專利名稱：幼魚苗用飼料及用于其中的低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物的制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供使用減少了肌醇六磷酸的低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物的幼魚苗用飼料。本發(fā)明還涉及該減少了肌醇六磷酸的低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物的制造方法。
背景技術(shù)：
以往，一直使用大豆原料(豆餅、豆乳、大豆蛋白等)作為養(yǎng)魚用飼料的蛋白原料。
此外，已知如果除去大豆中所含的肌醇六磷酸的話，能夠提高飼料的效率。
作為除去或者分解肌醇六磷酸的發(fā)明，已知(a)飼料(特開(kāi)平11-000164號(hào)公報(bào)、特開(kāi)平8-205785號(hào)公報(bào))、(b)脫脂大豆、豆腐渣等大豆由來(lái)的飼料材料(特開(kāi)平9-140334號(hào)公報(bào))、(c)大豆蛋白(本申請(qǐng)申請(qǐng)人的特開(kāi)2000-300185號(hào)公報(bào)、特開(kāi)4503002號(hào)公報(bào))和(d)豆乳(特開(kāi)照59-166049號(hào)公報(bào)、本申請(qǐng)申請(qǐng)人的特開(kāi)2000-245340號(hào)公報(bào))等。
但是，低肌醇六磷酸鈣鎂水解物還沒(méi)有用在養(yǎng)魚用飼料中。
一方面，本申請(qǐng)人一直在研究使用用酶水解大豆蛋白原料得到的蛋白水解物作為養(yǎng)魚用飼料。例如，特開(kāi)平7-227223號(hào)公報(bào)中記載的提高幼魚苗的存活率的魚飼料的發(fā)明、特開(kāi)平8-51937號(hào)公報(bào)中記載的發(fā)明等。此外，為了進(jìn)一步提高幼魚苗的存活率，對(duì)大豆蛋白水解物的改良也進(jìn)行了研究。
另一方面，關(guān)于大豆蛋白水解物，本申請(qǐng)申請(qǐng)人公開(kāi)了用于腎病患者的、以樹(shù)脂除去肌醇六磷酸的低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物(特開(kāi)平8-092123號(hào)公報(bào))。
再一方面，已知接種曲菌使大豆蛋白發(fā)酵，進(jìn)行蛋白分解和肌醇六磷酸酶處理，來(lái)制造低肌醇六磷酸鈣鎂蛋白水解物(特開(kāi)平9-023822號(hào)公報(bào))。
其它方面，有以下發(fā)明，即酶處理大豆蛋白原料時(shí)，由于使用粗酶，蛋白分解酶和肌醇六磷酸酶起相同的作用，或者將蛋白酶分解和肌醇六磷酸酶處理結(jié)合的發(fā)明，但是沒(méi)有公開(kāi)，也沒(méi)有教導(dǎo)酶分解的大豆蛋白用于養(yǎng)魚中等的內(nèi)容(特開(kāi)昭51-125300號(hào)公報(bào)、特開(kāi)2000-51706號(hào)公報(bào)等)。
如上所述，本申請(qǐng)人在不斷研究在養(yǎng)魚用飼料中使用大豆蛋白水解物，也一直在研究低肌醇六磷酸鈣鎂大豆蛋白水解物，但并不知道將它們用在養(yǎng)魚用飼料特別是幼魚苗中。
另外，除去大豆的肌醇六磷酸的方法包括(1)在使用鹽的水提大豆蛋白的過(guò)程中除去肌醇六磷酸的方法(特開(kāi)平8-173052號(hào)公報(bào)、特開(kāi)平9-121780號(hào)公報(bào)等)、(2)用肌醇六磷酸酶等分解肌醇六磷酸的方法、(3)用樹(shù)脂等吸附除去的方法(特開(kāi)2001-163800號(hào)公報(bào))等，與(1)和(3)的方法相比，(2)的方法的工序不復(fù)雜，在工業(yè)上是有利的。
此外，關(guān)于該(2)用肌醇六磷酸酶等分解肌醇六磷酸的方法的對(duì)象，(a)熟知的是作為飼料等用途的大豆、脫脂大豆等、(b)也已知豆乳、大豆分離蛋白等幾種，但關(guān)于(c)植物蛋白水解物混合物不太知道。
已知例如(a)飼料(特開(kāi)平11-000164號(hào)公報(bào)、特開(kāi)平8-205785號(hào)公報(bào))、(b)脫脂大豆、豆腐渣等大豆由來(lái)的飼料材料(特開(kāi)平9-140334號(hào)公報(bào))、大豆蛋白(本申請(qǐng)申請(qǐng)人的特開(kāi)2000-300185號(hào)公報(bào)、特開(kāi)4503002號(hào)公報(bào))和豆乳(特開(kāi)昭59-166049號(hào)公報(bào)、本申請(qǐng)申請(qǐng)人的特開(kāi)2000-245340號(hào)公報(bào))等。
但是，關(guān)于(c)低肌醇六磷酸鈣酶植物蛋白水解物卻不為人所知，在本申請(qǐng)申請(qǐng)人的特開(kāi)平8-092123號(hào)公報(bào)中公開(kāi)了使用樹(shù)脂的方法。
