專利名稱：用于喂養(yǎng)水生生物的海洋類脂組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及水產養(yǎng)殖領域，特別是提供一種用于喂養(yǎng)可捕食生物的類脂組合物，這種可捕食生物用作幼魚、甲殼類動物的幼蟲和雙殼貝類動物的食物。尤其是本發(fā)明提供海洋類脂組合物中含有大量的高價不飽和脂肪酸(HUFA)，特別是二十二碳六烯酸(DHA)，和含有大量富含DHA的磷脂。
水產養(yǎng)殖業(yè)的擴大需要注意幾個問題，其中一個最重要的問題是難以供應活的可捕食生物，這種可捕食生物為魚蚴提供足夠營養(yǎng)的食物。野生仔魚以一種能提供均衡營養(yǎng)的混合種群浮游可捕食生物為食。但是，收集足夠多的浮游生物來滿足水產養(yǎng)殖的需求是不可行的。作為一種替代方法，經挑選的可捕食生物種類，特別是輪蟲和Artemia類當前正被培養(yǎng)并用作食物。
但是通常這種人工培養(yǎng)的可捕食生物，雖然能提供大量的蛋白質和能量，含有某種類脂組合物，這種類脂組合物沒有包含對某些高價不飽和脂肪酸(HUFA)，特別是二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)的需求，可是DHA和EPA對魚蚴的最佳存活、發(fā)育和成長是必須的。特別是人們已經知道高含量的DHA是必須的，并且可捕食生物中DHA和EPA的比應該至少為1∶1，最好是至少為2∶1。為了提供含有那種關于HUFA的組合物的可捕食生物，有必要在有高含量DHA的富集組合物存在的情況下培養(yǎng)這種生物，更適宜的是至少為20％的重量比，DHA和EPA的比率要超過在可捕食生物中的目標比率，例如至少是3∶1，并且最好是更高些。
當前人們正在關注這個問題，他們用在富集組合物存在情況下培養(yǎng)可捕食生物，以使這些生物富含這些重要的脂肪酸。但是，當前用于該目的的，可供給市售的組合物，如以商品名Selco出售的乳狀液產品不能滿足上述要求，因為其DHA含量相對較低和/或DHA∶EPA的比率不夠高。有人已經報導了采用這類組合物，總類脂物中的3-5％的Artemia富集量(McEvoy et a1.Aquaculture(水產養(yǎng)殖)163(1998)237-250)，也有人已經報導了用這類Artemia喂養(yǎng)魚蚴，魚蚴的存活率范圍在12％-15％之間(McEvoy et al，supra；；Navarro et al，J.Fish.Biol.43(1993)503-515)。在這方面，存活率定義為自第一次喂養(yǎng)到變態(tài)的存活百分率。對于劃算的水產養(yǎng)殖生產，應該獲得50％的魚蚴存活率，或者最好是更高些。
用于可捕食生物富集作用的其他市售組合物是以商品名Algamac(TM)出售的，它含有高達14％重量比的DHA；和金槍魚油(TOO)，含有高達30％重量比的DHA。
WO99/37166公開了一種利用基于從海藻油提取的廢液流中獲得的HUFA的干皂粉的魚幼體的必需營養(yǎng)來富集活的可捕食生物的方法。提供這些粉末的原料含有磷脂和約28％重量比游離脂肪酸，并且它含有23％重量比的DHA，但顯然沒有其他n-3脂肪酸。公開了大約干重量的2.7％的Artemia富集水平。
在WO99/06585專利中介紹了另一種用于水產養(yǎng)殖的原料。實施例公開了DHA的含量為24％重量比，但是未公布磷脂的含量。然而這種原料含有高比率的游離脂肪酸(約32-37％重量比))和高含量的非類脂原料(約39-44％重量比)，這種非類脂原料可以減少可捕食動物的類脂攝取量。高含量的游離脂肪酸通常被認為對魚蚴和新生的幼體是有害的。
上面最后提到的兩種原料都不是魚基的，并且他們都缺少許多在魚類中發(fā)現(xiàn)的HUFA，例如EPA和其他n-3脂肪酸。
