專利名稱：一種液體組培繁殖魔芋的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到一種液體組培繁殖魔芋的方法，屬于植物的栽培方法技術(shù)領(lǐng)域，尤其適用于魔芋育苗繁殖。
背景技術(shù)：
魔芋球莖含有較高的有機葡甘聚糖，是一種可溶性半纖維，具有凝膠，成膠等性能和顯著的減肥、降脂、降血糖的功效，可用于食品工業(yè)、化學工業(yè)、醫(yī)藥工業(yè)、農(nóng)業(yè)、環(huán)保等多個領(lǐng)域，隨著魔芋產(chǎn)品的價值被市場越來越重視，目前魔芋種植已經(jīng)在長江流或大面積展開，但是由于魔芋的自然繁殖系數(shù)低，多年來采用傳統(tǒng)的留種繁殖法，致使病毒積累，品種退化，優(yōu)良種源缺少，難以形成產(chǎn)業(yè)規(guī)模。近年來有人開始探討利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖魔芋，即采取優(yōu)良植物體上的任何組織，通過人工配制不同營養(yǎng)成分和激素控制，使這一組織形成成千上萬個植株并且保存了母體全部優(yōu)良性狀，這種方法可以在短時間內(nèi)獲得大量組培苗，節(jié)約大量種用魔芋，同時可脫毒病毒保持品種的優(yōu)良性狀，減少遺傳病，緩解優(yōu)質(zhì)種源的不足。但是由于魔芋組織含酚類物質(zhì)比較多，使用傳統(tǒng)瓊脂類培養(yǎng)基和組培方法易產(chǎn)生褐化，嚴重影響培養(yǎng)增值芽的速度和質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種液體組培繁殖魔芋的方法，抑制魔芋種塊在組培過程中的褐變現(xiàn)象，以提高增值速度和增值芽的數(shù)量和品質(zhì)。
本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實現(xiàn)的這種液體組培繁殖魔芋的方法包括1)、種芋消毒將1-2年的魔芋塊莖洗凈，在無菌條件下切成小塊，用酒精、氯化汞液、頭孢唑林鈉溶液其中一種或幾種浸泡消毒；2)、液體培養(yǎng)將魔芋小塊置于含有磷、鉀、維生素、生長激素、食糖其中一種或幾種有效成分的液體培養(yǎng)基內(nèi)，經(jīng)暗培養(yǎng)5-10天，光照培養(yǎng)5-10天，形成形成愈傷組織；3)、叢生芽的增殖將帶有突起的愈傷組織按1∶3-1∶4的比例切割，接種于包括K、P、Ca、Mg、B、Zn、Mn、Fe鹽其中一種或幾種，生長激素卞基嘌呤(6-BA)、荼乙酸(NAA)、吲哚丁酸(IBA)其中一種或幾種、維生素VB1、VB6、煙酸、肌醇其中一種或幾種的液體培養(yǎng)基中，光照培養(yǎng)7-10天形成芽點；所述的液體組培繁殖魔芋的方法中所述液體培養(yǎng)基的組份比例包括(mg/L)氯化鈣0-440、硫酸鎂0-370、磷酸二氫鉀170-200、硼酸0-10.5、硫酸鋅0-8.6、硫酸錳0-2230、硫酸亞鐵0-30.5、乙二銨四乙酸二鈉0-37、VB10.5-2、VB60.5-2，煙酸0.5-2.0、卞基嘌呤(6-BA)0.5-2.0、荼乙酸(NAA)0-0.5、吲哚丁酸(IBA)0-0.5、水解乳蛋白0-200、蔗糖10000-30000、水余量。
所述的液體組培繁殖魔芋的方法中所述液體培養(yǎng)基的組份較好比例包括(mg/L)氯化鈣440、硫酸鎂370、磷酸二氫鉀190、硼酸10、硫酸鋅8.6、硫酸錳2230、硫酸亞鐵30.5、乙二銨四乙酸二鈉27、VB11.5、VB61.5，煙酸1.5、卞基嘌呤(6-BA)2.0、荼乙酸(NAA)0.5蔗糖30000、水余量。
