專利名稱：應(yīng)用emamectin治療魚(yú)寄生物的方法
背景技術(shù)：
在商業(yè)鮭魚(yú)喂養(yǎng)過(guò)程中控制海虱(sea lice)(lepeophtheirus salmoni和Caligus elongatus)感染在很大程度上仍依賴于化學(xué)治療方法(RothM.，Richards R.和Sommerville C.(1993)“綜述目前化學(xué)治療控制海虱感染的方法”Journal of Fish Diseases(16(1)1-26)。目前使用有機(jī)磷酸酯敵敵畏(AquagardNovartis)和Azamethiphos(SalmosanNovartis)、或者過(guò)氧化氫(SalartectBrenntag，ParamoveSolvay-Interox)或合成的除蟲(chóng)菊酯類、氯氰菊酯(ExcisVericore)和溴氰菊酯(AlphamaxAlpharma)，通過(guò)浸浴方法治療這些體外寄生的橈足蟲(chóng)類的突然蔓延。浸浴操作非常繁復(fù)、成本高而且對(duì)魚(yú)造成明顯威脅。此外，這樣的治療在暴露的場(chǎng)所及惡劣的天氣條件下可能不具有可行性。
除了氯氰菊酯之外，(Jakobsen P.J.和Holm J.C.(1990)“關(guān)于抗鮭魚(yú)寄生虱新型化合物試驗(yàn)的前景”Norsk Fiskeoppdrett.January，16-18)，使用其他化學(xué)物的浸浴治療只對(duì)成蟲(chóng)前期和成蟲(chóng)期海虱有效，附著幼體期海虱得以存活而繼續(xù)循環(huán)感染。因此這類治療僅在海虱群到達(dá)成蟲(chóng)前階段和成蟲(chóng)階段時(shí)適用，因此必須頻繁重復(fù)治療才能有效控制海虱。已證實(shí)某些海虱的種群對(duì)有機(jī)磷酸酯敵敵畏產(chǎn)生了抗性(Jones M.W.，Sommerville C.S.和Wootten，R.(1992)“鮭魚(yú)虱Lepeophtheirus salmonli對(duì)有機(jī)磷酸酯敵敵畏的敏感性降低”Journalof Fish Diseases 15197-202)。過(guò)氧化氫可能會(huì)對(duì)魚(yú)鰓造成損傷，而且因?yàn)槠湓谒疁剌^高時(shí)具有毒性而在夏季限制使用(Thomassen J.M.(1993)“過(guò)氧化氫用作大西洋鮭魚(yú)的滅虱劑”載于Pathoges of Wildand Farmed SalmonSea Lice(G.Boxshall和D.Defaye編輯)EllisHorwood Ltd.London)。
如果一種治療可在喂飼時(shí)給予、對(duì)所有寄生階段的海虱和其他寄生物都有效，同時(shí)避免與浸浴治療有關(guān)的不足，則這種治療將有利于鮭魚(yú)養(yǎng)殖工業(yè)。喂飼中治療使得在不利的天氣條件下及暴露場(chǎng)所也可以進(jìn)行治療，而且也允許在海灣域或單個(gè)海灣的一個(gè)場(chǎng)所和所有場(chǎng)所對(duì)所有飼養(yǎng)籠同時(shí)用藥，從而減少在對(duì)一個(gè)場(chǎng)所的所有飼養(yǎng)籠實(shí)施浸浴治療所必要的幾天內(nèi)可能發(fā)生的交叉感染。目前可使用的喂飼中治療藥物有昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、除蟲(chóng)脲(LepsidonEwos)和農(nóng)夢(mèng)特(CalicideNutreco)(Erdal J.I.(1997)“新藥療法在其最敏感時(shí)消滅海虱”Fish Farming International第24期，第2期)。它們的作用模式是抑制幾丁質(zhì)的合成(Horst M.N.和Walker A.N.(1996)“除蟲(chóng)脲對(duì)蛻皮后美味瘤蝤蛑(Callinectes sapidus)體內(nèi)幾丁質(zhì)合成的生化作用”Journal of Crustacean Biology.15401-408)從而其作用限于蛻皮期海虱。
通過(guò)培養(yǎng)除蟲(chóng)鏈霉菌產(chǎn)生的阿維菌素具有強(qiáng)效抗蠕蟲(chóng)和殺蟲(chóng)特性。化學(xué)修飾的衍生物雙氫除蟲(chóng)菌素(22，23-雙氫除蟲(chóng)菌素B1)已經(jīng)開(kāi)發(fā)為牛、羊、馬和豬的廣譜抗寄生藥物(Sutherland I.H.(1990)“雙氫除蟲(chóng)菌素的獸藥用途”Acta Leidensia 59211-216)，并且自1981年以來(lái)在世界范圍內(nèi)銷(xiāo)售。在某些人類寄生蟲(chóng)病的治療方面也廣泛使用雙氫除蟲(chóng)菌素(Ottesen E.A.和Campbell W.C.(1994)“用于人類醫(yī)療的雙氫除蟲(chóng)菌素”Journal of Antimicrobial Chemotherapy.34(2)195-203)。在認(rèn)識(shí)到海虱的抗有機(jī)磷酸酯性質(zhì)后(Jones M.W.，SommervilleC.S.和Wootten，R.(1992)“鮭魚(yú)虱Lepeophtheirus salmonis對(duì)有機(jī)磷酸酯敵敵畏的敏感性降低”Journal of Fish Diseases 15197-202)，人們將雙氫除蟲(chóng)菌素看作一種替代療法。除了其新的作用模式之外，雙氫除蟲(chóng)菌素一個(gè)更大的優(yōu)點(diǎn)是在喂飼中用藥方面的應(yīng)用。盡管雙氫除蟲(chóng)菌素應(yīng)用于鮭魚(yú)還未獲得管理部門(mén)的批準(zhǔn)，但英國(guó)的獸醫(yī)可在已經(jīng)批準(zhǔn)的產(chǎn)品不能有效控制海虱感染的多級(jí)感染情況(cascadeprocedure)下處方應(yīng)用(Anonymous(1998)Amelia No.8 VeterinaryMedicines Directorate.Woodham Lane，Newhaw，Addlestone，SurreyKT15 3NB)。若干年來(lái)雙氫除蟲(chóng)菌素的使用已表明，普遍采用的每周兩次25μg·kg-1生物量的劑量率具有一定控制作用(Rae G.H.(1996)“豬用雙氫除蟲(chóng)菌素預(yù)混合物治療人工養(yǎng)殖鮭魚(yú)海虱感染的使用指南”Scottish Salmon Growers Association pamphlet)。但是，發(fā)現(xiàn)雙氫除蟲(chóng)菌素在高于每周兩次25μg·kg-1生物量的劑量水平時(shí)具有毒性(S.CJohnson等，“大西洋鮭、大鱗大麻哈魚(yú)、銀大馬哈魚(yú)和硬頭鱒口服雙氫除蟲(chóng)菌素的毒理和病理作用”Diseases of Aquatic Organisms。第17卷107-112(1993)。
