專利名稱：殺病毒組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療和/或預(yù)防淺表病變或潰瘍、包括皰疹病毒和痘病毒引起的口腔潰瘍和病變的殺病毒組合物，以及治療和/或減輕普通感冒引起的癥狀的殺病毒組合物。
現(xiàn)有技術(shù)根據(jù)病毒結(jié)構(gòu)能把致病性病毒分成兩種常見類型，也就是含脂質(zhì)的病毒和不含脂質(zhì)的病毒。一些熟知的被稱為“有包膜”病毒(enveloped virus)的含脂質(zhì)的致病性病毒包括皰疹病毒，例如單純皰疹病毒1型和2型；粘液病毒，例如流感病毒；副粘液病毒，例如引起麻疹和腮腺炎的病毒以及引起哮吼(假膜性喉炎)的呼吸道合胞病毒；冠狀病毒，它也參于普通感冒；和披膜病毒(toga virus)，如風(fēng)疹病毒與引起腦炎及出血熱的病毒。其他許多病毒都缺少外在包膜(envelope)，因此被稱為“裸”病毒，這種類型包括的是鼻病毒(普通感冒最主要的病原體)、流感病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒和腺病毒。
病毒感染造成很多的不適、疾病并可以是致命的。如巨細(xì)胞病毒(CMV)、人親淋巴病毒(例如HTLV-1)及人免疫缺陷病毒(例如HIV-1)等病毒都造成了顯著的發(fā)病率和死亡率。單純皰疹病毒(HSV-1和HSV-2)與皮膚及粘膜的炎癥和病變有關(guān)，包括唇皰疹(cold sores)、熱病性皰疹和生殖道皰疹病變。水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)引起水痘和帶狀皰疹，而Epstein Barr病毒(EBV)與單核細(xì)胞增多癥有關(guān)。流感病毒引起流感癥狀并可能是致命的。HIV引起獲得性免疫缺陷病，它使感染的個(gè)體變得衰弱并導(dǎo)致感染的個(gè)體死亡。盡管這些病毒在一些細(xì)胞中持續(xù)潛伏的時(shí)間不等，但是病毒復(fù)制造成感染的細(xì)胞的不可逆的損害，這形成它們引起的疾病的不同的臨床表現(xiàn)。
單純皰疹感染發(fā)生和復(fù)發(fā)在身體的很多部位及器官，但是主要在皮膚和皮膚粘膜部位。每年大概5千萬的美國人得熱病性皰疹或唇皰疹，估計(jì)每年有1億人次的發(fā)作。這種病態(tài)的醫(yī)學(xué)名稱是單純皰疹唇炎。它由單純皰疹病毒(HSV)引起，它在最初一次感染后就在神經(jīng)結(jié)中永久的終身停留并處于休眠狀態(tài)。經(jīng)過各種刺激激活后，病毒經(jīng)過神經(jīng)通路游走到唇和嘴，在那里它表現(xiàn)為一個(gè)病變或水皰。這種難看的病變通常持續(xù)7到10天。HSV引起的發(fā)作的其他常見部位包括皮膚上的任何部位，如耳、鼻、胸部、腹部、手臂、手掌、手背、手指、大腿、腿。其他常見部位是眼和頸部。較少累及但觀察到的部位是嘴、呼吸道和中樞神經(jīng)系統(tǒng)。
醫(yī)生和患者都使用“普通感冒”這個(gè)詞來表示急性的較小的呼吸道疾病。自從1956年鑒定出鼻病毒后，已經(jīng)獲得了關(guān)于普通感冒的發(fā)病學(xué)和流行病的相當(dāng)多的知識(shí)。已知普通感冒不是一種單一的疾病，而是一組由一些病毒科的成員引起的疾病，包括副流感病毒，鼻病毒，呼吸道合胞病毒，腸道病毒和冠狀病毒。已經(jīng)進(jìn)行了大量的工作以確定引起普通感冒的病毒。另外，了解了大量的最重要的普通感冒病毒鼻病毒的分子生物學(xué)。相反的，盡管有著發(fā)展，但是對(duì)普通感冒治療的進(jìn)展是緩慢的。雖然現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞培養(yǎng)中大量化合物都表現(xiàn)出抗病毒活性，但是許多抗病毒化合物在患者上只有有限的作用。
因?yàn)樵谑芾廴巳簝?nèi)對(duì)現(xiàn)有市場(chǎng)上的普通感冒和過敏性鼻炎的治療的廣泛不滿，因此就存在對(duì)更有效和安全的治療的需求。本發(fā)明提供了這樣的一種治療。
現(xiàn)有技術(shù)中已知的是季銨化合物(quaternary ammoniumcompound)例如苯扎氯銨(benzalkonium chloride)對(duì)于抗細(xì)菌是有效的，但不是殺病毒的。Hendley等(抗微生物劑和化療，14690-694(1978))評(píng)價(jià)了含有乙醇、苯扎氯銨(BAK)和六氯酚的泡沫劑。在殺病毒上，單用乙醇是無效的，聯(lián)合乙醇和BAK也是相當(dāng)無效的。
現(xiàn)有技術(shù)中已知的是“有包膜”病毒是相對(duì)敏感的，因此能被目前已知的殺病毒的消毒劑所滅活。相反的，更多的問題是裸病毒引起的，它對(duì)常用的消毒劑基本上是更穩(wěn)定的，并且它只能被相對(duì)高濃度的甲醛所滅活。然而，因?yàn)槎拘?，甲醛是不受歡迎的，且不能被允許用于臨床或?qū)嶒?yàn)室中對(duì)身體的污染部位的有效的消毒。
