專利名稱：用乳酸菌微生態(tài)制劑調(diào)節(jié)皮膚免疫系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及用微生態(tài)制劑來平衡調(diào)節(jié)皮膚免疫功能。具體講，是用益生微生物改善皮膚在逆境下的免疫功能，特別是使皮膚免疫活性正?；?，減少發(fā)生超激性反應的可能。
現(xiàn)今認為，造成皮膚癌的主要因素是紫外輻射對皮膚再生細胞DNA的變異性損傷，另外一個原因是源于紫外對皮膚免疫系統(tǒng)的損害。健康狀態(tài)下，癌細胞會被功能正常的皮膚免疫系統(tǒng)銷毀。而在紫外照射下皮膚免疫系統(tǒng)受到抑制，不能再發(fā)揮其正常監(jiān)督功能。這樣，早期癌細胞未被銷毀，這最終會導致惡性細胞逃脫免疫監(jiān)控而發(fā)展成為腫瘤。
此外，已有證據(jù)表明，紫外照射會對生物體多種免疫反應產(chǎn)生負面影響，包括直接受照的皮膚和因系統(tǒng)性影響而連帶的遠離照射的部位。將小鼠以UV-B照射發(fā)現(xiàn)可以對紫外照射誘發(fā)的皮膚癌的排斥產(chǎn)生干擾，并且在未照射部位誘發(fā)延遲型和接觸型超敏反應。這些由紫外輻射而來的免疫抑制被認為與抗原特異性T-淋巴細胞抑制子的誘生相關(guān)。這種由T-淋巴細胞介導的免疫反應負責對抗許多慢性感染性疾病，因而延遲型超敏反應特別重要。
如今的實驗表明，在紫外照射的角質(zhì)形成細胞中，一些可溶物可能介導了對延遲型和接觸型超敏反應的系統(tǒng)抑制。通過體內(nèi)作用光譜對小鼠接觸性超敏反應的系統(tǒng)抑制研究認為，角質(zhì)層中出現(xiàn)的組胺脫氨產(chǎn)物尿刊酸是這類紫外誘導的免疫抑制的光受體之一。
除抑制皮膚免疫系統(tǒng)外，還發(fā)現(xiàn)紫外輻射也能誘導皮膚炎癥反應和刺激效應，這最終會導致皮膚起斑、水腫、鱗化(超角質(zhì)化)等。這些炎癥、刺激反應是由刺激本身而來的，與前面提到的免疫抑制是獨立無關(guān)事件。
為減輕紫外輻射對皮膚的毒性效應，有人嘗試用防曬霜或其他藥物。
出處為J.Invest.Dermatol.，97(1991)，624-628的論文報道，作為紫外吸收物的防曬霜在預防紫外輻射誘發(fā)的起斑、腫脹方面是有效的，但卻不能防止免疫抑制。這一發(fā)現(xiàn)被另外的一些研究證實，這些研究也表明防曬霜類物質(zhì)可以防止炎癥和刺激反應但不能完全阻止紫外輻射產(chǎn)生的免疫抑制效應。
另外，那些平常被用來治療皮膚刺激和炎癥反應的藥物如皮質(zhì)甾類、乙酰水楊酸、吲哚美辛等對紫外照射成傷后的皮膚免疫抑制效應是無效的。Bergstresser等(Bergstresser et al，Immunology 46(1989)，219-245)認為皮質(zhì)甾類通常可以減緩皮膚免疫反應。雖然Reeve等(Reeve et al.，Cancer Letters 95(1995)，213-319)研究表明吲哚美辛能抑制光誘發(fā)的癌癥，但它似乎在腫瘤發(fā)生的初始和增長階段都有效，因而其功用被認為是通常的抗癌作用而非改善皮膚的免疫系統(tǒng)。這些藥物看來存在著一種可以抑制炎癥和刺激反應但不能保護皮膚免疫系統(tǒng)的作用模式。
另一方面，一些在保護紫外照射誘發(fā)的皮膚免疫抑制作用有效的藥物卻無益于炎癥和刺激反應。在專利US-P-5,302,389中，提出了用脂質(zhì)體包裹的DNA修復酶來預防和治療紫外誘發(fā)的免疫抑制的方法。然而，這一制劑卻對皮膚的炎癥反應和刺激反應無甚效果。
所以，業(yè)界需要一種對紫外逆境誘發(fā)的皮膚的過激性反應和免疫系統(tǒng)抑制效應均有療效的制劑。