最近用emamectin(4”-脫氧-4”-表甲氨基除蟲(chóng)菌素B1)來(lái)治療可食農(nóng)作物(Leibee G.L，Jansson，R.K.，Nuessly，G和Taylor J.L.(1995)“苯甲酸除蟲(chóng)菌素和蘇云金芽胞桿菌在控制弗羅里達(dá)州甘蘭小菜蛾(鱗翅目采蛾科)中的作用”Florida Entomologist.78(1)82-96)。
發(fā)明概述本發(fā)明提供消除、減少或防止魚(yú)群寄生物的方法，該方法包括持續(xù)3-14天以每天每kg魚(yú)生物量25μg至400μg的劑量喂飼所述魚(yú)群emamectin或其鹽。
再一方面，本發(fā)明提供制備用于消除、減少或防止魚(yú)群寄生物的藥用魚(yú)食的套裝藥盒，該套裝藥盒包括提供emamectin或其鹽以及印刷說(shuō)明書(shū)，以便持續(xù)3-14天以每天每kg魚(yú)生物量25μg至400μg的劑量喂飼emamectin或其鹽。
附圖簡(jiǎn)述


圖1是劑量遞增研究第7天對(duì)照組與50μg/kg劑量組平均每條魚(yú)的各階段附著幼體(I、II、III、IV階段)數(shù)量的比較圖(實(shí)施例1)。
圖2是與
圖1相同的比較圖，但時(shí)間是第14天。
圖3是劑量確認(rèn)研究第7天對(duì)照組與50μg/kg劑量組平均每條魚(yú)的各階段附著幼體(I、II、III、IV階段)數(shù)量的比較圖(實(shí)施例3)。
圖4是與圖3相同的比較圖，但時(shí)間是第14天。
發(fā)明詳述可按照美國(guó)專利號(hào)5,288,710或者美國(guó)專利號(hào)5,399,717所述制備的emamectin(4”-脫氧-4”-表甲氨基除蟲(chóng)菌素B1)是兩種同系物4”-脫氧-4”-表-甲氨基除蟲(chóng)菌素B1a和4”-脫氧-4”-表-甲氨基除蟲(chóng)菌素B1b的混合物。優(yōu)選使用emamectin的鹽。在本發(fā)明中可使用的emamectin鹽的非限制性實(shí)例包括U.S.5,288,710所介紹的的鹽，如苯甲酸鹽、取代的苯甲酸鹽，苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽、酒石酸鹽、馬來(lái)酸鹽等等。本發(fā)明使用的的emamectin鹽最好是emamectin苯甲酸鹽。
令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，根據(jù)本發(fā)明的劑量水平和給藥方案使用emamectin時(shí)，它對(duì)魚(yú)群無(wú)毒。已知雙氫除蟲(chóng)菌素在相對(duì)低水平時(shí)仍然具有毒性，因而這是相當(dāng)令人驚奇的發(fā)現(xiàn)。因?yàn)閾?dān)心雙氫除蟲(chóng)菌素的毒性而不能連續(xù)數(shù)日給藥，因此相當(dāng)大的危險(xiǎn)是因?yàn)轱曫B(yǎng)者的侵?jǐn)_，不是特定魚(yú)群中的所有魚(yú)均可以接受合適的劑量。emamectin相對(duì)雙氫除蟲(chóng)菌素的顯著優(yōu)點(diǎn)是可以至少連續(xù)喂食數(shù)天，因?yàn)槲故硵?shù)天后增加了特定魚(yú)群中更多魚(yú)攝食的可能性。
emamectin及其鹽可以根據(jù)本發(fā)明用于消除或減少所有類型的魚(yú)寄生物，包括體外寄生物和體內(nèi)寄生物?？上驕p少的體內(nèi)寄生物實(shí)例包括但不限于扁形動(dòng)物門(mén)(Phylum Platyhelminthes)(單殖綱(Class Monogenea)、復(fù)殖綱(Class Digenea)和絳蟲(chóng)綱(Class Cestoda))寄生物；袋形動(dòng)物門(mén)(Phylum Apicomplexa)(線蟲(chóng)綱(Class Nematoda))寄生物；及原生動(dòng)物類(protozoans)(例如粘孢子蟲(chóng)感染(粘孢子蟲(chóng)門(mén)(Phylum Mxyozoa))、微孢子蟲(chóng)感染(微孢子蟲(chóng)門(mén)(Phylum Microspora))、球蟲(chóng)感染(Apicomplexa門(mén))以及纖毛門(mén)(Phylum Ciliophora)寄生物)?？上驕p少的體外寄生蟲(chóng)實(shí)例包括但不限于單殖吸蟲(chóng)類(monogeneans)、節(jié)肢動(dòng)物門(mén)(Phylum Arthropoda)(甲殼綱(ClassCrustacea)、鰓尾亞綱(Subclass Branchiura)和橈足亞綱(SubclassCopepoda)(例如包括劍水蚤目(Cyclopidea)、魚(yú)蚤目(Order Caligidea)和鄂虱目(Order Lernaeopodidea)))寄生物、以及鲺目(Argulus)和等足動(dòng)物門(mén)(Phylum Isopoda)的寄生物。
已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的emamectin治療對(duì)治療海虱即橈足亞綱魚(yú)蚤目的寄生蟲(chóng)特別有效，尤其是瘡痂魚(yú)虱(Lepeophtheirus)屬和魚(yú)虱(Caligus)屬的寄生蟲(chóng)。