按照Sargent等人最近的觀點(Aquaculture(水產養(yǎng)殖)179(1999)217-229)，他們強調除了HUFA方面的需求，魚蚴還有在磷脂方面的規(guī)定食物，并且強調魚蚴理想的餌料是含有類似于雞蛋黃的組合物。按照這些作者的觀點，魚卵黃包括約10％重量比(干的物質組合物)的磷脂，它含有17％重量比的DHA和約9％重量比的EPA。這些作者總結他們的觀點認為，存在的問題是關于如何用當前可用原料，以商業(yè)規(guī)模制備這種餌料。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有可能提供一種類脂組合物用于富集水產養(yǎng)殖可捕食生物，這是基于從大量有用的海洋生物原料，如魚肉中分離出來的含DHA的磷脂的應用。通過使用這種起始原料，有可能提供含有HUFA和磷脂的組合物的可捕食生物，這種組合物非常接近于魚卵黃并且是十分適合獲得最佳的幼魚，如大比目魚幼體的存活、生長、色素淀積和形態(tài)形成。
另一方面本發(fā)明提供一種含有上述組合物的類脂相的乳狀液。
另一方面本發(fā)明還涉及到制備上述組合物的方法，包括從海洋生物原料中分離出粗類脂成分(包括甘油三酸酯和磷脂)的步驟，接下來是磷脂富集步驟，包括在甘油三酸酯未沉淀的溫度下增加一種溶劑到粗類脂成分中，并冷卻混合物，使甘油三酸酯沉淀，以得到一種含有至少25％重量比的磷脂的類脂餾份。
這里也提供一種包含至少50％重量比的磷脂的海洋類脂組合物。
按本發(fā)明的組合物用于喂養(yǎng)可捕食生物，包括它的必需成分即富含磷脂的成分。
本文中，措詞“可捕食生物”是指任何能被用作水產養(yǎng)殖設備中生產的海洋物種的魚蚴的活飼料的海洋生物。對那種捕食生物的一般評述可見1995年國際糧食和農業(yè)組織公布的“水產養(yǎng)殖的活食的生產和應用指南”，Lavens & Sorgeloos(eds.)，這里可以作為參考。相應地最常用的被捕食性生物包括幾個種類和微藻類、輪蟲、Artemia和浮游動物類，浮游動物包括橈腳亞綱類、水蚤類、線蟲類核擔輪幼蟲。
這里所用的術語“水產養(yǎng)殖”是指最大范圍內的，它包括在水產養(yǎng)殖條件下生產的任何水生物種的任何產品，如魚類，包括鮭魚、鱒魚、鯉魚、鱸魚、鳊魚、大比目魚、海鱸、鰈魚、遮目魚、銀白胭脂魚、石斑魚、比目魚、海鯛、鱈魚、黑線鱈、日本比目魚、鰻魚；甲殼類動物如小蝦、龍蝦、小龍蝦、螃蟹；軟體類動物如雙殼類體動物。
這些水生物種的一個共同特征是生命周期中包括一個或多個可能有特別的營養(yǎng)需求的幼蟲階段，并且對于成功的水產養(yǎng)殖生產來說，相應地能滿足這些需求的活的可捕食生物的供應是基本因素。如上所述，高含量的基本脂肪酸DHA就是這樣一種特別的需求，術語“基本”表明可捕食生物不是能重新合成的化合物。本發(fā)明中的組合物含有至少30％重量比的DHA，例如它的范圍為30-35％重量比，或者35-40％重量比，更好是至少40％重量比，如至少50％重量比，當然也包括至少60％重量比。
為了提供一種具有這么高含量的DHA，必須精心挑選組合物的類脂成分，以提供所需數(shù)量的DHA。在可用的實施例中，富含磷脂的成分能提供所需數(shù)量的DHA。但是，在其他實施例中，磷脂成分中的DHA含量可能是不足的。在那種情況下，至少要加入另一種能提供足夠DHA含量的磷脂成分。典型的另一種磷脂成分，包含至少20％重量比的DHA，較好的是至少含有30％重量比的DHA，最好是含有至少50％重量比的DHA。在較佳實施例中，另一種磷脂成分含有至少60％重量比的DHA，例如至少70％重量比的DHA，也包括至少90％重量比的DHA。
如果需要，還可在本發(fā)明中的組合物中加入一定量的另一種富含DHA的類脂成分，使該組合物中DHA總含量至少為30％重量比。按照富含磷脂成分的DHA含量，所要求另加的類脂成分中的含量可在5-99％重量比范圍內。在本發(fā)明的某些實施例中，另加的類脂成分的含量在50-95％重量比的范圍內，例如約50-70％重量比范圍，或者更高。