另外，在特開(kāi)平9-023822號(hào)公報(bào)中，公開(kāi)了接種曲菌使大豆分離蛋白發(fā)酵，同時(shí)進(jìn)行酶分解和肌醇六磷酸酶處理，得到肌醇六磷酸含量低的肽生成物的方法。
但是，還沒(méi)有如本發(fā)明所述的使肌醇六磷酸在檢測(cè)界限以下的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人等在進(jìn)行研究中發(fā)現(xiàn)，為了使用植物蛋白水解物作為消化吸收功能不夠發(fā)達(dá)的小魚、魚苗、出生后成活的魚用的飼料，肽生成物是不夠充分的，需要消化吸收性優(yōu)異且肌醇六磷酸含量極少的植物蛋白水解物。因此，本發(fā)明的目的在于得到肌醇六磷酸含量極少的低肌醇六磷酸植物蛋白水解物，特別優(yōu)選得到肌醇六磷酸在檢測(cè)界限以下的低肌醇六磷酸植物蛋白水解物。
進(jìn)一步的目的在于使用這種低肌醇六磷酸植物蛋白水解物的魚苗用飼料。
本發(fā)明人等通過(guò)不斷悉心研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過(guò)減少在飼料中使用的大豆蛋白水解物所含的肌醇六磷酸，可以提高幼魚苗的存活率，可以促進(jìn)魚苗的生長(zhǎng)發(fā)育，從而完成了本發(fā)明。
另外，通過(guò)以下發(fā)現(xiàn)，得到低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物。
也就是說(shuō)，本申請(qǐng)人先完成了通過(guò)樹(shù)脂處理得到的低肌醇六磷酸鈣鎂蛋白水解物(特開(kāi)平8-092123號(hào)公報(bào))，但為了使肌醇六磷酸含量在檢測(cè)界限以下，樹(shù)脂處理很麻煩。
另一方面，本申請(qǐng)人用肌醇六磷酸酶處理大豆蛋白，制造低肌醇六磷酸大豆蛋白(特開(kāi)2000-300185號(hào)公報(bào))，但只酶解該低肌醇六磷酸大豆蛋白，也難于得到肌醇六磷酸含量非常低，即在檢測(cè)界限以下的大豆蛋白水解物。
因此，進(jìn)一步悉心研究，發(fā)現(xiàn)首先將大豆蛋白酶解至特定的分子量范圍，之后進(jìn)行肌醇六磷酸酶處理，可以得到肌醇六磷酸非常少(檢測(cè)界限以下)的大豆蛋白水解物。
還發(fā)現(xiàn)在酶解大豆蛋白時(shí)，從大豆原料水提取大豆蛋白后，如果不進(jìn)行干燥就進(jìn)行酶解的話，先進(jìn)行肌醇六磷酸酶處理，然后進(jìn)行酶解，也能除去肌醇六磷酸至檢測(cè)界限以下。
令人更加意外的是，這些肌醇六磷酸含量在檢測(cè)界限以下即肌醇六磷酸含量這樣極其少的大豆蛋白水解物與只經(jīng)過(guò)酶解的大豆蛋白水解物相比，風(fēng)味優(yōu)異。
本發(fā)明是基于這些發(fā)現(xiàn)完成的。
也就是說(shuō)，本發(fā)明的幼魚苗用飼料，其特征在于在飼料原料中含有肌醇六磷酸含量為0.05重量％或以下(以干燥固形物計(jì))的低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物。
平均分子量是200～10000的植物蛋白水解物是比較合適的低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物。
另外，本發(fā)明還涉及低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物的制造方法，其特征在于包括(a)用蛋白分解酶分解蛋白質(zhì)的工序和(b)用分解肌醇六磷酸的酶分解肌醇六磷酸的工序。
用蛋白分解酶分解蛋白后，優(yōu)選用分解肌醇六磷酸的酶分解肌醇六磷酸。
優(yōu)選用分解肌醇六磷酸的酶分解未干燥的蛋白后，用蛋白分解酶分解蛋白質(zhì)。
分解肌醇六磷酸的酶優(yōu)選肌醇六磷酸酶。
肌醇六磷酸酶處理的pH優(yōu)選為6～9。
低肌醇六磷酸鈣鎂蛋白水解物的平均分子量?jī)?yōu)選為200～10000。
低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物中的肌醇六磷酸含量?jī)?yōu)選以干燥固形物計(jì)，用釩鉬酸吸光光度法(檢測(cè)界限5mg/100g)不能檢測(cè)出肌醇六磷酸。
實(shí)施發(fā)明的最佳方式首先就幼魚苗用飼料進(jìn)行說(shuō)明。
本發(fā)明的用于幼魚苗用飼料的低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物以干燥固形物計(jì)的肌醇六磷酸含量為0.05重量％或以下，優(yōu)選0.01重量％或以下，更優(yōu)選0.004重量％或以下(檢測(cè)界限以下)比較合適。
植物蛋白水解物中所含的肌醇六磷酸的量越少，幼魚苗的存活率越高，是優(yōu)選的。另外，具有促進(jìn)魚苗的成長(zhǎng)、賦予糞便粘性、防止水由于糞便變渾濁的效果。
