專利名稱：大菱鲆口服免疫增強(qiáng)劑及配制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于海水魚類配合飼料添加劑的配制技術(shù)，是提高大菱鲆抗病力的一種免疫增強(qiáng)劑配制方法。
大菱鲆(Scophthalmus maximus)原產(chǎn)于歐洲，1992年引進(jìn)我國(guó)。目前工廠化養(yǎng)殖大菱鲆已成為我國(guó)海水養(yǎng)殖的重要產(chǎn)業(yè)。我國(guó)大菱鲆疾病的預(yù)防主要有藥物預(yù)防和生態(tài)預(yù)防，前者存在諸如耐藥性、藥物殘留、環(huán)境污染等問題，而后者在集約化程度較高的條件下往往難以達(dá)到預(yù)期效果。應(yīng)用免疫增強(qiáng)劑可以提高魚體非特異性防御機(jī)制，而不是特異性免疫反應(yīng)，從而增強(qiáng)魚體的抗病力。對(duì)于消費(fèi)者和環(huán)境都沒有負(fù)面影響，是有效的疾病預(yù)防方式。
已有的免疫增強(qiáng)劑，主要是滅活的細(xì)菌及細(xì)菌多肽、左旋咪唑、幾丁質(zhì)、多糖以及一些微量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和激素等。作用的途徑主要為浸泡、注射和口服。Villamil等(西班牙海洋調(diào)查研究所，2003)注射一種抗菌肽nisin，Santarem等(西班牙海洋調(diào)查研究所，1997)注射β-葡聚糖發(fā)現(xiàn)可以提高大菱鲆的抗病力。注射免疫增強(qiáng)劑多是利用它作為疫苗的佐劑，操作過程復(fù)雜，容易損傷魚體、產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)。未見利用營(yíng)養(yǎng)元素和免疫物質(zhì)相配合，作為大菱鲆飼料添加劑的報(bào)道。
本發(fā)明是按照以下操作方法完成的口服免疫增強(qiáng)劑的配料種類維生素E、亞硒酸鈉與甲殼胺口服免疫增強(qiáng)劑的適宜用量維生素E為80～300mg/kg，亞硒酸鈉為3～6.67mg/kg，甲殼胺為0.1～1g/kg在飼料配制過程中，首先要注意大菱鲆配合飼料的基料主配方，應(yīng)該營(yíng)養(yǎng)平衡，飼料配比合理及飼料原料優(yōu)質(zhì)、穩(wěn)定，能夠滿足大菱鲆的營(yíng)養(yǎng)需求。主配方為魚粉40％、豆粕20％、花生粕10％、次粉20％、酵母5％、膽堿0.5％、卵磷脂0.5％、磷酸二氫鈣2％、維生素預(yù)混料(不含VE)1％、礦物質(zhì)預(yù)混料(不含硒)1％。各種原料按用量充分混勻后，加入VE80～300mg/kg，亞硒酸鈉為3～6.67mg/kg，甲殼胺0.1～1g/kg，再次混勻，變異系數(shù)≤10％，再加入60g/kg的魚油，充分混勻，以2％的褐藻酸鈉做粘合劑，制粒后飼喂大菱鲆。
本發(fā)明技術(shù)與已有技術(shù)對(duì)比具有如下特點(diǎn)1.口服免疫增強(qiáng)劑的使用可以減少抗生素的應(yīng)用，既提高了魚類的非特異性防御機(jī)制，又減輕了對(duì)環(huán)境的污染。將微量營(yíng)養(yǎng)素與免疫添加物相配合，比單獨(dú)使用免疫添加物具有更長(zhǎng)期的免疫效果，不容易出現(xiàn)免疫“疲勞”現(xiàn)象。
2.將配制的口服免疫增強(qiáng)劑應(yīng)用到配合飼料中，大菱鲆的免疫力和抗病力都有所提高，生長(zhǎng)速度比對(duì)照組提高25％，成活率提高30％。
最佳實(shí)施配方的配制過程首先對(duì)不同免疫增強(qiáng)劑的配伍及用量進(jìn)行篩選，通過比較非特異性免疫指標(biāo)、生長(zhǎng)率、成活率以及感染實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，進(jìn)行綜合評(píng)定，認(rèn)為VE300mg/kg、亞硒酸鈉6.67mg/kg和甲殼胺1g/kg相配合，效果最佳，其次為VE 80mg/kg、亞硒酸鈉6.67mg/kg和甲殼胺0.5g/kg。
