專利名稱：大豆原位叢生芽組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種大豆組織培養(yǎng)的方法，特別是一種大豆原位叢生芽組織培養(yǎng)方法，屬于生物技術(shù)和現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
利用生物技術(shù)改良大豆已成為現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的一項(xiàng)重要技術(shù)途徑。而組織培養(yǎng)是生物技術(shù)的基礎(chǔ)。大豆組織培養(yǎng)的成功取決于是否具有良好的再生系統(tǒng)。經(jīng)文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，程林梅等在《中國(guó)油料作物學(xué)報(bào)》，1998年20(2)6～8，撰文“大豆不同外植體植株再生的研究”，該文對(duì)不同大豆品種誘導(dǎo)率研究表明下胚軸＞上胚軸＞小真葉＞幼胚，再生頻率為34％，最高達(dá)50％。報(bào)導(dǎo)提及大豆誘導(dǎo)再生植株頻率低，重復(fù)性差。袁鷹等人在《大豆科學(xué)》，2001年20(1)P9-13，撰文“大豆組織培養(yǎng)再生植株研究”，該文對(duì)大豆子葉節(jié)、葉片、葉柄等組織培養(yǎng)有過(guò)研究報(bào)導(dǎo)，初步建立了以子葉節(jié)為外植體的再生體系。由于缺乏一個(gè)高效大豆再生植株體系，大豆組織培養(yǎng)困難。其不定芽少，繁殖倍數(shù)低生長(zhǎng)慢，在培養(yǎng)中品種基因型間差異大，已影響到利用生物技術(shù)改良大豆的研究，因而成為目前組培中的難點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
和
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明針對(duì)背景技術(shù)的不足和缺陷，克服大豆組織培養(yǎng)中再生能力低的培養(yǎng)方法，提供一種大豆原位叢生芽組織培養(yǎng)方法，通過(guò)高效的植株再生系統(tǒng)，使其解決在組織培養(yǎng)中大豆不定芽少，繁殖數(shù)量低，生長(zhǎng)慢和基因型間差異大的難點(diǎn)，達(dá)到大豆組織培養(yǎng)的再生芽多，并通過(guò)培養(yǎng)基的培養(yǎng)使再生植株健壯的目的。本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明采用大豆再生腋芽分生組織的方法，大豆種子經(jīng)消毒處理，放在萌發(fā)培養(yǎng)基上萌發(fā)大豆無(wú)菌苗；去除頂尖生長(zhǎng)點(diǎn)，保留二片子葉，并制造一定的傷口，把外植體放在長(zhǎng)芽培養(yǎng)基上；不定芽長(zhǎng)大切下再放在生根培養(yǎng)基上，長(zhǎng)出根系得到再生苗后移栽到大盆，用這種培養(yǎng)基方法可以得到很多叢生的大豆不定芽，經(jīng)培養(yǎng)后得到再生苗。
以下對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述，方法步驟如下
(1)種子用水清洗放在70％的酒精中25～35秒，取出放在10％的次氯酸鈉溶液中15～25分鐘，用無(wú)菌水清洗2～4次，消毒種子放在MSB+6-BA0.1～1mg/L，PH5.8，萌發(fā)培養(yǎng)基上23℃～25℃萌發(fā)3～6天。
(2)萌發(fā)大豆取出頂尖生長(zhǎng)點(diǎn)，保留二片子葉，放在MSB+6-BA0.5～4mg/L，PH5.8，長(zhǎng)芽培養(yǎng)基上保持23℃～28℃，培養(yǎng)20天～30天至芽長(zhǎng)至2～4cm高。
(3)切下不定芽放在MSB+IBA0.1～0.5mg/L，PH5.8，生根培養(yǎng)基上23℃誘導(dǎo)生根15～25天，移栽到大盆，經(jīng)培養(yǎng)后得到再生苗。
本發(fā)明具有實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著進(jìn)步，與選用子葉、子葉節(jié)等外植體培養(yǎng)再生植株相比，本發(fā)明能產(chǎn)生叢生的不定芽、芽生長(zhǎng)快且封頂芽少、植株生長(zhǎng)健壯、培養(yǎng)時(shí)間縮短、各品種間組織培養(yǎng)再生差異小，用本發(fā)明方法建立大豆原位從生芽高效再生系統(tǒng)適合于各種大豆品種的組織培養(yǎng)，并能快速得到大豆組織苗。