已有許多研究論文描述了一些微生物對個體健康具有益影響。R.Fuller(R.Fuller，Journal of Applied Bacteriology 66(1989)，365-378)把這些菌稱為“益生菌”，具體指那些有助于改善宿主腸道微生態(tài)平衡的活的微生物。
益生菌是不致病、無毒的微生物，存在于胃到小腸的消化道中。隨著宿主的不斷攝入，益生菌最終會在胃腸道壁繁衍并達到一定數(shù)量，進而與其他潛在致病的菌競爭營養(yǎng)和黏附位置，從而減少致病菌數(shù)量和預防感染。
到現(xiàn)在已有許多不同的益生微生物被發(fā)現(xiàn)。并且發(fā)現(xiàn)他們都是通過產(chǎn)生毒素、代謝副產(chǎn)物、短鏈脂肪酸等在腸道中起作用。
也有證據(jù)表明胃腸道微生物能影響宿主黏膜的免役性能。Schiffrin等(Schiffrin et al，Am.J.Clin.Nutr.66(1997)，520)認為腸道上皮細胞、血白細胞、B-淋巴細胞、T-淋巴細胞以及免疫系統(tǒng)的附屬細胞都在一定程度上與上述免疫性能有關(guān)聯(lián)。因此，益生微生物被認為在多個層面上與免疫系統(tǒng)相互作用，包括細胞因子產(chǎn)生、單核細胞增殖、巨噬細胞的吞噬和殺滅作用、對致病細菌和原蟲的免疫等。
既然益生微生物的生物活性主要發(fā)生在宿主黏膜表面或內(nèi)部，或其鄰近組織，它們功用也就被認為主要作用于這些部位。對此，文獻已提供了充分的證據(jù)表明益生微生物的攝入會對宿主胃腸道系統(tǒng)發(fā)生作用。專利WO 00/41707揭示乳酸桿菌salivarius株在預防或治療腸炎疾病、腸道易激綜合癥等胃腸道炎癥方面十分有用。專利WO 00/35465調(diào)查了口腔乳酸桿菌或其他益生菌群種屬構(gòu)成，還調(diào)查了組成、維持健康泌尿系統(tǒng)的菌群構(gòu)成。
在本發(fā)明有關(guān)的研究過程中，我們吃驚地發(fā)現(xiàn)益生菌也能對宿主體內(nèi)距其繁衍部位較遠的部位發(fā)生作用。具體講，我們發(fā)現(xiàn)益生微生物能對宿主皮膚免疫系統(tǒng)發(fā)生作用。進而我們發(fā)現(xiàn)攝入益生微生物可以對宿主皮膚因暴露于物理、化學或生物逆境下產(chǎn)生的免疫抑制進行平衡調(diào)節(jié)，也可以減緩宿主在這些情況下發(fā)生炎癥或刺激反應的趨勢。
本發(fā)明任務中，“平衡皮膚免疫功能”應理解為使皮膚在導致免疫抑制的逆境下維持免疫功能正常化。也就是說，即便是暴露于那些逆境條件下，也能使皮膚保持正常情況一樣的免疫狀態(tài)?！澳婢场睉斫鉃槲锢砟婢橙鐚ζつw的紫外照射，化學逆境如皮膚粘上化學藥品或致敏物，生物逆境如被致病菌、病毒、真菌等粘附或感染。在這些逆境條件下，一方面皮膚免疫系統(tǒng)被抑制，比如被紫外輻射后；另一方面皮膚被過度刺激，如接觸刺激物或致敏原時。在本專利里，“培養(yǎng)物上清液”應理解為益生微生物培養(yǎng)物上清的濃縮態(tài)或從中分離的活性代謝產(chǎn)物。
我們發(fā)現(xiàn)，讓個體使用可以在其腸道內(nèi)繁衍的益生微生物或使用其培養(yǎng)物上清，其紫外照射等逆境條件下的免疫抑制現(xiàn)象就不明顯或被逐漸減緩，而其炎癥或刺激反應也只有輕微發(fā)生或根本就不發(fā)生。


在如下圖表中，圖1通過各種模型小鼠耳朵腫大程度顯示接觸型超敏反應相關(guān)的炎癥反應。
圖2顯示對多種模型鼠的細胞間粘附分子ICAM-1的抗體攻擊結(jié)果圖3顯示各受試模型小鼠的轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β水平。
