化腸道，干擾細(xì)菌繁殖，其通便作用能使腸道細(xì)菌同內(nèi)毒素一起排出而降低血漿內(nèi)毒素作用，但無法阻斷殘存于體內(nèi)內(nèi)毒素生物學(xué)效應(yīng)的發(fā)揮，無法改善由腸源性內(nèi)毒素血癥介導(dǎo)的肝臟微循環(huán)障礙。
專利號為981047483、發(fā)明名稱為“雙利肝沖劑及其制備方法”的中國專利公開了一種治療肝病的藥物。該藥物由丹參和大黃以一定比例煎制而成。從該中國專利的說明書中可以看出，該藥物也是在肝病發(fā)生發(fā)展的“腸源性內(nèi)毒素血癥學(xué)說”基礎(chǔ)上研制的，該藥物也具有減輕腸源性內(nèi)毒素血癥，同時又能抗肝損傷、改善肝功能的作用。該藥物(簡稱雙利肝)是由原生的中藥材丹參和大黃通過煎制而成。對其內(nèi)是哪一種有效成份使該藥物(雙利肝)具有減輕腸源性內(nèi)毒素血癥功能的藥學(xué)基理不甚清楚。而且該雙利肝沖劑口服用藥劑量大，對一些重癥肝病并伴隨消化道出血患者不適用，使該藥物的適用患者人群受到限制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對981047483專利口服用藥劑量大，適用患者人群受到限制等問題，以981047483專利為基礎(chǔ)，明確了丹參、大黃具有對癥藥學(xué)作用的有效成份，并以精提的有效成份為組份，提供了一種新的降低人體血液中內(nèi)毒素水平的藥物。
本發(fā)明是采用如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種降低人體血液中內(nèi)毒素水平的藥物，它是由下列重量配比的原料制成大黃酸1-25份，丹參素1-10份。
大黃是清熱解毒藥的典型代表，具有多種藥理效應(yīng)，大黃酸是大黃的主要有效單體成分之一，屬單蒽核類1，8-二羥基蒽醌衍生物，已被證明能有效降低急性肝損傷小鼠血清酶水平，并能通過清除活性氧和抗脂質(zhì)過氧化等作用而防止肝纖維化的發(fā)生，并且通過實(shí)驗(yàn)表明大黃酸在防治急性肝損傷方面作用優(yōu)于大黃素和蘆薈大黃素。丹參已分離出30余種化學(xué)成分，主要分為脂溶性和水溶性兩大類。大量資料顯示丹參的主要成分以水溶性物質(zhì)為主，丹參素(D(+)β-(3，4-二羥基苯基)乳酸)是丹參水溶性各種成分的基本結(jié)構(gòu)成分，已被證明有抗氧化、抑制一氧化氮合成、抗缺氧、抗纖維化等作用。故確認(rèn)大黃酸、丹參素是大黃、丹參中發(fā)揮作用的主要有效單體成分?；诖朔謩e從大黃、丹參中提取大黃酸、丹參素，進(jìn)行了現(xiàn)代藥理學(xué)研究。大黃酸、丹參素對肝損傷有獨(dú)特的防治作用，主要是(1)不僅可降低血漿內(nèi)毒素水平(見表1)，還可通過下調(diào)內(nèi)毒素受體CD14表達(dá)，下調(diào)KC NF-κB(核轉(zhuǎn)錄因子-KB)表達(dá)，從而減少TNF-α(腫瘤壞死因子)、ET(內(nèi)皮素)、TXB2(血栓素B2)等炎性細(xì)胞因子的釋放，以阻斷內(nèi)毒素生物學(xué)效應(yīng)的發(fā)揮(見表2)；(2)可以減少ET、TXB2含量，增加6-k-PGF1(6-酮-前列環(huán)素)含量，從而緩解肝臟微血管痙攣，增加肝臟血流，改善肝臟微循環(huán)(見表3)；(3)可以抑制誘生型一氧化氮合酶(iNOS)表達(dá)，減輕細(xì)胞毒性NO(一氧化氮)作用，促進(jìn)內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)表達(dá)，增加擴(kuò)血管作用NO的產(chǎn)生，改善受損肝臟的微循環(huán)障礙(見表5)；(4)可使最大血小板聚集率降低，全血黏度降低，從而抑制血小板聚集，降低全血黏度，改善血液流變性，進(jìn)而改善肝臟微循環(huán)障礙(見表4)。(5)降低血漿ALT水平，減輕肝細(xì)胞損傷，改善肝功能(見表1)。
