專利名稱：外引百合卡薩布蘭卡試管鱗莖的誘導(dǎo)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及一種外引百合卡薩布蘭卡(Lilium oriental hybrid“Cass Blanca”)試管鱗莖的誘導(dǎo)方法。
背景技術(shù)：
外引百合卡薩布蘭卡(Lilium oriental hybrid“Cass Blanca”)，花瓣純白，具有濃郁的香氣，作為鮮切花有較長的扦瓶壽命(20天左右)，深受人們喜愛。中國的種球來源主要靠從國外引進(jìn)，不僅花費(fèi)大量外匯，且引進(jìn)種質(zhì)1-2年便失去商品價(jià)值。據(jù)統(tǒng)計(jì)，20世紀(jì)90年代末，中國年進(jìn)口3000萬頭種球，其中百合占1/3以上，而云南年產(chǎn)百合400萬枝，所用百合的種球量占全國一半多。國內(nèi)外許多科技工作者通過篩選優(yōu)種優(yōu)株，試管脫毒和組培快繁已成功。但存在問題是快繁苗移栽成活率不高，且試管苗從定植到商品花產(chǎn)出的周期較長。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺點(diǎn)，提供外引百合試管鱗莖誘導(dǎo)方法，節(jié)約種植成本。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案外引百合卡薩布蘭卡試管鱗莖的誘導(dǎo)方法，取卡薩布蘭卡鱗片誘導(dǎo)產(chǎn)生的不定芽用自來水沖洗后，75％酒精擦洗，然后用0.1％升汞消毒8分鐘，后用無菌水沖洗4-5次，5分鐘/次，再用無菌紙吸干材料上的水分，切口處切掉2-3mm，接種，培養(yǎng)室溫度27±2℃，光照強(qiáng)度2000Lx，光照時(shí)間12h/d，鱗莖形成的培養(yǎng)基為MS NAA0.03mg/L，蔗糖含量為9％，不加瓊脂的液體靜置培養(yǎng)，鱗莖增殖培養(yǎng)基采用MS Kt10mg/L、NAA0.01mg/L，pH值5.8；當(dāng)鱗莖直徑達(dá)1cm左右時(shí)，取出種植在已消毒過的基質(zhì)上，澆透定根水，覆蓋塑料膜保濕并防止陽光直射，在移苗3天后通風(fēng)透氣，待試管苗長出新葉，除去覆蓋保濕的塑料膜。
具體實(shí)施例方式為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面將結(jié)合本發(fā)明的實(shí)施例進(jìn)一步對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。
實(shí)施例11材料與方法1.1材料本實(shí)驗(yàn)所用材料為外引百合“卡薩布蘭卡”鱗片誘導(dǎo)產(chǎn)生的不定芽。
1.2方法1.2.1外植體消毒外引百合“卡薩布蘭卡”鱗片誘導(dǎo)產(chǎn)生的不定芽用自來水沖洗后，75％酒精擦洗，然后用0.1％升汞消毒8分鐘，后用無菌水沖洗4-5次，5分鐘/次，再用無菌紙吸干材料上的水分，切口處切掉2-3mm，接種。
1.2.2培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度27±2℃，光照強(qiáng)度2000Lx，光照時(shí)間12h/d，最適鱗莖形成的培養(yǎng)基為MS NAA0.03mg/L(單位下同)，蔗糖含量為9％，不加瓊脂的液體靜置培養(yǎng)。鱗莖增殖培養(yǎng)基采用MS Kt10 NAA0.01。pH值5.8。
