專利名稱：金釵石斛的快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥用石斛的快速繁殖方法，具體地講，是指一種采用組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)金釵石斛進(jìn)行快速繁殖的方法。
背景技術(shù)：
植物組織培養(yǎng)是指用植物的各種器官、組織或細(xì)胞，在人工控制條件下進(jìn)行無(wú)菌培養(yǎng)，通過(guò)生長(zhǎng)發(fā)育的過(guò)程，產(chǎn)生可以用于繁殖的完整植株，并在數(shù)量上得到大幅度的增加。該技術(shù)取材少，培養(yǎng)植物材料成本低，生長(zhǎng)周期短，管理方便。利用植物組織培養(yǎng)這種快速繁殖技術(shù)，能在短時(shí)間內(nèi)繁衍出大量植株，并且能較好地保持母本的遺傳性狀。在我國(guó)通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖的植物已有近千種。
石斛是我國(guó)的一種傳統(tǒng)名貴中藥，由于生長(zhǎng)條件要求苛刻，自然條件下生長(zhǎng)極為緩慢，目前大量的采挖已經(jīng)使一些重要的藥用石斛種類瀕臨滅絕。據(jù)調(diào)查，現(xiàn)市場(chǎng)上流通的藥用石斛有30余種，而以其中的霍山石斛、鐵皮石斛、金釵石斛最為珍貴。金釵石斛藥用價(jià)值非常高，目前的市場(chǎng)價(jià)格為7-10元/克。同時(shí)，金釵石斛花色艷麗，花期長(zhǎng)，適合于做盆花栽培，因此，極具開發(fā)利用價(jià)值。
對(duì)石斛的開發(fā)，快速繁殖是第一步。目前有關(guān)于霍山石斛、鐵皮石斛組培快繁的技術(shù)報(bào)道較多[如曾宋君、程式君，石斛的試管苗快速繁殖，中藥材，1996，19(10)490-491；徐云昌、于力文等，霍山石斛種子試管苗的栽培，安徽農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，1985(1)95-97；趙天榜、陳志秀等，石斛組織培養(yǎng)與栽培技術(shù)研究，河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1994，28(2)128-133等]，從外植體的選擇、培養(yǎng)基的篩選等方面可以說(shuō)已經(jīng)相當(dāng)成熟了。一般是以成熟或未成熟的種子為材料，在有激素或無(wú)激素的培養(yǎng)基上萌發(fā)，形成原球莖，原球莖繼續(xù)擴(kuò)增或成苗。具體包括五個(gè)步驟(1)外植體的選擇與滅菌通常選擇果實(shí)或當(dāng)年萌生的有嫩莖尖，果實(shí)滅菌一般以70％乙醇?xì)⒕?-2分鐘后，再用3％的消潔靈殺菌20-25分鐘，無(wú)菌水沖洗3-5次，切開果實(shí)，將種子撒在培養(yǎng)基表面即可。莖尖則先用無(wú)菌水沖洗干凈，用70％乙醇消毒10秒鐘，再用3％消潔靈殺菌20分鐘，無(wú)菌水沖洗4-5次，將莖尖接種在培養(yǎng)基上。
(2)腋芽的萌發(fā)采用N6培養(yǎng)基，加入1mg/L的6-BA，0.5mg/L的NAA，在25±1℃、光照1500-2000Lx、光照時(shí)間為8-10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)，直至形成帶葉的小苗。
(3)叢生芽誘導(dǎo)將小苗接種在含有2mg/L NAA的1/2N6培養(yǎng)基上培養(yǎng)，直至形成叢生芽，培養(yǎng)條件同步驟(2)。
(4)成苗培養(yǎng)通常將不定芽或叢生芽接種到MS或N6+10％香蕉汁的培養(yǎng)基上，29-31天生根，形成完整植株，培養(yǎng)條件同步驟(2)。