另加的類脂成分的來源可能是一些天然存在的含至少20％重量比DHA的類脂(較好的是包含甘油酯，如甘油三酸酯和甘油二酯)和那些化學合成和酶法合成的類脂類。天然存在的富含DHA的類脂的例子是金槍魚油(TOO)和從具有高含量DHA的微生物細胞中分離出的類脂類，例如包括小球藻類和crypthecodinium類的海藻，和某些酵母類如酵母屬、被孢酶屬(moteriella)，裂桴草屬(Schizochytrium)和破囊壺菌屬(thraustochytrium)。作為選擇可使用天然存在的富含DHA類脂類，這些類脂類可用化學合成或酶法合成。本發(fā)明有用的實施例中，通過DHA以游離脂肪酸和甘油在化學催化劑的存在下，進行接觸，得到甘油脂，或者可以從反應物中生成甘油脂的酶的作用下生成甘油脂，這種類脂是以甘油脂來提供的。所述的酶，如脂肪酶，包括從南極洲假絲酵母中分離出的脂肪酶。
按照本發(fā)明發(fā)現(xiàn)使用魚基的原料作為該組合物的類脂來源具有特別的用處(例如作為含磷脂成分的來源和/或另外富含DHA成分的來源)。除了DHA，那些原料還提供其他有價值的HUFA(特別是n-3HUFA)，這些是魚類的特征(如20∶5EPA(二十碳五烯酸)、18∶3、18∶4和20∶4脂肪酸)，這些成份均在幼魚的天然食物和魚卵黃中被發(fā)現(xiàn)，并且被認為對喂養(yǎng)魚用的可捕食生物的成功富集是有益的。在一個有利的實施例中，富集組合物中HUFA的總含量至少為30％重量比，例如至少40％重量比，較好的是50％重量比，更好的是60％重量比。在那種組合物中，EPA(二十碳五烯酸)的范圍較好的是2-15％重量比，例如5-10％重量比的范圍，相比于DHA和EPA，其他n-3HUFA的含量范圍較好的是2-25％重量比，更好的范圍是5-15％重量比，例如大約10％重量比。在另外有利的實施中，n-3HUFA的總含量至少為50％重量比，例如至少60％重量比。
如上所述，本發(fā)明中的組合物包括一個主要的富含磷脂成分，該成分包含至少25％重量比的磷脂。在本文中，術語“磷脂”用來描述一類磷酸單酯或二酯的類脂物。這樣磷脂包括卵磷脂(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇激酶(PI)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰絲胺酸(PS)、磷脂酸(PA)。術語“卵磷脂”通常也用于上述磷脂的混合物。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，磷脂類組份的分布可能對本發(fā)明組合物的功能有重要的影響，能獲得幼魚的高存活率和好的色素淀積比。特別地還發(fā)現(xiàn)青魚肉中的磷脂組合物可以獲得幼魚恰當色素淀積的特高比率。
按照本發(fā)明，可使用任何富含磷脂的成分。但是，當前更好的磷脂是從海洋生物原料中分離出來的磷脂，包括新鮮原料和干化的原料。新鮮原料包括如魚或海洋生物的內臟、魚肉、魚卵、魷魚、軟體動物和浮游生物。干化原料包括，特別是魚肉如青魚、鱗魚、鯖魚、鯡魚、沙丁魚、鳳尾魚、竹莢魚的肉、藍鱈魚和浮游生物的肉。如上所提供的那些魚類海洋原料不僅有高含量的DHA，還有EPA和其他n-3PUFA、魚的特性，并且與幼魚的天然餌料有一定程度上的相似。
眾所周知，商品魚肉的質量各不相同。特別是低質量的魚肉中的磷脂多少都已經變壞，包括氧化和水解作用。為實現(xiàn)本發(fā)明的目的，特別要使用高質量的商品魚肉作為含磷脂成分的來源。本文中高質量魚用下列涉及質量和新鮮度的參數(shù)來描述“總的揮發(fā)性氮”(TVN)應該如在Antonacopoulus中描述的低于50毫克/100克被測物，N.Handbuch derLebensmittelcheme，vol.III/2，Springer Verlag，柏林(1968年)，以及蛋白質的mink可消化性應該至少90％。