以下本發(fā)明方法的內(nèi)容提供以下三個(gè)實(shí)施例實(shí)施例1試驗(yàn)品種為合豐35，50粒；種子用水清洗放在70％酒精中25秒，取出在10％的次氯酸鈉溶液15分鐘，用無(wú)菌水清洗2次，消毒種子放在MSB+6-BA0.1mg/L，PH5.8，萌發(fā)培養(yǎng)基上23℃萌發(fā)5天；萌發(fā)大豆取出頂尖生長(zhǎng)點(diǎn)，保留二片子葉，放在MSB+6-BA1mg/L，PH5.8，長(zhǎng)芽培養(yǎng)基上保持23℃30天，培養(yǎng)至3cm高；切下不定芽放在MSB+IBA0.1mg/L，PH5.8，生根培養(yǎng)基23℃誘導(dǎo)生根15天，移栽到大盆，得到再生苗；獲得合豐35號(hào)再生植株156株。再生率比常規(guī)子葉節(jié)為外植體的方法提高了60％。
實(shí)施例2試驗(yàn)品種為合豐39號(hào)，50粒；種子用水清洗放在70％酒精中30秒，取出在10％次氯酸鈉溶液20分鐘，用無(wú)菌水清洗3次，消毒種子放在MSB+6-BA0.5mg/L，PH5.8，萌發(fā)培養(yǎng)基上24℃萌發(fā)4天；萌發(fā)大豆取出頂尖生長(zhǎng)點(diǎn)，保留二片子葉，放在MSB+6-BA2mg/L，PH5.8，長(zhǎng)芽培養(yǎng)基上保持24℃萌發(fā)25天，培養(yǎng)至3.5cm高；切下不定芽放在MSB+IBA0.3mg/L，PH5.8，生根培養(yǎng)基上23℃誘導(dǎo)生根20天，移栽到大盆得到再生苗；獲得合豐39號(hào)再生植株189株。再生率比常規(guī)子葉節(jié)為外植體的方法提高了65％。
實(shí)施例3試驗(yàn)品種為東農(nóng)43，50粒；種子用水清洗放在70％酒精中35秒，取出放在10％次硫酸鈉25分鐘，用無(wú)菌水洗4次，消毒種子放在MSB+6-BA0.8mg/L，PH5.8，萌發(fā)培養(yǎng)基上25℃萌發(fā)3天；萌發(fā)大豆取出頂尖生長(zhǎng)點(diǎn)，保留二片子葉，放在MSB+6-BA4mg/L，PH5.8，長(zhǎng)芽培養(yǎng)基上保持26℃培養(yǎng)基上20天，培養(yǎng)至4cm高；切下不定芽放在MSB+IBA0.5mg/L，PH5.8，生根培養(yǎng)基上25℃誘導(dǎo)生根25天，移栽到大盆得到再生苗；獲得東農(nóng)43再生植株173株。再生率比常規(guī)子葉節(jié)為外植體的方法提高了50％。
權(quán)利要求
1.一種大豆原位叢生芽組織培養(yǎng)方法，其特性在于采用大豆再生腋芽分生組織的方法，大豆種子經(jīng)消毒處理，放在萌發(fā)培養(yǎng)基上萌發(fā)大豆無(wú)菌苗；去除頂尖生長(zhǎng)點(diǎn)，保留二片子葉，把外植體放在長(zhǎng)芽培養(yǎng)基上；不定芽長(zhǎng)大切下再放在生根培養(yǎng)基上，長(zhǎng)出根系得到再生苗后移栽到大盆，經(jīng)培養(yǎng)后得到再生苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的這種大豆原位叢生芽組織培養(yǎng)方法，其特征是方法步驟如下(1)種子用水清洗放在70％的酒精中25～35秒，取出放在10％的次硫酸鈉15~25分鐘用無(wú)菌水清洗2～5次，消毒種子放在MSB+6-BA0.1~1mg/L，PH5.8，萌發(fā)培養(yǎng)基上23℃～26℃萌發(fā)3～6天；(2)萌發(fā)大豆取出頂尖生長(zhǎng)點(diǎn)，保留二片子葉，放在MSB+6-BA0.5~4mg/L，PH5.8，長(zhǎng)芽培養(yǎng)基上保持23℃～28℃，培養(yǎng)20天～30天至2～4cm高；(3)切下不定芽放在MSB+IBA0.1~0.5mg/L，PH5.8，生根培養(yǎng)基上23℃誘導(dǎo)生根15～25天，移栽到大盆，經(jīng)培養(yǎng)后得到再生苗。
全文摘要
一種大豆原位叢生芽組織培養(yǎng)方法屬于生物技術(shù)和現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明采用大豆再生腋芽分生組織的方法，大豆種子經(jīng)消毒處理，放在萌發(fā)培養(yǎng)基上萌發(fā)大豆無(wú)菌苗；去除頂尖生長(zhǎng)點(diǎn)，保留二片子葉，把外植體放在長(zhǎng)芽培養(yǎng)基上；不定芽長(zhǎng)大切下再放在生根培養(yǎng)基上，長(zhǎng)出根系得到再生苗后移栽到大盆。本發(fā)明能促使其產(chǎn)生叢生的不定芽，芽生長(zhǎng)快，且封頂芽少，植株生長(zhǎng)健壯，培養(yǎng)時(shí)間縮短，各種間組織培養(yǎng)再生差異小，用本發(fā)明方法建立大豆原位叢生芽高效再生系統(tǒng)適合于各種大豆品種的組織培養(yǎng)，并能快速得到大豆組培苗。
文檔編號(hào)A01H4/00GK1411705SQ0215078
公開(kāi)日2003年4月23日 申請(qǐng)日期2002年11月28日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月28日
發(fā)明者武天龍, 馬曉紅, 邱承祥 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)