任何魚(yú)類，包括淡水魚(yú)和咸水魚(yú)，都可以用emamectin來(lái)消除或減少寄生物?？芍委煹聂~(yú)類包括但不限于鮭魚(yú)、鱒魚(yú)(trout)、鯰魚(yú)、尖吻鱸(sea bass)、金槍魚(yú)、大比目魚(yú)、北極嘉魚(yú)、鱘魚(yú)、大菱鲆魚(yú)(turbot)、比目魚(yú)(flounder)、鰨魚(yú)(sole)、鯉魚(yú)、羅非魚(yú)(tilapia)、stripedbass、鰻魚(yú)、海鯛(sea bream)、黃尾魚(yú)(yellowtail)、amberjack、石斑魚(yú)(grouper)和遮目魚(yú)(milkfish)。
可有效減少、消除、或防止寄生物的emamectin劑量可以由獸醫(yī)按常規(guī)決定，盡管這可能會(huì)根據(jù)所治療魚(yú)的種類、所涉及的具體寄生物、感染的程度而有所不同。優(yōu)選以每天每kg魚(yú)生物量25μg至400μg的劑量喂飼emamectin或其鹽，更優(yōu)選每天每kg魚(yú)生物量25μg至100μg，最優(yōu)選每天每kg魚(yú)生物量50μg至75μg的劑量。
持續(xù)3至14天、優(yōu)選7至14天、最優(yōu)選1周每天給予emamectin治療。令人驚奇地發(fā)現(xiàn)治療后長(zhǎng)達(dá)8至10周emamectin仍表現(xiàn)出持續(xù)的藥力。因此，emamectin可以作為一種防止措施實(shí)施，以防止出現(xiàn)寄生蟲(chóng)感染。
本發(fā)明的套裝藥盒可以是適合提供至少7天所需emamectin的任何形式以及印刷說(shuō)明書(shū)，以便根據(jù)上述劑量給藥水平和方案給予emamectin。所述套裝藥盒實(shí)例包括但不限于帶有描述周期性劑量給藥說(shuō)明的說(shuō)明書(shū)、或劑量給藥說(shuō)明直接印于或貼于其上的各種容器(例如瓶、紙盒、泡罩包裝和安瓿瓶)。所述套裝藥盒中的emamectin或其鹽可以是包含一種或多種稀釋劑和0.01-1％(重量)的emamectin或其鹽的預(yù)混合物。
所述藥用魚(yú)食可以通過(guò)將適量的emamectin或其鹽摻入一種可購(gòu)得的魚(yú)食產(chǎn)品中以達(dá)到預(yù)期的劑量水平來(lái)制備。摻入魚(yú)食的emamectin量根據(jù)魚(yú)的喂養(yǎng)情況來(lái)決定。對(duì)每天0.2-4％生物量的魚(yú)喂養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，優(yōu)選每kg藥用魚(yú)食包含0.5至100mg的emamectin或其鹽，更優(yōu)選每kg藥用魚(yú)食包含1至50mg的emamectin或其鹽，最優(yōu)選每kg藥用魚(yú)食包含5至15mg的emamectin或其鹽。
雖然emamectin可以在制成藥丸前加入到魚(yú)食混合物中，但是優(yōu)選藥用魚(yú)食用emamectin包衣魚(yú)食小丸而制成。對(duì)包衣魚(yú)食小丸，優(yōu)選使用包含以下成分的預(yù)混合物(a)0.01-1％(重量)的emamectin或其鹽；(b)0.001-0.2％(重量)的防腐劑；(c)1-4％(重量)的丙二醇或者聚乙二醇；及(d)適量的稀釋劑。所述防腐劑優(yōu)選為丁基化羥基苯甲醚(BHA)。優(yōu)選使用丙二醇。所述稀釋劑可以是任何常用的稀釋劑，如乳糖、麥芽糖糊精、玉米淀粉、碳酸鈣、微晶纖維素、稻殼和玉米棒。所述稀釋劑優(yōu)選是麥芽糖糊精、玉米淀粉或它們的混合物。特別優(yōu)選的預(yù)混合物包含0.2％(重量)emamectin苯甲酸鹽、0.01％(重量)丁基化羥基苯甲醚、2.5％(重量)丙二醇、49.8％(重量)玉米淀粉和適量的麥芽糖糊精M-100。所述預(yù)混合物優(yōu)選用高剪切力混合器/制粒機(jī)按以下步驟制備攪拌下使BHA溶于丙二醇。將淀粉裝入高剪切力混合器/制粒機(jī)中。慢慢將BHA溶液加入淀粉中混合。繼續(xù)混合20-40分鐘(目標(biāo)30分鐘)，以使淀粉將溶液充分吸收。刮拭混合容器的內(nèi)壁以去除所有粘附的物質(zhì)。通過(guò)一個(gè)20目的篩子將藥物加載到混合容器中?；旌喜⒓羟?切碎機(jī)開(kāi)啟)10分鐘。將麥芽糖糊精加載到混合容器后再混合/剪切10分鐘。取出最后產(chǎn)物進(jìn)行包裝。
或者可采用以下帶式混合器工藝制備所述預(yù)混合物攪拌使BHA溶于丙二醇。將淀粉加入一個(gè)較小的帶式混合器中(大約批量大小的一半)。開(kāi)啟帶式混合器，慢慢將BHA溶液加載到淀粉中?；旌暇鶆颉ＭＶ乖摶旌掀?，將混合物在混合器中保留30-60分鐘。取出少量混合物(1-5％的批量)放入一個(gè)小行星式混合器中。將藥物加載到該行星式混合器中混合5分鐘。將所述藥物預(yù)混合物轉(zhuǎn)移回帶式混合器中混合10-30分鐘。從帶式混合器中取出藥物混合物，通過(guò)粉碎研磨機(jī)(Fitzmill)磨碎后傳送到分離泵。將磨碎的物質(zhì)轉(zhuǎn)移到另一個(gè)帶式混合器。將麥芽糖糊精加載到該混合器混合10-30分鐘。取出最后產(chǎn)物進(jìn)行包裝。
可以用干包衣法或油包衣法對(duì)所述魚(yú)食小丸包衣所述預(yù)混合物。干包衣法中，將所述預(yù)混合物與魚(yú)食小丸一起混合以使其均勻地分布在小丸的表面，而且在混合物中加入熱魚(yú)油或植物油以完全包衣小丸。油包衣法中，所述預(yù)混合物先與一小部分熱魚(yú)油或植物油混合，再與小丸混合以均勻地分布在小丸的表面，將余下的熱的魚(yú)油或植物油加入至已包衣的小丸中混合直至小丸被完全包衣。
以下實(shí)施例可闡明前述的發(fā)明，但是這些實(shí)施例不應(yīng)被解釋為限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例位于蘇格蘭Machrihanish的水產(chǎn)業(yè)海洋環(huán)境研究實(shí)驗(yàn)室協(xié)會(huì)(Institute of Aquaculture Marine Environmental Research Laboratory inMachrihanish，Scotland)開(kāi)展了三項(xiàng)研究。由無(wú)疾病的大西洋鮭Salmosalar L.魚(yú)群獲得后三齡大的小鮭魚(yú)(post-smolt)，使其適應(yīng)實(shí)驗(yàn)設(shè)備。