所述的工廠化快速繁殖魔芋的方法中用于分化液體培養(yǎng)基的較好比例還包括氯化鈣440、硫酸鎂370、磷酸二氫鉀190、硼酸10、硫酸鋅8.6、硫酸錳2230、硫酸亞鐵30.5、乙二銨四乙酸二鈉27、VB11.5、VB61.5，煙酸1.5、卞基嘌呤(6-BA)1.5、荼乙酸(NAA)0.2、水解乳蛋白200、蔗糖30000、水余量。
所述的工廠化快速繁殖魔芋的方法也適用于快速繁殖馬鈴薯、紅薯、山藥或其它塊莖類植物。
本發(fā)明采用的技術(shù)方案，對防治褐化、愈傷、快速誘導(dǎo)叢生芽的分化起到重要作用。其優(yōu)點表現(xiàn)為初培養(yǎng)中(愈傷組織的培養(yǎng))，誘導(dǎo)率從70％提高到100％，叢生芽的誘導(dǎo)率從70％提高到90％以上。叢生芽的誘導(dǎo)周期由原來的40天以上，縮短到20-30天，叢生芽生長狀態(tài)很好。
具體實施例方式
實施例1、叢生芽分化培養(yǎng)1)、取材，在芽萌發(fā)之前取1-2年魔芋地下塊莖，洗凈后吸干多余水份。
2)、材料消毒方法在無菌條件下，將吸水后的魔芋塊莖切成5cm左右的塊，在75％的酒精中浸泡20-30秒，然后放入0.1％汞液中消毒10-15分鐘，無菌水沖洗4次，分割成0.3-0.5cm的小方塊，置于1％的頭孢唑林鈉抗菌素溶液中消毒3分鐘備用。
3)、愈傷組織培養(yǎng)在無菌條件下，將滅菌的培養(yǎng)物接種到液體培養(yǎng)基內(nèi)，培養(yǎng)基的組分是(mg/L)氯化鈣200、硫酸鎂250、磷酸二氫鉀170、硼酸6.0、硫酸鋅3.5、硫酸錳10、硫酸亞鐵27.8、乙二銨四乙酸二鈉20、VB10.5、VB60.5，煙酸0.5、卞基嘌呤(6-BA)1.0、蔗糖20000、水余量。接種后暗培養(yǎng)一周，然后進行光照培養(yǎng)，培養(yǎng)20天左右，愈傷組織直徑達1-2cm。
4)、分化培養(yǎng)將愈傷組織按1∶3-1∶4的分化數(shù)切割，接種到液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的組分是(mg/L)氯化鈣440、硫酸鎂370、磷酸二氫鉀190、硼酸10、硫酸鋅8.6、硫酸錳2230、硫酸亞鐵30.5、乙二銨四乙酸二鈉27、VB11.5、VB61.5，煙酸1.5、卞基嘌呤(6-BA)1.0、蔗糖30000、水余量。5天后觀察到愈傷組織上出現(xiàn)明顯的芽點，15左右叢生芽苗長1cm，20-25天，叢生芽苗高1-3cm，有效芽苗達80％。此培養(yǎng)的光照強度為1500LX，光照時間12小時。實施例2、分化增殖培養(yǎng)1)、2)、3)、步驟與實施例1相同；4)、分化增殖將愈傷組織，按1∶3-1∶4分化數(shù)切割，然后接種到液體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基的組分是(mg/L)氯化鈣440、硫酸鎂370、磷酸二氫鉀190、硼酸10.5、硫酸鋅8.6、硫酸錳2230、硫酸亞鐵30.5、乙二銨四乙酸二鈉27、VB11.5、VB61.5，煙酸1.5、水解乳蛋白200、卞基嘌呤(6-BA)2.0、荼乙酸(NAA)0.5蔗糖30000、水余量。5天左右觀察到愈傷組織變色，7天左右形成大量芽點，20-25天芽點增殖系數(shù)達6-10個，分化增殖率達90％。在芽分化培養(yǎng)過程中，塊莖表面不斷產(chǎn)生叢生芽，芽的分化能力很強，一個芽按年繁殖8代計算，一年可繁殖有效芽苗130多萬株。此培養(yǎng)所需溫度22-28℃，光照強度1500LX，光照時間12小時。
在實施例1或2中取魔芋塊莖作培養(yǎng)材料，愈傷組織培養(yǎng)階段加入的液體培養(yǎng)基一般不要超過魔芋塊的1/3，保持濕度使之維持正常生長20天左右。增殖分化階段加入液體培養(yǎng)基可適當多一些，使之能維持正常生長25天左右。
