專利名稱：一種用于器官移植的灌洗保存液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種器官移植技術(shù)，尤其是指一種對(duì)器官進(jìn)行灌洗，以便于保存，并提高存活率的灌洗液。
背景技術(shù)：
器官移植被稱為“21世紀(jì)醫(yī)學(xué)之巔”。在跨入新世紀(jì)之際，器官移植又進(jìn)入了一個(gè)蓬勃發(fā)展的新時(shí)期。據(jù)全球移植中心名錄(WTCD)的統(tǒng)計(jì)，迄今已有60余萬(wàn)名身患不治之癥者，通過(guò)器官移植獲得了第二次生命。他們?cè)谝浦财鞴俸螅斫】?，過(guò)著與正常人一樣的生活；心理健康，工作精力充沛；育齡婦女能懷孕生育，少年兒童能健康成長(zhǎng)。為了使器官移植有更好的前景，各國(guó)科學(xué)工作者們正孜孜不倦地在探索新的領(lǐng)域。為開(kāi)拓器官來(lái)源，正在開(kāi)展利用動(dòng)物器官的異種移植研究；創(chuàng)制各種新的器官保存液。
我國(guó)自70年代開(kāi)展臨床器官移植以來(lái)，技術(shù)隊(duì)伍不斷擴(kuò)大，水平亦逐年提高，在腎移植、肝移植、脾移植等多個(gè)方面都取得了驕人的成績(jī)，并且逐漸形成了自己的特色。因此，引起了國(guó)際學(xué)術(shù)界的廣泛關(guān)注。
自從1983年多倫多肺移植組成功進(jìn)行人類單肺移植，1986年成功進(jìn)行雙肺移植以來(lái)，全世界應(yīng)用肺移植技術(shù)治療終末期肺部疾病的病例迅速增加，據(jù)國(guó)際心肺移植協(xié)會(huì)登記2000年全世界單肺移植7420，雙肺移植5420例。平均一年存活率超過(guò)87％，三年存活率超過(guò)60％，五年存活率超過(guò)45％，七年存活率超過(guò)35％。
亞洲地區(qū)肺移植相對(duì)落后。肺移植在國(guó)內(nèi)開(kāi)展時(shí)間不長(zhǎng)，僅北京安貞醫(yī)院報(bào)告2例長(zhǎng)期生存。目前除安貞醫(yī)院的病例外，國(guó)內(nèi)尚無(wú)存活的肺移植病例。我國(guó)肺移植工作落后于國(guó)際水平的因素很多，其中選擇適當(dāng)?shù)墓嘧⒁阂约胺喂嘧⒈４婕夹g(shù)一直是實(shí)驗(yàn)及臨床研究的焦點(diǎn)，它是減少肺再灌注損傷(Ischemia-reperfusion injury)的關(guān)鍵。
肺移植術(shù)后影響早期肺功能的因素很多。在臨床實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用很多不同的肺保存技術(shù)，有的已經(jīng)成功，但沒(méi)有一個(gè)是理想的技術(shù)。應(yīng)用改良Euro-Collins液或UW(威斯康辛大學(xué))液體進(jìn)行肺動(dòng)脈灌注，目前也僅能保存4-6h，即缺血時(shí)間最長(zhǎng)不得超過(guò)6h，因此不甚理想。近年研究并試用的灌洗液還有LPD(低鉀右旋糖酐)，有多家報(bào)道其肺保存作用較Euro-Collins液、UW(威斯康辛大學(xué))液更好，認(rèn)為它能更好地保護(hù)肺泡毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞，但即便如此，仍然不是一種可以在臨床上廣泛應(yīng)用的理想的灌洗液，這些因素導(dǎo)致供肺的運(yùn)轉(zhuǎn)、手術(shù)的安排乃至手術(shù)操作都受到嚴(yán)重限制，成為肺移植發(fā)展的重要障礙。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于尋求一種用于器官移植的灌洗保存液，這種灌洗液能有效提高移植器官的存活率。