Poli等(食品化學(xué)(英國)4(4)251-258(1979))描述了對(duì)有機(jī)酸(枸櫞酸、蘋果酸等)的殺病毒活性的研究。這些學(xué)者發(fā)現(xiàn)其中的枸櫞酸、蘋果酸、丙酮酸和琥珀酸在體外抗“有包膜”病毒(皰疹病毒、正粘病毒和彈狀病毒(狂犬病病毒))是有效的。他們的試驗(yàn)使用純的酸的水溶液在室溫下進(jìn)行，沒有使用底物或載體。這些學(xué)者選擇用于研究的三種病毒都是“有包膜”病毒。Poli等也觀察到這些酸對(duì)于抗腺病毒是無效的，該病毒是一種“裸”病毒。據(jù)此，他們推斷這些酸在體外抗“有包膜”病毒是有效的，但是抗“裸”病毒是無效的。酸溶液在體內(nèi)不能起到作用是因?yàn)樗岵荒軡B透過外皮層，因此它不能到達(dá)病毒復(fù)制的部位。
W.Snipes等(抗微生物劑和化療，11(1)98-104，(1977))闡述了將特定的醇(也就是具有特定的鏈長(zhǎng)度的醇)用于滅活含脂質(zhì)的病毒的用途。盡管這些作者使用范圍從C4到C18的醇，但是他們指出在有著10到14碳的飽和醇中發(fā)現(xiàn)了殺病毒活性的明顯的高峰。由于有著10個(gè)或更多碳的更長(zhǎng)鏈的醇在水性介質(zhì)中極不易溶解，優(yōu)選的C10-C14醇首先必需按需求濃度的100倍的濃度制備于95％的乙醇中。調(diào)整用于治療的最終溶液的pH值到至少7.2。因此，盡管C10到C14的醇表現(xiàn)出好的殺病毒活性，考慮到需要最初的制備步驟，它們的相當(dāng)差的水的溶解性是一個(gè)缺點(diǎn)。
Konowalchuk等報(bào)道與葡萄汁在4℃及葡萄酒的天然pH值(pH3.3-4.4)或pH7.0下孵育24小時(shí)后將脊髓灰質(zhì)炎病毒的感染力減少了1000倍，并發(fā)現(xiàn)中性pH的商品化的葡萄汁可滅活單純皰疹病毒。紅葡萄酒有著比白葡萄酒更強(qiáng)的抗病毒性。沒有測(cè)定天然pH的葡萄酒對(duì)單純皰疹病毒的作用。
Noda等(J.Jap.Ass.Infect.Dis.55355-366(1981))已經(jīng)報(bào)道近80％或更高濃度的非常高濃度的純的甲醇、乙醇、n-丙醇、異丙醇或丁醇有著一定的但有限的體外殺病毒作用。更低濃度的這些醇的效果不很充分。個(gè)別的醇、丙醇、異丙醇或各種丁醇沒有抗“裸的”親水的病毒的充分的活性。具有20-40％的總的活性物質(zhì)含量的已知的乙醇和異丙醇混合物也沒有表現(xiàn)出殺病毒活性。
Von Rheinbaben等(美國專利No.5,728,404)闡述了有著抗“裸”病毒的殺病毒活性的組合物，它包括從50％到90％(重量)的至少一種選自C1到C4脂肪族單羥基醇的成分以及從0.1％到1.0％(重量)的至少一種金屬鹽，例如鋅鹽。Von Rheinbaben等發(fā)現(xiàn)包含40-80％(重量)之間的乙醇、n-丙醇、異丙醇、丁醇或它們的混合物的成分對(duì)于抗脊髓灰質(zhì)炎病毒、腺病毒、牛痘病毒和SV40腫瘤病毒是無效的，然而通過向這些醇的成分中加入金屬鹽能制成殺病毒物質(zhì)。
Revici等(美國專利No.4,513,008)闡述了一種滅活有包膜病毒(HSV-2)的方法，它包括用殺病毒有效量的C20到C24直鏈多不飽和酸，醛或有著5-7雙鍵的單次醇接觸病毒。
Brown-Skrobot等(美國專利No.4,975,217)闡述了一種當(dāng)應(yīng)用于被Serratia marcescens(粘質(zhì)沙雷氏菌，一種革蘭氏陰性細(xì)菌)污染的手時(shí)有著殺菌活性的組合物，其中該組合物基本上由一種陰離子型表面活性劑(如烷基磺酸鹽)和一種有機(jī)酸(蘋果酸、枸櫞酸、和它們的混合物)組成。Brown-Skrobot等說明單用表面活性劑和單用酸都沒有殺菌活性，以及強(qiáng)調(diào)必須同時(shí)使用有機(jī)酸和陰離子表面活性劑以獲得顯著的殺菌活性。其中提出乙醇可作為Brown-Skrobot等的組合物中的一種可選擇的成分。然而，Brown-Skrobot等沒有測(cè)定該組合物的抗病毒作用。
Hoffler等(美國專利No.5,043,357)闡述了有著抗裸病毒(如1型脊髓灰質(zhì)炎病毒)的殺菌活性的組合物，它有著至少70％(重量)的乙醇和/或異丙醇，以及從0.5％到5％(重量)的短鏈酸。單用乙醇和異丙醇沒有顯示出有效的抗裸病毒的活性。沒有測(cè)試這些組合物抗有包膜病毒的有效性，也沒有測(cè)試這些組合物的體內(nèi)殺病毒活性。
Hendley等(6,034,133)闡述了一種有效對(duì)抗裸鼻病毒的擦手劑，其含有蘋果酸、枸櫞酸、和一種C1到C6醇以預(yù)防鼻病毒的手到手傳播。Hendley等說明只要擦手劑中的乙醇濃度在25-90％，擦手劑就保持有殺病毒活性。擦手劑的pH值被調(diào)整到pH 3和pH 6之間以避免皮膚瘙癢。
Dove等(美國專利No.5,071,650)闡述了一種體外滅活生物學(xué)活性蛋白(如血漿或細(xì)胞培養(yǎng)液)的水溶液中的病毒如VSV(一種脂質(zhì)包被的病毒)的方法。它利用中等長(zhǎng)度的醇(C4到C10)在4℃及約4到5的pH值下處理該溶液，殺病毒活性隨碳鏈長(zhǎng)度增加而增加，直到C8。而乙醇和異丙醇在這樣的條件下是相當(dāng)無活性的。
最近FDA已經(jīng)批準(zhǔn)二十二烷醇(10％乳膏)作為反復(fù)口-面部皰疹(唇皰疹和熱病性皰疹)的治療藥物(見Katz等美國專利No.5,952,392和5,534,554)。因?yàn)樵撻L(zhǎng)鏈醇(C26)弱的水溶性，該物質(zhì)需要一種雙功能性的阻斷聚合物的非離子型表面活性劑以產(chǎn)生二十二烷醇的懸浮液或乳劑。另外，美國專利No.5,534,554說明特定的賦形劑對(duì)于n-二十二烷醇的活性是有害的，并強(qiáng)調(diào)制備穩(wěn)定的、有效的、含n-二十二烷醇的物質(zhì)有著難以想像的困難挑戰(zhàn)。