將魚(yú)分成平行測(cè)定組飼養(yǎng)于塑料纖維的水池(tank)中，每個(gè)水池的容積為0.54m3。以大約181·min-1的流速向每個(gè)水池供應(yīng)室溫(7-14℃)和一定鹽度(30-35ppt)的天然海水。水池出水口配有篩孔，以阻留未食用的魚(yú)食小丸。每天觀察魚(yú)的行為和藥物副作用。同時(shí)還記錄魚(yú)的死亡率和嚴(yán)重海虱損傷的發(fā)生率。海虱感染在蘇格蘭西海岸的商業(yè)鮭魚(yú)養(yǎng)殖場(chǎng)收獲鮭魚(yú)時(shí)收集海虱。從懷卵的雌虱上收集的卵串在室溫、鹽度范圍為32-35ppt的海水中培養(yǎng)。一旦孵化的幼蟲(chóng)到達(dá)橈足幼體期，在四個(gè)平行測(cè)定魚(yú)池中分別加入38-170條橈足幼體/魚(yú)，且每個(gè)池的供水暫停大約三小時(shí)，以使橈足幼體附著在魚(yú)體上。每隔3-5天重復(fù)一次，共重復(fù)4-5次，直至出現(xiàn)I、II、III、IV期附著幼體。在治療前1天或2天時(shí)抽樣(每池N＝6-9條魚(yú))計(jì)量附著幼體數(shù)。此時(shí)每池中加入5-10只海虱/魚(yú)，使魚(yú)感染成蟲(chóng)前海虱及成蟲(chóng)海虱。供水暫停約一小時(shí)直至所有海虱都粘附到魚(yú)體上。治療前海虱數(shù)以子樣本總魚(yú)群數(shù)為基礎(chǔ)，表示為附著幼體平均數(shù)/魚(yú)。然后按每項(xiàng)研究的試驗(yàn)設(shè)計(jì)中所述，將魚(yú)從四個(gè)初始池中隨機(jī)再分配至對(duì)照池或治療池中，治療時(shí)和治療后不再實(shí)施感染。藥用魚(yú)食基礎(chǔ)魚(yú)食是FulmarTM(BOCM Pauls Ltd.)3.5或5mm的鮭魚(yú)食丸。將emamectin苯甲酸鹽溶于丙二醇中，與魚(yú)油混合后再包衣至魚(yú)食小丸上。對(duì)照食物通過(guò)相同的方法以丙二醇及魚(yú)油制備。以0.5％生物量的喂飼率，每天0、25、50和100μg·kg-1魚(yú)生物量的額定劑量率實(shí)施治療，持續(xù)七天(0-6天)。每池中食物的實(shí)際日消耗量通過(guò)在投食后約三十分鐘采集未食用的魚(yú)食小丸并從投食的日配給小丸數(shù)目中減去而算得。每組的平均消耗量按以下公式計(jì)算 平均食物消耗率(％)×額定劑量率(μg·kg-1)＝平均消耗劑量(μg·kg-1)海虱的計(jì)數(shù)在治療開(kāi)始后的第7、14和21天計(jì)數(shù)海虱數(shù)。將魚(yú)用40mg·1-1對(duì)氨基苯甲酸乙酯(苯佐卡因)麻醉，然后在低倍顯微鏡下觀察每條魚(yú)。海虱鑒別為I-IV期附著幼體、I或II期成蟲(chóng)前海虱及成蟲(chóng)期海虱。成蟲(chóng)前和成蟲(chóng)期海虱還鑒別雄性和雌性。記錄每個(gè)發(fā)育階段的數(shù)量。計(jì)數(shù)包括脫離在麻醉液中所有海虱，然后在將魚(yú)轉(zhuǎn)移到新鮮海水中后使其重新粘附到魚(yú)體上。抽樣檢測(cè)后將魚(yú)放回保持的水池中，在第7、14和21天再對(duì)這些魚(yú)進(jìn)行檢測(cè)。
實(shí)施例1劑量遞增研究水溫為7-10℃，鹽度為33-34ppt。治療前的平均魚(yú)生物量為192g(±30g S.D.)。以每天0、25、50和100μg·kg-1魚(yú)生物量的額定劑量率給予emamectin苯甲酸鹽。每個(gè)治療方案中有兩個(gè)平行測(cè)定池，每池樣本數(shù)為19或20條魚(yú)。本研究的結(jié)果在下表1中列出。表1劑量遞增研究emamectin苯甲酸鹽對(duì)大西洋鮭salmo salar的海虱Lepeophtheirus salmonis誘導(dǎo)感染的療效。魚(yú)以每天0.5％生物量的喂飼率連續(xù)7天(0-6天)接受藥用魚(yú)食。在第7、14和21天測(cè)定海虱的平均數(shù)。由兩個(gè)平行測(cè)定池(每池的樣本數(shù)N＝19或20條魚(yú))的數(shù)據(jù)合計(jì)算出平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。時(shí)間 額定 平均 平均 平均平均 相對(duì)于劑量 消耗 海虱總量附著幼體量 活動(dòng)海虱量 對(duì)照的μg·kg-1劑量*(±S.D) (±S.D) (±S.D)減少率％μg.kg-1(海虱總量)0 0 51.1±15.1 24.3±8.8 26.7±7.8 /2521.5 32.6±10.7 20.9±8.6 11.7±6.036.2％第7天5045.0 31.9±11.4 24.8±10.3 7.1±4.1 37.5％100 91.0 33.0±10.7 29.0±9.8 4.0±3.6 35.4％0 44.9±11.1 3.2±2.041.7±10.5 /第14天 25 13.1±6.99.7±3.93.4±6.4 70.8％50 13.4±5.912.4±3.5 1.0±1.2 70.3％10015.1±5.814.1±5.5 1.0±3.2 66.4％0 34.5±9.30.03±0.2 34.5±9.3 /第21天 25 3.5±2.7 2.4±1.91.1±2.2 89.8％50 1.7±1.3 1.6±1.50.1±0.3 95.2％1001.5±1.6 1.2±1.20.3±1.0 95.8％*平均消耗量是根據(jù)治療期間消耗食物的百分比計(jì)算所得的實(shí)際接受劑量。