在較佳實施例中，含磷脂成分中磷脂的含量至少30％重量比，較好是至少40％重量比，更好是至少50％重量比，例如至少60％重量比，包括70％重量比的磷脂，或者更高。假設含磷脂成分被精選過而含有足夠高的DHA含量，本發(fā)明中的組合物可能包括這種成分作為單一含磷脂成分。但是，如上所述，它可能要求用另外的具有高含量DHA的類脂成分來增加含磷脂成分。在那種情況下，含磷脂成分的比例是在1-99％重量比之間，例如范圍為2-75％重量比，包括5-50％重量比范圍，又例如范圍為5-25％重量比之間，包括大約5％重量比，大約10％重量比和大約15％重量比，或者位于25-50％重量比的范圍內。
如上所述，可以看出，不但幼魚的食物中要求有高含量的DHA，而且可捕食生物中DHA和EPA之間的比率對培養(yǎng)物幼魚的存活和生長都很重要。通常認為可捕食生物中DHA∶EPA的比值至少應為1∶1，較好的是至少2∶1。但是，已經發(fā)現(xiàn)為了在可捕食生物中獲得所需的比值，給可捕食生物的富集組合物就要求十分高的比值。相應地，本發(fā)明中的富集組合物中DHA∶EPA的重量比的范圍在1∶1到10∶1之間，例如2∶1到8∶1，包括4∶1到6∶1間的范圍。
如上文中Sargent等人所述，其他HUFA可能非常重要，例如二十碳四烯酸。相應地按照本發(fā)明要補充一種含有足夠量的二十碳四烯酸的富集組合物。如果需要，富集組合物中二十碳四烯酸的含量范圍可為全部脂肪酸的1-20％重量比，例如2-10％重量比。
在目前的工藝水平中通常人們都知道，高含量的游離脂肪酸可能對小魚有害。本發(fā)明中組合物的較佳實施例含有少量的游離脂肪酸，例如總含量約少于10％重量比，包括約少于5％重量比，更適合的是約少于3％重量比，例如約少于1％重量比。
在有用的實施例中，本發(fā)明的富集組合物包括補充成分，該成分包括乳化劑、免疫刺激劑，例如葡聚糖或烷氧基甘油、維生素、抗氧化劑、無機物和二十碳四烯酸。適合的乳化劑包括巴斯夫產的Chremophore A25(TM)、Croda的VOLPO(TM)、大豆卵磷脂、磷脂、甘油酯和包括肥皂在內的脂肪酸。
可加入本組合物中的維生素包括一些水溶性維生素如維生素B、維生素C和一些非水溶性維生素如維生素A、維生素D和維生素E。已經發(fā)現(xiàn)，維生素C的高含量可能對富集組合物對幼小食肉動物的存活和生長方面的功能產生重要的影響。(Merchie，G；Sorgeloos，P.Effects of dietary vitamin C on fish and crustacean Iarvae(食用維生素C對魚和甲殼類幼蟲的影響)，Proceedings Larvi’95，Ghent(1995)；Merchie，G.Nutritional effect of Vitamin C on the growthand physiological condition of the Iarvae of aquaculture organisms(維生素C對海洋生物幼體的成長和生理條件的營養(yǎng)功能)，Thesis(論文)，1995，University in Ghent(根特大學)；Merchie，G.Et.al，，Aquaculture(水產養(yǎng)殖)，134(1995)325-337。)相應地在有用的實施例中，維生素C的含量可能的范圍是1-15％重量比，例如5-10％重量比。有效的抗氧化劑包括TBHQ，促長啉、BHT、BHA、維生素A和維生素C。
熟練的技術工人將會懂得，本發(fā)明的富集組合物可用作藥用活性物質，如抗微生物劑和包括抗菌疫苗和抗病毒感染疫苗在內的免疫活性物質，和任何它們的化合物的方便的載體。