(5)練苗和移栽先將組培苗在室內(nèi)鍛煉20-25天后，洗凈根上的培養(yǎng)基，用0.1％的多菌靈消毒后，栽培于活苔蘚中，栽后澆足水，以后經(jīng)常進(jìn)行人工噴霧，保持環(huán)境濕潤(rùn)，每隔10-15天灑一次營(yíng)養(yǎng)液。成活率可以達(dá)到95-97％。
在上述方法和下列關(guān)于本發(fā)明的描述中，MS和N6培養(yǎng)基是本領(lǐng)域常用的培養(yǎng)基，從有關(guān)植物組織培養(yǎng)的書都可找到其配方。BA是6-芐基腺嘌呤，NAA是萘乙酸，Lx是光強(qiáng)的單位——勒克斯。
但上述方法以種子為材料，由于石斛屬植物在自然狀態(tài)下，主要以營(yíng)養(yǎng)繁殖為主要繁殖方式，雖然開花多，但授粉結(jié)實(shí)率很低，使得種子的獲得具有一定的困難，且接種時(shí)間受到嚴(yán)格的限制；選擇幼嫩莖尖為材料，不僅接種時(shí)間受到限制，材料數(shù)量有限，還會(huì)明顯地影響栽培植株的正常生長(zhǎng)；不利于材料的更新。此外，在練苗技術(shù)上，多數(shù)方法要求較高，如要求栽在活苔蘚上，才能獲得較高的成活率等，所以難以大規(guī)模生產(chǎn)。
目前，關(guān)于金釵石斛的離體快繁研究至今未見報(bào)道，由于金釵石斛和絕大多數(shù)蘭科植物一樣，種子小，自然條件下萌發(fā)率極低，依靠傳統(tǒng)的繁殖方式，無(wú)法解決金釵石斛的快速繁殖問(wèn)題。
發(fā)明專利內(nèi)容本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有石斛組織培養(yǎng)方法的不足，對(duì)其進(jìn)行改進(jìn)，提供一種能夠適合金釵石斛、采用組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行快速繁殖的方法，該方法可以將金釵石斛的種苗繁殖工廠化，在短時(shí)間內(nèi)獲得滿足大規(guī)模生產(chǎn)所需要的種苗，還具有成本低、種苗生長(zhǎng)整齊、練苗方法簡(jiǎn)便易行、遺傳的穩(wěn)定性好等特點(diǎn)，同時(shí)一年四季均能獲得所需的外植體。
本發(fā)明的方法是在現(xiàn)有石斛組織培養(yǎng)技術(shù)的基礎(chǔ)上增加“叢生芽增殖培養(yǎng)”步驟，以提高繁殖的效率。也就是說(shuō)，本發(fā)明在現(xiàn)有技術(shù)五步驟(1)外植體的選擇與滅菌；(2)腋芽的萌發(fā)；(3)叢生芽誘導(dǎo)；(4)成苗培養(yǎng)；(5)練苗和移栽的基礎(chǔ)上，在步驟(3)“叢生芽誘導(dǎo)”之后增加“叢生芽增殖培養(yǎng)”步驟，其具體操作是將已經(jīng)通過(guò)叢生芽誘導(dǎo)的材料培養(yǎng)在下列培養(yǎng)基中1/2MS，0.1-0.2mg/LNAA，50％香蕉汁100mL/L，蔗糖25-30g/L，活性炭0.5g/L，pH為5.6-5.8，培養(yǎng)條件為25-28℃，光強(qiáng)2000-3000Lx，培養(yǎng)時(shí)間為25-30天，光照時(shí)間10-12小時(shí)/天。
本發(fā)明的較佳方案是對(duì)原有五步驟中的一步或多步進(jìn)行改進(jìn)，各步驟的較佳方案如下(1)外植體的選擇與滅菌——選用二年生莖段為外植體，莖段洗凈、去除葉鞘后，切成具有1-4個(gè)腋芽、長(zhǎng)3-5厘米段，用300-500mg/L的多菌靈溶液浸泡2-4小時(shí)，再用70％乙醇?xì)⒕?-2分鐘后，用0.1％氯化汞殺菌15-20分鐘，無(wú)菌水沖洗3-5次，取出材料，切成具有一個(gè)腋芽、長(zhǎng)度為1厘米左右的小段，最后用12％次氯酸鈉殺菌0.5-1分鐘，無(wú)菌水沖洗三次。