實(shí)施例2劑量確認(rèn)研究(dose confirmation study)I水溫為12-14℃，鹽度為33-35ppt。治療前的平均魚(yú)生物量為224g(±43g S.D.)。以每天0、25和50μg·kg-1生物量的額定劑量率給予emamectin苯甲酸鹽。每個(gè)治療方案有三個(gè)平行測(cè)定池，每池15條魚(yú)。但是，在這項(xiàng)研究中，魚(yú)的死亡使25μg·kg-1組可評(píng)價(jià)寄生物的魚(yú)數(shù)量在研究結(jié)束時(shí)減至9、10和14條；50μg·kg-1組減至10、12和13條，以及對(duì)照組減至2、5和5條。為此進(jìn)行了第二次研究劑量確認(rèn)研究II(以下的實(shí)施例3)。本研究的結(jié)果在下表2中列出。表2劑量確認(rèn)研究Iemamectin苯甲酸鹽對(duì)大西洋鮭Salmo salar的海虱Lepeophtheirus salmonis誘導(dǎo)感染的療效。魚(yú)以每天0.5％生物量的喂飼率連續(xù)7天(0-6天)接受藥用魚(yú)食。在第7、14和21天測(cè)定海虱的平均數(shù)。由三個(gè)平行測(cè)定池(每池的樣本數(shù)N＝2-15條魚(yú))的數(shù)據(jù)合計(jì)算出平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。時(shí)間 額定 平均平均平均 平均 相對(duì)于劑量 消耗 海虱總量 附著幼體量活動(dòng)海虱量對(duì)照的μg·kg-1劑量*(±S.D) (±S.D) (±S.D) 減少率％μg·kg-1(海虱總量)0 0 60.9±15.1 1.9±1.6 59.0±14.9 /25 20.2 34.2±15.8 1.8±1.7 32.4±15.443.8％第7天50 44.3 28.1±13.1 3.2±2.2 24.9±13.253.8％0 40.9±14.4 0 40.9±14.4 /第14天 259.8±4.4 0.30 9.5±4.4 76.0％504.9±2.7 0.64.3±2.6 88.0％0 27.3±9.7 0 27.3±9.7 /第21天 254.9±3.10 4.9±3.1 81.9％501.6±1.30 1.6±1.4 94.3％*平均消耗量是根據(jù)治療期間消耗食物的百分比計(jì)算所得的實(shí)際接受劑量。
實(shí)施例3劑量確認(rèn)研究II水溫為9-12℃，鹽度為30-34ppt。治療前的平均魚(yú)生物量為418.2g(±49g S.D.)。以每天0和50μg·kg-1生物量的額定劑量率給予emamectin苯甲酸鹽。每個(gè)治療方案有三個(gè)平行測(cè)定池，每池15-16條魚(yú)。本研究的結(jié)果在下表3中列出。表3劑量確認(rèn)研究IIemamectin苯甲酸鹽對(duì)大西洋鮭Salmo salar的海虱Lepeophtheirus salmonis誘導(dǎo)感染的療效。魚(yú)以每天0.5％生物量的喂飼率連續(xù)7天(0-6天)接受藥用魚(yú)食。在第7、14和21天測(cè)定海虱的平均數(shù)。由三個(gè)平行測(cè)定池(每池的樣本數(shù)N＝15-16條魚(yú))的數(shù)據(jù)合計(jì)算出平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。時(shí)間 額定 平均 平均 平均 平均 相對(duì)于劑量 消耗海虱總量附著幼體量 活動(dòng)海虱量 對(duì)照的μg·kg-1劑量*(±S0) (±S.D) (±S.D) 減少率％μg·kg-1(海虱總量)0 0 74.9±17.1 22.7±8.852.2±13.4/第7天5045.7 40.5±12.2 30.0±11.8 10.5±8.1 45.9％050.2±10.3 0.6±0.8 49.5±10.3/第14天50 14.7±5.912.7±5.72.0±3.270.7％038.1±8.60.1±0.3 38.1±8.7 /第21天50 2.1±2.1 1.5±1.7 0.6±1.194.6％*平均消耗量是根據(jù)治療期間消耗食物的百分比計(jì)算所得的實(shí)際接受劑量。數(shù)據(jù)處理結(jié)果總結(jié)為附著幼體(I-IV期附著幼體)、活動(dòng)海虱(成蟲(chóng)前和成蟲(chóng)階段)和海虱總量(附著幼體和活動(dòng)海虱的總和)。對(duì)海虱數(shù)/魚(yú)進(jìn)行F-檢驗(yàn)以檢定方差齊性，以及相關(guān)性檢驗(yàn)以檢查數(shù)據(jù)分布的正態(tài)性。用單因素ANOVA檢驗(yàn)魚(yú)重和治療前海虱數(shù)。因?yàn)榉讲畈积R或不是正態(tài)分布，治療前海虱數(shù)用非參數(shù)的Dunn’s檢驗(yàn)進(jìn)行分析(Zar1984)。
在全部三項(xiàng)研究中，任一時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組、25、50或100g·kg-1治療組中任一組的平行池之間的附著幼體或活動(dòng)海虱的數(shù)量不存在任何顯著差異(P＞0.05)。這使每組平行池的平均數(shù)據(jù)可在表1、2和3中合計(jì)分析。但是，對(duì)每個(gè)平行池的數(shù)據(jù)也進(jìn)行了單獨(dú)分析。
相對(duì)于對(duì)照組來(lái)說(shuō)，每種劑量的海虱平均減少百分率按以下公式計(jì)算 所述三項(xiàng)研究結(jié)果的總結(jié)在下表4中列出。表4第21天的劑量遞增研究、劑量確認(rèn)研究I和劑量確認(rèn)研究II的總結(jié)數(shù)據(jù)emamectin苯甲酸鹽對(duì)大西洋鮭Salmo salar海虱Lepeophtheirus salmonis誘導(dǎo)感染的療效。魚(yú)以每天0.5％生物量的喂飼率連續(xù)7天(0-6天)接受藥用魚(yú)食。研究 額定 平均 減少率沒(méi)有海虱(附著 沒(méi)有活動(dòng)海魚(yú)死亡率項(xiàng)目 劑量 消耗 (％) 幼體或活動(dòng)海虱的魚(yú)的百(％)μg·kg-1劑量*(海虱總虱) 分比*μg·kg-1量) 的魚(yú)的百分比00 / 0％ 0％ 5％劑量遞增 25 21.5 89.8％13.8％ 55.0％0％研究 50 45.0 95.2％22.5％ 87.5 0％100 91.0 95.8％28.2％ 87.0％2.5％00 / 0％ 0％ 75％劑量確認(rèn)25 20.2 81.9％3.0％ 6.1％ 31％研究I50 44.3 94.3％28.6％ 28.6％27％劑量確認(rèn) 00 / 0％ 0％ 6％研究II 50 45.7 94.6％27％66.3％0％減少率(％)是海虱數(shù)目相對(duì)于對(duì)照組的減少率，根據(jù)每個(gè)治療組平行池合并平均數(shù)算出。