對(duì)于有效對(duì)抗有包膜病毒和裸病毒、且有著非常弱的毒性的局部施用的組合物的需求是持續(xù)存在的。具體地，需要有效抗皰疹病毒和痘病毒科的病毒的、廉價(jià)的、容易使用的局部殺病毒組合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明滿足了這些和其他的需要，它提供了有著高度有效抗廣譜病毒以及還能安全地生產(chǎn)和使用的殺病毒組合物。
更具體地，本發(fā)明提供了利用本發(fā)明的局部施用組合物治療和/或預(yù)防病毒引起的口腔潰瘍和病變的方法，所述病毒是潛伏在和/或被傳播于和/或感染于真皮或上皮細(xì)胞的病毒。這些病毒的例子包括那些皰疹病毒和痘病毒科的病毒。本發(fā)明的組合物適合于局部施用，比如應(yīng)用于唇部以治療唇皰疹和口腔潰瘍，應(yīng)用于皮膚以治療皰疹感染，以及應(yīng)用于陰莖、陰道或直腸的周圍皮膚以治療和預(yù)防這些病毒引起的感染。本發(fā)明的組合物也可以被應(yīng)用于肌體的其他部位，例如應(yīng)用于口腔、陰道或直腸腔，以及周圍組織。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了在用于殺滅器械和表面的病毒的液體中使用的組合物，如檢查臺(tái)、手套、和其他在醫(yī)學(xué)和牙科檢查過程中直接與動(dòng)物或人的身體接觸的表面，該組合物并可用作臨床環(huán)境的安全的抗病毒消毒劑。這些組合物能被置于氣霧劑罐中以噴霧施用這些組合物。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了有效對(duì)抗引起普通感冒的病毒的組合物，所述的病毒如鼻病毒、腺病毒、腸道病毒、冠狀病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒和副流感病毒。
因此，本發(fā)明的一個(gè)部分提供了殺病毒的有效組合物，它包含一種用合適的酸將pH值調(diào)整到或低于4.6的短鏈醇或二醇的水溶液。也提供了適合于局部施用和鼻部給藥的這些組合物。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種滅活病毒的方法，其包含用本發(fā)明的殺病毒有效量的組合物接觸病毒的部位或病毒本身。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種治療動(dòng)物或人對(duì)象中的病毒感染如皰疹病毒感染相關(guān)的病變的方法，其包含將有效量的本發(fā)明的殺病毒組合物應(yīng)用于感染的部位以減少或阻止這些病變。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種預(yù)防動(dòng)物或人對(duì)象中病毒如皰疹病毒感染相關(guān)的病變的方法，它包括將有效量的本發(fā)明的殺病毒組合物應(yīng)用于皮膚部位以預(yù)防這些病變的發(fā)生。
本發(fā)明的其他的新的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)將部分地在以下的描述中體現(xiàn)，而通過檢查下面的說明書或?qū)W習(xí)本發(fā)明的實(shí)踐，其他部分對(duì)于本領(lǐng)域人員而言將變得更清晰。通過各種手段、組合以及附加的權(quán)利要求書中特別指出的方法可以實(shí)現(xiàn)并達(dá)到本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和新的特點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明提供了有著殺病毒活性的組合物，它適用于治療和/或預(yù)防潛伏在和/或被傳播于和/或感染真皮或上皮的細(xì)胞的病毒引起的病變。這些病毒的例子包括那些皰疹病毒科的病毒，如單純皰疹病毒、水痘-帶狀皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、和Epstein-Barr病毒，以及痘病毒科的病毒，如傳染性軟疣病毒。這些組合物對(duì)抗口腔潰瘍也是有效的。單純皰疹指的是1型和2型皰疹病毒引起的各種感染。1型感染的最常見的標(biāo)記是在唇的紅唇緣或在外鼻孔出現(xiàn)一組或多組水皰，而2型感染的標(biāo)記是外生殖器的類似病變。
更具體地，本發(fā)明提供了用于預(yù)防或減輕口腔潰瘍、或病毒感染如皰疹病毒科或痘病毒科相關(guān)的病毒性病變、或用于縮短治愈這些潰瘍或病變時(shí)間的局部施用的組合物。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了有效對(duì)抗引起普通感冒的病毒的殺病毒組合物，這些病毒例如為鼻病毒、腺病毒、腸道病毒、冠狀病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒和副流感病毒。這些組合物可以以各種形式被提供，包括鼻部給藥的形式。