本發(fā)明的用于幼魚苗用飼料中的低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物的平均分子量為200～10000(優(yōu)選300～5000)比較合適。分子量大的低肌醇六磷酸鈣鎂蛋白水解物提高促進(jìn)幼魚苗的生長(zhǎng)發(fā)育的效果和存活率的效果差，若分子量減少直至成為氨基酸的話，飼料的滲透壓升高，變得易于溶解，作為飼料不合適。
只要是養(yǎng)魚用飼料，分子量比較大的大豆蛋白水解物也可以，但養(yǎng)的魚是幼魚苗的話，平均分子量小的比較好，尤其是剛從卵孵化的小魚，優(yōu)選分子量小的寡肽混合物。
本發(fā)明的飼料，作為其組成，含有蛋白成分40～70重量％，優(yōu)選約50～60重量％比較合適。
本發(fā)明的飼料含有低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物1重量％～30重量％，優(yōu)選3～25重量％比較合適。通常，用上述低肌醇六磷酸植物蛋白水解物取代本發(fā)明飼料中的蛋白成分的3重量％以上，優(yōu)選10～80重量％比較合適。取代比例增加的話，該飼料的顆?；兊美щy。
本發(fā)明飼料中低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物少的話，沒(méi)有提高幼魚苗的存活率和魚苗的成長(zhǎng)率的效果，過(guò)多的話，會(huì)引起生長(zhǎng)障礙，因此是不優(yōu)選的。這是加吉魚、比目魚等養(yǎng)殖種苗生產(chǎn)困難的魚共同具有的，與其它魚的養(yǎng)殖不同。
另外，作為低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物以外的蛋白質(zhì)成分，可以合并使用南極磷蝦、魚類加工產(chǎn)品、雞蛋加工品、牛奶制品、明膠、魚粉、魚介類提取物、酵母提取物、魚卵提取物。
本發(fā)明的飼料除含有上述低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物、其它蛋白質(zhì)之外，還可以含有碳水化合物、脂肪、維生素、礦物質(zhì)、n-3高度不飽和脂肪酸和大豆卵磷脂等磷脂。
n-3高度不飽和脂肪酸是比目魚等海水魚所必須的脂肪酸，大豆卵磷脂等飼料性磷脂是幼魚苗的養(yǎng)殖所必需的成分，因此可以含在本發(fā)明的飼料中。
本發(fā)明的飼料的形式優(yōu)選保持魚易于攝取的粒徑、浮游性、沉降速度且在水中營(yíng)養(yǎng)素不溶出，在消化道中被消化吸收這樣的形式，特別用于比目魚和蝦等小魚時(shí)，優(yōu)選通過(guò)微膠囊化等，制成微粒飼料。
將平均分子量200～10000的低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物微膠囊化的方法可以采用例如將水解物的水溶液噴霧干燥的方法。另外，也可以根據(jù)需要，為了調(diào)節(jié)對(duì)海水的溶出性、浮游性、分散性，在噴霧前也可以添加油脂，噴霧后，添加硬化油脂后，攪拌并涂覆等來(lái)制備。
本發(fā)明的飼料可以根據(jù)幼魚苗的日齡，在幼魚苗期，與生物飼料結(jié)合或者單獨(dú)，以30分～1小時(shí)間隔，適量給料。
以下描述用于如上幼魚苗的飼料的低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物的一個(gè)制造方法。
(植物蛋白原料)
本發(fā)明所用的植物蛋白可以使用公知的植物蛋白，谷物、油脂原料的蛋白獲得容易，特別是大豆蛋白工業(yè)上可以大量生產(chǎn)，因此是優(yōu)選的蛋白原料之一。
下面說(shuō)明使用含有若干肌醇六磷酸的大豆蛋白的例子，但該方法也是可以應(yīng)用在其它植物蛋白中的方法。
用于制造本發(fā)明的低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物的大豆蛋白原料可以包括豆乳(也包括脫脂豆乳。以下同)、濃縮豆乳、濃縮大豆蛋白、大豆分離蛋白、脫脂大豆等、只要包含大豆蛋白即可。
脫脂大豆優(yōu)選沒(méi)有蛋白變性或者輕度蛋白變性的經(jīng)加工處理的所謂低變性脫脂大豆，不受品種、產(chǎn)地等限定。一般來(lái)說(shuō)，把正己烷作為提取溶劑進(jìn)行低溫提取處理的脫脂大豆作為原料比較合適，特別是NSI(氮可溶系數(shù))為60以上，優(yōu)選80以上的低變性脫脂大豆比較好。
(大豆蛋白的酶解)大豆蛋白的酶解方法可以在含水溶液(大豆蛋白漿料或者溶液)中使用酶水解大豆蛋白。
例如，在使用低變性大豆蛋白的場(chǎng)合，用于酶處理的大豆蛋白溶液的濃度為1重量％～30重量％，優(yōu)選5～15重量％，較優(yōu)選8～12重量％比較合適。該濃度低對(duì)酶解也無(wú)礙，但產(chǎn)率降低，是不優(yōu)選的。