2結(jié)果2.1蔗糖濃度對(duì)試管鱗莖形成的影響基本培養(yǎng)基采用MS NAA0.03、附加不同濃度的蔗糖，每瓶接入約0.4cm直徑的不定芽10個(gè)，每處理設(shè)3個(gè)重點(diǎn)。綜合分析(從鱗莖大小、根系發(fā)達(dá)程度等)后，認(rèn)為MS NAA0.03 S9％為最適合試管形成鱗莖的培養(yǎng)基(見表1)。
表1 蔗糖濃度對(duì)鱗莖形成的影響糖濃度(％)30天鱗莖直徑(cm) 60天鱗莖直徑 生長狀況20 0.5-0.8 0.6-1.5 葉長3cm根+10 0.5-1 0.6-1.5 葉長2.5cm根90.8-1 0.8-1.5 葉長3cm根-60.5-0.8 0.6-1 葉長2cm根-40.5-0.8 0.6-1 葉長2cm根-30.5 0.6-1 葉長3cm根-注“根+”為根系發(fā)達(dá)長2cm以上；“根”為根長1cm左右；“根-”為根長1cm以下。
2.2糖的種類對(duì)鱗莖形成的影響試驗(yàn)用培養(yǎng)基為MS NAA0.03，糖濃度為9％，糖種類包括單糖(葡萄糖、半乳糖)，二糖(乳糖、白糖、蔗糖和麥芽糖)，以及多糖(糊精)。試驗(yàn)結(jié)果表明(見表2)蔗糖和白糖均適宜試管鱗莖的誘導(dǎo)，但在含白糖的培養(yǎng)基上，百合根系是叢生狀，一定程度上影響了鱗莖生長，而在蔗糖培養(yǎng)基上鱗莖經(jīng)兩個(gè)月培養(yǎng)最大直徑可達(dá)2cm。
2.3各種添加物對(duì)試管鱗莖生長的影響為了尋找只使鱗莖形成和生長，而抑制根和葉生長的培養(yǎng)基，我們?cè)O(shè)計(jì)了該組試驗(yàn)(見表3)效果較好的培養(yǎng)基是MS NAA0.03 TA5 S9％的培養(yǎng)基。
2.4不同植物激素對(duì)試管鱗莖形成的影響在本組試驗(yàn)中，觀察到MS KT10 NAA0.1有利于鱗莖增殖(見表4)，再生小鱗片呈叢生狀。經(jīng)統(tǒng)計(jì)，1個(gè)鱗莖含有的小鱗片數(shù)達(dá)到100多個(gè)片。
表2.糖的種類對(duì)鱗莖形成與生長的影響糖種類 培養(yǎng)90天鱗莖直徑(cm) 生長狀況葡萄糖 1 葉長4cm根細(xì)半乳糖 0.4葉長1cm無根乳糖 0.4葉長2cm根-白糖 1-1.5 葉長8cm根叢生狀蔗糖 1-1.5以上 葉長1.5cm根-麥芽糖 0.4葉長褐化糊精 0.4葉長8cm無根.玻璃化表3 不同添加物對(duì)鱗莖形成的影響添加物(mg/L) 90天鱗莖直徑(cm)生長狀況CCC(矮壯素)2 0.7 根-TIBA(三碘苯甲酸)20 1.2 無根ABA(脫落酸)2 0.5 根-Gln(谷氨酰胺)501 根+BR-120(油菜素內(nèi)脂)50 0.5 苗稍壯根-TA(三十烷醇)5 1.2-2 苗壯根-
表4 植物激素對(duì)鱗莖形成的影響培養(yǎng)基(mg/L) 60天鱗莖直徑(cm)MS NAA0.03 1-1.5MS NAA0.1 0.8-1MS IAA2 0.5MS IAA3 0.7MS Kt10 NAA0.1 0.8-1.5MS Kt10 NAA10.8-1MS Kt8 NAA1 0.8-1.5MS Kt6 NAA1 0.6-1.5MS Kt5 NAA1 0.6-1.5MS Kt4 NAA1 0.6-1.2MS Kt3 NAA1 0.5-1MS Kt0.2 IBA0.5 0.5-1MS BA2 NAA2 0.62.5試管鱗莖的移植試驗(yàn)中所得百合試管鱗莖已具有根和葉片，可以省去生根培養(yǎng)這一環(huán)節(jié)。當(dāng)鱗莖直徑達(dá)1cm左右時(shí)，便可取出種植在已消毒過的基質(zhì)上，澆透定根水，注意保濕(覆蓋塑料膜)和防止陽光直射，在移苗3天后要注意通風(fēng)透氣，待試管苗長出新葉，可除去覆蓋保濕的塑料膜，粗放管理，移植成活率90％以上。