為了保證免疫增強(qiáng)劑的效果，必須確保飼料基料配比合理及飼料原料優(yōu)質(zhì)、穩(wěn)定，所用飼料新鮮、無霉變、結(jié)塊、蟲害等，魚粉為優(yōu)質(zhì)魚粉，魚油無酸敗和氧化氣味。所有飼料原料95％通過0.25mm孔試驗(yàn)篩。飼料配制過程中，各種原料按如下比例進(jìn)行稱量，魚粉40％、花生粕10％、豆粕20％、次粉20％、酵母5％、膽堿0.5％、卵磷脂0.5％、磷酸二氫鈣2％、維生素預(yù)混料1％(不含VE)、礦物質(zhì)預(yù)混料1％(不含硒)，充分混勻，加入VE300mg/kg、亞硒酸鈉6.67mg/kg和甲殼胺1g/kg，再次混勻，變異系數(shù)≤10％，再加入60g/kg的魚油，充分混勻，以2％的褐藻酸鈉做粘合劑，制粒后飼喂大菱鲆。
完成上述配制過程具體操作如下1、口服免疫增強(qiáng)劑配方的篩選本試驗(yàn)采用6種不同配方的免疫增強(qiáng)劑，所用配合飼料基料相同，進(jìn)行了3個(gè)月的喂養(yǎng)試驗(yàn)，每隔30天對(duì)大菱鲆的非特異性免疫指標(biāo)、增重率、成活率指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，投喂試驗(yàn)結(jié)束后，進(jìn)行細(xì)菌感染實(shí)驗(yàn)。
免疫增強(qiáng)劑的6種試驗(yàn)組配方配方1維生素E為80mg/kg，亞硒酸鈉為3.0mg/kg，甲殼胺為0.5g/kg配方2維生素E為80mg/kg，亞硒酸鈉為3.0mg/kg，甲殼胺為1.0g/kg配方3維生素E為300mg/kg，亞硒酸鈉為3.0mg/kg，甲殼胺為1g/kg配方4維生素E為80mg/kg，亞硒酸鈉為6.67mg/kg，甲殼胺為0.5g/kg配方5維生素E為300mg/kg，亞硒酸鈉為3.0mg/kg，甲殼胺為0.5g/kg配方6維生素E為300mg/kg，亞硒酸鈉為6.67mg/kg，甲殼胺為1g/kg(1)、對(duì)大菱鲆的非特異性免疫指標(biāo)測(cè)定從表1可看出大菱鲆飼料中添加免疫增強(qiáng)劑與對(duì)照組(未添加免疫增強(qiáng)劑)相比血清溶菌酶活性均有提高，在前2個(gè)月內(nèi)隨著時(shí)間的推移，添加免疫增強(qiáng)劑組的血清溶菌酶活性有增加的趨勢(shì)，但到第三個(gè)月第2組、第3組及第5組的溶菌酶活性有下降趨勢(shì)，出現(xiàn)所謂的“疲勞”現(xiàn)象。從血液白細(xì)胞總數(shù)來看，添加免疫增強(qiáng)劑組與對(duì)照組相比均有提高，而且隨著時(shí)間的推移白細(xì)胞總數(shù)有增加的趨勢(shì)。試驗(yàn)組白細(xì)胞吞噬率均有提高，在前2個(gè)月內(nèi)隨著時(shí)間的推移，添加免疫增強(qiáng)劑組的白細(xì)胞吞噬率有增加的趨勢(shì)，但到第三個(gè)月添加免疫增強(qiáng)劑的實(shí)驗(yàn)組白細(xì)胞吞噬率大多呈下降趨勢(shì)，出現(xiàn)“疲勞”現(xiàn)象，這與其它魚種獲得的結(jié)果有相似之處，只有第6組繼續(xù)保持增長(zhǎng)的趨勢(shì)。試驗(yàn)期間大菱鲆飼料中添加免疫增強(qiáng)劑，其血清補(bǔ)體活性與對(duì)照組相比均有提高，在前2個(gè)月內(nèi)隨著時(shí)間的推移，添加免疫增強(qiáng)劑組血清補(bǔ)體活性明顯增加，第3個(gè)月除第3組外，其它實(shí)驗(yàn)組血清補(bǔ)體活性有明顯增加。
表1口服免疫增強(qiáng)劑對(duì)大菱鲆免疫指標(biāo)的影響 (2)、對(duì)大菱鲆增重率和成活率指標(biāo)測(cè)定試驗(yàn)期間大菱鲆增重率和成活率如表2所示，實(shí)驗(yàn)組增量率明顯優(yōu)于對(duì)照組，說明所用免疫增強(qiáng)劑對(duì)大菱鲆增重同樣有促進(jìn)作用。試驗(yàn)后期增重率降低可能是溫度降低所致。試驗(yàn)期間試驗(yàn)組和對(duì)照組的大菱鲆成活率較相似，故使用免疫增強(qiáng)劑對(duì)大菱鲆成活率無不良影響。