圖4顯示各受試模型小鼠表皮的白細胞介素IL-10的水平。
圖5通過耳朵腫大程度反映的接觸型超敏反應來顯示益生微生物對紫外輻射誘發(fā)的免疫抑制的療效。
圖6通過超敏反應抑制百分率顯示益生微生物對紫外輻射誘發(fā)的免疫抑制的療效。
按照一個優(yōu)選的實施例，微生態(tài)制劑包括的益生微生物選自乳酸菌群，具體講有乳酸桿菌屬和(或)雙歧桿菌屬，尤其是乳酸桿菌屬中的johnsonii株，reuteri株，rhamnosus株，paracasei株，casei株，雙歧桿菌屬中的bifidum株，breve株，animalis株，infants株，dolescentis株，pseudocatenulatum株。由于乳酸桿菌和雙歧桿菌需氧量不同，它們在腸道寄生位置也會不同，因此一個良好的混合配比可以有更廣泛的覆蓋面積。
根據(jù)最優(yōu)配比，我們用的菌株是根據(jù)布達佩斯特條例存放于巴斯德研究所的保存編號為CNCM I-1225的乳酸桿菌屬johnsonii株(Lactobacillusjohnsonii，Lal)和保存編號為CNCM I-2116的乳酸桿菌屬paracasei株(Lactobacillus paracasei，ST11)。
制劑形式可以是任何食品或藥品，內(nèi)服或外用化妝品。這些制劑中可以含益生微生物本身或者培養(yǎng)物上清。舉例來講，食品和藥品制劑可以是如下形式牛奶，乳酸，果凍，乳酪，發(fā)酵乳，牛奶類發(fā)酵制品，冰淇淋，谷物類發(fā)酵制品，奶粉，嬰兒食品，寵物食品，片劑藥，菌懸液，干、濕零食，干、濕鼻飼物?；瘖y品制劑可以是洗滌劑，香波，乳膏如潤膚霜、早霜、晚霜、抗老霜，軟膏。這些制劑中，微生物可以是活體、半失活或全失活狀態(tài)如凍干粉等。培養(yǎng)物上清或其濃縮態(tài)也可以添加于化妝品中。
需要指出的是，以微生物形式制備的微生態(tài)制劑的平衡調(diào)節(jié)活性是劑量依賴性的。所以制劑可以包含活或失活菌體個數(shù)為105到1012每克。培養(yǎng)物上清可以直接添加，也可以經(jīng)過一至多步的純化再加以便濃縮、分離活性組分或代謝物。眾所周知，分離純化及其測活對操作人員技術(shù)要求較高。
雖然本發(fā)明適用于所有動物，包括人，哺乳動物尤其是其中的寵物，但益生微生物微生態(tài)制劑還是優(yōu)先適用于免疫能力降低的老年個體。
在本發(fā)明的深度研究過程中，所用模型動物是符合微生物相關(guān)條例(microflora associated characteristics，MAC)和無菌動物條例(germfreeanimal characteristics，GAC)的無菌動物。符合這些條例很重要，尤其對于由皮膚表現(xiàn)的過敏性和炎癥疾病。
下面的例子進一步闡述了這一發(fā)明，但本發(fā)明不限于此。例1 平衡超敏反應本實驗評估了某一化學壓力條件下，益生菌(死的或活的)對皮膚免疫系統(tǒng)的作用。在這方面，動物用某化學物質(zhì)(二硝基氯苯)致敏，從而比較無菌動物致敏后的效應與腸道中只含益生菌的動物致敏后的效應。DNCB(二硝基氯苯)引發(fā)的超敏反應的水平用幾個參數(shù)來評估(見下文)。
無菌雄性實驗鼠C3H(LPS+)由Orléans研究中心(CNRS Orléans，F(xiàn)rance)提供，分成4組，每組8只。按照腸道微生物的不同狀態(tài)，分別設定為“C”(Conventional，腸道寄生普通微生物的一組)，“LV”(LiVing，腸道僅寄生活乳酸菌的一組)，“LD”(LactobacillusDead，喂食已滅活的乳酸菌的一組)，“A”(Axenic，無菌鼠)；各組均在分開獨立的籠子里飼養(yǎng)，C組在自然狀態(tài)上飼養(yǎng)。