其主要技術(shù)方案是在灌洗液中含有鉀3.5～6(毫摩爾/升)，鈉130～168(毫摩爾/升)，鎂0.8～2.5(毫摩爾/升)，氯100～110(毫摩爾/升)，磷酸鹽30～40(毫摩爾/升)，硫酸鹽3.5～5.5(毫摩爾/升)，前列腺素E1 100～150(毫克/升)，棉子糖30～50(毫摩爾/升)，低分子右旋糖酐40 20～40(克/升)。
為進(jìn)一步提高灌洗液的效果還可在灌洗液中添加谷光甘肽3～5(毫摩爾/升)；腺苷5～8(毫摩爾/升)；別嘌呤醇1～3(毫摩爾/升)；地塞米松5～10(毫克/升)。
其中鉀、鈉、鎂、氯、磷酸鹽及硫酸鹽主要用于模擬細(xì)胞外液的環(huán)境，調(diào)整Ph值，以便更好地保護(hù)供體器官；前列腺素E1用于擴(kuò)張肺動(dòng)脈；棉子糖用來(lái)取代葡萄糖作為附加的滲透支持；谷光甘肽、腺苷、別嘌呤醇為氧自由基，對(duì)肺缺血灌注損傷的發(fā)生起到重要的作用，谷光甘肽與別嘌呤醇均可明顯減少肺缺血灌注損傷；地塞米松用于抗炎癥，減少器官排斥；低分子右旋糖酐40用于改善循環(huán)。
我們?cè)诖罅縿?dòng)物實(shí)驗(yàn)上研究并試用WXC液，該技術(shù)在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)上已顯示出較好的肺保存效果，實(shí)驗(yàn)研究顯示肺安全保存時(shí)間超過(guò)24小時(shí)，較之EURO-COLLINS溶液在90分鐘的缺血豬模型中有更好的表面物質(zhì)活性。目前臨床應(yīng)用于肺移植，顯示優(yōu)于Eurolollins液，體現(xiàn)在WXC增強(qiáng)最初的氣體交換，減少術(shù)后機(jī)械通氣時(shí)間，術(shù)后死亡率減少，增強(qiáng)了術(shù)后肺功能(PO2/FiO2比)，預(yù)防缺血再灌注損傷的發(fā)生。
過(guò)去十年間，移植肺的匱乏是臨床肺移植的主要限制性因素。大多數(shù)供體肺由于水腫、人工吸引和由于腦死亡、供者的維持性通氣導(dǎo)致的肺炎而出現(xiàn)低氧和肺部浸潤(rùn)。近來(lái)的研究證明，部分先前認(rèn)為“不合適移植”的肺也可被成功移植。然而，大多數(shù)此類肺仍不能被成功獲取并移植。因而采用挽救這些移植物的手段或使用在移植后能減輕缺血——再灌注損傷的新方法來(lái)改善目前困擾臨床肺移植供體來(lái)源缺乏的問(wèn)題，還有很長(zhǎng)的一段路要走。肺保存技術(shù)已成為肺移植的限制因素，因此WXC灌注液對(duì)在我國(guó)開(kāi)展肺移植有非常重要的意義。
國(guó)外三種灌洗液成分與WXC灌洗液比較

注1、ECEuro-Collins液；2、UW威斯康星大學(xué)液；3、LPD低鉀右旋糖酐液；4、WXC中國(guó)無(wú)錫液，即本發(fā)明的灌洗液。
與國(guó)外三種保存液比較，WXC能預(yù)防細(xì)胞水腫，保存液的成功之處與其它灌注液的區(qū)別在于①不含葡萄糖，而用一種大分子量的Raffinose棉子糖作為附加的滲透支持；②含有前列腺素E1擴(kuò)張肺動(dòng)脈；③氧自由基對(duì)肺缺血灌注損傷的發(fā)生起到重要的作用，谷胱甘肽(GSH)和別嘌呤醇均可明顯減少肺缺血灌注損傷。