本發(fā)明的組合物包含一種C1到C3的單羥基醇或C3到C4的二醇的稀釋的水溶液，該溶液已經(jīng)通過添加一種無機(jī)或有機(jī)酸調(diào)整pH值到4.6或更低的。這里使用的“C1”、“C2”、“C3”和“C4”指的是相應(yīng)的有著1，2，3或4個(gè)碳的醇。在一個(gè)實(shí)施方案中，將組合物進(jìn)行緩沖化，優(yōu)選地用可保持組合物的pH值的合適的緩沖液。本領(lǐng)域人員熟知這些緩沖液。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該組合物包含含有大約0.2％到13％(體積)之間的醇的水溶液。更優(yōu)選地，該組合物包含大約5％和10％(體積)之間溶解于水中的醇。合適的醇包括短鏈醇和二醇，包括甲醇、乙醇、n-丙醇、2-丙醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，2-丁二醇、1，3-丁二醇、1，4-丁二醇和2，3-丁二醇。
本發(fā)明的組合物中可以使用的有機(jī)酸包括，但不局限于乙酸、枸櫞酸、乙醇酸、乳酸、蘋果酸、琥珀酸和戊酸。優(yōu)選的有機(jī)酸是乙醇酸。
本發(fā)明的組合物中可以使用的無機(jī)酸包括，但不局限于鹽酸、亞氯酸、硫酸、次氯酸、次磷酸、碘酸、硝酸、高碘酸、磷酸、亞磷酸、和亞硫酸。優(yōu)選的無機(jī)酸是鹽酸。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物包含溶解于水中的10％(體積)的95％乙醇，其中通過添加乙醇酸或HCl將組合物的pH值調(diào)整到pH 4.6或更低。例如，通過添加0.6％乙醇酸水溶液或0.1M HCl水溶液可以將pH值調(diào)整到4.6。
本發(fā)明的組合物包含的成分，也就是一種醇和一種酸，這些成分單獨(dú)地局部施用于感染部位時(shí)都不是有效的抗病毒劑。例如，已知特定的有機(jī)酸如二羧酸在體外是殺病毒的，但是在局部施用時(shí)是無效的。另外，已知更短鏈的醇如乙醇和異丙醇在體外和體內(nèi)對(duì)抗有包膜病毒是無效的。然而令人驚異的是，當(dāng)在本發(fā)明的組合物中聯(lián)合使用這些成分(也就是一種有機(jī)酸和一種C1，C2，或C3醇或一種C2，C3，或C4二醇)時(shí)，注意到了協(xié)同的抗病毒作用。例如，令人驚異地發(fā)現(xiàn)當(dāng)將有效量的有著pH值在4.6或低于4.6的本發(fā)明的殺病毒組合物局部施用于病毒(如HSV-1)引起的病變部位或潛在的病變的部位時(shí)，大部分病毒被滅活，因此中斷和阻止了病毒的傳播。
因此，令人驚異和出乎意料地發(fā)現(xiàn)，將包含短鏈醇的稀釋水性組合物與有機(jī)酸或無機(jī)酸聯(lián)合使用，提供了有效的局部施用的殺病毒組合物，其中所述的酸的量足以調(diào)整該組合物的pH值到4.6或更低。這與現(xiàn)有技術(shù)的教導(dǎo)形成了對(duì)照，現(xiàn)有技術(shù)中認(rèn)為殺病毒活性所需要的是中等或長(zhǎng)鏈醇(也就是C8到C26)和/或高濃度的醇(尤其是在使用短鏈醇的情況下)。
在一個(gè)實(shí)施例中，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的局部施用的組合物有著體內(nèi)抗HSV-1(引起唇皰疹和熱病性皰疹)、HSV-2(引起生殖道皰疹)以及帶狀皰疹病毒(引起帶狀皰疹)的活性。然而，相信這些組合物對(duì)于皰疹病毒科中的其他病毒也將是有活性的，這些病毒在結(jié)構(gòu)上和感染的機(jī)制上是相似的，包括水痘病毒(引起水痘)。如下面實(shí)施例描述的，利用標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)定方法已經(jīng)得到了本發(fā)明的殺病毒組合物在體外和體內(nèi)具有對(duì)抗HSV-1的效力的證據(jù)。
表1說明了用不同濃度的、通過添加0.1N或1.0N HCl將pH值調(diào)整到3.5的乙醇水溶液抑制單純皰疹病毒1型(HSV-1)的生長(zhǎng)所需要的時(shí)間，所示為溶液未被稀釋以及用Eagles培養(yǎng)基按1/4、1/16或1/64稀釋后的結(jié)果。按實(shí)施例1所描述的進(jìn)行試驗(yàn)。
表1

+病毒生長(zhǎng)-無病毒生長(zhǎng)如表1顯示的，在5分鐘的暴露時(shí)間后，僅有12.5％乙醇溶液抑制了病毒。然而當(dāng)暴露時(shí)間增加到10分鐘時(shí)，甚至相當(dāng)稀釋的組合物(例如1/4倍稀釋的2.5％乙醇溶液)仍有效地抑制了病毒的生長(zhǎng)。
如表2所示，測(cè)試了各種酸的水溶液的殺病毒活性。通過制備0.6％(重量)的乙醇酸的水溶液制備了pH值為3.8的乙醇酸溶液，通過添加0.1N或1.0N的氫氧化鈉調(diào)整該0.6％的乙醇酸溶液的pH值以制備其余的乙醇酸溶液。琥珀酸溶液是0.2％(重量)的琥珀酸的水溶液。
表2暴露4分鐘后pH信對(duì)HSV-1生長(zhǎng)抑制的作用。

