專(zhuān)利名稱(chēng)：用于水生物種的富含二十二碳六烯酸的可捕食生物的培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域，特別是提供一種生產(chǎn)富含高價(jià)不飽和脂肪酸(HUFA)，尤其是二十二碳六烯酸(DHA)的可捕食生物的方法。同時(shí)也提供了基于這種生物的飼料組合物。
背景技術(shù)：
大量消費(fèi)者所需的如鮭魚(yú)、鱒魚(yú)、大比目魚(yú)和鰻鱺等海洋食物種類(lèi)的消費(fèi)不斷增加，由于這種大量的需求和有限的天然原種，人們作了很多努力，開(kāi)發(fā)低成本率喂養(yǎng)上述物種的水產(chǎn)養(yǎng)殖。一個(gè)特別重要的問(wèn)題是保證所養(yǎng)殖物種孵化出的幼蟲(chóng)的高存活率。
水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的擴(kuò)大需要注意幾個(gè)問(wèn)題，其中一個(gè)最重要的問(wèn)題是難以供應(yīng)活的可捕食生物，這種可捕食生物為魚(yú)蚴提供足夠營(yíng)養(yǎng)的食物。野生仔魚(yú)以一種能提供均衡營(yíng)養(yǎng)的混合種群浮游可捕食生物為食。但是，收集足夠多的浮游生物來(lái)滿(mǎn)足水產(chǎn)養(yǎng)殖的需求是不可行的。作為一種替代方法，經(jīng)挑選的可捕食生物種類(lèi)，特別是輪蟲(chóng)和Artemia類(lèi)當(dāng)前正被培養(yǎng)并用作食物。
但是通常這種人工培養(yǎng)的可捕食生物雖然能提供大量的蛋白質(zhì)和能量，含有某種類(lèi)脂組合物，這種類(lèi)脂組合物沒(méi)有包含對(duì)某些高價(jià)不飽和脂肪酸(HUFA)，特別是二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)的需求，可是DHA和EPA對(duì)魚(yú)蚴的最佳存活、發(fā)育和成長(zhǎng)是必須的。特別是人們已經(jīng)知道高含量的DHA是必須的，并且可捕食生物中DHA和EPA的比應(yīng)該至少為1∶1，最好是至少為2∶1。為了提供含有那種關(guān)于HUFA的組合物的可捕食生物，有必要在含有高含量DHA的富集組合物存在的情況下培養(yǎng)這種生物，更適宜的是至少為20％的重量比，DHA和EPA的比率要超過(guò)在可捕食生物中的目標(biāo)比率，例如至少是3∶1，并且最好是更高些。
當(dāng)前人們正在關(guān)注這個(gè)問(wèn)題，他們用在富集組合物存在情況下培養(yǎng)可捕食生物，以使這些生物富含這些重要的脂肪酸。但是，當(dāng)前用于該目的的，可供給市售的組合物，如以商品名Selco出售的乳狀液產(chǎn)品不能滿(mǎn)足上述要求，因?yàn)槠銬HA含量相對(duì)較低和/或DHA∶EPA的比率不夠高。有人已經(jīng)報(bào)導(dǎo)了采用這類(lèi)組合物，總類(lèi)脂物中的3-5％的Artemia富集量(McEvoyet al.Aquaculture 163(1998)237-250)，也有人已經(jīng)報(bào)導(dǎo)了用這類(lèi)Artemia喂養(yǎng)魚(yú)蚴，魚(yú)蚴的存活率范圍在12％-15％之間(McEvoy et al，supra；；Navarro et al，J.Fish.Biol.43(1993)503-515)。在這方面，存活率定義為自第一次喂養(yǎng)到變態(tài)的存活百分率。對(duì)于劃算的水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)，應(yīng)該獲得50％的魚(yú)蚴存活率，或者最好是更高些。
用于可捕食生物富集作用的其他市售組合物是以商品名Algamac(TM)出售的，它含有高達(dá)14％重量比的DHA；和金槍魚(yú)油(TOO)，含有高達(dá)30％重量比的DHA。
WO99/37166公開(kāi)了一種利用基于從海藻油提取的廢液流中獲得的HUFA的干皂粉的魚(yú)幼體的必需營(yíng)養(yǎng)來(lái)富集活的可捕食生物的方法。提供這些粉末的原材料含有磷脂和23％重量比的DHA，但顯然沒(méi)有其他n-3脂肪酸。大約是干重量的2.7％的Artemia富集水平被公開(kāi)了，但是沒(méi)有公開(kāi)在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用和對(duì)于魚(yú)幼體存活的功效。
在WO99/06585專(zhuān)利中介紹了另一種用于水產(chǎn)養(yǎng)殖的原料。實(shí)施例公開(kāi)了DHA的含量為24％重量比，但是未公布磷脂的含量。但是這種原料含有高比率的游離脂肪酸(約32-37％重量比))和高含量的非類(lèi)脂原料(約39-44％重量比)，這種非類(lèi)脂原料可以減少可捕食動(dòng)物的類(lèi)脂攝取量。高含量的游離脂肪酸通常被認(rèn)為對(duì)魚(yú)蚴和新生的幼體是有害的。