表2免疫增強(qiáng)劑對(duì)大菱鲆增重率和成活率的影響

(3)、免疫增強(qiáng)劑對(duì)抵抗細(xì)菌感染的觀察試驗(yàn)表3免疫增強(qiáng)劑對(duì)抵抗細(xì)菌感染的觀察試驗(yàn)

免疫增強(qiáng)劑對(duì)抵抗細(xì)菌感染的觀察試驗(yàn)結(jié)果表明(表3)，未投喂免疫增強(qiáng)劑的大菱鲆在注射細(xì)菌51.5小時(shí)內(nèi)全部死亡，而投喂免疫增強(qiáng)劑的各組都顯示出推遲死亡的現(xiàn)象，投喂免疫增強(qiáng)劑第4和第6兩組在感染87小時(shí)后，仍有17％的成活率。由此可以看出，該免疫增強(qiáng)劑對(duì)抵抗細(xì)菌感染有較好效果。
綜上所述，試驗(yàn)組6的效果最好，它的配方組成為VE300mg/kg、亞硒酸鈉6.67mg/kg和甲殼胺1g/kg相配合對(duì)大菱鲆血清溶菌酶活性、血清補(bǔ)體活性、血液白細(xì)胞總數(shù)、白細(xì)胞吞噬率、增重率均有提高，也對(duì)大菱鲆抵抗細(xì)菌感染、提高成活率有較好效果。2、口服免疫增強(qiáng)劑的配制及應(yīng)用效果在大菱鲆配合飼料的基料主原料中加入300mg/kgVE、亞硒酸鈉6.67mg/kg和1g/kg甲殼胺，逐級(jí)擴(kuò)散、充分混合均勻，變異系數(shù)≤10％，再加入60g/kg的魚油，充分混勻，以2％的褐藻酸鈉做粘合劑，制粒后飼喂大菱鲆。在榮成好當(dāng)家養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行應(yīng)用試驗(yàn)，試驗(yàn)用大菱鲆4000尾，平均體重20g左右，養(yǎng)殖密度為70～20尾/m2，進(jìn)行充氣流水養(yǎng)殖，日換水量為300％，試驗(yàn)期間DO＞6.0mg/L、pH＝7.8～8.1、T＝16～20℃。每日投餌2次，測(cè)量水溫2次，吸殘污1次。經(jīng)過一個(gè)養(yǎng)殖周期，可使大菱鲆的增重率提高25％，存活率提高30％。
權(quán)利要求
1.一種大菱鲆口服免疫增強(qiáng)劑，其特征在于它的配料種類是由維生素E、亞硒酸鈉和甲殼胺組成，它的配料配比是維生素E為80-300mg/kg、亞硒酸鈉為3-6.67mg/kg、甲殼胺為0.1-1g/kg。
2.一種大菱鲆口服免疫增強(qiáng)劑配制方法，它是由大菱鲆配合飼料基料和口服免疫增強(qiáng)劑混合而成，其特征在于它的配制方法是配合飼料的基料按用量充分混勻后，加入維生素E 80-300mg/kg、亞硒酸鈉為3-6.67g/kg、甲殼胺為0.1-1g/kg，予以混勻，變異系數(shù)≤10％；再加入60g/kg的魚油，再次充分混勻，以2％的褐藻酸鈉做粘和劑，制粒后飼喂大菱鲆。
全文摘要
一種大菱鲆口服免疫增強(qiáng)劑及配制方法，配料種類和配比維生素E80～300mg/kg，亞硒酸鈉3～6.67mg/kg和甲殼胺0.1～1g/kg。配制方法是將各種配料按用量充分混勻，然后按配方加入維生素E、亞硒酸鈉和甲殼胺，再次混勻，變異系數(shù)≤10％，再加入60g/kg的魚油，充分混勻，以2％的褐藻酸鈉做粘合劑，制粒后飼喂大菱鲆。經(jīng)生產(chǎn)性試驗(yàn)，大菱鲆的免疫力和抗病力都有所提高，生長(zhǎng)速度比對(duì)照組提高25％，成活率提高30％?？诜庖咴鰪?qiáng)劑的使用可以減少抗生素的應(yīng)用，既提高了魚類的非特異性防御機(jī)制，又減輕了對(duì)環(huán)境的污染，適宜大菱鲆大規(guī)模實(shí)際養(yǎng)殖生產(chǎn)應(yīng)用。
文檔編號(hào)A23K1/16GK1473489SQ0313882
公開日2004年2月11日 申請(qǐng)日期2003年7月18日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月18日
發(fā)明者常青, 梁萌青, 王印庚, 常 青 申請(qǐng)人:中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所