本發(fā)明中的組合物可以是液體、易傾倒的乳化劑、或一種糊狀物、或干態(tài)，例如粒狀、粉末狀或薄片。當本組合物以乳化劑，更好的是類脂在水中的乳化劑提供時，首選的是一種相對濃縮形態(tài)。那樣一種濃縮乳化劑形態(tài)可用作預乳化劑，因為它能在水介質中經一步或多步稀釋而為可捕食生物提供最終的富集介質。在較佳實施例中，按照本發(fā)明這樣的預乳化劑作為類脂相存在，占富集組合物中的至少50％重量比。
從上面公開的內容看，本富集組合物可用于富集含有必需HUFA和磷脂的水產可捕食生物。
在另一方面，本發(fā)明提供一種制備上面所描述的富集組合物的方法。該方法的第一步是從上面所描述的海洋生物原料中分離出一種粗磷脂成分。該分離步驟可以通過傳統(tǒng)的從有機原料中分離出磷脂的方法來完成，例如用一些適合的溶劑來萃取的方法，適合的溶劑包括有機溶劑如包括乙醇和丙醇在內的醇類，烴類溶劑，舉例來說如戊烷、己烷，或烷烴，環(huán)烴或芳香烴溶劑的混合物；醚、酯或其混合物以及其他發(fā)現(xiàn)適合的溶劑。也可以考慮使用超臨界萃取的方法。其他的從原料中分離磷脂的方法還包括層析法、離心過濾法、濃縮法、熱處理法或任意這些方法的結合使用。在第二步中，通過對磷脂成分進行處理是粗磷脂成分中的磷脂部分被富集，這個處理過程導致甘油三酸酯部分至少是部分的沉淀或固化，隨后甘油三酸酯可被移走。這種處理有利地包括在某一溫度時加入一種適合的溶劑，如上面所涉及到的任何一種到天然磷脂成分中，該溫度下甘油三酸酯不沉淀，隨后冷卻磷脂/溶劑的混合物到甘油三酸酯的大部分沉淀的溫度。移去沉淀物并且蒸發(fā)溶劑部分，以獲得一種富含磷脂的成分。這種處理能夠重復一次或多次，并且所得到的富含磷脂成分的等分試樣可以合并。用以提供富含磷脂成分的適當原料包括上面所描述的海洋生物。
如上所述，可能要求用另一種具有高DHA含量的類脂成分來增加磷脂成分。相應地，本發(fā)明的方法包括磷脂成分與那樣一種如前所述的富含DHA成分的合并的實施例。
在另一方面，本發(fā)明提供一種新的海洋類脂組合物，包括至少50％重量比的能由上述方法制備的磷脂。那樣一種組合物可能含有至少75％重量比的磷脂，和甚至至少90％重量比的磷脂。如上所述，那樣一種組合物可能用于本發(fā)明的富集組合物。然而，那樣一種組合物的其他的用途是可預料的，例如作為一種食品中的膳食成分，包括嬰兒處方和腸道外或通過管道用藥的營養(yǎng)組合物，或作為一種醫(yī)學活性劑和化妝品中的一種成分。
根據本發(fā)明中的這種海洋類脂組合物可以適當?shù)男问教峁?，包括對于上面富集組合物所描述的形式。
通過加入重量體積比為1∶5的乙醇使該合并的粗類脂餾分純化，得到的懸浮液在4℃下靜置一個晚上，使甘油三酸脂的實質部分沉淀。分離乙醇部分并使用旋轉蒸發(fā)器蒸餾，產生一紅-淡黃色的濃厚的富含磷脂的部分，糖漿狀物料6.5-6.8克，如下所示約含有71％類脂組合物。(最左邊欄的數(shù)字表示該類脂組合物的脂肪酸中碳和雙鍵的數(shù)量，DHA為22∶8，EPA為20∶5)

實施例2青魚肉中富含磷脂的類脂成分的實驗室分離用與實施例1中所描述的本質上相同的方法來從青魚肉中獲得富含磷脂的成分，帶有下列類脂組合物

從上可看到，根據本發(fā)明青魚肉為富含磷脂的成分提供一種很好的原料，含有高比例的DHA磷脂。
實施例1和2中乙醇的提取方法能被該領域熟練的技術人員用傳統(tǒng)的方法按比例增加，類似于實施例3中所描述的不同溶劑方式。
實施例3從魷魚套膜中大規(guī)模地分離富含磷脂的類脂組合物將切碎的魷魚(150千克)加入到300升異丙醇中，將混合物用力搖動4-6小時并靜置過夜。接下來，過濾混合物，將300升正己烷加入到濾出液并混合。這就導致了混合液分成了可分離的兩相。包含大部分的正己烷和異丙醇的上面一層被分離，經在真空下，在幾個圓形鍋中蒸餾，并通過50升的旋轉蒸發(fā)器得到真空容器中的蒸餾物，總共產出了2.2千克富含磷脂的產出物，這部分是含有為65％重量比的磷脂、其余為脂肪酸組合物的棕黃色蠟狀物(最左邊一欄的數(shù)字代表了碳元素和類脂組合物的脂肪酸中雙鍵的數(shù)目，DHA是22∶6、EPA是20∶5)