上面最后提到的兩種原料都不是魚(yú)基的，并且他們都缺少許多在魚(yú)類(lèi)中發(fā)現(xiàn)的HUFA，例如EPA和其他n-3脂肪酸。
按照Sargent等人最近的觀點(diǎn)(Aquaculture 179(1999)217-229)，他們強(qiáng)調(diào)除了HUFA方面的需求，魚(yú)蚴還有在磷脂方面的規(guī)定食物，并且強(qiáng)調(diào)魚(yú)蚴理想的餌料是含有類(lèi)似于雞蛋蛋黃的組合物。按照這些作者的觀點(diǎn)，魚(yú)卵黃包括約10％重量比(干的物質(zhì)組合物)的磷脂，它含有17％重量比的DHA和約9％重量比的EPA。這些作者總結(jié)他們的觀點(diǎn)認(rèn)為，存在的問(wèn)題是關(guān)于如何用當(dāng)前可用原料，以商業(yè)規(guī)模制備這種餌料。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，以商業(yè)規(guī)模提供富集水產(chǎn)養(yǎng)殖可捕食生物是可能的，這些可捕食生物具有與魚(yú)卵黃非常相近于HUFA和磷脂的組合物。通過(guò)利用本發(fā)明的可捕食生物，獲得魚(yú)幼體如大比目魚(yú)幼體最佳的存活、生長(zhǎng)、色素淀積和形態(tài)形成是可能的。作為例證，本發(fā)明提供了幼體階段較高的存活率，提高了比較早公開(kāi)的魚(yú)，例如大比目魚(yú)的類(lèi)質(zhì)量參數(shù)，從而使許多高需求魚(yú)類(lèi)的水產(chǎn)養(yǎng)殖在經(jīng)濟(jì)和商業(yè)上更加可行。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一，本發(fā)明提供一種用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的生產(chǎn)可捕食生物的方法，特別是喂養(yǎng)幼魚(yú)，該方法包括養(yǎng)殖所述的生物，在它們的生命周期的至少一部分時(shí)期中，處于含水介質(zhì)中，而這種含水介質(zhì)至少含有30％重量比的DHA含量的類(lèi)脂組合物中培養(yǎng)所述生物的方法。
本發(fā)明的另一個(gè)目的，本發(fā)明提供一種在幼體或者非幼體階段飼養(yǎng)魚(yú)的組合物，所述的組合物包括以上提到的可捕食生物；所述的生物至少含有該生物中總類(lèi)脂含量的12％重量比的DHA。
本發(fā)明的另一個(gè)目的，本發(fā)明提供一個(gè)生產(chǎn)含有低于50％重量比的水(包括不多于10％重量比的水)的組合物的方法，根據(jù)以上的方法生產(chǎn)活的生物的方法，以及至少部分地把培養(yǎng)的生物從含水介質(zhì)中分離出來(lái)。
還有另一個(gè)目的，本發(fā)明提供一種將上述組合物用于喂養(yǎng)幼體階段或者后幼體階段的水生生物。
根據(jù)本發(fā)明的用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的生產(chǎn)可捕食生物的方法，特別是喂養(yǎng)幼魚(yú)，該方法包括養(yǎng)殖所述的生物，在它們的生命周期的至少一部分時(shí)期中，處于含水介質(zhì)中，而這種含水介質(zhì)至少含有30％重量比的DHA含量的類(lèi)脂組合物中培養(yǎng)所述生物的方法。
本文中，措詞“可捕食生物”是指任何能被用作水產(chǎn)養(yǎng)殖設(shè)備中生產(chǎn)的海洋物種的魚(yú)蚴的活飼料的海洋生物。對(duì)那種捕食生物的一般評(píng)述可見(jiàn)1995年國(guó)際糧食和農(nóng)業(yè)組織公布的“水產(chǎn)養(yǎng)殖的活食的生產(chǎn)和應(yīng)用指南”，Lavens & Sorgeloos(eds.)，這里可以作為參考。相應(yīng)地最常用的被捕食性生物包括幾個(gè)種類(lèi)和微藻類(lèi)、輪蟲(chóng)、Artemia和浮游動(dòng)物類(lèi)，浮游動(dòng)物包括橈腳亞綱類(lèi)、水蚤類(lèi)、線(xiàn)蟲(chóng)類(lèi)核擔(dān)輪幼蟲(chóng)。
這里所用的術(shù)語(yǔ)“水產(chǎn)養(yǎng)殖”是指最大范圍內(nèi)的，它包括在水產(chǎn)養(yǎng)殖條件下生產(chǎn)的任何水生物種的任何產(chǎn)品，如魚(yú)類(lèi)包括如鮭魚(yú)、鱒魚(yú)、鯉魚(yú)、鱸魚(yú)、鳊魚(yú)、大比目魚(yú)、海鱸、鰈魚(yú)、遮目魚(yú)、銀白胭脂魚(yú)、石斑魚(yú)、比目魚(yú)、海鯛、鱈魚(yú)、黑線(xiàn)鱈、日本比目魚(yú)、鰻魚(yú)；甲殼類(lèi)動(dòng)物如小蝦、龍蝦、小龍蝦、螃蟹；軟體類(lèi)動(dòng)物如雙殼類(lèi)體動(dòng)物。