從大黃、丹參中提取大黃酸、丹參素的提取方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，使用常規(guī)的提取方法即可得到大黃酸、丹參素。
本發(fā)明藥物動物實(shí)驗(yàn)療效如下。動物觀察對象是硫代乙酰胺(TAA)所致急性肝損傷大鼠，檢測指標(biāo)為轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性變化，它反映肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞損傷的程度；血漿內(nèi)毒素水平(LPS)反映肝枯否細(xì)胞的吞噬功能；同時還測定了肝組織CD14(內(nèi)毒素受體)、NF-κB(核轉(zhuǎn)錄因子-κB)、TNF-α(腫瘤壞死因子)水平以反映內(nèi)毒素生物學(xué)效應(yīng)的發(fā)揮狀況；檢測全血黏度和最大血小板聚集率，反映血液流變學(xué)變化；檢測肝組織ET-1(內(nèi)皮素)、NO(一氧化氮)、TXB2(血栓素B2)、6-keto-PGF1α(6-酮-前列環(huán)素)含量判定肝臟微循環(huán)變化；檢測內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)和誘生型一氧化氮合酶(iNOS)在肝組織中的表達(dá)反映NO變化情況。
表1各組動物ALT與LPS的變化

a.vs Normal b.vs TAA c.vs大黃酸、丹參素*.P＜0.05表1表明，模型組與正常組相比，ALT及內(nèi)毒素水平均顯著升高(P＜0.01)；大黃酸、丹參素治療組與模型組相比，上述指標(biāo)均明顯下降(P＜0.01或P＜0.05)，提示大黃酸、丹參素是“雙利肝”組成的有效成分，證明經(jīng)大黃酸、丹參素治療后，腸源性內(nèi)毒素水平降低，肝功能好轉(zhuǎn)。且由上表可見，大黃酸丹參素合劑亦可降低ALT水平及血漿內(nèi)毒素水平，其治療作用優(yōu)于大黃酸、丹參素治療組。且作用與“雙利肝”不相上下。
表2各組CD14、NF-kB和TNF-α免疫組化染色結(jié)果比較

a.vs正常組 b.vs模型組 c.vs大黃酸、丹參素組 Δ.p＜0.05*.p＜0.01表2表明，正常組僅見微量CD14、NF-κB和TNF-α表達(dá)，模型組CD14、NF-κB和TNF-α表達(dá)明顯增多(P＜0.01)，大黃酸與丹參素治療組CD14、NF-κB和TNF-α表達(dá)明顯減少，與模型組相比有明顯差異(P＜0.01)。提示大黃酸、丹參素對內(nèi)毒素上調(diào)的CD14、NF-κB和TNF-α表達(dá)有明顯抑制作用。且大黃酸丹參素合劑組治療作用優(yōu)于大黃酸、丹參素治療組。
表3肝組織勻漿TXB2、6-keto-PGF1α、ET-1及NO含量的變化

a.vs正常組 b.vs模型組 c.vs大黃酸、丹參素組 Δ.p＜0.05*.p＜0.01表3表明，模型組與正常組相比，TXB2、6-keto-PGF1α、ET-1及NO均明顯升高(P＜0.01或P＜0.05)；大黃酸組、丹參素組治療組與模型組相比，TXB2、NO均明顯下降(P＜0.01或P＜0.05)，6-keto-PGF1α明顯升高(P＜0.05)，丹參素治療組與模型組相比ET-1明顯下降(P＜0.05)。且大黃酸丹參素合劑組治療作用優(yōu)于大黃酸、丹參素治療組。
表4各組動物全血粘度及最大血小板聚集率的變化