實施例4為幼魚可捕食生物的富集組合物所做的準備通過合并，混合下面的組合物，可得到一種可捕食生物的組合物，例如Artemia物種，表4.1

原料TG4010用作組合物中的富含DHA成分，該成分從富含DHA的魚類油基原料分離出來，包含40％重量比的DHA，大約10％重量比的EPA和大約10％重量比的其它n-3HUFA。脂肪酸主要以甘油三酸酯形式存在，該原料含有的游離脂肪酸量很少。
作為富含DHA的資源的其它原料也被測試過，例如TG5010(也是來自Croda)，大約含有50％重量比的DHA，還有高度酶化富含DHA的甘油三酸酯。
實施例5用于培養(yǎng)Artemia的富集組合物的應用Artemia的胞囊在最佳條件(海水中27-29℃下，PH值約為8，氧含量約為4mg/L)下孵化出來。沖洗新孵化出來的Artemia幼蟲，并將其轉移到一個250升的容器以得到200.00/L的密度。溫度保持在25-28℃，氧含量5-6mg/L，用重碳酸鈉(2g/l)將PH值緩沖到7.5。通過在內容器底部的貫穿孔，使容器充滿空氣。把實施例4中介紹的富集組合物加到容器中以達到0.2g/L的濃度，10小時后在加入同樣的量，第一次加入富集組合物24小時后，Artemia有了如下的類脂組成(類脂干重量31％)


根據本發(fā)明，得到的Artemia富含高濃度DHA，因此特別適合飼養(yǎng)幼魚，尤其是大比目魚的幼魚。
實施例6用于培養(yǎng)Artemia的富集組合物的應用新孵化出來的Artemia放置在250L的容器中，并保持在實施例3中敘述的條件下。用混合了重量比為2％的Chremophore A25乳化液的類脂組合物喂養(yǎng)Artemia。類脂組合物和包含了重量比為50％的實施例1中的磷脂組合物；25％重量比的‘DHA-80’；包含重量比為80％的DHA的甘油三酸酯，通過從南極洲假絲酵母(Candida Antarctica)(美國專利5,604,119中所述)得來的脂肪酶從甘油和DHA脂肪酸酶法合成；25％ Lysi-22(TM)(Lysi hi，冰島)，含有22％重量比DHA的魚油。把飼料組合物加到容器中以達到0.2g/L的濃度，12小時后在加入同樣的量，第一次加入富集組合物24小時后，Artemia有了如下的類脂組成(類脂干重量34％)

根據本發(fā)明得到的Artemia與其它魚特征n-3HUFAs同樣高度富含DHA，總濃度9.5％，因此特別適合飼養(yǎng)幼魚，尤其是大比目魚的幼魚。
實施例7用來養(yǎng)殖臂尾輪蟲(Brachionus plichatilis)的富集組合物的應用。
輪蟲在與實施例5中描述的相似的環(huán)境中養(yǎng)殖，他們被用Isochrysis浮游生物和酵母喂養(yǎng)，并除了用Croda 50代替Croda 40外，實施例4中描述的富積組合物在27℃富積6小時，Croda 50包含50％重量比的DHA。輪蟲有下面的類脂組合物(22％類脂干重量)

根據本發(fā)明，得到的輪蟲具有高含量的DHA，并含有其他的n-3HUFA和非常高的類脂含量，并由此舉證說明本發(fā)明的功效。
實施例8用于培養(yǎng)Artemia的富集組合物的比較Artemia胞囊在實施例5的條件下孵化，并轉移到培養(yǎng)器，培養(yǎng)器的條件與實施例3保持相同(除去溫度上少許不同，見表)用實施例4中描述的相似方法，準備富集組合物。例如添加表4.1中的一些添加劑，例如乳化劑、維生素或者實施例3中所述的魷魚套膜中提取的富含磷脂成分。大多數(shù)(80％)配劑的成分是表表8.1中列出的市售類脂組合物。它們是AlgaMac 2000(TM)，DHA Selco(TM)，DC DHA(TM)和飼料級鱈魚肝油(從Lysi，冰島)。把準備的配料倒入容器中，以達到0.2g/L的濃度，10小時后在加入同樣的量，第一次加入富集組合物24小時后，Artemia有了如下的類脂組成表8.1