+病毒生長(zhǎng)-無病毒生長(zhǎng)在另一個(gè)試驗(yàn)中，調(diào)整濃度為0.2％(體積)的各種醇的溶液的pH值以明確具有抗HSV-1病毒活性的酸性的醇溶液所需要的每種醇的pH值的上限。將pH值為4.0到6.8(增幅為0.2pH單位)的每種醇的樣品與病毒一起孵育2分鐘，然后按實(shí)施例1所述進(jìn)行接種。也就是說，表3中測(cè)試的每種醇的pH值為4.0、4.2、4.4、4.6、4.8、5.0、5.2、5.4、5.6、5.8、6.0、6.2、6.4、6.6和6.8，用0.1N或1.0N的HCl調(diào)整pH值。直到pH值達(dá)到4.6，甲醇、n-丁醇和2，3-丁二醇均能有效地完全滅活HSV-1。直到pH值達(dá)到4.4，乙醇均是有效的。直到pH值達(dá)到4.2，1，2-丁二醇均是有效的。
表3能夠滅活HSV-1的醇的pH值的上限。

現(xiàn)有技術(shù)已知，單獨(dú)的乙醇或丙醇沒有對(duì)抗有包膜病毒的殺病毒活性。雖然沒有期望約束于任何特殊的理論，但是相信醇促進(jìn)了酸穿透外表皮層到達(dá)HSV復(fù)制的部位。也就是，觀察到了酸和醇之間的協(xié)同作用，發(fā)現(xiàn)了兩者必需一起使用才能獲得顯著的殺病毒活性。進(jìn)一步，發(fā)現(xiàn)組合物的pH值決定組合物的殺病毒作用比降低組合物的pH值所使用的酸的作用更大。因此，本發(fā)明的低pH值的組合物比各種成分本身能更好地透過皮膚的更深的感染的層面，因此增加了醇和/或酸滅活病毒的作用。例如，沒有醇，酸不能透過組織發(fā)揮有效的抗病毒作用。為了增加酸的穿透性和延長(zhǎng)停留時(shí)間，在本發(fā)明的殺病毒組合物中使用了短鏈醇。
本發(fā)明的組合物的更多的優(yōu)點(diǎn)是短鏈醇避免了不溶于水問題且沒有更長(zhǎng)鏈的醇所具有的難聞的氣味。
如實(shí)施例2所述，評(píng)價(jià)了組合物對(duì)反復(fù)口面部單純皰疹病毒感染的治療。在一組患者的紅斑、丘疹或水皰期使用了包含10％(體積)的95％乙醇和0.6％(重量)的乙醇酸的、pH值調(diào)整到2.45的水溶液。在治療的2到3天內(nèi)即抑制了皰疹的發(fā)展并促進(jìn)了水皰的快速結(jié)痂，相比之下，未治療的則需要10天或更長(zhǎng)。當(dāng)在感染前驅(qū)期的24小時(shí)內(nèi)，也就是在感到燒灼感、麻刺感或瘙癢感但沒有出現(xiàn)皰疹的期間使用與上述相同的組合物時(shí)，則沒有出現(xiàn)丘疹。因此，本發(fā)明的組合物顯示出可以預(yù)防病變的發(fā)生，并有效地縮短病變愈合的時(shí)間。
另一個(gè)患反復(fù)面部帶狀皰疹的患者使用了本發(fā)明的組合物，該組合物包含混合于乙醇酸水溶液中、并使得組合物的pH值為3.1的13.5％的乙醇。在20分鐘的間隔內(nèi)使用該組合物3次。在使用后病變部位的疼痛馬上消失。與同一個(gè)患者以往的發(fā)作持續(xù)3個(gè)月的情況相比，該帶狀皰疹病變?cè)?天內(nèi)愈合。當(dāng)然愈合的時(shí)間依賴于病變的大小。例如，另一個(gè)有著6英寸病變的帶狀皰疹患者在間隔20分鐘使用3次后的愈合時(shí)間為約10天，而相比之下，未治療的愈合時(shí)間為3-6個(gè)月。
不期望收到任何理論的約束，相信本發(fā)明的組合物在真皮/表皮結(jié)合處可保持活性達(dá)24小時(shí)以上，并可結(jié)合或滅活病毒用于結(jié)合和/或用于穿透靶細(xì)胞的受體位點(diǎn)。這基于一些觀察，包括1)如果一個(gè)病毒穿透細(xì)胞，在細(xì)胞被裂解和釋放病毒之前，它需要24小時(shí)以上；2)本發(fā)明的組合物在間隔20分鐘使用3次對(duì)于抑制皰疹的發(fā)展和預(yù)防進(jìn)一步發(fā)作是有效的。因此，本發(fā)明也可以用作預(yù)防人群間傳播病毒的預(yù)防劑。例如，如果一個(gè)伴侶有HSV-2引起的活動(dòng)性發(fā)作，另一個(gè)伴侶能將本發(fā)明的組合物應(yīng)用于生殖道周圍以預(yù)防HSV-2的感染。
能將本發(fā)明的局部施用的殺病毒組合物每天給藥1次或分開劑量給藥。對(duì)于控制HSV-1感染，殺病毒有效量的本發(fā)明的組合物的應(yīng)用方法為，在感染部位，例如患有病毒感染、尤其是皰疹病毒感染的動(dòng)物或人對(duì)象的皮膚表面，如嘴周圍部位、唇、皮膚粘膜、眼，通常每天使用1到3次，例如間隔20分鐘，這依賴于被治療的部位、癥狀的嚴(yán)重性、以及殺病毒劑的性狀和采用的局部載體。優(yōu)選的局部施用的制劑是酸性醇溶液，其中每毫升水或緩沖液使用0.2％到13％的醇，其中用酸將溶液的pH值調(diào)整到在4.5或低于4.5，以及優(yōu)選的pH值為約2.6。通過浸泡，通過噴霧或擦拭于被保護(hù)或治療的部位，將本發(fā)明的組合物局部施用到所述部位。
對(duì)于控制生殖道皰疹，也就是HSV-2感染，優(yōu)選地將本發(fā)明的組合物混合于藥用載體經(jīng)陰道內(nèi)施用。當(dāng)然，可根據(jù)所需的給藥的途徑和方法選擇載體。在本發(fā)明中，施用是局部實(shí)現(xiàn)的，也就是，施用于特定的位置或部位，在這種情況下，例如為陰道，以乳膏、油膏、泡沫劑、膠凍、片劑、胚珠(ovule)的形式，或其他適合于局部陰道給藥形式的合適組合物。乳膏和油膏是優(yōu)選的形式。