用于本發(fā)明的蛋白分解酶(蛋白酶)可以單獨(dú)或者合并使用來(lái)源于動(dòng)物、植物或者微生物的胞外蛋白酶或者胞內(nèi)蛋白酶。具體地可以使用絲氨酸蛋白酶(動(dòng)物由來(lái)的胰蛋白酶、糜蛋白酶、微生物由來(lái)的枯草桿菌蛋白酶、羧肽酶等)、硫醇蛋白酶(植物由來(lái)的木瓜蛋白酶、無(wú)花果蛋白酶、波蘿蛋白酶等)、羧基蛋白酶(動(dòng)物由來(lái)的胃蛋白酶等)。進(jìn)一步具體地為米曲酶起源的“プロチン FN”(大和化成株制)、灰色鏈酶菌起源的“アクチナ-ゼ”(科研制藥株制)、來(lái)自地衣芽孢桿菌的“アルカラ-ゼ”(ノボ社制)、來(lái)自枯草桿菌的“プロチン A”(大和化成株制)。另外，作為含有胞內(nèi)蛋白酶的酶，可以舉出天野制藥(株)制的“プロテア一ゼS”、大和化成(株)制的“プロチンAC-10”和“ビオプラ-ゼ(ナガゼ生化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社)等，作為含有胞外和胞內(nèi)蛋白酶的蛋白分解酶，可以舉出天野制藥(株)制的“プロテア一ゼM”。
本發(fā)明的水解條件因使用的蛋白分解酶的種類多少不同，一般說(shuō)來(lái)，優(yōu)選在該蛋白分解酶的作用pH范圍、作用溫度、最佳反應(yīng)時(shí)間下，使用足量的酶以水解大豆蛋白。在同時(shí)考慮脂質(zhì)代謝改善劑和限制鹽分的食物(例如經(jīng)飼管營(yíng)養(yǎng)食物等)的用途的場(chǎng)合，如果pH為5～10，優(yōu)選pH6～9，可以減少中和生成的鹽，因而是優(yōu)選的。
對(duì)于水解的程度，平均分子量為200～10000，優(yōu)選300～5000比較合適?？梢愿鶕?jù)目的和用途來(lái)調(diào)節(jié)水解的程度。例如，在食料和飼料的場(chǎng)合，比較大的分子量也無(wú)妨，在用作養(yǎng)魚用飼料的場(chǎng)合和用作幼魚苗用飼料的場(chǎng)合，優(yōu)選易于消化的低分子量，適合的平均分子量為200～5000，較優(yōu)選為200～2000。
(用肌醇六磷酸分解酶分解肌醇六磷酸)作為用于本發(fā)明的分解肌醇六磷酸的酶，可以使用來(lái)自小麥和馬鈴薯等植物的酶，或者來(lái)自腸管等動(dòng)物內(nèi)臟的酶、來(lái)自細(xì)菌、酵母、真菌、放線菌等微生物的且具有肌醇六磷酸分解活性的肌醇六磷酸酶和磷酸酶等酶。
作為分解肌醇六磷酸的酶，肌醇六磷酸酶和磷酸酶比較合適，較優(yōu)選肌醇六磷酸酶。肌醇六磷酸酶可以使用曲霉屬、根霉屬、酵母屬、毛霉屬、地絲菌屬等各種具有產(chǎn)肌醇六磷酸酶能力的菌株。優(yōu)選來(lái)自曲霉屬的酶比較合適，較優(yōu)選的曲霉屬(Aspergillus)可選自來(lái)自無(wú)花果曲霉(Aspergillus ficuum)的肌醇六磷酸酶、來(lái)自黑曲霉(Aspergillus niger)的肌醇六磷酸酶和土曲酶(Aspergillus terreus)的肌醇六磷酸酶。為了把大豆中的肌醇六磷酸分解為肌醇，需要切斷酯基，進(jìn)行切斷的酶是肌醇六磷酸酶。
另外，也可以使用作為酸性磷酸酶的真菌類由來(lái)的酸性磷酸酶。也就是說(shuō)，可以選自無(wú)花果曲霉(Aspergillus ficuum)由來(lái)的酸性磷酸酶、黑曲霉(Aspergillus niger)由來(lái)的酸性磷酸酶和土曲酶(Aspergillus terreus)由來(lái)的酸性磷酸酶。
酶處理的肌醇六磷酸的分解反應(yīng)可以在非常溫和的條件下實(shí)施，因此對(duì)蛋白質(zhì)的影響極其小。例如，本發(fā)明的酶反應(yīng)在30～60℃下進(jìn)行0.1～30小時(shí)即可。
在本發(fā)明中，肌醇六磷酸分解反應(yīng)時(shí)的pH特別重要，在pH6～9，優(yōu)選6.2～8.5，進(jìn)一步6.2～7實(shí)施比較好。在低于pH6.0下處理的大豆蛋白其溶解性降低，風(fēng)味變差，是不優(yōu)選的。另外，pH超過(guò)9.0，風(fēng)味也變差，也不是優(yōu)選的。在上述pH范圍內(nèi)分解肌醇六磷酸，可以更好地制造減少了肌醇六磷酸的大豆蛋白。
因而，在本發(fā)明中適合使用的酶優(yōu)選在pH6以上的中性乃至堿性pH范圍可以分解肌醇六磷酸和肌醇六磷酸鹽的酶，對(duì)其來(lái)源沒(méi)有特別的限定，可以使用上述酶。
可以在無(wú)論粉末狀、液體狀的形式下使用酶，相對(duì)于大豆蛋白中的粗蛋白重量，以0.01～10重量％，優(yōu)選0.05～2重量％，更優(yōu)選0.1～1重量％進(jìn)行添另而實(shí)施，但作為酶效價(jià)，添加0.1～100U/g粗大豆蛋白、優(yōu)選0.5～20U/g粗大豆蛋白，較優(yōu)選1～10U/g粗大豆蛋白的肌醇六磷酸酶比較好。另外，對(duì)于酶活性，在37℃，使由0.5ml含4mM肌醇六磷酸鈉的0.2Mtris-HCl緩沖液(pH6.5)、0.4ml蒸餾水和0.1ml酶液組成的反應(yīng)液反應(yīng)30分鐘，加入1.0ml 10％TCA并停止反應(yīng)。用Fiske-Subbarow方法對(duì)該反應(yīng)液中的無(wú)機(jī)磷酸含量進(jìn)行定量。在上述條件下，把在1分鐘內(nèi)使1μmol的無(wú)機(jī)磷酸游離的酶量作為1個(gè)單位(U)。