a.vs正常組 b.vs模型組 c.vs大黃酸、丹參素組 Δ.p＜0.05*.p＜0.01表4表明，模型組與正常組相比，全血粘度及最大血小板聚集率均明顯升高(P＜0.01或P＜0.05)；大黃酸、丹參素治療組與模型組相比，前組上述指標(biāo)均有顯降低(P＜0.01或P＜0.05)，提示給予大黃酸、丹參素灌胃后血液流變得到明顯改善。且大黃酸丹參素合劑組治療作用優(yōu)于大黃酸組、丹參素組治療組。
表5各組eNOS和iNOS免疫組化染色結(jié)果比較

a.vs Normal b.vs TAA c.vs大黃酸、丹參素組*.P＜0.01 Δ.P＜0.05表5表明，正常組未見iNOS表達(dá)，模型組iNOS表達(dá)明顯增多，大黃酸與丹參素治療組iNOS表達(dá)明顯減少，與模型組染色結(jié)果相比有顯著性差異(P＜0.05)。正常組有少量eNOS表達(dá)，模型組未見eNOS表達(dá)，大黃酸與丹參素治療組eNOS表達(dá)明顯增多，與正常組染色結(jié)果相比差異有顯著性(P＜0.01)。且大黃酸丹參素合劑組治療作用優(yōu)于大黃酸組、丹參素組治療組。
從上述動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，大黃酸丹參素合劑的治療既可降低腸源性內(nèi)毒素水平、阻斷內(nèi)毒素生物學(xué)效應(yīng)的發(fā)揮又可改善肝臟微循環(huán)從而達(dá)到抗肝損傷的目的，且通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)其作用與“雙利肝”不相上下，提示大黃酸、丹參素是“雙利肝”組成的有效成分，可達(dá)到標(biāo)本兼治的功效。
臨床病例1、張慶華，男，58歲，急性肝炎患者，入院時血漿內(nèi)毒素測定值為9.2EU/ml，高于正常人90倍，用該藥物經(jīng)過一段時間的治療，內(nèi)毒素水平降到3.1EU/ml，同時ALT水平也由治療前1127U/L降到49U/L，其臨床癥狀也大大緩解。
2、張丹紅，女，38歲，急性肝炎患者，入院時血漿內(nèi)毒素測定值為8.7EU/ml，高于正常人90倍，用該藥物經(jīng)過一段時間的治療，內(nèi)毒素水平降到2.5EU/ml，同時ALT水平也由治療前1057U/L降到42U/L，其臨床癥狀也大大緩解。
3、劉春紅，女，72歲，慢性肝炎患者，入院時血漿內(nèi)毒素測定值為12.9EU/ml，高于正常人130倍，用該藥物經(jīng)過一段時間的治療，內(nèi)毒素水平降到7.6EU/ml，同時ALT水平也由治療前549U/L降到57U/L，其臨床癥狀也大大緩解。
4、黃正一，男，75歲，慢性肝炎患者，入院時血漿內(nèi)毒素測定值為10.7EU/ml，高于正常人100倍，用該藥物經(jīng)過一段時間的治療，內(nèi)毒素水平降到6.2EU/ml，同時ALT水平也由治療前463U/L降到49U/L，其臨床癥狀也大大緩解。
5、劉玉柱，男，63歲，肝硬化患者，入院時血漿內(nèi)毒素測定值為13.3EU/ml，高于正常人130倍，用該藥物經(jīng)過一段時間的治療，內(nèi)毒素水平降到8.5EU/ml，同時ALT水平也由治療前282U/L降到60U/L。
6、李梅芳，女，74歲，肝硬化患者，入院時血漿內(nèi)毒素測定值為11.7EU/ml，高于正常人110倍，用該藥物經(jīng)過一段時間的治療，內(nèi)毒素水平降到7.3EU/ml，同時ALT水平也由治療前257U/L降到58U/L。
7、李興旺，男，47歲，重癥肝炎患者，入院時血漿內(nèi)毒素測定值為14.2EU/ml，高于正常人140倍，用該藥物經(jīng)過一段時間的治療，內(nèi)毒素水平降到8.1EU/ml，同時ALT水平也由治療前598U/L降到69U/L。