3討論本發(fā)明提供外引百合試管內(nèi)誘導(dǎo)鱗片產(chǎn)生的不定芽形成直徑1cm左右小鱗莖的技術(shù)，以及糖的種類與量、植物激素等因子對(duì)形成試管鱗莖的影響?；九囵B(yǎng)基為MS，在試驗(yàn)范圍內(nèi)，蔗糖是最佳碳源，其含量9％，配合使用NAA0.03mg/L，對(duì)百合芽形成試管鱗莖最有利。MS Kt10 NAA0.1有利鱗莖增殖。百合常規(guī)繁殖可用種子(有性繁殖)或用鱗莖(無性繁殖)。前者的弊端是有些百合不結(jié)種子(種子產(chǎn)生困難或很少)，種子萌發(fā)后長出的實(shí)生苗變異大，而且，由種子形成商品所需的周期很長。后者因鱗莖含水量高，貯藏困難(鱗莖易爛)。組培鱗莖誘導(dǎo)和生長的成功可克服以上問題。本發(fā)明曾在10月種植直徑為1cm的試管鱗莖，8個(gè)月后開花。
百合屬球根花卉，試管無性繁殖最終目標(biāo)是形成新的子鱗莖。試管鱗莖形成與生產(chǎn)，克服了東方百合天然種植子球形成少的缺陷。影響鱗莖形成的主導(dǎo)因子是蔗糖濃度，其次是植物激素種類與組合。誘導(dǎo)試管鱗莖最適培養(yǎng)基為MSNAA0.03 S9％，鱗莖增殖培養(yǎng)基為MS Kt10 NAA0.1。培養(yǎng)基中添加ABA2mg/L，有利百合鱗莖的離體保存，繼代周期可達(dá)一年。另外用半乳糖代替蔗糖培養(yǎng)鱗莖，也達(dá)到延長百合鱗莖繼代周期的作用。本試驗(yàn)鱗片誘導(dǎo)不定芽，和鱗莖的誘導(dǎo)與生長，均采用液體靜置培養(yǎng)，這為試管鱗莖用大型培養(yǎng)器的擴(kuò)大培養(yǎng)提供了依據(jù)。
權(quán)利要求
1.外引百合卡薩布蘭卡試管鱗莖的誘導(dǎo)方法，其特征在于取卡薩布蘭卡鱗片誘導(dǎo)產(chǎn)生的不定芽用自來水沖洗后，75％酒精擦洗，然后用0.1％升汞消毒8分鐘，后用無菌水沖洗4-5次，5分鐘/次，再用無菌紙吸干材料上的水分，切口處切掉2-3mm，接種，培養(yǎng)室溫度27±2℃，光照強(qiáng)度2000Lx，光照時(shí)間12h/d，鱗莖形成的培養(yǎng)基為MS NAA0.03mg/L，蔗糖含量為9％，不加瓊脂的液體靜置培養(yǎng)，鱗莖增殖培養(yǎng)基采用MS Kt10mg/L、NAA0.01mg/L，pH值5.8；當(dāng)鱗莖直徑達(dá)1cm左右時(shí)，取出種植在已消毒過的基質(zhì)上，澆透定根水，覆蓋塑料膜保濕并防止陽光直射，在移苗3天后通風(fēng)透氣，待試管苗長出新葉，除去覆蓋保濕的塑料膜。
全文摘要
本發(fā)明提供外引百合試管內(nèi)誘導(dǎo)鱗片產(chǎn)生的不定芽形成直徑1cm左右小鱗莖的方法，以及糖的種類與量、植物激素等因子對(duì)形成試管鱗莖的影響?；九囵B(yǎng)基為MS，在試驗(yàn)范圍內(nèi)，蔗糖是最佳碳源，其含量9％，配合使用NAA0.03mg/L，對(duì)百合芽形成試管鱗莖最有利。MSKt10NAA0.1有利鱗莖增殖。
文檔編號(hào)A01H4/00GK1460410SQ0313514
公開日2003年12月10日 申請(qǐng)日期2003年6月4日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月4日
發(fā)明者龍春林, 程漢英, 羅吉鳳, 張長芹, 楊錦, 王俐 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院昆明植物研究所