在本發(fā)明中，只要包括用蛋白分解酶分解蛋白質(zhì)的工序和用分解肌醇六磷酸的酶分解肌醇六磷酸的工序，其順序無(wú)論什么樣的組合均可，經(jīng)過(guò)這些工序，可以使低肌醇六磷酸鈣鎂化，即植物蛋白水解物中的肌醇六磷酸含量以干燥固形物計(jì)為0.5％或以下，優(yōu)選0.2％或以下。而且，為了使肌醇六磷酸含量在檢測(cè)界限5mg/100g以下，在酶分解蛋白質(zhì)后，進(jìn)行肌醇六磷酸酶處理，對(duì)于制造低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物是較優(yōu)選的。另一方面，對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行肌醇六磷酸酶處理后，即使酶解蛋白質(zhì)，也難于使肌醇六磷酸含量在檢測(cè)界限5mg/100g以下。但是，如果在使用前述未變性大豆蛋白的場(chǎng)合，使前述肌醇六磷酸酶作用于該大豆蛋白溶液(沒(méi)有粉末干燥)分解肌醇六磷酸后，進(jìn)行前述的蛋白酶分解，可以得到肌醇六磷酸含量在檢測(cè)界限以下的所需低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物。
如上得到的低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物的平均分子量為200～10000，優(yōu)選300～5000比較合適。
另外，肌醇六磷酸含量以低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物的干燥固形物計(jì)，用釩鉬酸吸光光度法(檢測(cè)界限5mg/100g)，檢測(cè)為0.5％或以下，優(yōu)選沒(méi)有檢測(cè)出肌醇六磷酸。
(實(shí)施例)下面通過(guò)實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方式。
首先，對(duì)飼料進(jìn)行說(shuō)明。
〔制造例1〕(低肌醇六磷酸大豆蛋白水解物的制造)往10重量份脫脂大豆中加7倍的水，在50℃、pH7下，攪拌提取30分鐘后，用離心分離機(jī)分離豆腐渣和豆乳，用硫酸將豆乳調(diào)節(jié)至pH4.5后，通過(guò)離心分離等，分離成等電點(diǎn)沉淀蛋白質(zhì)和乳清蛋白質(zhì)后，相對(duì)于等電點(diǎn)沉淀蛋白質(zhì)，加4倍水后，用NaOH調(diào)節(jié)至pH6.0，制備8％濃度的大豆蛋白溶液50重量份。
將該大豆蛋白溶液加熱至50℃，添加新日本化學(xué)工業(yè)(株)制的0.04重量份肌醇六磷酸酶分解酶“スミチ-ムPHY”，使之反應(yīng)60分鐘。在150℃將該反應(yīng)液殺菌7秒后，冷卻至50℃，用NaOH調(diào)節(jié)至pH7.0，添加天野制藥(株)制的0.16重量份“プロテア一ゼM”，使之反應(yīng)5小時(shí)。調(diào)節(jié)至pH6.5，在150℃殺菌7秒后，立即用噴霧干燥機(jī)粉末干燥。
用釩鉬酸吸光光度法測(cè)定該粉末中的肌醇六磷酸(內(nèi)消旋肌醇環(huán)己酸)含量，沒(méi)有檢測(cè)出(檢測(cè)界限5mg/100g)。平均分子量用電泳法測(cè)定的結(jié)果約500。
〔制造例2〕(沒(méi)有除去肌醇六磷酸的大豆蛋白水解物的制造)把100重量份(以下為“份”)大豆分離蛋白(不二制油(株)制的“フジプロ-R”)制成pH7的5％水溶液，用プロチンFN(大和化成(株)制曲霉屬起源)1份，在50℃酶解5小時(shí)后，在70℃加熱30分鐘使酶失活，將冷卻后離心分離得到的上清液噴霧干燥，來(lái)制造大豆蛋白水解物。另外，該水解物的TCA(三氯醋酸)可溶率(15％TCA可溶氮/全氮的值乘以100的值)為100，且平均分子量為676。
〔實(shí)施例1和對(duì)比例1〕·實(shí)施例1從預(yù)備飼養(yǎng)水槽將38日齡的比目魚移至300尾宛100L實(shí)驗(yàn)水槽中，準(zhǔn)備5個(gè)這樣的槽，作為實(shí)驗(yàn)水槽。在實(shí)驗(yàn)期間，海水的溫度保持在17℃。
作為實(shí)驗(yàn)飼料，在表1的比目魚養(yǎng)殖飼料中，如表1所示，添加0、2.5、5.0、10.0、20.0重量份酪蛋白代替和上述制造例1一樣制造的低肌醇六磷酸大豆蛋白水解物，用常規(guī)方法制成微粒飼料。實(shí)驗(yàn)飼料組成示于表1中。單位為重量份。第5組為對(duì)照組。
從39日齡開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，從上午9時(shí)開(kāi)始，每1小時(shí)給料，給料8次，直至16時(shí)，在17時(shí)，給予アルテミア作為生物飼料，每天給料9次。飼料量隨著日齡的增長(zhǎng)，把養(yǎng)殖飼料定為0.31g～0.50g/次/魚，把アルテミア定為55～80只/次/魚。