(2)腋芽的萌發(fā)——采用培養(yǎng)基配方為1/2MS，0-1mg/L BA，0-1mg/L NAA，50％香蕉汁100mL/L，蔗糖25g/L，活性炭0.5g/L，pH為5.6-5.8。培養(yǎng)條件為25±1℃、光照1500-2000Lx，光照時(shí)間為8-10小時(shí)/天，培養(yǎng)時(shí)間為28-32天。
(3)叢生芽誘導(dǎo)——采用培養(yǎng)基配方為1/2MS，0.1-0.5mg/LBA，50％香蕉汁100mL/L，蔗糖25-30g/L，活性炭0.5g/L，pH5.6-5.8。培養(yǎng)條件為25-28℃，光強(qiáng)1500-2000Lx，光照時(shí)間10-12小時(shí)/天，培養(yǎng)時(shí)間為28-32天。
(4)成苗培養(yǎng)——采用培養(yǎng)基配方為MS或N6+10％香蕉汁，0.1-0.2mg/LNAA，1-2mg/LBA，培養(yǎng)條件為25±1℃、光照1500-2000Lx，光照時(shí)間為8-10小時(shí)/天，培養(yǎng)時(shí)間為60-90天。
(5)練苗和移栽——不再進(jìn)行室內(nèi)練苗，而是將洗凈培養(yǎng)基的瓶苗在陰涼處晾20-30小時(shí)，緩慢降低其含水量；更換活苔蘚為商品水蘚，栽培后7-10天內(nèi)不澆水，以減少栽培后的腐爛問(wèn)題。一個(gè)月后，開始施肥。施肥每周2次，用0.3-0.5％的復(fù)合肥葉面噴施。這樣，不僅可以縮短周期半個(gè)月左右，還可以免去對(duì)活苔蘚的依賴，使得大規(guī)模工廠化生產(chǎn)成為可能。
在上述發(fā)明中，步驟(2)中，激素濃度最好是采用0.1mg/L NAA+1mg/LBA；步驟(3)中，BA的濃度最好是0.5mg/L；“叢生芽增殖培養(yǎng)”步驟中，NAA濃度最好是0.2mg/L在步驟(5)中，晾的時(shí)間最好為24小時(shí)，栽培后不澆水的時(shí)間最好是10天。
在本方法中，由于采用營(yíng)養(yǎng)體為材料，而不是利用種子作為材料，因此保證了遺傳的穩(wěn)定性。利用二年生莖段作為外植體的最大優(yōu)勢(shì)，是可以在一年四季中任何時(shí)候取材，并且材料量充足。增加了叢生芽增殖，可以大大提高快繁的效率，而練苗方法的改進(jìn)，不僅保證了較高的成活率，也使得該技術(shù)滿足了大規(guī)模推廣和工廠化生產(chǎn)的要求。
本發(fā)明方法具有如下優(yōu)點(diǎn)或效果1、本方法克服了傳統(tǒng)繁殖方法繁殖速度慢，很難滿足大規(guī)模生產(chǎn)需求的不足?？梢詫⒔疴O石斛的種苗繁殖工廠化，在短時(shí)間內(nèi)能夠繁殖出滿足大規(guī)模生產(chǎn)所需要的種苗；2、本方法具有成本低、種苗生長(zhǎng)整齊等特點(diǎn)；3、由于采用成熟的莖段作為外植體，保證了遺傳的穩(wěn)定性，同時(shí)由于其數(shù)量多，可以在一年四季中隨時(shí)更新。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1(1)外植體的選擇與滅菌將采回的二年生莖段先用毛刷蘸洗潔精將表面的污垢洗凈，剝?nèi)埩舻娜~鞘，用解剖刀切成具有1-4個(gè)腋芽，長(zhǎng)3-5厘米段，用300mg/L的多菌靈溶液浸泡2小時(shí)，其間經(jīng)常搖動(dòng)，到時(shí)棄去多菌靈溶液，材料用流水沖洗干凈，加入70％乙醇1分鐘，傾出乙醇后用0.1％氯化汞殺菌20分鐘，無(wú)菌水沖洗3-5次，取出材料，用解剖刀切成具有一個(gè)腋芽，長(zhǎng)度為1厘米左右的小段，再用12％次氯酸鈉殺菌1分鐘，接種。其污染率為16.7％，而常規(guī)方法的結(jié)果污染率高達(dá)95.2％，與本發(fā)明的方法相比差距甚大。