本發(fā)明提供的魔芋液體組培方法亦可用于培養(yǎng)其它塊莖植物，如馬鈴薯、紅薯、山藥等。
權(quán)利要求
1.一種液體組培繁殖魔芋的方法包括1)、種芋消毒將1-2年的魔芋塊莖洗凈，在無菌條件下切成小塊，用酒精、氯化汞液、頭孢唑林鈉溶液其中一種或幾種浸泡消毒；2)、液體培養(yǎng)將魔芋小塊置于含有磷、鉀、維生素、生長激素、食糖其中一種或幾種有效成分的液體培養(yǎng)基內(nèi)，經(jīng)暗培養(yǎng)5-10天，光照培養(yǎng)5-10天，形成形成愈傷組織；3)、叢生芽的增殖將帶有突起的愈傷組織按1∶3-1∶4的比例切割，接種于包括K、P、Ca、Mg、B、Zn、Mn、Fe鹽其中一種或幾種，生長激素卞基嘌呤(6-BA)、荼乙酸(NAA)、吲哚丁酸(IBA)其中一種或幾種、維生素VB1、VB6、煙酸、肌醇其中一種或幾種的液體培養(yǎng)基中，光照培養(yǎng)7-10天形成芽點。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液體組培繁殖魔芋的方法，其特征在于所述液體培養(yǎng)基的組份包括(mg/L)氯化鈣0-440、硫酸鎂0-370、磷酸二氫鉀170-200、硼酸0-10.5、硫酸鋅0-8.6、硫酸錳0-2230、硫酸亞鐵0-30.5、乙二銨四乙酸二鈉0-37、VB10.5-2、VB60.5-2，煙酸0.5-2.0、卞基嘌呤(6-BA)0.5-2.0、荼乙酸(NAA)0-0.5、吲哚丁酸(IBA)0-0.5、水解乳蛋白0-200、蔗糖10000-30000、水余量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的液體組培繁殖魔芋的方法，其特征在于所述液體培養(yǎng)基的組份包括(mg/L)氯化鈣440、硫酸鎂370、磷酸二氫鉀190、硼酸10.5、硫酸鋅8.6、硫酸錳2230、硫酸亞鐵30.5、乙二銨四乙酸二鈉27、VB11.5、VB61.5，煙酸1.5、卞基嘌呤(6-BA)1.5、蔗糖30000、水余量。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的工廠化快速繁殖魔芋的方法，其特征在于所述液體培養(yǎng)基的組份還包括氯化鈣440、硫酸鎂370、磷酸二氫鉀190、硼酸10、硫酸鋅8.6、硫酸錳2230、硫酸亞鐵30.5、乙二銨四乙酸二鈉27、VB11.5、VB61.5，煙酸1.5、卞基嘌呤(6-BA)2.0、荼乙酸(NAA)0.5、水解乳蛋白200、蔗糖30000、水余量。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4所述的工廠化快速繁殖魔芋的方法，其特征還包括本方法適用于快速繁殖馬鈴薯、紅薯、山藥或其它塊莖類植物。
全文摘要
本發(fā)明提供一種液體組培繁殖魔芋的方法,抑制魔芋種塊在組培過程中的褐變現(xiàn)象,以提高增值速度和增值芽的數(shù)量和品質(zhì)。這種液體組培繁殖魔芋的方法包括:1)、種芋消毒;2)、液體培養(yǎng);3)、叢生芽的增殖幾個步驟;所述的液體培養(yǎng)基組份比例包括(mg/L):氯化鈣0－440、硫酸鎂0－370、磷酸二氫鉀170－200、硼酸0－10.5、硫酸鋅0－8.6、硫酸錳0－2230、硫酸亞鐵0－30.5、乙二銨四乙酸二鈉0－37.5、V
文檔編號A01H4/00GK1332956SQ0113120
公開日2002年1月30日 申請日期2001年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2001年8月31日
發(fā)明者王玉珍, 羅景蘭 申請人:中國科學院石家莊農(nóng)業(yè)現(xiàn)代化研究所