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后14天，測(cè)定約50尾52日齡的幼魚苗的體長(zhǎng)、存活尾數(shù)、色素異常率。
·對(duì)比例1作為實(shí)驗(yàn)飼料，使用和上述制造例2一樣制造的沒(méi)有除去肌醇六磷酸的大豆蛋白水解物，用和實(shí)施例1一樣的方法，養(yǎng)殖比目魚。
(表1)

實(shí)施例1和對(duì)比例1的結(jié)果如表2所示。
(表2)52日齡測(cè)定結(jié)果

從實(shí)施例1的結(jié)果可知，添加了低肌醇六磷酸大豆蛋白水解物的1～4組與作為對(duì)照的5組相比較，生長(zhǎng)均得到促進(jìn)，特別是在1～3組沒(méi)有發(fā)現(xiàn)顯著差別。即使對(duì)于存活數(shù)，與5組相比，在1～4組可以看到良好的傾向。另外，色素異常率各組沒(méi)有差別，在給予大豆蛋白水解物的組，也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)異常。
另外，與下述比較例1相比較，肌醇六磷酸含量低的大豆蛋白水解物(寡肽混合物)的存活率也顯著上升。
〔制造例3〕將100重量份大豆分離蛋白(不二制油(株)制“ニュ-フジプロ-R”)溶解在水900份中，往其中加入2份蛋白質(zhì)分解酶(大和化成株式會(huì)社制“プロチン”)，在50℃培養(yǎng)5小時(shí)后，用離心分離(5000rpm×30分鐘)除去不溶物，進(jìn)一步在80℃加熱30分鐘，使酶失活和殺菌，進(jìn)行冷凍干燥，得到酶分解物(SH)。
往直徑1.4cm的柱中填充丙烯酸類弱堿性陰離子交換樹(shù)脂(住友化學(xué)工業(yè)(株)制“KA890”)直至高度15cm(樹(shù)脂容積23cm3)，通入50ml 5％苛性鈉液和500ml離子交換水，進(jìn)行洗滌。
另一方面，用離子交換水溶解上述酶解物，用10％鹽酸調(diào)節(jié)pH至4.5，用離子交換水調(diào)節(jié)以使最終蛋白濃度達(dá)到10％。
以51ml/hr從填充KA890并洗滌的柱的上部通入上述調(diào)制液，從柱的下部分離獲得洗脫的處理液。
通入酶解液，收集其量最終為1219ml(作為蛋白量為121.9g，每1ml樹(shù)脂為5.3g)的酶解液，即肌醇六磷酸完全被樹(shù)脂吸附除去的洗脫液，冷凍干燥，得到低磷含量的酶解物(SHR)。用穆罕默德等人的方法(Cereal Chem.63.475.1986)測(cè)定肌醇六磷酸含量。其結(jié)果沒(méi)有檢測(cè)出肌醇六磷酸(檢測(cè)界限0.005重量％)。
〔實(shí)施例2和對(duì)比例2〕用在制造例3中得到的低肌醇六磷酸鈣鎂大豆蛋白水解物和在制造例2中得到的沒(méi)有除去肌醇六磷酸的大豆蛋白水解物，孵化來(lái)自母蝦的受精卵，用預(yù)備飼養(yǎng)至水蚤幼蟲l期的飼料，進(jìn)行飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。
飼養(yǎng)條件如表3所示，在1升燒杯中收入100尾水蚤幼蟲1期，用微粒飼料在室溫下飼養(yǎng)。試驗(yàn)飼料的組成如表4所示。
作為試驗(yàn)飼料，往表4的對(duì)蝦養(yǎng)殖飼料中分別添加10.0重量份酪蛋白(對(duì)照)來(lái)代替和制造例3和制造例2一樣制造的各大豆蛋白水解物，用常規(guī)方法制成微粒飼料。
另外，以幼苗的生長(zhǎng)指數(shù)(Growth index達(dá)到成長(zhǎng)期)和存活率判斷添加效果。結(jié)果如表5所示。
(表3)對(duì)蝦幼苗的飼養(yǎng)條件

(表4)試驗(yàn)飼料組成

※1(205ω3)∶(226ω3)＝3∶2(表5)對(duì)蝦幼苗的飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果

·生長(zhǎng)指數(shù)(Growth index)＝(1n1+2n2+3n3+4n4+5n5+6n6+7n7)/N(條件是，N＝n1+n2+...+n7)
·n1、n2、n3、n4、n5、n6和n7表示水蚤幼蟲1期、水蚤幼蟲2期、水蚤幼蟲3期、糠蝦幼體1期、糠蝦幼體2期、糠蝦幼體3期和后期幼體1幼苗的尾數(shù)該結(jié)果發(fā)現(xiàn)，后期幼體的體長(zhǎng)(第11天測(cè)定的)在制造例3的低肌醇六磷酸鈣鎂大豆蛋白水解物添加區(qū)與無(wú)添加區(qū)或者制造例2的大豆蛋白水解物添加區(qū)之間沒(méi)有差別，但發(fā)現(xiàn)低肌醇六磷酸大豆蛋白水解物添加區(qū)在存活率、生長(zhǎng)指數(shù)方面有良好的傾向。
〔實(shí)施例3〕將生后第70～80天的比目魚移到20L實(shí)驗(yàn)水槽中，每個(gè)區(qū)20尾，準(zhǔn)備3個(gè)這樣的水槽，進(jìn)行飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)期間，飼養(yǎng)水溫保持在18℃。