*表示因?yàn)楹Ｊ腥緦?dǎo)致的死亡率，但在劑量確認(rèn)研究II中，對(duì)照組有2％的死亡不是由海虱引起的。死亡的數(shù)值包括被剔除的魚(yú)。結(jié)果分析與討論各治療組的食物消耗率范圍為81-92％。計(jì)算出每組的平均實(shí)際消耗劑量，其和額定劑量率一起列在表1、2和3中。對(duì)照組的食物消耗率范圍為77-90％。觀察到對(duì)照組部分魚(yú)的進(jìn)食行為和活動(dòng)在研究期間逐漸消減。這與對(duì)照組魚(yú)的海虱水平較高有關(guān)，當(dāng)海虱活動(dòng)隨著附著幼體成長(zhǎng)為更具破壞性的活動(dòng)海虱而增加時(shí)，這種消減現(xiàn)象最為顯著。在每項(xiàng)研究結(jié)束時(shí)，任何治療組和對(duì)照組之間在平均魚(yú)生物量上無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
所測(cè)試的任何劑量的emamectina苯甲酸鹽都沒(méi)有副作用或?qū)е卖~(yú)死亡。在劑量遞增研究或劑量確認(rèn)研究II中幾乎沒(méi)有魚(yú)死亡，但是因?yàn)樵趧┝看_認(rèn)研究II中海虱數(shù)量多，部分魚(yú)死亡或被剔除(表4)。劑量遞增研究開(kāi)始研究時(shí)，以每池中10條魚(yú)的子樣品為基礎(chǔ)算出的治療前每條魚(yú)的總體附著幼體平均數(shù)是58.1(±21.9)。在重新分布和治療前池與池之間在感染水平上無(wú)顯著差異(F3.36＝1.70，P＞0.05)。治療前的海虱(包括活動(dòng)海虱)平均數(shù)是63-68/魚(yú)。
劑量遞增研究的結(jié)果在表1中列出。早在第7天，所有治療組每條魚(yú)的海虱總數(shù)相對(duì)于對(duì)照組降低了35.4-37.5％。到第21天，25、50和100μg·kg-1治療組每條魚(yú)的海虱平均數(shù)分別降低了89.8、95.2和95.8％。對(duì)照組每條魚(yú)的平均海虱數(shù)為34.5，而50μg·kg-1劑量組的平均海虱數(shù)低至1.7。相對(duì)于對(duì)照組來(lái)說(shuō)，50和100μg·kg-1劑量率組的海虱數(shù)在治療開(kāi)始后的第7、14(P＜0.05)和21天(P＜0.001)都顯著減少。但是，50和100μg·kg-1劑量率組之間無(wú)顯著差異。
對(duì)附著幼體和活動(dòng)期海虱的數(shù)據(jù)也單獨(dú)進(jìn)行了分析，數(shù)據(jù)顯示從第7天至21天，隨著附著幼體的成熟，對(duì)照組活動(dòng)海虱平均數(shù)從平均26.7/魚(yú)升至34.5/魚(yú)(表1)。相反，第21天各治療組每條魚(yú)的活動(dòng)海虱平均數(shù)降至0.1-1.1。
對(duì)照組附著幼體的平均數(shù)也隨著其成熟而減少，從而使活動(dòng)期海虱數(shù)增加(表1)。但是，在所有三個(gè)治療組中，附著幼體平均數(shù)的減少較緩慢，而且無(wú)相應(yīng)的活動(dòng)期海虱數(shù)增加。在第14和21天，所有三個(gè)治療組的附著幼體數(shù)比對(duì)照組高。但是，接受治療的魚(yú)上存在的多數(shù)附著幼體外表異常，看作死亡或不能存活。第7天，接受治療的魚(yú)比對(duì)照組的魚(yú)有更多的I和II期附著幼體，而在對(duì)照組的魚(yú)上，III和IV期附著幼體占有更大的比例，如
圖1所示。第14天(圖2)，接受治療的魚(yú)仍然存在I和II期附著幼體，而對(duì)照組魚(yú)沒(méi)有I和II期附著幼體，只存在少量III和IV期附著幼體。
第21天，多數(shù)接受治療的魚(yú)都沒(méi)有活動(dòng)海虱存在，而部分魚(yú)完全沒(méi)有附著幼體和活動(dòng)海虱。相反，沒(méi)有一條對(duì)照組的魚(yú)上完全沒(méi)有活動(dòng)海虱(表4)。劑量確認(rèn)研究I開(kāi)始研究時(shí)，以每池中9條魚(yú)的子樣品為基礎(chǔ)算出的治療前總體每條魚(yú)的附著幼體平均數(shù)是82.3(±36.6)。在重新分布和治療前池與池之間在感染水平上無(wú)顯著差異(F3.32＝0.55，P＞0.05)。治療前每條魚(yú)的海虱(包括活動(dòng)海虱)總平均數(shù)是87-92。
在本研究中，部分魚(yú)因?yàn)楦吒腥舅蕉劳龌蛘弑惶蕹?。在海虱?shù)保持較高的對(duì)照組中，75％的魚(yú)死亡或被剔除，而在50μg·kg-1治療組中，只有27％的魚(yú)死亡或被剔除(表4)。觀察對(duì)照組死魚(yú)發(fā)現(xiàn)活動(dòng)海虱非常多，而那些對(duì)照組中存活到第21天的魚(yú)可能存在較少的海虱。這樣，如果第21天對(duì)照組中的所有魚(yú)都存活下來(lái)，那么每條魚(yú)的平均海虱數(shù)可能會(huì)高得多。所有死亡和被剔除的魚(yú)都因?yàn)楹Ｊ顒?dòng)引致的損傷。對(duì)照組和治療組的魚(yú)身上的海虱損傷表現(xiàn)為頭部和背部表皮糜爛，并且這些個(gè)體伴有進(jìn)食活動(dòng)減少。到第21天，治療組魚(yú)的整體外觀和進(jìn)食行為明顯改進(jìn)。相反，對(duì)照組存活的少量魚(yú)存在海虱損傷并持續(xù)表現(xiàn)出低落的進(jìn)食反應(yīng)。
劑量確認(rèn)研究I的結(jié)果在表2中列出。第7天，治療組總的每條魚(yú)的海虱平均數(shù)相對(duì)于對(duì)照組已降低了44-54％。到第21天試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，25μg·kg-1治療組海虱平均數(shù)降低了82％，而50μg·kg-1治療組降低了94％。與三個(gè)對(duì)照組中的兩個(gè)對(duì)照組相比，最高劑量率50μg·kg-1組的海虱數(shù)量在第14天和21天顯著降低(P＜0.05)。第三個(gè)平行對(duì)照組在研究結(jié)束時(shí)只有兩條魚(yú)的樣本，因此分析中不包括這個(gè)對(duì)照組。盡管在對(duì)照組和25μg·kg-1劑量組的各個(gè)平行池之間沒(méi)有顯著差異，但當(dāng)把數(shù)據(jù)合并得到更大樣品數(shù)時(shí)，兩者之間有顯著差異(P＜0.001)。同樣，25μg·kg-1劑量組的平行池和50μg·kg-1劑量組的兩個(gè)平行池之間也沒(méi)有顯著差異，但當(dāng)把其數(shù)據(jù)合并時(shí)，兩個(gè)劑量組之間有顯著差異(P＜0.001)。第21天，對(duì)照組、25μg·kg-1劑量組和50μg·kg-1劑量組的合計(jì)平均海虱數(shù)分別為27.3/魚(yú)、4.9/魚(yú)和1.6/魚(yú)。