8、張玉梅，女，62歲，重癥肝炎患者，入院時血漿內(nèi)毒素測定值為13.8EU/ml，高于正常人140倍，用該藥物經(jīng)過一段時間的治療，內(nèi)毒素水平降到5.6EU/ml，同時ALT水平也由治療前420U/L降到47U/L。
9、王勇強(qiáng)，男，37歲，急性胰腺炎病人剛?cè)朐簳r血漿內(nèi)毒素測定值為5.83EU/ml，高出正常人50倍，(正常人血漿內(nèi)毒素低于0.1EU/ml)，用該藥物經(jīng)過一段時間的治療，測定內(nèi)毒素水平降到2.3EU/ml。
10、張梁，男，63歲，菌血癥休克患者，入院時血漿內(nèi)毒素測定值為7.2EU/ml，高出正常人70倍，用該藥物經(jīng)過一段時間的治療，內(nèi)毒素水平降到2.1EU/ml。
11、趙潔，女，32歲，創(chuàng)傷性休克，入院時血漿內(nèi)毒素測定值為5.7EU/ml，高出正常人50倍，用該藥物經(jīng)過一段時間的治療，內(nèi)毒素水平降到2.6EU/ml。
12、王新民，男，57歲，因阻塞性黃疸入院治療，入院時血漿內(nèi)毒素測定值為6.3EU/ml，高出正常人60倍，用該藥物經(jīng)過一段時間的治療，內(nèi)毒素水平降到3.4EU/ml。
本發(fā)明所述的藥物為大黃酸、丹參素分別提取、制備成溶劑服用，便于患者吸收。也可制成片劑、注射劑和沖劑等多種形式。這兩味單體均可由人工提取，符合藥政法規(guī)定，對人體無毒無害。
本發(fā)明是主要針對降低腸源性內(nèi)毒素水平、阻斷內(nèi)毒素生物學(xué)效應(yīng)的發(fā)揮和改善肝臟微循環(huán)的新藥，是在研究肝病發(fā)生發(fā)展機(jī)理基礎(chǔ)上國內(nèi)外首創(chuàng)藥物。另外，由于腸源性內(nèi)毒素血癥對于阻塞性黃疸、胰腺炎、各種休克等疾病的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后與轉(zhuǎn)歸有著重要的影響，所以本發(fā)明所述藥物對于以上幾種疾病伴有的腸源性內(nèi)毒素血癥也有積極的治療作用。隨著腸源性內(nèi)毒素血癥對疾病影響的深入研究，必將受到人們越來越多的重視。
中藥的精制是現(xiàn)代藥理學(xué)研究、發(fā)展的趨勢，本發(fā)明在現(xiàn)有“雙利肝”的基礎(chǔ)上，通過對大黃、丹參有效成份的確認(rèn)、提取，給出了一種精制的中藥制品，適應(yīng)了現(xiàn)代藥理學(xué)研究、發(fā)展的趨勢。本發(fā)明所述藥物的組份配比是在大量實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上確定的，其組份配比精確、合理；該藥物可制成多種劑型(片劑、注射劑)，大大減少了病人服藥劑量，擴(kuò)大了適用患者人群。除肝病外，創(chuàng)傷性休克、燒傷患者及各型感染性休克及多器官功能衰竭在發(fā)病后皆伴有嚴(yán)重的腸源性內(nèi)毒素血癥，一旦發(fā)生腸源性內(nèi)毒素血癥往往使病情急驟惡化。本發(fā)明所述藥物不僅適用于急慢性肝炎患者，也適用于外科各種創(chuàng)傷性休克、多器官功能衰竭等危重病人的搶救治療。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1大黃酸的提取取大黃粗粉1000g置于5000ml圓底燒瓶中，加20％硫酸1000ml、乙醚2000ml，水浴回流提取2h，傾出提取液，燒瓶中生藥殘渣加20％硫酸1000ml、乙醚1500ml，同上法提取2次，每次1小時，合并提取液，分取乙醚層，水洗2次。取乙醚提取液1000ml置于2000ml分液漏斗中，以2.5％碳酸氫鈉水溶液1000ml分3次萃取，合并碳酸氫鈉萃取液，加鹽酸酸化至pH2-3得黃色沉淀，將沉淀濾出并重結(jié)晶得大黃酸固體。濾出的大黃酸用蒸餾水分三次洗滌。產(chǎn)品用真空干燥箱干燥，干品重量為1.3g，顏色為淡黃色，即為大黃酸干粉。