(2)腋芽的萌發(fā)誘導(dǎo)時(shí)間為28天，培養(yǎng)條件為25℃，光強(qiáng)2000Lx，光照時(shí)間10小時(shí)/天。培養(yǎng)基配方為1/2MS，0.1mg/LNAA，1mg/LBA，50％香蕉汁100mL/L，蔗糖25g/L，活性炭0.5g/L，pH5.6。結(jié)果在88個(gè)外植體材料中，腋芽萌發(fā)率為25％，明顯好于對(duì)照組的9.7％。
(3)叢生芽的誘導(dǎo)誘導(dǎo)時(shí)間為28天，培養(yǎng)條件為28℃，光強(qiáng)1500Lx，光照時(shí)間12小時(shí)/天。培養(yǎng)基配方為1/2MS，0.5mg/LBA，50％香蕉汁100mL/L，蔗糖30g/L，活性炭0.5g/L，pH5.8。在接種的50個(gè)材料中，叢生芽誘導(dǎo)率為18％，對(duì)照為4％，本發(fā)明的方法明顯好于對(duì)照組。
新增步驟——叢生芽的增殖采用培養(yǎng)基為1/2MS，0.2mg/LNAA，50％香蕉汁100mL/L，蔗糖30g/L，活性炭0.5g/L，pH5.8。培養(yǎng)條件為28℃，光強(qiáng)3000Lx，光照時(shí)間10小時(shí)/天?？梢栽?0天內(nèi)，使叢生芽的數(shù)量增加17.2倍，繁殖效率明顯提高。
(4)成苗培養(yǎng)培養(yǎng)基采用MS+0.1mg/LNAA+1mg/L BA，培養(yǎng)條件為25℃、光照2000Lx，光照時(shí)間為8小時(shí)/天，培養(yǎng)時(shí)間為60-90天，平均苗高為4.6cm，明顯優(yōu)于對(duì)照的2.5cm。
(5)練苗和移栽洗凈的瓶苗，在陰涼處晾干24小時(shí)，栽于潤(rùn)濕的水蘚中，10天后開始澆水，一個(gè)月后，開始用0.3％的復(fù)合肥葉面噴施，每周2次。成活率為96.3％，與對(duì)照95-97％相近，但該方法解決了必須栽于活苔蘚中的制約，為大規(guī)模工廠化生產(chǎn)創(chuàng)造了條件。
綜合以上各步，本發(fā)明的方法，不僅在取材方便性，腋芽的萌發(fā)率，叢生芽的誘導(dǎo)率，增殖倍數(shù)和瓶苗質(zhì)量等方面明顯優(yōu)于對(duì)照，而且為大規(guī)模工廠化生產(chǎn)，提供了可行的練苗和移栽的方法，與對(duì)照相比具有明顯的優(yōu)勢(shì)。
實(shí)施例2其它同實(shí)施例1，步驟(1)的殺菌方法為300mg/L多菌靈4小時(shí)+70％乙醇1分鐘+0.1％氯化汞15分鐘+12％次氯酸鈉0.5分鐘。結(jié)果在接種的859個(gè)外植體材料中，污染率為47.7％，明顯好于對(duì)照組。
實(shí)施例3其它同實(shí)施例1，步驟(1)的殺菌方法為500mg/L多菌靈2小時(shí)+70％乙醇1分鐘+0.1％氯化汞15分鐘+12％次氯酸鈉1分鐘。結(jié)果在接種的633個(gè)外植體材料中，污染率為45.2％，明顯好于對(duì)照組。
實(shí)施例4其它同實(shí)施例1，步驟(2)中，誘導(dǎo)時(shí)間為32天，培養(yǎng)條件為25℃，光強(qiáng)1500Lx，光照時(shí)間8小時(shí)/天。培養(yǎng)基配方為1/2MS，1mg/LBA，50％香蕉汁100mL/L，蔗糖25g/L，活性炭0.5g/L，pH5.8。結(jié)果在88個(gè)外植體材料中，腋芽萌發(fā)率為25％，明顯好于對(duì)照組的9.7％。