根據本發(fā)明富含了優(yōu)選的組合物的Artemia很顯然富集了高濃度的DHA，這樣也就特別適合飼養(yǎng)幼魚，尤其是大比目魚的幼魚。
實施例9HUFA和富含磷脂的Artemia對水產養(yǎng)殖大比目魚的應用大比目魚幼體在230-250°d下被第一次喂養(yǎng)(°d溫度(℃)的乘法因素和從孵化開始的天數(shù))。采用3，5或7m3的圓形飼養(yǎng)池。幼體逐漸適應11℃的飼養(yǎng)溫度和300-500勒克斯的光強度。每天在早上和傍晚喂Artemia給幼體兩次。根據本發(fā)明在早上喂養(yǎng)前24小時，Artemia富積富集組合物，接下來在13-15℃下又儲存7-8小時為下午的喂養(yǎng)。調節(jié)進食率以允許很好消化Artemia。將微藻(microalgae)(Isocrysis sp.)加入到養(yǎng)殖水中，以減少應力和便于最大的攝取率。在飼養(yǎng)池的中間設有微小曝氣，以均化水質和食物顆粒。要有微小環(huán)流導入，以分散幼體。要進行換水，從開始時的每24小時1.2次，提高到最后階段的每24小時3.3次。要每天清洗幼體飼養(yǎng)池。
從喂養(yǎng)開始到幼體階段后期，觀測到飼養(yǎng)池中存活率超過80％(90％排除“嘴裂”顎畸形的幼體)，通常已觀測到65-75％的存活率。平均起來大約80％的幼體顯現(xiàn)了正常的色素淀積，但是在一個飼養(yǎng)池中觀測到最多達96％的正常的色素淀積。正常的色素淀積定義為在眼睛邊的正常染色和盲邊的不染色。在一個飼養(yǎng)池總平均起來65％的幼體而最多80％的幼體顯現(xiàn)出正確的眼睛色移，即兩只眼睛的色移均在眼睛邊。正在進行的實驗表明甚至能得到更高的存活率和色素淀積率。
結果顯示根據本發(fā)明富含DHA的可捕食生物尤其適合于水產類如高存活率和高質量的大比目魚的養(yǎng)殖。
權利要求
1.一種用在水產養(yǎng)殖中用于喂養(yǎng)可捕食生物的組合物，包括一種含有至少25％重量比的磷脂含量的類脂成分，該組合物提供至少30％重量比的DHA含量。
2.如權利要求1所述的一種組合物，其特征在于，該類脂成分提取白一種海洋生物。
3.去權利要求1所述的組合物，其特征在于，該含有磷脂的成分包含至少50％重量比的磷脂。
4.如權利要求3所述的組合物，其特征在于，該含有磷脂的成分包含至少70％重量比的磷脂。
5.如權利要求1所述的組合物包括其他含有至少20％重量比的DHA含量的類脂組合物。
6.如權利要求5所述的組合物，其特征在于，該其他類脂成分有至少30％重量比的DHA含量，例如至少40％重量比。
7.如權利要求6所述的組合物，其特征在于，該其他類脂成分有至少50％重量比的DHA含量。
8.如權利要求5所述的組合物，其特征在于，該其他類脂成分的數(shù)量范圍是該組合物的50-95％重量比。
9.如權利要求5所述的組合物，其特征在于，該富含磷脂成分的數(shù)量范圍是5-50％重量比。
10.如權利要求1所述的組合物，其特征在于，DHA∶EPA的重量比范圍是1∶1至10∶1。
11.如權利要求10所述的組合物，其特征在于，該DHA∶EPA的比值范圍是2∶1至8∶1，包括4∶1至6∶1。
12.如權利要求1所述的組合物還有至少40％重量比的DHA含量。
13.如權利要求12所述的組合物，其特征在于，該DHA的總含量是至少50％重量比，包括至少60％重量比。
14.如權利要求1所述的組合物，其特征在于，該富含磷脂成分從海洋生物原料的分離獲得的。
15.如權利要求14所述的組合物，其特征在于，該海洋生物原料是一種魚肉。
16.如權利要求15所述的組合物，其特征在于，該魚肉選自由毛鱗魚肉、青魚肉、鯡魚肉、鯖魚肉、鳳尾魚肉、沙丁魚肉、金槍魚肉和藍鱈魚肉組成的魚肉類。
17.如權利要求15所述的組合物，其特征在于，該魚肉是高質量的市售魚肉。