本發(fā)明的組合物也適合于治療或減輕引起普通感冒的病毒引起的癥狀。這些病毒包括鼻病毒、腺病毒、腸道病毒、冠狀病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒和副流感病毒。例如，患有普通感冒引起的鼻部充血的患者鼻內(nèi)應(yīng)用本發(fā)明的組合物，體驗(yàn)到了這些癥狀的迅速緩解。
可以以大量的形式提供這些組合物，比如鼻部給藥形式。為了給患者提供使用上的便利，可以以預(yù)先包裝好的劑盒的形式提供該組合物，它可以包括一種用于鼻內(nèi)施用的、給予量化劑量的混合藥物的鼻內(nèi)給藥噴霧器或滴入裝置。
應(yīng)用本發(fā)明的殺病毒組合物的一種方式是作為局部施用藥物。優(yōu)選地，局部施用的制劑是溶液，即包括水溶性的醇和酸的液體配方。其他合適的形式包括半固體或固體形式，其包含一種適合局部施用的載體以及具有動(dòng)態(tài)的粘度，優(yōu)選的為比水更大的粘度，條件是載體不與組合物中的酸或醇發(fā)生有害的反應(yīng)。合適的形式包括，但不限制于，唇膏、懸浮液、乳劑、乳膏、油膏、粉末、擦劑、軟膏等等。如果需要，這些組合物可以被消毒或與附加的試劑混合，如防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤(rùn)劑、緩沖劑或影響滲透壓的鹽等等。半固體或固體形式的局部施用制劑的優(yōu)選的載體包括油膏基質(zhì)，如聚乙二醇-1000(PEG-1000)；傳統(tǒng)的眼科載體；乳膏，如HEB乳膏；和凝膠，如K-Y凝膠；以及石油膏(petroleum jelly)等等。這些局部施用制劑也可以含有潤(rùn)膚劑、香水和/或色素以增強(qiáng)它們的不同用途的可接受性，條件是此類添加劑不與組合物中的酸或醇發(fā)生有害的反應(yīng)。
同樣適合于局部施用的制劑的是噴霧的氣霧制劑，其中所述的殺病毒組合物，其優(yōu)選地與固體或液體惰性載體材料混合，被包裝于高壓瓶或混合于增壓了的揮發(fā)物，通常是氣態(tài)的推進(jìn)劑，如氟利昂(含氯氟烴)或環(huán)境相容性的揮發(fā)性推進(jìn)劑。這些組合物能應(yīng)用于環(huán)境的表面，例如檢查桌、馬桶座等等，和/或應(yīng)用于皮膚或粘膜。氣霧制劑或噴霧制劑中除了本發(fā)明的殺病毒組合物，還可以含有溶劑、緩沖液、表面活性劑、香水和/或抗生素。
本發(fā)明的組合物可以與傳統(tǒng)的賦形劑混合使用，例如適合于局部施用的藥用可接受的有機(jī)或無機(jī)載體物質(zhì)，所述載體物質(zhì)不與組合物中的酸或醇發(fā)生有害的反應(yīng)。合適的藥用可接受的載體包括但不限制于水、鹽溶液、醇、植物油、聚乙二醇、明膠、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、滑石、硅酸、粘石蠟、香油(perfume oil)、脂肪酸甘油單酯和甘油二酯、季戊四醇脂肪酸酯、羥基甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、潤(rùn)滑劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤(rùn)劑、乳化劑、影響滲透壓的鹽、緩沖劑、調(diào)色物質(zhì)、調(diào)味物質(zhì)和/或芳香物質(zhì)等等，它們不與組合物中的酸或醇發(fā)生有害的反應(yīng)。
本發(fā)明的殺病毒組合物也可以用于預(yù)防病毒感染的傳播，所述病毒潛伏在和/或被傳播于和/或感染真皮或上皮的細(xì)胞。也就是說，在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物可以摻入到護(hù)手霜或擦劑，供醫(yī)務(wù)人員在檢查可疑病毒感染的患者的前后使用。本發(fā)明的組合物可以在液體中使用以用于殺死檢查臺(tái)、裝置、手套、毛巾和其他在醫(yī)學(xué)檢查過程中可能與病毒顆粒接觸的表面的病毒。此外，本發(fā)明的組合物采用的所有成分通常被認(rèn)為是安全的。本發(fā)明的化合物的低毒性進(jìn)一步增強(qiáng)了它們用于預(yù)防性應(yīng)用的吸引性。
實(shí)施例1pH值為3.5的不同濃度的醇在體外對(duì)HSV-1的生長(zhǎng)的抑制用Eagles培養(yǎng)基(pH4.2)稀釋95％的乙醇來制備下面的乙醇溶液1％、2.5％、5％、10％和12.5％。用0.1N HCl或1.0N HCl將pH值調(diào)整到pH 3.5。如表1所示，也用Eagles培養(yǎng)基按1/4、1/16和1/64稀釋每種溶液。
在Vero非洲綠猴腎細(xì)胞上進(jìn)行該測(cè)試，該細(xì)胞已經(jīng)生長(zhǎng)在聚丙烯12孔盤的含5％胎牛血清的Eagles最低基本營養(yǎng)素培養(yǎng)基(Eaglesminimum essential nutrient medium)中。孵育培養(yǎng)盤直到單層細(xì)胞已經(jīng)完全長(zhǎng)滿了培養(yǎng)盤底。每個(gè)孔含有大約2ml的pH值調(diào)整到7的Eagles培養(yǎng)基。