盡管研究開(kāi)始時(shí)成蟲(chóng)前期和成蟲(chóng)活動(dòng)期海虱相對(duì)較少，但是隨著附著幼體的成熟，到第7天所有組該階段海虱的數(shù)量都增加(表2)。兩個(gè)治療組的魚(yú)身上的活動(dòng)海虱增加的數(shù)量少于對(duì)照組中見(jiàn)到的活動(dòng)海虱增加數(shù)量。第7天到第21天之間，自然死亡以及本研究中感染最嚴(yán)重的魚(yú)的死亡或剔除，對(duì)照組平均海虱數(shù)下降。治療組平均海虱數(shù)隨著時(shí)間而不斷下降，到第21天，海虱總數(shù)比對(duì)照組低82-94％。
表2顯示從研究開(kāi)始到第14天對(duì)照組和25μg·kg-1劑量組的平均附著幼體數(shù)量下降。在第7天和14天，50μg·kg-1劑量組的附著幼體數(shù)量略微增加，但又發(fā)現(xiàn)接受治療的魚(yú)身上存在的附著幼體不能存活，所以到了第21天，所檢測(cè)的魚(yú)身上均無(wú)附著幼體。
第21天，50μg·kg-1劑量組中28.6％的魚(yú)完全沒(méi)有附著幼體和活動(dòng)海虱(表4)。相反，25μg·kg-1劑量組中只有3％的魚(yú)完全沒(méi)有海虱，而對(duì)照組沒(méi)有一條魚(yú)完全沒(méi)有海虱。劑量確認(rèn)研究II各池之間的附著幼體感染水平在重新分布和治療前無(wú)顯著差異(F3.20＝0.428，P＞0.05)。治療前每條魚(yú)上包括活動(dòng)海虱的海虱數(shù)是79-84。
表3中列出的總結(jié)結(jié)果顯示，早在第7天，50μg·kg-1劑量組平均海虱總數(shù)相對(duì)于對(duì)照組降低了46％到第21天降低了95％。在第21天，對(duì)照組每條魚(yú)的總體平均海虱數(shù)是38.1，而50μg·kg-1劑量組只有2.1。在第7、14和21天，所有三個(gè)50μg·kg-1劑量治療組相對(duì)于三個(gè)對(duì)照組來(lái)說(shuō)，海虱數(shù)顯著降低(P＜0.001)。
對(duì)照組平均活動(dòng)海虱數(shù)從第7天的52.2/魚(yú)降至第21天的38.1/魚(yú)(表3)。同期50μg·kg-1劑量組的平均活動(dòng)海虱數(shù)下降得快得多，而且在第21天，每條魚(yú)的平均海虱數(shù)只有0.6。對(duì)照組的平均附著幼體數(shù)量隨著附著幼體的成熟而下降，因此，事實(shí)上到第14天不再有附著幼體存在(表3)。在每次取樣時(shí)，接受治療的魚(yú)比對(duì)照組魚(yú)存在更多的附著幼體，第14天時(shí)這一差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有顯著性(P＜0.001)。在第21天，觀察到接受治療的魚(yú)上繼續(xù)存在的多數(shù)附著幼體為退化類型，認(rèn)為其發(fā)育過(guò)程停止且不能存活。圖3和圖4顯示在第7和14天對(duì)照組和治療組的各個(gè)階段附著幼體的比例。第7天，治療組中I和II期附著幼體所占的比例較大，而對(duì)照組中III和IV期附著幼體更多(圖3)。第14天，接受治療的魚(yú)存在的海虱仍然大多數(shù)是III和IV期附著幼體和部分I和II期附著幼體，而對(duì)照組的魚(yú)每條魚(yú)平均只有0.4的IV期附著幼體(圖4)。
研究結(jié)束時(shí)，27％接受治療的魚(yú)無(wú)附著幼體或活動(dòng)海虱，66％無(wú)活動(dòng)海虱。相反，對(duì)照組的魚(yú)沒(méi)有一條完全沒(méi)有任何階段的附著幼體或活動(dòng)海虱(表4)。到了第21天，對(duì)照組中21％的魚(yú)存在海虱活動(dòng)導(dǎo)致的頭部損傷。50μg·kg-1劑量組中的魚(yú)沒(méi)有記錄到任何頭部損傷，且全部治療組中都沒(méi)有魚(yú)死亡，而對(duì)照組中4％的魚(yú)因?yàn)楹Ｊ瓝p傷而在本研究中被剔除。
在所有三項(xiàng)研究中通過(guò)口服emamectin苯甲酸鹽治療大西洋鮭的活動(dòng)海虱和附著幼體階段的L.Salmonis感染具有很好的療效。在21天的研究期間，寄生物數(shù)量的減少不斷增加。研究發(fā)現(xiàn)50μg·kg-1劑量率的emamectin苯甲酸鹽在減少海虱數(shù)上和100μg·kg-1劑量率一樣有效。盡管大多數(shù)情況下都證實(shí)25μg·kg-1劑量率是有效的，但50μg·kg-1劑量率始終都能達(dá)到更高的94-95％降低率。在劑量確認(rèn)研究I中，25μg·kg-1劑量治療組的魚(yú)身上的平均海虱總量與對(duì)照組沒(méi)有顯著差異，而50μg·kg-1劑量治療組的魚(yú)身上的海虱數(shù)比25μg·kg-1劑量治療組顯著降低。在該研究中，25μg·kg-1劑量治療組接受的基于食物消耗率所得的實(shí)際劑量率只有18.7-22.0μg·kg-1。研究開(kāi)始就感染嚴(yán)重的個(gè)體可能食物攝取量較少，因而藥品攝入減少，而不可能完全得益于藥物治療。這導(dǎo)致該組的死亡率和剔除率較高，而且在所有情況下都是海虱損傷引起的。雖然接受治療的魚(yú)上比對(duì)照組的魚(yú)保有更多的附著幼體，但無(wú)任何相應(yīng)的活動(dòng)海虱數(shù)增加以及不同階段的附著幼體延遲發(fā)育都清楚地說(shuō)明，emamectin苯甲酸鹽對(duì)未成熟的附著幼體期海虱的治療高度有效。