供給實驗鼠的益生菌是乳酸菌ST11(來自巴斯德研究所，索取號CNCM I-2116)，喂飼量為活菌108cfu/ml(cfu＝克隆形成單位)，或用照射致死或滅活的濃度為2.1g/25ml的菌與水混合液強迫喂食，或按3.3g/L配在飲用水中(如下)。
為得到腸道僅寄生活乳酸菌的實驗鼠，將無菌鼠在第7天，第8天以108cfu/ml的溶液0.5ml強迫喂食兩次(LV組)。為得到腸道含有已照射滅活的乳酸菌的實驗鼠，無菌鼠從第36天到第38天，第41天到第45天，第48天到第49天，以及從51天開始每天以含2.1g/25ml滅活微生物的溶液0.2ml強迫喂食。從第55天開始，上述溶液換成在飲用水中加入3.3g/L滅活微生物，直到實驗結(jié)束(LD組)。為得到腸道寄生普通微生物的實驗鼠，無菌鼠運到3天后轉(zhuǎn)到普通動物籠中，用普通飼料喂養(yǎng)，發(fā)展腸道中的正常微生物。A，LV，LD各組中的所有實驗鼠均測定排泄物中微生物組成，已確定特殊的腸道微生物狀態(tài)是否得到維持。
不同組中動物均在第45，第50天在側(cè)腹位置注射50μl 1％二硝基氯苯(DNCB)致敏。最后一次致敏5天后，所有組中的動物再連續(xù)3天(第55，第56和第57天)，右耳注射25μ1％二硝基氯苯，左耳注射25μl載體(橄欖油)。
在第58天，測定了由上述條件DNCB處理導致的過敏反應的水平。在第58天，分別測量了每只實驗鼠左耳和右耳的厚度，并計算了同一只鼠左右耳的厚度差。結(jié)果如圖一所示，并總結(jié)在表I中，如下表I

由上可見，顯然由測定的兩耳厚度差反映的超敏性程度以如下順序遞增C＜LV＜LD＜A。
通過以上結(jié)果，可以得出結(jié)論，與無菌鼠相比，普通腸道微生物傾向于調(diào)節(jié)炎癥反應。此外，似乎單獨加入益生菌ST11導致DNCB注射引起的炎癥反應減弱，喂給乳酸菌的實驗鼠耳朵水腫有消減的趨勢。這一發(fā)現(xiàn)令人驚奇，因為腸道微生物通常由不同種菌組成，每種菌分擔不同任務。
進一步地，為得到該壓力條件引起的免疫反應的生化數(shù)據(jù)，制備了右耳結(jié)晶分泌物，檢測ICAM-1和TGF-β的量。ICAM-1是炎癥前分子標記，TGF-β是炎癥后分子標記。因此，預計壓力條件誘導將導致ICAM-1水平升高，TGF-β水平下降。
在實驗中使用了稀釋度為1/25兔抗鼠ICAM-1抗體(clone KAT-1，CaltagLaboratories，CA，USA)，稀釋度為1/700的兔抗大鼠-FITC(Dako，Ca，USA)。為測定TGF-β量，使用稀釋度為1/20的兔抗人/鼠TGF-β(V)抗體(Santa CruzBiotechnology，Ca，USA)，以及稀釋度為1/1000的豬抗兔-FITC(Dako，Ca，USA)。
如圖2所示，無菌鼠可檢測到高水平的炎癥細胞因子ICAM-1，可觀察到喂給活益生菌的實驗鼠ICAM-1量降低，與帶有普通微生物的實驗鼠相當。喂給滅活的益生菌的動物也有ICAM-1水平降低。這一發(fā)現(xiàn)可以用如下順序表示C＝LV＞LD＞A。
根據(jù)對炎癥分子標記量的測定，發(fā)現(xiàn)腸道僅寄生益生菌的實驗鼠與寄生正常菌群的實驗鼠有一樣低的ICAM-1水平。
此外，與之對比，圖3顯示了炎癥后分子標記TGF-β的量在無菌鼠中比在寄生正常菌群的實驗鼠降低了。腸道寄生菌的實驗鼠與無菌鼠比，明顯有TGF-β水平升高。這一分子標記的順序是這樣的C＞LV＞LD＞A。