從一具有活動(dòng)性1型皰疹病變的對(duì)象中采集病毒。將標(biāo)本接種于一瓶長(zhǎng)有Vero細(xì)胞的Eagles培養(yǎng)基中，pH7.3。在病毒已經(jīng)感染所有的細(xì)胞后，冷融培養(yǎng)瓶多次以裂解細(xì)胞并釋放病毒。離心去除細(xì)胞碎片，將含病毒的上清分發(fā)到安瓿中并在-20℃短時(shí)間儲(chǔ)存。用Eagles培養(yǎng)基，pH7.3稀釋融化的病毒安瓿，這樣使得0.25ml中含有足夠的病毒以便在病毒對(duì)照中形成每孔20-25個(gè)噬菌斑。
將用于測(cè)試活性的醇溶解在Eagles培養(yǎng)基中，調(diào)整pH到4.0，然后在Eagles培養(yǎng)基中按1/4、1/16、1/64進(jìn)行系列稀釋。每個(gè)樣本稀釋液中加入0.25ml的病毒，并保持指定的時(shí)間。然后用巴斯德吸管在培養(yǎng)板的兩個(gè)孔的每個(gè)孔中各加入兩滴。孵育3天后，將板用于檢測(cè)致細(xì)胞病變效應(yīng)。對(duì)照孔通常顯示出25-30個(gè)噬菌斑。
實(shí)施例2體內(nèi)抑制HSV-2病人對(duì)象為三位有過急性唇皰疹反復(fù)發(fā)作，且其未治療的發(fā)作的平均持續(xù)時(shí)間為10天，對(duì)其在24小時(shí)期間內(nèi)、每20分鐘一次、每天最少三次、在感染部位使用了一種溶液，該溶液通過混合10ml的95％乙醇、0.6g乙醇酸、及90ml蒸餾水而制備，其中溶液的最終的pH為2.45。將該材料用手指輕輕地拍抹并使其在應(yīng)用間期被風(fēng)干。當(dāng)在紅斑、丘疹或水皰期使用時(shí)，其抑制了進(jìn)展并出現(xiàn)水皰的快速結(jié)痂。當(dāng)結(jié)痂自然脫落或不再有活動(dòng)性病變的證據(jù)時(shí)，就是完全愈合了。這些數(shù)據(jù)表明經(jīng)過所述的治療，唇皰疹的持續(xù)時(shí)間顯著縮短，為平均2天。
當(dāng)在有前驅(qū)癥狀(如燒灼感、麻刺感或瘙癢感)的24小時(shí)內(nèi)使用同一種的組合物時(shí)，則不會(huì)出現(xiàn)進(jìn)一步的進(jìn)展。皰疹發(fā)作所伴發(fā)的浮腫和疼痛也被消除。
上述的說明書被認(rèn)為僅僅是本發(fā)明原理的說明。進(jìn)一步，由于各種的改良和變更對(duì)于本領(lǐng)域人員是顯而易見的，因此無需將本發(fā)明限制于上述的精確的結(jié)構(gòu)和過程。因此，所有合適的更改以及等價(jià)物均可屬于以下所附的權(quán)利要求書所限定的本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
本說明書和下面的權(quán)利要求書中使用的詞語“包含”、“含有”、“具有”意欲指出所述的特征、整數(shù)、成分或步驟的存在，但是它們不排除一個(gè)或更多的其他特征、整數(shù)、成分或步驟或其組合的存在或添加。
權(quán)利要求
1.一種用于滅活感染部位的有包膜病毒的局部施用的組合物，其基本上由一種C1-C3醇或一種C2-C4二醇和一種有效量的酸組成，所述有效量的酸足以調(diào)整該組合物的pH值到4.6或更低。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的醇選自甲醇、乙醇、1-丙醇和2-丙醇。
3.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的醇選自2，3-丁二醇、1，2-丁二醇、1，3-丁二醇和1，4-丁二醇。
4.權(quán)利要求2的組合物，其中所述的醇是乙醇。
5.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的酸是有機(jī)酸。
6.權(quán)利要求5的組合物，其中所述的有機(jī)酸選自乙醇酸、乳酸、琥珀酸、蘋果酸、枸櫞酸和乙酸。
7.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的酸是無機(jī)酸。
8.權(quán)利要求7的組合物，其中所述的酸是鹽酸。
9.權(quán)利要求1的組合物，其中所述組合物的pH值為2.45。
10.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的醇在所述組合物中的濃度是在大約0.2％和12.5％(體積)之間。
11.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的組合物能有效地對(duì)抗來自皰疹病毒科的病毒。
12.權(quán)利要求11的組合物，其中所述的組合物能有效地對(duì)抗單純皰疹病毒1型。
13.權(quán)利要求11的組合物，其中所述的組合物能有效地對(duì)抗單純皰疹病毒2型。
14.權(quán)利要求11的組合物，其中所述的組合物能有效地對(duì)抗水痘帶狀皰疹病毒。
15.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的組合物是選自酊劑、凝膠、油膏、乳膏、軟膏、洗劑、唇膏和泡沫劑的一種局部施用的制劑。
16.一種預(yù)防或治療皰疹病毒引起的炎癥或病變的局部施用的組合物，其基本上由10％(體積)的乙醇和0.6％(重量)的乙醇酸組成。
17.權(quán)利要求16的組合物，其中所述的組合物是選自酊劑、凝膠、油膏、乳膏、軟膏、洗劑、唇膏和泡沫劑的一種局部施用的制劑。