丹參素的提取取粉碎的丹參生藥400g，置于5000ml圓底燒瓶中，加入4800ml的蒸餾水，在回流裝置中加熱、煎煮兩次，每次1.5h，合并煎液，減壓濃縮至大約250ml，加入5％的明膠適量，以慢加快攪的方式加入濃縮液中，放置1h，然后加入95％乙醇940ml進(jìn)行沉淀，于4℃冷藏過夜，濾出沉淀后，回收乙醇，再將溶液濃縮至135ml，再加入95％乙醇1150ml(含醇量約為85％)進(jìn)行沉淀，濾去沉淀，減壓蒸出乙醇，然后再加入約200ml蒸餾水，即得丹參素水溶液。取上述丹參素水溶液加入160ml乙醚，振搖，待靜置分層后，除去乙醚層，然后在水溶液中加入640ml飽和氯化鈉溶液進(jìn)行鹽析，將第一次析出物過濾，濾液放置后有白色長針狀沉淀析出，此沉淀用水重結(jié)晶，濾出沉淀，并用5ml冰水洗滌三次。產(chǎn)品用真空干燥箱干燥，即得丹參素1.02g，產(chǎn)率約0.26％。
本發(fā)明所述藥物由下列重量配比的原料制成大黃酸5份，丹參素2份。
實(shí)施例2大黃酸和丹參素的提取與實(shí)施例1相同。
本發(fā)明所述藥物由下列重量配比的原料制成大黃酸20份，丹參素5份。
實(shí)施例3大黃酸和丹參素的提取與實(shí)施例1相同。
本發(fā)明所述藥物由下列重量配比的原料制成大黃酸10份，丹參素10份。
實(shí)施例4大黃酸和丹參素的提取與實(shí)施例1相同。
本發(fā)明所述藥物由下列重量配比的原料制成大黃酸2份，丹參素8份。
實(shí)施例5大黃酸和丹參素的提取與實(shí)施例1相同。
本發(fā)明所述藥物由下列重量配比的原料制成大黃酸18份，丹參素8份。
權(quán)利要求
1.一種降低人體血液中內(nèi)毒素水平的藥物，其特征為它是由下列重量配比的原料制成大黃酸1-25份，丹參素1-10份。
2.如權(quán)利要求1所述的降低人體血液中內(nèi)毒素水平的藥物，其特征為；由下列重量配比的原料制成大黃酸5份，丹參素2份。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種藥物，具體為一種降低人體血液中內(nèi)毒素水平的藥物。本發(fā)明針對98104748.3專利口服用藥劑量大，適用患者人群受到限制等問題，以98104748.3專利為基礎(chǔ)，明確了丹參、大黃具有對癥藥學(xué)作用的有效成分，并以精提的有效成份為組份。該藥物由下列重量配比的原料制成大黃酸1－25份，丹參素1－10份。本發(fā)明是主要針對降低腸源性內(nèi)毒素水平、阻斷內(nèi)毒素生物學(xué)效應(yīng)的發(fā)揮和改善肝臟微循環(huán)的新藥，是在研究肝病發(fā)生發(fā)展機(jī)理基礎(chǔ)上國內(nèi)外首創(chuàng)藥物。另外，由于腸源性內(nèi)毒素血癥對于阻塞性黃疸、胰腺炎、各種休克等疾病的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后與轉(zhuǎn)歸有著重要的影響，所以本發(fā)明所述藥物對于以上幾種疾病伴有的腸源性內(nèi)毒素血癥也有積極的治療作用。
文檔編號A61K31/192GK1695605SQ20051001256
公開日2005年11月16日 申請日期2005年6月2日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月2日
發(fā)明者韓德五, 趙正保, 周鑫, 趙海珍 申請人:韓德五