以50μg·kg-1劑量率的emamectin苯甲酸鹽治療后，無(wú)活動(dòng)海虱存在的魚(yú)高達(dá)87％。雖然任何階段的海虱都不存在的魚(yú)只有20-30％，但大部分存在海虱感染的魚(yú)只有附著幼體期海虱。即使接受治療魚(yú)上的多數(shù)附著幼體外表異常而且被看作死亡或不能存活，它們?nèi)岳^續(xù)存在，因?yàn)轭~絲粘附結(jié)構(gòu)破壞以及脫離可能需要一段時(shí)間。在對(duì)附著幼體的效果有利于防止它們發(fā)育成更具破壞性的活動(dòng)海虱的同時(shí)，使活動(dòng)海虱的數(shù)量快速下降也是很重要的，因?yàn)樗鼈儗?duì)寄主魚(yú)的損傷劇烈得多。早在藥物療法開(kāi)始后的第7天，以50μg·kg-1劑量治療的魚(yú)身上的活動(dòng)海虱數(shù)減少了多達(dá)58-80％。
證實(shí)用emamectin苯甲酸鹽治療后去除海虱使海虱寄生物引起的表皮損傷減輕。在劑量確認(rèn)研究I中，海虱損傷導(dǎo)致一部分魚(yú)死亡和剔除，這降低了該研究的有效性。為此重復(fù)了該研究的試驗(yàn)，但結(jié)果證明了用emamectin治療的保護(hù)性有益作用。
大部分批準(zhǔn)用于控制海虱感染的治療方法不能同時(shí)有效對(duì)抗未成熟附著幼體和成熟活動(dòng)期海虱(Roth，Richards & Sommerville1993)，而且這些治療方法必須小心地注意時(shí)機(jī)以保證大部分海虱在處于其生活周期的敏感階段得到治療。海虱的幼蟲(chóng)可以繼續(xù)生長(zhǎng)至具生殖能力的成蟲(chóng)以使種群連續(xù)再生。對(duì)所有階段的寄生物都有效的治療方法其優(yōu)點(diǎn)在于可以控制其生活周期任何時(shí)間點(diǎn)的海虱，從而防止其繁殖。喂飼中治療可使所有籠同時(shí)得到控制以至于可以進(jìn)行全方位的治療，從而降低了治療的頻率。
盡管結(jié)合以上具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，但是替代方法、改進(jìn)方法和變換方法對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的。所有這些替代方法、改進(jìn)方法和變換方法均在在本發(fā)明的精神和范疇內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種消除、減少或防止魚(yú)群寄生物的方法，該方法包括持續(xù)3-14天以每天每kg魚(yú)生物量25μg至400μg的日劑量喂飼所述魚(yú)群emamectin或其鹽。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述寄生物是體內(nèi)寄生物。
3.權(quán)利要求2的方法，其中使用emamectin苯甲酸鹽。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述寄生物是體外寄生物。
5.權(quán)利要求4的方法，其中使用emamectin苯甲酸鹽。
6.權(quán)利要求5的方法，其中持續(xù)至少7天以25-100μg/kg魚(yú)生物量/天的劑量率喂飼emamectin苯甲酸鹽。
7.權(quán)利要求5的方法，其中持續(xù)至少7天以50-75μg/kg魚(yú)生物量/天的劑量率喂飼emamectin苯甲酸鹽。
8.權(quán)利要求5的方法，其中所述寄生物是海虱，而且給予所述日劑量至少7天。
9.權(quán)利要求8的方法，其中以25-100μg/kg魚(yú)生物量/天的劑量率喂飼emamectin苯甲酸鹽。
10.權(quán)利要求9的方法，其中以50-75μg/kg魚(yú)生物量/天的劑量率喂飼emamectin苯甲酸鹽。
11.一種用于制備消除、減少或防止魚(yú)群寄生物的藥用魚(yú)食的套裝藥盒，該套裝藥盒包括提供emamectin或其鹽以及印刷說(shuō)明書(shū)，以便可持續(xù)3-14天以25μg至400μg/kg魚(yú)生物量/天的日劑量喂飼emamectin或其鹽。
12.權(quán)利要求11的套裝藥盒，其中所述emamectin是emamectin苯甲酸鹽，且所述說(shuō)明書(shū)說(shuō)明以25μg至100μg/kg魚(yú)生物量/天的日劑量持續(xù)喂飼7-14天。
13.權(quán)利要求11的套裝藥盒，其中所述說(shuō)明書(shū)說(shuō)明以50μg至75μg/kg魚(yú)生物量/天的日劑量持續(xù)喂飼7-14天。
14.權(quán)利要求11的套裝藥盒，其中所述說(shuō)明書(shū)說(shuō)明以50μg/kg魚(yú)生物量/天的日劑量持續(xù)喂飼1周。
15.權(quán)利要求14的套裝藥盒，其中所述ememectin苯甲酸鹽為包含0.01％至1％(重量)的ememectin苯甲酸鹽的預(yù)混合物。
16.權(quán)利要求15的套裝藥盒，其中所述預(yù)混合物包括(a)0.01-1％(重量)emamectin苯甲酸鹽；(b)0.001-0.2％(重量)的防腐劑；(c)1-4％(重量)的丙二醇或者聚乙二醇；及(d)適量稀釋劑。
17.權(quán)利要求16的套裝藥盒，其中所述預(yù)混合物包括(a)0.2％(重量)的emamectin苯甲酸鹽；(b)0.01％(重量)的丁基化羥基苯甲醚；(c)2.5％(重量)的丙二醇；(d)49.8％(重量)的玉米淀粉；及(e)適量的麥芽糖糊精M-100。
全文摘要
本發(fā)明提供一種方法,該方法通過(guò)持續(xù)3－14天以每天每kg魚(yú)生物量25μg至400μg的日劑量喂飼魚(yú)群emamectin或其鹽來(lái)消除、減少或防止魚(yú)群寄生物。本發(fā)明還提供一種制備用于消除、減少或防止魚(yú)群寄生物的藥用魚(yú)食的套裝藥盒,該套裝藥盒提供emamectin或其鹽以及印刷說(shuō)明書(shū),以便持續(xù)3－14天以每天每kg魚(yú)生物量25μg至400μg的日劑量喂飼emamectin或其鹽。
文檔編號(hào)A23K1/18GK1356875SQ00808447
公開(kāi)日2002年7月3日 申請(qǐng)日期2000年4月6日 優(yōu)先權(quán)日1999年4月8日
發(fā)明者A·S·哈克, Z·J·邵, K·J·瓦馬 申請(qǐng)人:先靈-普勞有限公司