實(shí)施例5其它同實(shí)施例1，步驟(2)的培養(yǎng)基所用激素僅采用1mg/L NAA。步驟(3)中，誘導(dǎo)時(shí)間為32天，培養(yǎng)條件為25℃，光強(qiáng)2000Lx，光照時(shí)間10小時(shí)/天。培養(yǎng)基配方為1/2MS，0.3mg/LBA，50％香蕉汁100mL/L，蔗糖25g/L，活性炭0.5g/L，pH5.6。結(jié)果在35個(gè)接種材料中，叢生芽誘導(dǎo)率為5.7％，好于對(duì)照組的4％。
實(shí)施例6其它同實(shí)施例1，步驟(3)中，誘導(dǎo)時(shí)間為30天，培養(yǎng)條件為28℃，光強(qiáng)1500Lx，光照時(shí)間12小時(shí)/天。培養(yǎng)基配方為1/2MS，0.1mg/LBA，50％香蕉汁100mL/L，蔗糖30g/L，活性炭0.5g/L，pH5.8。結(jié)果在接種的50個(gè)材料中，叢生芽誘導(dǎo)率為18％，明顯好于對(duì)照組。
實(shí)施例7其它同實(shí)施例1，新增步驟——叢生芽的增殖中，培養(yǎng)時(shí)間為25天。培養(yǎng)條件為25℃，光強(qiáng)2000Lx，光照時(shí)間12小時(shí)/天。培養(yǎng)基為1/2MS，0.1mg/LNAA，50％香蕉汁100mL/L，蔗糖25g/L，活性炭0.5g/L，pH5.6。結(jié)果在接種的30瓶材料中，增殖倍數(shù)為2.3，明顯好于對(duì)照組的1.2。
實(shí)施例8其它同實(shí)施例1，新增步驟——叢生芽的增殖中，培養(yǎng)時(shí)間為25天。培養(yǎng)條件為28℃，光強(qiáng)3000Lx，光照時(shí)間10小時(shí)/天。培養(yǎng)基為1/2MS，0.2mg/LNAA，50％香蕉汁100mL/L，蔗糖30g/L，活性炭0.5g/L，pH5.8。結(jié)果接種的30瓶材料中，增殖倍數(shù)為17.2，明顯好于對(duì)照組。
實(shí)施例9其它同實(shí)施例1，步驟(4)的培養(yǎng)基采用N6+10％香蕉汁+0.2mg/LNAA+2mg/LBA，培養(yǎng)條件為25℃、光照1500Lx，光照時(shí)間為10小時(shí)/天，培養(yǎng)時(shí)間為60-90天，結(jié)果瓶苗的苗高為4.6cm，明顯好于對(duì)照組的2.5cm。
實(shí)施例10其它同實(shí)施例1，步驟(5)中，將達(dá)到出瓶標(biāo)準(zhǔn)的瓶苗，輕輕拉出培養(yǎng)瓶，小心洗凈所附著的培養(yǎng)基，在陰涼處涼20小時(shí)后，將其栽培于培養(yǎng)基質(zhì)上，培養(yǎng)基質(zhì)選用商用水蘚，栽植后7天之內(nèi)不淋水，一個(gè)月后，開始施肥。施肥每周2次，用0.3％的復(fù)合肥葉面噴施。結(jié)果成活率為83.5％。
實(shí)施例11其它同實(shí)施例10，瓶苗在陰涼處涼30小時(shí)，栽植于水蘚后10天之內(nèi)不淋水，復(fù)合肥濃度為0.5％。結(jié)果成活率為96.3％，與對(duì)照組相近。
根據(jù)對(duì)實(shí)施例1-11的統(tǒng)計(jì)，本方法從外植體殺菌到練苗完成，具體比率(平均值)如下如接種外植體數(shù)量為100個(gè)，殺菌后未染菌數(shù)量83.3個(gè)，經(jīng)培養(yǎng)有20.825個(gè)腋芽萌發(fā)，誘導(dǎo)產(chǎn)生的叢生芽數(shù)量為3.748個(gè)，增殖一代為64.47個(gè)，二代為1108.96個(gè)，三代為19074個(gè)。
權(quán)利要求
1.一種金釵石斛的快速繁殖方法，包括(1)外植體的選擇與滅菌；(2)腋芽的萌發(fā)；(3)叢生芽誘導(dǎo)；(4)成苗培養(yǎng)；(5)練苗和移栽等步驟，其特征在于在步驟(3)和(4)之間還包括“叢生芽增殖培養(yǎng)”步驟，即將已經(jīng)通過(guò)叢生芽誘導(dǎo)的材料培養(yǎng)在下列培養(yǎng)基中1/2 MS、NAA 0.1-0.2mg/L、50％香蕉汁100mL/L、蔗糖25-30g/L、活性炭0.5g/L，pH為5.6-5.8；培養(yǎng)條件為溫度25-28℃、光強(qiáng)2000-3000Lx；培養(yǎng)時(shí)間為25-30天，光照時(shí)間為10-12小時(shí)/天。