18.如權利要求14所述的組合物，其特征在于，該海洋生物原料選自由魚卵、魷魚的套膜和浮游生物組成的種類。
19.如權利要求1所述的組合物包括至少一個選自由乳化劑、免疫刺激劑、維生素、無機物和二十酸四烯酸組成的種類中的其他成分。
20.如權利要求1所述的組合物，其形式選自由干粉、粒狀、漿糊和薄片組成的種類。
21.一種乳狀液包括權利要求1-19中任一項所述的一種組合物中的類脂部分。
22.如權利要求21所述的乳狀液包括至少50％重量比的如權利要求1所述的組合物。
23.如權利要求1所述的組合物，其特征在于，HUFA的總含量至少是30％重量比。
24.如權利要求23所述的組合物，其特征在于，HUFA的總含量至少是40％重量比，例如至少50％重量比。
25.如權利要求1所述的組合物，其特征在于，n-3HUFA的總含量至少是50％重量比。
26.如權利要求1所述的組合物，其特征在于，游離脂肪酸的數(shù)量大約少于5％重量比。
27.一種制備如權利要求1所述的組合物的方法，包括從海洋生物中分離出一種包括甘油三酸酯和磷脂的粗類脂成分，接下來是一磷脂富集步驟，該步驟包括在甘油三酸酯不沉淀的溫度下加入一溶劑到該天然類脂成分中、冷卻該混合物至甘油三酸酯沉淀和移去該沉淀以獲得一含有至少25％重量比的磷脂的類脂餾分。
28.如權利要求27所述的方法，其特征在于，該海洋生物原料是選自由魚肉、魚卵、魷魚套膜和浮游生物組成的種類。
29.如權利要求28所述的方法，其特征在于，該魚肉選自由鱗魚肉、青魚肉、鯡魚肉、鯖魚肉、鳳尾魚肉、沙丁魚肉、金槍魚肉和藍鱈魚肉組成的魚肉類。
30.如權利要求27所述的方法包括用一種含有至少20％重量比的DHA含量的其他類脂成分混合該含有磷脂的餾分。
31.如權利要求30所述的方法，其特征在于，該其他類脂成分通過一種方法獲得，該方法包括在催化劑存在下，能使甘油和HUFA接觸，或者用能結合甘油和HUFA的酶，在允許形成甘油酯或甘油酯的混合物的條件下。
32.如權利要求31所述的方法，其特征在于，該酶是脂肪酶，包括一種南極洲假絲酵母產生的脂肪酶。
33.如權利要求27所述的方法，其特征在于，該含有磷脂的類脂成分有至少50％重量比的磷脂含量，包括至少75％重量比的磷脂含量。
34.一種海洋類脂組合物包括至少50％重量比的磷脂。
35.如權利要求34所述的組合物包含至少75％重量比的磷脂，包括至少90％重量比的磷脂。
36.如權利要求34所述的組合物可以通過從海洋生物原料中分離而獲得。
37.如權利要求36所述的組合物，其特征在于，該海洋生物原料選自由魚肉、魚卵、魷魚套膜和浮游生物組成的種類。
38.如權利要求37所述的組合物，其特征在于，該魚肉選自由毛鱗魚肉、青魚肉、鯡魚肉、鯖魚肉、鳳尾魚肉、沙丁魚肉、金槍魚肉和藍鱈魚肉組成的魚肉類。
39.如權利要求34所述的組合物，其形式選自由干粉、粒狀、漿糊和薄片組成的種類。
40.如權利要求1或34所述的組合物進一步包括一種醫(yī)學活性物質。
41.如權利要求40所述的組合物，其特征在于，該醫(yī)學活性物質選自由抗微生物劑、包括抗菌疫苗和抗病毒感染疫苗在內的免疫活性物質和任何它們的化合物的載體所組成的種類。
全文摘要
一種用于喂養(yǎng)水產養(yǎng)殖的可捕食生物如Artemia和輪蟲，包括一種含有至少25％重量比的磷脂的類脂組合物，并能提供至少30％重量比的DHA含量。該類脂組合物適合得自海洋生物如魚肉、浮游植物或浮游動物。該組合物用于為包括鮭魚、鱒魚、鱸魚、甲殼類動物以及軟體動物在內的魚類水產養(yǎng)殖提供具有高含量的高度不飽和脂肪酸(HUFA)的可捕食生物。
文檔編號A23K1/10GK1400868SQ01804925
公開日2003年3月5日 申請日期2001年1月15日 優(yōu)先權日2000年1月14日
發(fā)明者博德·哈塔森, 古德曼·G·哈爾森, 奧拉夫·哈德森 申請人:博德·哈塔森, 古德曼·G·哈爾森, 奧拉夫·哈德森