這些水生物種的一個(gè)共同特征是生命周期中包括一個(gè)或多個(gè)可能有特別的營(yíng)養(yǎng)需求的幼蟲(chóng)階段，并且對(duì)于成功的水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)來(lái)說(shuō)，相應(yīng)的能滿(mǎn)足這些需求的活的可捕食生物的供應(yīng)是基本因素。如上所述，高含量的基本脂肪酸DHA就是這樣一種特別的需求，術(shù)語(yǔ)“基本”表明可捕食生物不是能重新合成的化合物。
在本方法的可行的實(shí)施例中，可捕食生物進(jìn)行培養(yǎng)，一直至少要達(dá)到50％培養(yǎng)的生物中總類(lèi)脂含量的DHA含量是12％重量比，或者更多。培養(yǎng)的生物總類(lèi)脂含量中至少含有DHA為15％重量比，其中包括至少17.5％重量比，例如可以是至少20％重量比，至少25％重量比。
本發(fā)明允許在大經(jīng)濟(jì)規(guī)模培養(yǎng)可捕食動(dòng)物，以便為魚(yú)類(lèi)，例如比目魚(yú)的商業(yè)養(yǎng)殖提供合適的飼料。這些魚(yú)類(lèi)在其幼體階段特別敏感，已經(jīng)證明在這個(gè)階段用人工方法狀態(tài)進(jìn)行水產(chǎn)養(yǎng)殖是很難成功的。根據(jù)這個(gè)方法，要培養(yǎng)的水生生物可以從所有能在水產(chǎn)業(yè)中飼養(yǎng)和使用的水生生物中選擇，在可行的實(shí)施例中，生物可以是甲殼類(lèi)例如Artemia，橈足類(lèi)，水蚤，裸腹蚤屬(moina)類(lèi)；輪蟲(chóng)類(lèi)例如折皺臂尾輪蟲(chóng)(Brachionus plicatiklis)，圓葉臂尾輪蟲(chóng)(Brachionusrotundiformis)，和Brachionus rubens；或者腕足類(lèi)動(dòng)物。
實(shí)施例中包括的Artemia類(lèi)物種特別有用。Artemia類(lèi)物種可以進(jìn)行培養(yǎng)，并根據(jù)本發(fā)明的方法在無(wú)節(jié)幼蟲(chóng)、后無(wú)節(jié)幼蟲(chóng)以及成熟體階段使用。
在本方法的特別實(shí)施例中，使用的類(lèi)脂成分是一種基本上含有甘油三酸酯或者包含富含磷脂成分的成分。如上面所述，除了DHA成分，磷脂成分也是成功水產(chǎn)養(yǎng)殖許多物種的關(guān)鍵成分。因此，本方法的可行的實(shí)施例中，在其中培養(yǎng)生物的含水介質(zhì)包括含有類(lèi)脂的組合物，該組合物包括至少含有25％重量比的富含磷脂成分，例如至少含有40％重量比磷脂的富含磷脂成分，至少含有50％重量比磷脂更好，例如60％重量比和70％重量比，組合物至少含有30％重量比的DHA。
在本文中，術(shù)語(yǔ)“磷脂”用來(lái)描述一類(lèi)磷酸單酯或二酯的類(lèi)脂物。這樣磷脂包括卵磷脂(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇激酶(PI)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰絲胺酸(PS)、磷脂酸(PA)。術(shù)語(yǔ)“卵磷脂”通常也用于上述磷脂的混合物。
與本發(fā)明相一致，任何的富含磷脂成分都可以用在本方法的組合物中。但是當(dāng)前較好的磷脂是從海洋生物原料中分離出來(lái)的磷脂，所述的原料包括新鮮原料和干燥原料。新鮮原料包括魚(yú)和其它海洋生物的內(nèi)臟，魚(yú)肉、魚(yú)卵、魷魚(yú)、軟體動(dòng)物、浮游生物。干燥原料包括魚(yú)肉，例如青魚(yú)、毛鱗魚(yú)、鯖魚(yú)、鯡魚(yú)、沙丁魚(yú)、鳳尾魚(yú)、金槍魚(yú)、藍(lán)鱈魚(yú)，也可以是浮游生物的肉。
根據(jù)本發(fā)明這些基于魚(yú)的材料特別實(shí)用，因?yàn)樗鼈儾粌H提供DHA的高含量，而且包含EPA和其它n-3PUFA，魚(yú)的特征包括18∶3、18∶4、20∶4和22∶5，和幼魚(yú)的自然食物在相似的范圍。
在可行的實(shí)施例中，富含磷脂的成分提供了所需的DHA含量，但是在其他實(shí)施例中，磷脂成分中的DHA含量可能不足。在那種情況下，至少要加入另一種能提供足夠DHA含量的磷脂成分。典型的另一種磷脂成分，包含至少20％重量比的DHA，較好的是至少含有30％重量比的DHA，最好是含有至少50％重量比的DHA。在較佳實(shí)施例中，另一種磷脂成分含有至少60％重量比的DHA，例如至少70％重量比的DHA，也包括至少90％重量比的DHA。
如果需要，還可在本發(fā)明中的組合物中加入一定量的另一種富含DHA的類(lèi)脂成分，使該組合物中DHA總含量至少為30％重量比。按照富含磷脂成分的DHA含量，所要求另加的類(lèi)脂成分中的含量可在5-99％重量比范圍內(nèi)。在本發(fā)明的某些實(shí)施例中，另加的類(lèi)脂成分的含量在50-95％重量比的范圍內(nèi)，例如約50-70％重量比范圍，或者更高。