器官保存液的質(zhì)量可直接影響供體器官的質(zhì)量與移植后的效果。WXC為一種成功的器官保存液，符合下述5條器官保存液的質(zhì)量要求。
1、適當(dāng)?shù)膒H值。有關(guān)保存液的pH值尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，通常器官保存液的Ph值約在7.0～7.4，但要考慮低溫的影響，因氫離子濃度隨溫度而變化。防止細(xì)胞內(nèi)酸中毒是器官保存良好的先決條件，有研究證明，肝、胰用Ph值為7.9～8.3的保存液可明顯改善保存效果，肺用Ph值為7.50～7.70的保存液可明顯改善保存效果。
2、適宜的滲透濃度，高滲性可防止細(xì)胞水腫。
3、無(wú)雜質(zhì)、無(wú)熱原、無(wú)細(xì)菌污染，因?yàn)槠鞴俦４嬉菏怯糜诠w器官初期原位灌注和隨后的冷保存，在質(zhì)量上應(yīng)同輸液制劑一樣無(wú)菌、無(wú)熱原。然而在制備過(guò)程中，要經(jīng)過(guò)許多步驟才能完成，這就要求生產(chǎn)過(guò)程中嚴(yán)格控制細(xì)菌的污染，所有容器及封裝材料必須清理處理。
4、性能穩(wěn)定，在已消毒條件下，有效期為1～2年，如出現(xiàn)渾濁、結(jié)晶析出應(yīng)棄之不用。另外，有部分具有藥理活性的成分、生物制劑應(yīng)在灌注前臨時(shí)加入，以便保證保存液質(zhì)量。
5、實(shí)用性，配制方法簡(jiǎn)便，藥源供應(yīng)足，價(jià)格低廉，便于推廣應(yīng)用。
灌洗液的配制方法如下按配方稱取藥品，用適量蒸餾水?dāng)嚢枞芙猓偌铀磷懔?，取少量液體測(cè)其pH值、滲透濃度及電解質(zhì)濃度，再用垂熔玻璃濾器過(guò)濾(以濾孔大小分號(hào)，號(hào)碼愈大，孔徑越小，5號(hào)以上可除菌)，濾液經(jīng)灌裝，放薄膜，蓋橡皮塞，壓鋁蓋，最后高壓消毒滅菌，成品抽樣作細(xì)菌培養(yǎng)，對(duì)整批保存液逐瓶進(jìn)行澄明度檢查，凡發(fā)現(xiàn)異物，均剔出作廢，合格品才能作保存液。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一在灌洗液中含有鉀3.5(毫摩爾/升)，鈉140(毫摩爾/升)，鎂1.2(毫摩爾/升)，氯100(毫摩爾/升)，磷酸鹽30(毫摩爾/升)，硫酸鹽3.5(毫摩爾/升)，前列腺素E1 110(毫克/升)，棉子糖30(毫摩爾/升)，低分子右旋糖酐40 30(克/升)，谷光甘肽4(毫摩爾/升)，腺苷6(毫摩爾/升)，別嘌呤醇2(毫摩爾/升)，地塞米松8(毫克/升)。
實(shí)施例二在灌洗液中含有鉀5.0(毫摩爾/升)，鈉130(毫摩爾/升)，鎂1.2(毫摩爾/升)，氯110(毫摩爾/升)，磷酸鹽40(毫摩爾/升)，硫酸鹽4.5(毫摩爾/升)，前列腺素E1 150(毫克/升)，棉子糖50(毫摩爾/升)，低分子右旋糖酐40 20(克/升)，谷光甘肽5(毫摩爾/升)，腺苷8(毫摩爾/升)，別嘌呤醇3(毫摩爾/升)，地塞米松10(毫克/升)。
實(shí)施例三在灌洗液中含有鉀6.0(毫摩爾/升)，鈉150(毫摩爾/升)，鎂2.5(毫摩爾/升)，氯108(毫摩爾/升)，磷酸鹽38(毫摩爾/升)，硫酸鹽5.5(毫摩爾/升)，前列腺素E1 130(毫克/升)，棉子糖35(毫摩爾/升)，低分子右旋糖酐40 25(克/升)，谷光甘肽3.5(毫摩爾/升)，腺苷7(毫摩爾/升)，別嘌呤醇1.5(毫摩爾/升)，地塞米松9(毫克/升)。