2.如權(quán)利要求1所述的繁殖方法，其特征在于在步驟(1)中，選用二年生莖段為外植體，首先用300-500mg/L的多菌靈溶液浸泡2-4小時(shí)，然后用70％乙醇?xì)⒕?-2分鐘，再用0.1％氯化汞殺菌15-20分鐘，最后用12％次氯酸鈉殺菌0.5-1分鐘。
3.如權(quán)利要求2所述的繁殖方法，其特征在于在步驟(2)中，所采用的培養(yǎng)基配方為1/2MS、0-1mg/L BA、0-1mg/L NAA、50％香蕉汁100mL/L、蔗糖25g/L、活性炭0.5g/L，pH為5.6-5.8；培養(yǎng)條件為溫度25±1℃、光照1500-2000Lx；光照時(shí)間為8-10小時(shí)/天，培養(yǎng)時(shí)間為28-32天。
4.如權(quán)利要求3所述的繁殖方法，其特征在于在步驟(3)中，所采用的培養(yǎng)基配方為1/2MS、0.1-0.5mg/LBA、50％香蕉汁100mL/L、蔗糖25-30g/L、活性炭0.5g/L，pH為5.6-5.8；培養(yǎng)條件為溫度25-28℃、光強(qiáng)1500-2000Lx；光照時(shí)間為10-12小時(shí)/天，培養(yǎng)時(shí)間為28-32天。
5.如權(quán)利要求4所述的繁殖方法，其特征在于在步驟(4)中，所采用的培養(yǎng)基配方為MS或N6+10％香蕉汁、0.1-0.2mg/LNAA、1-2mg/LBA；培養(yǎng)條件為溫度25±1℃、光照1500-2000Lx；光照時(shí)間為8-10小時(shí)/天，培養(yǎng)時(shí)間為60-90天。
6.如權(quán)利要求5所述的繁殖方法，其特征在于在步驟(5)中，將洗凈培養(yǎng)基的瓶苗在陰涼處晾20-30小時(shí)，緩慢降低其含水量，然后將其栽培于商品水蘚中，栽培后7-10天內(nèi)不澆水，一個(gè)月后，開始每周施肥2次，用0.3-0.5％的復(fù)合肥葉面噴施。
7.如權(quán)利要求6所述的繁殖方法，其特征在于在步驟(2)中，激素濃度采用0.1mg/L NAA+1mg/L BA；步驟(3)中，BA的濃度是0.5mg/L；“叢生芽增殖培養(yǎng)”步驟中，NAA濃度是0.2mg/L；在步驟(5)中，晾的時(shí)間為24小時(shí)，栽培后不澆水的時(shí)間是10天。
全文摘要
金釵石斛的快速繁殖方法，在現(xiàn)有技術(shù)五步驟的“叢生芽誘導(dǎo)”步驟之后增加“叢生芽增殖培養(yǎng)”，該步驟采用1/2MS+0.1－0.2mg/LNAA+50％香蕉汁100ml/l+蔗糖25－30g/l+活性炭0.5g/l培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件為25－28℃，光強(qiáng)2000－3000Lx，培養(yǎng)時(shí)間25－30天，光照10－12小時(shí)/天。本方法具有繁殖快、成本低、種苗生長(zhǎng)整齊、練苗簡(jiǎn)便、遺傳穩(wěn)定性好、外植體易得等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK1402971SQ0213475
公開日2003年3月19日 申請(qǐng)日期2002年9月17日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月17日
發(fā)明者葉慶生, 劉偉, 王小菁 申請(qǐng)人:華南師范大學(xué)