如果需要供應(yīng)富含磷脂成分以加強(qiáng)DHA的水平，含磷脂成分的比例是在1-99％重量比范圍之間變化，例如范圍為2-75％重量比，包括5-50％重量比范圍，又例如范圍為5-25％重量比之間，包括10-20％重量比之間。
另一種類(lèi)脂成分可以是天然存在的至少含有20％重量比的DHA的類(lèi)脂類(lèi)，任何此類(lèi)類(lèi)脂類(lèi)是用化學(xué)方法合成或酶法形成的。在可行的實(shí)施例中，另一種類(lèi)脂成分物基本上包括甘油酯，例如甘油三酸酯。這種帶有高DHA含量的成份能在化學(xué)催化劑存在下，由DHA以游離脂肪酸與甘油接觸得到甘油三酸酯，或者通過(guò)能從反應(yīng)物中生成甘油酯的酶，包括(從念珠菌屬antactic中分離出的脂肪酶)的作用下，得到甘油三酸酯。盡管游離脂肪酸不是一般推薦的喂養(yǎng)魚(yú)的可捕食生物的主要成分，在目前的工藝水平中一般認(rèn)為高含量的游離脂肪酸對(duì)幼魚(yú)有害。在本發(fā)明的方法優(yōu)選實(shí)施例中，用于喂養(yǎng)可捕食生物的含類(lèi)脂組合物中含有的游離脂肪酸不超過(guò)10％重量比，超過(guò)5％重量比更好，例如不超過(guò)2％重量比。在某些實(shí)施例中，基于以上原因，其他的類(lèi)脂成分從魚(yú)基來(lái)源得到，例如這種原料額外提供了另外所需的n-3HUFA。
如上所述，可以看出，不但魚(yú)蚴的食物中要求有高含量的DHA，而且捕食性生物中DHA和EPA之間的比率對(duì)養(yǎng)殖物種的魚(yú)蚴的存活和發(fā)育都很重要。通常認(rèn)為捕食性生物中DHA∶EPA的比值至少應(yīng)為1∶1，較好的是至少2∶1。為了在捕食性生物中獲得所需的比值，給捕食性生物的富集組合物就要求十分高的比值。相應(yīng)地，本發(fā)明中的富集組合物中DHA∶EPA的重量比的范圍在1∶1到10∶1之間，更好的例如2∶1到8∶1，包括4∶1到6∶1間的范圍。
如上所述可知，在本方法中，飼養(yǎng)混合物中具有高含量的DHA對(duì)得到本發(fā)明所需結(jié)果是具有重要意義的，例如至少含有30％重量比，35％重量比更好，包括40％重量比，更好的是50％重量比，包括60％重量比，例如至少70％重量比。
本方法的在含水介質(zhì)中類(lèi)脂組合物或者類(lèi)脂成分的濃度可以是任何提供效喂養(yǎng)的濃度，并由此富集可捕食生物。在可行的實(shí)施例中，類(lèi)脂組合物或者類(lèi)脂成分的濃度總計(jì)在一個(gè)范圍0.01-5g/L，包括0.01-1g/L，例如0.01-0.1g/L的范圍內(nèi)。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，類(lèi)脂成分或者類(lèi)脂組合物在含水介質(zhì)中是一種乳化液形式，例如是一種由可捕食生物可攝取的膠束顆粒大小，例如平均最大尺寸范圍是1-100微米，包括1-50微米。
在某些可行實(shí)施例中，含水介質(zhì)是海水或者添加了氯化鈉的模擬海水。
另一方面，本發(fā)明提供了一種喂養(yǎng)在幼體或者非幼體階段的海洋生物的組合物，組合物包括至少含有12％重量比DHA的類(lèi)脂的可捕食生物，至少15％重量比總類(lèi)脂更好，至少20％重量比更好，包括至少25％重量比總類(lèi)脂，例如至少30％重量比和35％重量比總類(lèi)脂。所述的生物可以是在含水介質(zhì)中飼養(yǎng)的任何有用的可捕食生物，例如包括Atemia和橈足類(lèi)，水蚤和monia的甲殼類(lèi)動(dòng)物，包括折皺臂尾輪蟲(chóng)(Brachionus plicatilis)、圓葉臂尾輪蟲(chóng)(Brachionus rotundiformis)、腕足rubens的輪蟲(chóng)類(lèi)。
從以上可知，為了提供組合物中的關(guān)鍵DHA的比率，可捕食生物中的總類(lèi)脂成分很關(guān)鍵，例如至少含有以干質(zhì)為基礎(chǔ)的20％重量比，30％重量比更好。如上所述在飼養(yǎng)幼魚(yú)或者其他水產(chǎn)生物時(shí)，高含量的游離脂肪酸并不是必需的。根據(jù)本發(fā)明的方法，可捕食生物中的總類(lèi)脂最好含有不超過(guò)10％重量比的游離脂肪酸。
在一個(gè)特殊實(shí)施例中，在至少含有50％重量比的水相的組合物中包括一種鹽，例如氯化鈉，其濃度為至少0.5％重量比。組合物也可以是干態(tài)或者含水不超過(guò)50％重量比的半干態(tài)，包括含有不超過(guò)10％重量比的水，例如不超過(guò)1％重量比的水，例如基本不含水的。干態(tài)或者半干態(tài)組合物可以是粉末、小顆?；蛘弑∑?br> 人們已發(fā)現(xiàn)包含Artemia的組合物特別有用，Artemia可用于無(wú)節(jié)幼體或者后無(wú)節(jié)幼體，或者是成熟體階段。
還有另一方面，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)組合物的方法，所述的組合物如上所述包括至少已經(jīng)從培養(yǎng)它們的含水介質(zhì)中部分分離的已培養(yǎng)的前面列出的可捕食生物。本方法的特別的實(shí)施例包括將分離的生物烘干的步驟，以得到如上所述形態(tài)的組合物。