作為實(shí)驗(yàn)飼料，將市售的比目魚飼料((株)ヒガシマル制的EP飼料、種苗用S-6)調(diào)制成基料。也就是將市售的飼料加熱，進(jìn)行涂覆使在上述制造例1中制造的低肌醇六磷酸大豆蛋白水解物和在制造例2中制造的未經(jīng)肌醇六磷酸酶處理的大豆蛋白水解物與其粘附后，干燥制成實(shí)驗(yàn)飼料。市售飼料的組成和添加了大豆蛋白水解物的實(shí)驗(yàn)飼料的組成示于表6中。
(表6)

用全長(zhǎng)平均80.3mm、魚體重4.4g、體重/全長(zhǎng)＝55.5mg/mm的魚苗開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，給料從上午9時(shí)開(kāi)始，每6個(gè)小時(shí)給料，每天給4次。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后經(jīng)過(guò)10天、20天后，測(cè)定幼魚苗60尾的體長(zhǎng)、魚體重，從測(cè)定結(jié)果算出體重/全長(zhǎng)。
(表7)測(cè)定開(kāi)始第0天(試驗(yàn)魚數(shù)60尾)

備注( )內(nèi)相對(duì)于對(duì)照區(qū)的增減
(表8)測(cè)定開(kāi)始第10天(試驗(yàn)魚數(shù)60尾，存活率60尾)

備注( )內(nèi)相對(duì)于對(duì)照區(qū)的增減(表9)測(cè)定開(kāi)始第20天(試驗(yàn)魚數(shù) 60尾，存活率60尾)

備注( )內(nèi)相對(duì)于對(duì)照區(qū)的增減從該結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組區(qū)、添加大豆蛋白水解物相比較，在低肌醇六磷酸鈣鎂大豆蛋白水解物添加區(qū)，在第10天，以平均體重/體長(zhǎng)(mg/mm)計(jì)的生長(zhǎng)率高，具有促進(jìn)生長(zhǎng)的效果。進(jìn)一步在第20天，對(duì)于體重/體長(zhǎng)(mg/mm)，也觀察倒最大的固體。最小的與對(duì)照區(qū)、添加大豆蛋白水解物相比，值也比較高，這大概是由于飼料集中在固體大的魚中，固體間的差異大，平均值與對(duì)照區(qū)沒(méi)有太大區(qū)別。
(飼養(yǎng)過(guò)程)飼養(yǎng)期間的水溫、給料量、攝取狀況記載如下。
糞便的狀況，對(duì)照區(qū)給料后的糞便的狀況為拉稀便，水槽的水渾濁，與此相反，在大豆蛋白水解物和低肌醇六磷酸大鈣鎂豆蛋白水解物添加區(qū)，糞便為保持形狀的軟便狀，且水槽的水保持干凈。而且，低肌醇六磷酸鈣鎂大豆蛋白水解物的飼料，存在糞便粘稠，糞便多的傾向。
(表10)


下面說(shuō)明低肌醇六磷酸大豆蛋白水解物的實(shí)施例。
〔實(shí)施例4〕往10kg脫脂大豆中加7倍的水，在50℃、pH7下，攪拌提取30分鐘后，用離心分離機(jī)分離豆腐渣和豆乳，用硫酸將豆乳調(diào)節(jié)至pH4.5后，通過(guò)離心分離等，分離成等電點(diǎn)沉淀蛋白質(zhì)和乳清蛋白質(zhì)后，相對(duì)于等電點(diǎn)沉淀蛋白質(zhì)，加4倍水后，用NaOH調(diào)節(jié)至pH7.0，制備50升8％濃度的大豆蛋白溶液。
往該大豆蛋白溶液中分別添加“プロテア一ゼS”和“プロテア一ゼM”(天野制藥(株)制)各160g，在50℃使之反應(yīng)5小時(shí)，加水分解(15％TCA可溶率85％)。然后，將pH調(diào)節(jié)至6.0，添加新日本化學(xué)工業(yè)(株)制的40g肌醇六磷酸分解酶“スミチ-ムPHY”，在50℃使之反應(yīng)60分鐘后，用NaOH調(diào)節(jié)至6.5，在150℃殺菌7秒后，立即用噴霧干燥機(jī)粉末干燥。
用釩鉬酸吸光光度法測(cè)定該粉末中的肌醇六磷酸(內(nèi)消旋肌醇環(huán)己酸)含量，沒(méi)有檢測(cè)出(檢測(cè)界限5mg/100g)，可以極好地低降低肌醇六磷酸。
〔實(shí)施例5〕往10kg脫脂大豆中加7倍的水，在50℃、pH7下，攪拌提取30分鐘后，用離心分離機(jī)分離豆腐渣和豆乳，用硫酸將豆乳調(diào)節(jié)至pH4.5后，通過(guò)離心分離等，分離成等電點(diǎn)沉淀蛋白質(zhì)和乳清蛋白質(zhì)后，相對(duì)于等電點(diǎn)沉淀蛋白質(zhì)，加4倍水后，用NaOH調(diào)節(jié)至pH6.0，制備50升8％濃度的大豆蛋白溶液。
將該大豆蛋白溶液加熱至50℃，添加40g新日本化學(xué)工業(yè)(株)制的肌醇六磷酸酶分解酶“スミチ-ムPHY”，使之反應(yīng)60分鐘后，用NaOH調(diào)節(jié)至7.0，添加160g天野制藥(株)制的“プロテア一ゼM”，使之反應(yīng)5小時(shí)。調(diào)節(jié)至pH6.5，在150℃殺菌7秒后，立即用噴霧干燥機(jī)粉末干燥。
用釩鉬酸吸光光度法測(cè)定該粉末中的肌醇六磷酸(內(nèi)消旋肌醇環(huán)己酸)含量，沒(méi)有檢測(cè)出(檢測(cè)界限5mg/100g)，可以極好地低降低肌醇六磷酸。