18.權(quán)利要求17的組合物，其中所述的組合物是選自酊劑、凝膠、油膏、乳膏、軟膏、洗劑、唇膏和泡沫劑的一種局部施用的制劑。
19.一種滅活有包膜病毒的局部施用的組合物，其基本上由一種醇和一種有效量的酸組成，所述有效量的酸足以調(diào)整該組合物的pH值到4.6或更低，其中所述的醇選自甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、2，3-丁二醇、1，2-丁二醇、1，3-丁二醇和1，4-丁二醇。
20.一種治療病毒引起的炎癥或病變的方法，其包含用殺病毒有效量的組合物接觸所述的炎癥或病變，所述組合物基本上由一種醇以及一種有效量的酸組成，所述的醇選自甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、2，3-丁二醇、1，2-丁二醇、1，3-丁二醇和1，4-丁二醇，所述有效量的酸足以調(diào)整該組合物的pH值到4.6或更低，其中所述的酸選自乙醇酸、乳酸、琥珀酸、蘋果酸、枸櫞酸、乙酸和鹽酸。
21.權(quán)利要求20的方法，其中所述的組合物的pH值為2.45。
22.權(quán)利要求20的方法，其中所述的醇在所述的組合物中的濃度是在大約0.2％和12.5％(體積)之間。
23.權(quán)利要求20的方法，其中將所述的組合物在局部施用以減輕或抑制被所述病毒感染的動(dòng)物或人的病變。
24.權(quán)利要求20的方法，其中所述的病毒潛伏在被所述病毒感染的人或動(dòng)物的真皮或表皮內(nèi)。
25.權(quán)利要求20的方法，其中所述的病毒是皰疹病毒科的一個(gè)成員。
26.權(quán)利要求25的方法，其中所述的病毒是單純皰疹病毒1型。
27.權(quán)利要求25的方法，其中所述的病毒是單純皰疹病毒2型。
28.權(quán)利要求25的方法，其中所述的病毒是水痘-帶狀皰疹病毒。
29.權(quán)利要求20的方法，其中所述的病毒是痘病毒科的一個(gè)成員。
30.權(quán)利要求29的方法，其中所述的病毒是傳染性軟疣病毒。
31.權(quán)利要求20的方法，其中所述的病毒選自鼻病毒、腺病毒、腸道病毒、冠狀病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒和副流感病毒。
32.權(quán)利要求20的方法，其中所述的組合物是選自酊劑、凝膠、油膏、乳膏、軟膏、洗劑、唇膏、泡沫劑、噴劑和氣霧劑的一種局部施用的制劑。
33.一種預(yù)防或治療皰疹病毒引起的炎癥或病變的方法，其包含在所述的炎癥或病變局部施用一種組合物，所述組合物基本上由10％(體積)的乙醇和0.6％(重量)的乙醇酸組成。
34.一種預(yù)防皰疹病毒或痘病毒科的病毒引起的病變的方法，所述方法包含局部施用一種組合物，所述組合物基本上由一種醇和一種有效量的酸組成，所述的醇選自甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、2，3-丁二醇、1，2-丁二醇、1，3-丁二醇和1，4-丁二醇，所述有效量的酸足以調(diào)整該組合物的pH值到4.6或更低，其中所述的酸選自乙醇酸、乳酸、琥珀酸、蘋果酸、枸櫞酸、乙酸和鹽酸，其中所述的組合物在有疼痛、瘙癢感、燒灼感或麻刺感的癥狀期間施用。
35.權(quán)利要求34的方法，其中所述的組合物的pH值為2.45。
36.權(quán)利要求34的方法，其中所述的醇在所述的組合物中的濃度是在大約0.2％和12.5％(體積)之間。
37.權(quán)利要求34的方法，其中所述的病毒潛伏在被所述病毒感染的人或動(dòng)物的真皮或表皮內(nèi)。
38.權(quán)利要求34的方法，其中所述的病毒是單純皰疹病毒1型。
39.權(quán)利要求34的方法，其中所述的病毒是單純皰疹病毒2型。
40.權(quán)利要求34的方法，其中所述的病毒是水痘-帶狀皰疹病毒。
41.權(quán)利要求34的方法，其中所述的病毒是傳染性軟疣病毒。
42.權(quán)利要求34的方法，其中所述的組合物是選自酊劑、凝膠、油膏、乳膏、軟膏、洗劑、唇膏、泡沫劑、噴劑和氣霧劑的一種局部施用的制劑。
43.一種預(yù)防皰疹病毒或痘病毒科的病毒引起的病變的方法，所述方法包含局部施用一種組合物，所述的組合物基本上由10％(體積)的乙醇和0.6％(重量)的乙醇酸組成，其中所述的組合物在有疼痛、瘙癢感、燒灼感或麻刺感的癥狀期間施用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種滅活病毒的方法，其包含用殺病毒有效量的組合物接觸病毒，該組合物基本上由一種C1到C3的單羥基醇或一種C2到C4二醇和一種有效量的酸組成，所述有效量的酸足以調(diào)整該組合物的pH值到4.6或更低。該組合物的局部給藥是優(yōu)選的，并在治療病毒如單純皰疹病毒感染相關(guān)的病變方面是有效的。鼻部給藥的形式對(duì)于治療引起普通感冒的病毒所導(dǎo)致的癥狀是有效的。本發(fā)明提供了本方法中所使用的藥用組合物。
文檔編號(hào)A01N31/00GK1505478SQ02809063
公開日2004年6月16日 申請(qǐng)日期2002年2月13日 優(yōu)先權(quán)日2001年2月28日
發(fā)明者托馬斯·W·科諾瓦爾丘克, 杰克·科諾瓦爾丘克, 托馬斯 W 科諾瓦爾丘克, 科諾瓦爾丘克 申請(qǐng)人:托巴斯·W·科諾瓦爾丘克, 杰克·科諾瓦爾丘克, 托巴斯 W 科諾瓦爾丘克