還有另一方面，本發(fā)明提供了如上所述組合物的使用，以在幼體或者后幼體階段喂養(yǎng)水生生物。所述的水生生物可以是任何能水產(chǎn)養(yǎng)殖的物種，包括如鮭魚(yú)、鱒魚(yú)、鯉魚(yú)、鱸魚(yú)、鳊魚(yú)、大比目魚(yú)、海鱸、鰈魚(yú)、遮目魚(yú)、銀白胭脂魚(yú)、石斑魚(yú)、比目魚(yú)、海鯛、鱈魚(yú)、黑線(xiàn)鱈、日本比目魚(yú)、鰻魚(yú)；甲殼類(lèi)動(dòng)物如小蝦、龍蝦、小龍蝦、螃蟹；軟體類(lèi)動(dòng)物如雙殼類(lèi)體動(dòng)物。
在某些實(shí)施例中，本發(fā)明提供了使用組合物喂養(yǎng)并不是主要用來(lái)消費(fèi)的水生生物，例如觀賞性的魚(yú)類(lèi)、水族館魚(yú)類(lèi)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1從魷魚(yú)套膜中大規(guī)模地分離富含磷脂的類(lèi)脂組合物將切碎的魷魚(yú)(150千克)加入到300升異丙醇中，將混合物用力搖動(dòng)4-6小時(shí)并靜置過(guò)夜。接下來(lái)，過(guò)濾混合物，將300升正己烷加入到濾出液并混合。這就導(dǎo)致了混合液分成了可分離的兩相。包含大部分的正己烷和異丙醇的上面一層被分離，經(jīng)在真空下，在幾個(gè)圓形鍋中蒸餾，并通過(guò)50升的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器得到真空容器中的蒸餾物，總共產(chǎn)出了2.2千克富含磷脂的產(chǎn)出物，這部分是含有為65％重量比的磷脂、其余為脂肪酸組合物的棕黃色蠟狀物(最左邊一欄的數(shù)字代表了碳元素和類(lèi)脂組合物的脂肪酸中雙鍵的數(shù)目，DHA是22∶6、EPA是20∶5)

實(shí)施例2為幼魚(yú)可捕食生物的富集組合物所做的準(zhǔn)備通過(guò)合并，混合下面的組合物，可得到一種可捕食生物的組合物，例如Artemia物種，表2.1

原料TG4010用作組合物中的富含DHA成分，該成分從富含DHA的魚(yú)類(lèi)油基原料分離出來(lái)，包含40％重量比的DHA，大約10％重量比的EPA和大約10％重量比的其它n-3HUFA。脂肪酸主要以甘油三酸酯形式存在，該原料含有的游離脂肪酸量很少。
作為富含DHA的資源的其它原料也被測(cè)試過(guò)，例如TG5010(也是來(lái)自Croda)，大約含有50％重量比的DHA，還有高度酶化富含DHA的甘油三酸酯。
實(shí)施例3用于培養(yǎng)Artemia的富集組合物的應(yīng)用Artemia的胞囊在最佳條件(海水中27-29℃下，PH值約為8，氧含量約為4mg/L)下孵化出來(lái)。沖洗新孵化出來(lái)的Artemia幼蟲(chóng)，并將其轉(zhuǎn)移到一個(gè)250升的容器以得到200.00/L的密度。溫度保持在25-28℃，氧含量5-6mg/L，用重碳酸鈉(2g/l)將PH值緩沖到7.5。通過(guò)在內(nèi)容器底部的貫穿孔，使容器充滿(mǎn)空氣。把實(shí)施例4中介紹的富集組合物加到容器中以達(dá)到0.2g/L的濃度，10小時(shí)后在加入同樣的量，第一次加入富集組合物24小時(shí)后，Artemia有了如下的類(lèi)脂組成(類(lèi)脂干重量31％)

根據(jù)本發(fā)明，得到的Artemia富含高濃度DHA，因此特別適合飼養(yǎng)幼魚(yú)，尤其是大比目魚(yú)的幼魚(yú)。
實(shí)施例4用于培養(yǎng)Artemia的富集組合物的應(yīng)用新孵化出來(lái)的Artemia放置在250L的容器中，并保持在實(shí)施例3中敘述的條件下。用混合了重量比為2％的Chremophore A25乳化液的類(lèi)脂組合物喂養(yǎng)Artemia。類(lèi)脂組合物和包含了重量比為50％的實(shí)施例1中的磷脂組合物；25％重量比的‘DHA-80’；包含重量比為80％的DHA的甘油三酸酯，通過(guò)從Candida Antarctica(美國(guó)專(zhuān)利5,604,119中所述)得來(lái)的脂肪酶從甘油和DHA脂肪酸酶法合成；25％Lysi-22(TM)(Lysi hi，iceland)，含有22％重量比DHA的魚(yú)油。把飼料組合物加到容器中以達(dá)到0.2g/L的濃度，12小時(shí)后在加入同樣的量，第一次加入富集組合物24小時(shí)后，Artemia有了如下的類(lèi)脂組成(類(lèi)脂干重量34％)

根據(jù)本發(fā)明得到的Artemia與其它魚(yú)特征n-3HUFAs同樣高度富含DHA，總濃度9.5％，因此特別適合飼養(yǎng)幼魚(yú)，尤其是大比目魚(yú)的幼魚(yú)。