另外，從鼠背部剪取皮膚樣品，按照文獻Peguet et al.，Br.J.Dermatol.133(1995)，661方法，取下的皮膚樣品移入抽提緩沖液(10mM Tris HCl，pH7.4；2mMMgCl；150mM NaCl；1％ Triton X100；2mM PMSF)冰浴，超聲處理。也收集實驗鼠血清樣品。血清樣品和皮膚抽提物均測定了IL-10水平。
該實驗使用了Biosource International，CA，USA公司的ultrasensitive ELISAtest Cytoscreen試劑盒。IL-10的量按照標準曲線(0.625～080pg/ml)計算。
抽提物的實驗結(jié)果反映了總胞質(zhì)物質(zhì)中的總蛋白(Lowry法測得)中含有IL-10的量。結(jié)果顯示為pg IL-10，在圖4和表II中可見。
表II

似乎很明顯，寄生正常菌群的實驗鼠IL-10水平最高，腸道寄生益生菌的實驗鼠比無菌鼠要高。順序如下C＞LV＞LD＞A。
根據(jù)實驗中的發(fā)現(xiàn)，明顯看出測定不同參數(shù)(TGF-β，ICAM-1，IL-10)的結(jié)果確證了兩耳厚度差的結(jié)果，也就是，喂給乳酸菌能調(diào)節(jié)炎癥反應。例2本實驗中，紫外線誘發(fā)的，顯然是超敏反應降低引起的皮膚免疫系統(tǒng)抑制，被用于檢測益生菌恢復免疫系統(tǒng)應答壓力條件的能力這一潛力，尤其是在正常狀態(tài)下接觸到過敏原時。
設立了3組實驗動物。第1組動物給與已知能引起超敏反應的一種化合物二硝基氟苯(DNFB)，并測定了皮膚免疫系統(tǒng)的反應。第2組動物在化合物處理前用紫外線照射，測定了這種條件組合下免疫系統(tǒng)的反應。第3組動物給與活益生菌或滅活的益生菌，或其培養(yǎng)上清，再接受紫外照射。評估了這組中益生菌恢復免疫反應的效應。
該實驗使用了出生8周到10周的雌性Skhl/hr實驗鼠(來自Charles RiverLaboratories，法國)。給與不同實驗組的益生菌如表III所示表III

提供的益生菌樣品為109cfu/ml的1.5ml冷凍分裝。無菌培養(yǎng)基(產(chǎn)品1)作為對照使用。
實驗鼠分為32組，每組10只鼠。各組實驗鼠從紫外照射(第0天)前10天開始喂給相應產(chǎn)品，直到紫外照射后的第12天，這天使用DNFB刺激。所以，實驗動物喂食產(chǎn)物的時間共23天。產(chǎn)品1～7(如上所示)分別強制喂食給第5～第32組，喂食劑量為每只動物100μl，相當于每只動物每天108cfu。表IV列出了各種產(chǎn)品及喂給各產(chǎn)品的相應實驗鼠組。
表IV

在第0天，小鼠用異熒烷/氧輕度麻醉后，再用1000W氙燈(Oriel)模擬太陽照射，氙燈帶有一個分色鏡(Oriel，Statford，USA)，其中裝有一個WG320/1mm厚的濾光器和一個UG11/1mm厚的濾光器(Schott)。這一過濾后的光源模擬了太陽紫外光譜(290～400nm)，去除了所有可見光和紅外線。用輻射計ARCC 1600(Osram)測定了照射劑量為UVB1.95mW/cm2，UVA9.35mW/cm2。實驗用的光譜用SPF COLIPA確證。
在第0天，第3，4，7，8，9，11，12，15，16，19，20，23，24，27，28，31，32組實驗鼠除了耳朵得到保護外，均接受了照射。一次接受劑量為2.5MED。
第5和第6天，分別在小鼠腹部注射50μl丙酮(第1，3，5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31)或DNFB(0.3％的丙酮溶液，第2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32)誘發(fā)超敏反應。
第12天，在所有小鼠右耳注射0.2％的DNFB丙酮溶液5μl。小鼠均在測試開始(第0天)和結(jié)束時(第13天)稱重。