實(shí)施例四在灌洗液中含有鉀4.0(毫摩爾/升)，鈉168(毫摩爾/升)，鎂1.0(毫摩爾/升)，氯103(毫摩爾/升)，磷酸鹽33(毫摩爾/升)，硫酸鹽4.0(毫摩爾/升)，前列腺素E1 140(毫克/升)，棉子糖45(毫摩爾/升)，低分子右旋糖酐40 35(克/升)，谷光甘肽4.5(毫摩爾/升)，腺苷5.5(毫摩爾/升)，別嘌呤醇2.5(毫摩爾/升)，地塞米松6(毫克/升)。
實(shí)施例五在灌洗液中含有鉀5.5(毫摩爾/升)，鈉135(毫摩爾/升)，鎂1.6(毫摩爾/升)，氯106(毫摩爾/升)，磷酸鹽36(毫摩爾/升)，硫酸鹽3.7(毫摩爾/升)，前列腺素E1 108(毫克/升)，棉子糖42(毫摩爾/升)，低分子右旋糖酐40 38(克/升)，谷光甘肽3.2(毫摩爾/升)，腺苷6.5(毫摩爾/升)，別嘌呤醇1.2(毫摩爾/升)，地塞米松7(毫克/升)。
實(shí)施例六在灌洗液中含有鉀3.0(毫摩爾/升)，鈉140(毫摩爾/升)，鎂1.2(毫摩爾/升)，氯100(毫摩爾/升)，磷酸鹽30(毫摩爾/升)，硫酸鹽3.5(毫摩爾/升)，前列腺素E1 110(毫克/升)，棉子糖30(毫摩爾/升)，低分子右旋糖酐40 30(克/升)。
權(quán)利要求
1.一種用于器官移植的灌洗保存液，其特征是在灌洗液中含有鉀3.5～6(毫摩爾/升)，鈉130～168(毫摩爾/升)，鎂0.8～2.5(毫摩爾/升)，氯100～110(毫摩爾/升)，磷酸鹽30～40(毫摩爾/升)，硫酸鹽3.5～5.5(毫摩爾/升)，前列腺素E1 100～150(毫克/升)，棉子糖30～50(毫摩爾/升)，低分子右旋糖酐40 20～40(克/升)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的灌洗液，其特征是在灌洗液中含有谷光甘肽3～5(毫摩爾/升)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的灌洗液，其特征是在灌洗液中含有腺苷5～8(毫摩爾/升)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的灌洗液，其特征是在灌洗液中含有別嘌呤醇1～3(毫摩爾/升)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的灌洗液，其特征是在灌洗液中含有地塞米松5～10(毫克/升)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種器官移植技術(shù)，尤其是指一種對(duì)器官進(jìn)行灌洗，以便于保存，并提高存活率的灌洗液。它模擬細(xì)胞外液的環(huán)境，其主要技術(shù)方案是在灌洗液中含有鉀3.5～6(毫摩爾/升)，鈉130～168(毫摩爾/升)，鎂0.8～2.5(毫摩爾/升)，氯100～110(毫摩爾/升)，磷酸鹽30～40(毫摩爾/升)，硫酸鹽3.5～5.5(毫摩爾/升)，前列腺素El 100～150(毫克/升)，棉子糖 30～50(毫摩爾/升)，低分子右旋糖酐 4020～40(克/升)。這種灌洗液能延長(zhǎng)移植器官的保存時(shí)間，提高移植器官的存活率，最大可能的保存移植器官的功能。
文檔編號(hào)A01N1/02GK1415200SQ02138519
公開(kāi)日2003年5月7日 申請(qǐng)日期2002年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月29日
發(fā)明者陳靜瑜 申請(qǐng)人:陳靜瑜