實(shí)施例5用來(lái)養(yǎng)殖折皺臂尾輪蟲(chóng)(Brachionus plichatilis)的富集組合物的應(yīng)用。
輪蟲(chóng)在與實(shí)施例2中描述的相似的環(huán)境中養(yǎng)殖，他們被用Isochrysis浮游生物和酵母喂養(yǎng)，并除了用Croda 50代替Croda 40外，實(shí)施例2中描述的富積組合物在27℃富積6小時(shí)，Croda 50包含50wt％的DHA。輪蟲(chóng)有下面的脂質(zhì)組成(22％類(lèi)脂干重量)

根據(jù)本發(fā)明，得到的輪蟲(chóng)具有高含量的DHA，經(jīng)分析是以不同的類(lèi)脂種類(lèi)分布，因此特別適合水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。并由此舉證說(shuō)明本發(fā)明的功效。
實(shí)施例6Artemia胞囊在實(shí)施例3的條件下孵化，并轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)器，培養(yǎng)器的條件與實(shí)施例3保持相同(除去溫度上少許不同，見(jiàn)表)用實(shí)施例2中描述的相似方法，準(zhǔn)備富集組合物。例如添加表2.1中的一些添加劑，例如乳化液、維生素或者實(shí)施例1中所述的魷魚(yú)套膜中提取的富含磷脂成分。大多數(shù)(80％)配劑的成分是表X中列出的市售類(lèi)脂組合物。它們是AlgaMac 2000(TM)，DHA Selco(TM)，DC DHA(TM)和飼料級(jí)鱈魚(yú)肝油(從Lysi，冰島)。把準(zhǔn)備的配料倒入容器中，以達(dá)到0.2g/L的濃度，10小時(shí)后在加入同樣的量，第一次加入富集組合物24小時(shí)后，Artemia有了如下的類(lèi)脂組成


根據(jù)本發(fā)明富含了優(yōu)選的組合物的Artemia很顯然富集了高濃度的DHA，這樣也就特別適合飼養(yǎng)幼魚(yú)，尤其是大比目魚(yú)的幼魚(yú)。
實(shí)施例7HUFA和富含磷脂的Artemia對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖大比目魚(yú)的應(yīng)用大比目魚(yú)幼體在230-250°d下被第一次喂養(yǎng)(°d溫度(℃)的乘法因素和從孵化開(kāi)始的天數(shù))。采用3，5或7m3的圓形飼養(yǎng)池。幼體逐漸適應(yīng)11℃的飼養(yǎng)溫度和300-500勒克斯的光強(qiáng)度。每天在早上和傍晚喂Artemia給幼體兩次。根據(jù)本發(fā)明在早上喂養(yǎng)前24小時(shí)，Artemia富積富集組合物，接下來(lái)在13-15℃下又儲(chǔ)存7-8小時(shí)為下午的喂養(yǎng)。調(diào)節(jié)進(jìn)食率以允許很好消化Artemia。Microalgae(Isocrysis sp.)加入到養(yǎng)殖水中，以減少應(yīng)力和便于最大的攝取率。在飼養(yǎng)池的中間設(shè)有微小曝氣，以均化水質(zhì)和食物顆粒。要有微小環(huán)流導(dǎo)入，以分散幼體。要進(jìn)行換水，從開(kāi)始時(shí)的每24小時(shí)1.2次，提高到最后階段的每24小時(shí)3.3次。要每天清洗幼體飼養(yǎng)池。
從喂養(yǎng)開(kāi)始到幼體階段后期，觀測(cè)到飼養(yǎng)池中存活率超過(guò)80％(90％排除“嘴裂”顎畸形的幼體)，通常已觀測(cè)到65-75％的存活率。平均起來(lái)大約80％的幼體顯現(xiàn)了正常的色素淀積，但是在一個(gè)飼養(yǎng)池中觀測(cè)到最多達(dá)96％的正常的色素淀積。正常的色素淀積定義為在眼睛邊的正常染色和盲邊的不染色。在一個(gè)飼養(yǎng)池總平均起來(lái)65％的幼體而最多80％的幼體顯現(xiàn)出正確的眼睛色移，即兩只眼睛的色移均在眼睛邊。正在進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)表明甚至能得到更高的存活率和色素淀積率。
結(jié)果顯示根據(jù)本發(fā)明富含DHA的可捕食生物尤其適合于水產(chǎn)類(lèi)如高存活率和高質(zhì)量的比目魚(yú)的養(yǎng)殖。
權(quán)利要求
