專利名稱：大豆轉(zhuǎn)基因種子消毒處理方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種種子消毒處理方法，特別是一種大豆轉(zhuǎn)基因種子消毒處理方法，屬于生物技術(shù)和現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
隨著生物技術(shù)的發(fā)展，轉(zhuǎn)基因作物已逐漸的走向市場，大豆是其中的一個重要作物。在大豆組織培養(yǎng)中種子消毒是工作的第一環(huán)節(jié)，病菌污染是無菌組織培養(yǎng)的一大障礙。經(jīng)文獻檢索發(fā)現(xiàn)，甘肅科學(xué)技術(shù)出版社，1996年出版，曹孜義等主編的《實用植物組織培養(yǎng)技術(shù)教程》P39頁常規(guī)方法一般用0.1％HgCl2溶液浸泡15分鐘或者飽和漂白粉溶液浸泡25分鐘。但在工作中常常消毒不徹底，污染時有發(fā)生，造成試驗材料的浪費和影響實驗的準(zhǔn)確性，如果時間浸泡過長則對種子發(fā)芽造成侵害，使種子發(fā)芽率下降，并且發(fā)芽勢減弱。

發(fā)明內(nèi)容
和
具體實施例方式
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有消毒方法的不足和缺陷，提供一種大豆轉(zhuǎn)基因種子消毒處理方法，使大豆種子消毒徹底，無污染，又不影響種子萌發(fā)，小苗生長健壯，達到大豆組培不定芽多，生長速度快的效果。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的本發(fā)明主要采用控制溫度的方式，把溫度控制在2℃～6℃，在加入消毒液后，并延長消毒時間至50～70分鐘，從而殺死各種微生物，既能保證大豆種子污染率下降至0.1％-0.7％，且不影響大豆種子的正常萌發(fā)，萌發(fā)率保持在97％-99％，發(fā)芽勢強。
以下對本發(fā)明作進一步的描述，方法步驟如下(1)大豆種子、75％的酒精、0.1％氯化汞或飽和漂白粉溶液保持在2℃～6℃。
(2)挑選種皮無破損、無病斑種子經(jīng)自來水清洗干凈，再用2℃～6℃75％酒精浸泡30秒擋住倒干。
(3)加2℃～6℃0.1％氯化汞或飽和漂白粉溶液浸泡，并保持在溫度2℃～6℃的范圍內(nèi)50～70分鐘。
(4)在無菌操作條件下加2℃～6℃無菌水500ml沖洗3～8次后接于MS培養(yǎng)基上萌發(fā)，經(jīng)培養(yǎng)5～7天得到萌發(fā)的幼苗。
本發(fā)明具有實質(zhì)性特點和顯著進步，本發(fā)明解決了種子由于消毒不徹底而造成的污染，及由于消毒時間長而影響大豆種子發(fā)芽率，減弱發(fā)芽勢的難點，使大豆種子污染率下降，并保持高萌發(fā)率和強芽勢，與選用常溫下面0.1％HgCl2溶液浸泡15分鐘或者飽和漂白粉溶液浸泡25分鐘相比，種子消毒徹底，而且發(fā)芽率上升，發(fā)芽勢增強，生長健壯。
結(jié)合本發(fā)明的內(nèi)容提供以下三個實施例實施例1-實驗品種為合豐35大豆種子、75％的酒精、0.1％氯化汞或飽和漂白粉溶液保持2℃，選取種皮無破損、無病斑種子經(jīng)自來水清洗干凈，再用2℃70％酒精浸泡30秒擋住倒干；加2℃1％氯化汞或飽和的漂白粉溶液浸泡，并保持在溫度2℃的范圍內(nèi)50分鐘；在無菌操作條件下加2℃無菌水500ml沖洗3次后接于MS培養(yǎng)基上萌發(fā)5天。實驗品種合豐35污染率0.7％，萌發(fā)率97％，發(fā)芽勢強。
實施例2-實驗品種為合豐25大豆種子、75％的酒精、0.1％氯化汞或飽和漂白粉溶液保持4℃，種皮無破損、無病斑種子經(jīng)自來水清洗干凈，再用4℃70％酒精浸泡30秒擋住倒干；加4℃1％氯化汞或飽和的漂白粉溶液浸泡，并保持在溫度4℃的范圍內(nèi)60分鐘；在無菌操作條件下加4℃無菌水500ml沖洗6次后接于MS培養(yǎng)基上萌發(fā)6天。實驗品種合豐25污染率0.5％。萌發(fā)率99％，發(fā)芽勢強。
實施例3-實驗品種為合豐39大豆種子、75％的酒精、0.1％氯化汞或飽和漂白粉溶液保持6℃，種皮無破損、無病斑種子經(jīng)自來水清洗干凈，再用6℃70％酒精浸泡30秒擋住倒干；加6℃1％氯化汞或飽和漂白粉溶液浸泡，并保持在溫度6℃的范圍內(nèi)70分鐘；在無菌操作條件下加6℃無菌水500ml沖洗8次后接于MS培養(yǎng)基上萌發(fā)7天。實驗品種合豐39污染率0.1％，萌發(fā)率98％，發(fā)芽勢強。
權(quán)利要求
1.一種大豆轉(zhuǎn)基因種子消毒處理方法，其特征在于采用控制溫度的方式，把溫度控制在2℃～6℃，在加入消毒液后，并延長消毒時間至50～70分鐘，從而殺死各種微生物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的這種大豆轉(zhuǎn)基因種子消毒處理方法，其特征是方法步驟如下(1)大豆種子、75％的酒精、0.1％氯化汞或飽和漂白粉溶液保持2℃～6℃；(2)挑選種皮無破損、無病斑種子，經(jīng)自來水水清洗數(shù)次，再用2℃～6℃無菌水沖洗數(shù)次后，用2℃～6℃70％酒精浸泡30秒，擋住倒干；(3)加2℃～6℃0.1％氯化汞或飽和的漂白粉溶液浸泡，并保持在溫度2℃～6℃的范圍內(nèi)50～70分鐘；(4)在無菌操作條件下加2℃～6℃無菌水500ml沖洗3～8次后接于MS培養(yǎng)基上萌發(fā)5～7天，經(jīng)培養(yǎng)得到萌發(fā)的幼苗。
全文摘要
一種大豆轉(zhuǎn)基因種子消毒處理方法屬于生物技術(shù)和現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明采用控制溫度的方式，把溫度控制在2℃～6℃，在加入消毒液后，并延長消毒時間至50～70分鐘，從而殺死各種微生物。本發(fā)明具有實質(zhì)特點和顯著進步，本發(fā)明解決了種子由于消毒不徹底而造成的污染，及由于消毒時間長而影響大豆種子發(fā)芽率，減弱發(fā)芽勢的難點，使大豆種子污染下降，并保持高萌發(fā)率和強芽勢，與選用常溫下面0.1％HgCl
文檔編號A01C1/08GK1406460SQ02150780
公開日2003年4月2日 申請日期2002年11月28日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月28日
發(fā)明者武天龍, 馬曉紅, 邱承祥 申請人:上海交通大學(xué)