對炎癥反應的評估在紫外照射24小時后，也就是第1天進行。評測2個參數(shù)，一個是統(tǒng)計小鼠背部的紅斑和水腫個數(shù)，計算各組的平均值；另一個參數(shù)是測定照射組和非照射組背部皮膚厚度的增加程度，計算各自的平均值。
左耳和右耳皮膚厚度的測定在第13天進行。計算了同一只動物左右耳皮膚厚度差，以及每個組的平均值。其結(jié)果顯示在表V，圖5和圖6中。
表V測定耳朵厚度差反映的超敏反應程度


正如所預料的，沒有接受益生菌處理的實驗鼠，對照實驗鼠，和僅接受培養(yǎng)基的實驗鼠暴露于紫外照射，均能抑制DNFB誘發(fā)的超敏反應。接受益生菌或它的培養(yǎng)上清處理的實驗鼠明顯有免疫系統(tǒng)的恢復，表現(xiàn)出了針對DNFB的超敏反應。這些發(fā)現(xiàn)清楚表明，益生菌以及其培養(yǎng)上清中的代謝產(chǎn)物顯然能紫外照射抑制后的免疫系統(tǒng)，從而恢復免疫反應。
權(quán)利要求
1.應用益生乳酸菌或它的培養(yǎng)上清，制備一種平衡皮膚免疫功能的載體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于該載體是可攝入的載體，或是可通過局部滴旋使用的載體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應用，其特征在于該乳酸菌是從乳酸菌類群，尤其是乳桿菌屬和/或雙歧桿菌屬中選擇的。
4.根據(jù)上述權(quán)利要求中的任何一項權(quán)利要求所述的應用，其特征在于該乳酸菌是CNCM I-1225或CNCM I-2116。
5.根據(jù)上述權(quán)利要求中的任何一項權(quán)利要求所述的應用，其特征在于壓力條件導致的炎癥和/或照射效應得到了抑制。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應用，其特征在于該壓力條件是一種物理的，化學的或生物的壓力條件。
7.根據(jù)上述權(quán)利要求中的任何一項權(quán)利要求所述的應用，其特征在于該物理壓力條件是和紫外照射相關(guān)的。
8.根據(jù)上述權(quán)利要求中的任何一項權(quán)利要求所述的應用，其特征在于該載體是從牛奶，酸奶酪，凝乳，干酪，發(fā)酵牛奶，牛奶來源的發(fā)酵產(chǎn)物，冰淇淋，谷物來源的發(fā)酵產(chǎn)物，奶粉，嬰兒配方，藥片，菌懸液，固體口服補品，液體口服補品，固體管飼或液體管飼，寵物食品或洗液，洗發(fā)水，護膚霜和/或藥膏中選取的。
9.根據(jù)上述權(quán)利要求中的任何一項權(quán)利要求所述的應用，其特征在于該載體中益生菌的含量為105～1012cfu/g。
10.根據(jù)上述權(quán)利要求中的任何一項權(quán)利要求所述的應用，其特征在于皮膚免疫功能得到平衡的個體是指人或?qū)櫸铮绕涫抢夏耆撕屠夏陮櫸铩?br> 全文摘要
本發(fā)明是關(guān)于用微生態(tài)制劑來調(diào)節(jié)皮膚免疫功能的。具體講，就是應用益生微生物制劑來調(diào)節(jié)皮膚在像紫外照射等逆境條件下的免疫功能，特別是增強皮膚免疫活力，減緩發(fā)生過敏反映的趨勢。
文檔編號A23K1/18GK1468105SQ01816819
公開日2004年1月14日 申請日期2001年10月4日 優(yōu)先權(quán)日2000年10月6日
發(fā)明者馬科司·鮑爾, 里昂內(nèi)爾·布來登, 弗朗科司·寇滋, 安德魯·金里奇, 金里奇, 司 寇滋, 爾 布來登, 馬科司 鮑爾 申請人:雀巢產(chǎn)品股份有限公司