1.本發(fā)明提供一種用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的的可捕食生物的生產(chǎn)方法，特別是用于喂養(yǎng)幼魚(yú)，所述的方法包括在它們的生命周期的至少一部分時(shí)期中，在包括至少含有重量比為30％的DHA的類(lèi)脂組合物的含水介質(zhì)中培養(yǎng)所述的生物。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，進(jìn)行培養(yǎng)的生物中至少50％的經(jīng)培養(yǎng)的生物中其總類(lèi)脂成分至少含有重量比為12％，或者更多的DHA。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，經(jīng)培養(yǎng)的生物中總類(lèi)脂成分至少含有重量比為15％的DHA，其中包括至少含有重量比為17.5％，例如可以是至少含有重量比為20％。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，要培養(yǎng)的生物可以從以下的甲殼類(lèi)物種選取，包括Artemia，橈足類(lèi)，水蚤，裸腹蚤屬(moina)類(lèi)；輪蟲(chóng)類(lèi)；腕足動(dòng)物類(lèi)。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述甲殼類(lèi)物種是Artemia類(lèi)。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，在無(wú)節(jié)幼蟲(chóng)階段、后無(wú)節(jié)幼蟲(chóng)階段和成熟體階段，所述的Artemia類(lèi)在含水介質(zhì)中培養(yǎng)。
7.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述生物可以是輪蟲(chóng)類(lèi)或者腕足動(dòng)物類(lèi)。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，浮游物種可以從包括折皺臂尾輪蟲(chóng)(Brachionusplicatilis)、圓葉臂尾輪蟲(chóng)(Brachionus rotundiformis)、腕足rubens的輪蟲(chóng)類(lèi)中選擇。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，至少有一種類(lèi)脂成分從包括含有必需的甘油三酸酯的成分與富含磷脂的成分的一類(lèi)中選擇。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的含水介質(zhì)包含的組合物包含的富含磷脂成分，至少含有重量比25％的磷脂，組合物至少含有重量比30％的DHA。
11.如權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述富含磷脂成分至少含有重量比50％的磷脂。
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，所述富含磷脂成分至少含有重量比70％的磷脂。
13.如權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述組合物還包括另一種類(lèi)脂成分含有重量比至少20％的DHA。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，另一種水產(chǎn)類(lèi)脂成分含有重量比至少30％的DHA，包含重量比至少40％。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，另一種水產(chǎn)類(lèi)脂成分含有重量比50％的類(lèi)脂成分。
16.如權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，另一種類(lèi)脂成分的數(shù)量占類(lèi)脂組合物重量的50-95％。
17.如權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，富含磷脂成分的含量范圍在5-50％之間。
18.如權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，DHA與EPA的組合物重量比在1∶1到10∶1之間。
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，DHA與EPA的組合物重量比在2∶1到8∶1之間，包括4∶1到6∶1之間的范圍。
20.如權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述組合物中DHA的總含量至少40％重量比。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其特征在于，所述組合物中DHA的總含量至少50％重量比，包括60％重量比。
22.如權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，所述另一種類(lèi)脂成分基本上是甘油三酸酯。
23.如權(quán)利要求22所述的方法，其特征在于，所述甘油三酸酯通過(guò)從Candida Antarctica得來(lái)的脂肪酶或者催化劑催化使得甘油和脂肪酸DHA合成得到。
24.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述富含磷脂成分可以從水生生物原料中分離得到，所述的水生生物例如魷魚(yú)、魚(yú)卵、浮游生物或者魚(yú)肉。
25.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的含水介質(zhì)包含0.01-5g/L的至少含30％重量比DHA的海洋類(lèi)脂成分。
26.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的含水介質(zhì)包含0.01-5g/L權(quán)利要求10中所述的類(lèi)脂成分。
27.如權(quán)利要求25或26所述的方法，其特征在于，至少一種海洋類(lèi)脂成分或者根據(jù)權(quán)利要求10的類(lèi)脂組合物在含水介質(zhì)中被乳化。
28.如權(quán)利要求27所述的方法，其特征在于，至少一種海洋類(lèi)脂成分或者根據(jù)權(quán)利要求10的類(lèi)脂組合物具有一個(gè)微粒形狀，最大平均尺寸在1-100微米范圍，包括1-50微米。
29.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的含水介質(zhì)是海水。
31.一種在幼體或者非幼體階段喂養(yǎng)水生生物的組合物，組合物包含可以從以下的甲殼類(lèi)物種選取的生物，包括Artemia，橈足類(lèi)，水蚤，裸腹蚤屬(moina)類(lèi)；輪蟲(chóng)類(lèi)；腕足動(dòng)物類(lèi)；線(xiàn)蟲(chóng)類(lèi)；所述的生物中總的類(lèi)脂成分中至少含有重量比為12％的DHA。
32.如權(quán)利要求31所述的組合物，其特征在于，所述的生物中總的類(lèi)脂成分中至少含有重量比為15％的DHA。
33.如權(quán)利要求32所述的組合物，其特征在于，所述的生物中總的類(lèi)脂成分中至少含有重量比為20％的DHA，包括25％。
34.如權(quán)利要求31所述的組合物，其特征在于，所述的生物中總的類(lèi)脂成分中至少含有干質(zhì)基礎(chǔ)上重量比為15％的DHA。
35.如權(quán)利要求31所述的組合物，其特征在于，所述的水相重量比至少為50％。
36.如權(quán)利要求35所述的組合物，其特征在于，所述的水相至少含有0.5％的氯化鈉。
37.如權(quán)利要求31所述的組合物，其特征在于，所述的水相重量比不多于50％，包括所述的水相重量比不多于或者約等于10％。
38.如權(quán)利要求37所述的組合物，其特征在于，所述的組合物可以是粉末、小顆粒、薄片中的一種。
39.如權(quán)利要求31所述的組合物，其特征在于，所述的生物可以是Artemia類(lèi)或者輪蟲(chóng)類(lèi)。
40.如權(quán)利要求31所述的組合物，其特征在于，所述的生物可以是處于無(wú)節(jié)幼蟲(chóng)、后無(wú)節(jié)幼蟲(chóng)及成熟體階段的Artemia類(lèi)。
41.一種生產(chǎn)如權(quán)利要求31的組合物的方法，包括生產(chǎn)如權(quán)利要求1-30所述方法中的活的生物，并將培養(yǎng)的生物部分地從含水介質(zhì)中分離。
42.如權(quán)利要求41所述的方法，其特征在于，進(jìn)一步將分離的生物烘干。
43.根據(jù)權(quán)利要求31-40中的組合物的使用，在幼體和/或后幼體階段用一種組合物喂養(yǎng)水生生物。
44.如權(quán)利要求43所述的使用方法，其特征在于，水生生物可以從以下選取鮭魚(yú)、鱒魚(yú)、鯉魚(yú)、鱸魚(yú)、鳊魚(yú)、大比目魚(yú)、海鱸、鰈魚(yú)、遮目魚(yú)、銀白胭脂魚(yú)、石斑魚(yú)、比目魚(yú)、海鯛、鱈魚(yú)、黑線(xiàn)鱈、日本比目魚(yú)、鰻魚(yú)；甲殼類(lèi)動(dòng)物如小蝦、龍蝦、小龍蝦、螃蟹；軟體類(lèi)動(dòng)物如雙殼類(lèi)體動(dòng)物。
45.如權(quán)利要求43所述的使用方法，其特征在于，水生生物可以從觀賞性的魚(yú)類(lèi)或者水族館魚(yú)類(lèi)中選取。
全文摘要
本發(fā)明提供一種用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的的可捕食生物如Artemia和輪蟲(chóng)的生產(chǎn)方法，特別是用于喂養(yǎng)幼體階段的水生生物。所述的方法包括在它們的生命周期的至少一部分時(shí)期中，在包括至少含有重量比為30％的DHA的類(lèi)脂組合物的含水介質(zhì)中培養(yǎng)所述的生物。富含可捕食生物中其總類(lèi)脂成分至少含有重量比為12％的DHA。所述的可捕食生物適合喂養(yǎng)包括大比目魚(yú)、大菱鲆、比目魚(yú)的幼魚(yú)；甲殼類(lèi)動(dòng)物和軟體動(dòng)物。
文檔編號(hào)A23K1/16GK1400867SQ01804924
公開(kāi)日2003年3月5日 申請(qǐng)日期2001年1月15日 優(yōu)先權(quán)日2000年1月14日
發(fā)明者博德·哈塔森, 古德曼·G·哈爾森, 奧拉夫·哈德森 申請(qǐng)人:博德·哈塔森, 古德曼·G·哈爾森, 奧拉夫·哈德森