〔實(shí)施例6〕往10kg脫脂大豆中加7倍的水，在50℃、pH7下，攪拌提取30分鐘后，用離心分離機(jī)分離豆腐渣和豆乳，用硫酸將豆乳調(diào)節(jié)至pH4.5后，通過(guò)離心分離等，分離成等電點(diǎn)沉淀蛋白質(zhì)和乳清蛋白質(zhì)后，相對(duì)于等電點(diǎn)沉淀蛋白質(zhì)，加4倍水后，用NaOH調(diào)節(jié)至pH6.0，制備50升8％濃度的大豆蛋白溶液，立即用噴霧干燥機(jī)粉末干燥。
將該蛋白液調(diào)節(jié)為8％溶液，加熱至50℃，添加40g新日本化學(xué)工業(yè)(株)制的肌醇六磷酸酶分解酶“スミチ-ムPHY”，使之反應(yīng)60分鐘后，用NaOH調(diào)節(jié)至7.0，添加160g天野制藥(株)制的“プロテア一ゼM”，使之反應(yīng)5小時(shí)。調(diào)節(jié)至pH6.5，在150℃殺菌7秒后，立即用噴霧干燥機(jī)粉末干燥。
用釩鉬酸吸光光度法測(cè)定該粉末中的肌醇六磷酸(內(nèi)消旋肌醇環(huán)己酸)含量，肌醇六磷酸被降低至0.5％(檢測(cè)界限5mg/100g)。
〔實(shí)施例7〕往10kg脫脂大豆中加7倍的水，在50℃、pH7下，攪拌提取30分鐘后，用離心分離機(jī)分離豆腐渣和豆乳，用硫酸將豆乳調(diào)節(jié)至pH4.5后，通過(guò)離心分離等，分離成等電點(diǎn)沉淀蛋白質(zhì)和乳清蛋白質(zhì)后，相對(duì)于等電點(diǎn)沉淀蛋白質(zhì)，加4倍水后，用NaOH調(diào)節(jié)至pH6.0，制備50升8％濃度的大豆蛋白溶液。
將該大豆蛋白溶液加熱至50℃，添加40g新日本化學(xué)工業(yè)(株)制的肌醇六磷酸酶分解酶“スミチ-ムPHY”，使之反應(yīng)60分鐘后，立即用噴霧干燥機(jī)粉末干燥。
將該溶液調(diào)節(jié)為8％溶液，用NaOH調(diào)節(jié)至7.0，添加160g天野制藥(株)制的“プロテア一ゼM”，使之反應(yīng)5小時(shí)，在150℃殺菌7秒后，立即用噴霧干燥機(jī)粉末干燥。
用釩鉬酸吸光光度法測(cè)定該粉末中的肌醇六磷酸(內(nèi)消旋肌醇環(huán)己酸)含量，肌醇六磷酸被降低至0.2％(檢測(cè)界限5mg/100g)。
〔實(shí)施例8〕往10kg脫脂大豆中加7倍的水，在50℃、pH7下，攪拌提取30分鐘后，用離心分離機(jī)分離豆腐渣和豆乳，用硫酸將豆乳調(diào)節(jié)至pH4.5后，通過(guò)離心分離等，分離成等電點(diǎn)沉淀蛋白質(zhì)和乳清蛋白質(zhì)后，相對(duì)于等電點(diǎn)沉淀蛋白質(zhì)，加4倍水后，用NaOH調(diào)節(jié)至pH6.0，制備50升8％濃度的大豆蛋白溶液。
將該蛋白液加熱至50℃，添加40g新日本化學(xué)工業(yè)(株)制的肌醇六磷酸酶分解酶“スミチ-ムPHY”，使之反應(yīng)60分鐘后，立即用噴霧干燥機(jī)粉末干燥。
將該溶液調(diào)節(jié)為8％溶液，用NaOH調(diào)節(jié)至7.0，添加160g天野制藥(株)制的“プロテア一ゼM”，使之反應(yīng)5小時(shí)(反應(yīng)時(shí)pH6.2)，之后，再添加40g新日本化學(xué)工業(yè)(株)制的肌醇六磷酸分解酶“スミチ-ムPHY”，使之反應(yīng)60分鐘后，在150℃殺菌7秒后，立即用噴霧干燥機(jī)粉末干燥。
用釩鉬酸吸光光度法測(cè)定該粉末中的肌醇六磷酸(內(nèi)消旋肌醇環(huán)己酸)含量，肌醇六磷酸被降低至0.2％(檢測(cè)界限5mg/100g)。
〔實(shí)施例9〕把30kg粉末干燥的大豆分離蛋白(不二制油(株)制，“ニュ-フジプロ-R”)制成pH7.0的10％溶液，使之受1.2kg天野制藥(株)制的蛋白分解酶“プロテア一ゼS”和0.3kg天野制藥(株)制的“プロテア一ゼM”的作用，在50℃水解5小時(shí)(15％TCA可溶率85％)后，將pH調(diào)節(jié)至6.0，添加0.6kg新日本化學(xué)工業(yè)(株)制的肌醇六磷酸酶分解酶“スミチ-ムPHY”，在45℃水解2小時(shí)。
在可連續(xù)處理的高速離心分離機(jī)中，將該分解液調(diào)整至100升/小時(shí)的送液速度，分離除去產(chǎn)生的沉淀成分。將所得離心上清液(固形物的收率為70％)調(diào)節(jié)至pH6.5，在150℃殺菌7秒后，立即用噴霧干燥機(jī)粉末干燥。
用釩鉬酸吸光光度法測(cè)定該粉末中的肌醇六磷酸(內(nèi)消旋肌醇環(huán)己酸)含量，沒(méi)有檢測(cè)出(檢測(cè)界限5mg/100g)，可以極好地低降低肌醇六磷酸。
工業(yè)實(shí)用性通過(guò)將本發(fā)明的飼料給料，能夠促進(jìn)幼魚苗的生長(zhǎng)發(fā)育，大幅度提高存活率。
特別是能夠提高一般認(rèn)為養(yǎng)魚困難所在的幼魚苗的存活率，能夠養(yǎng)殖以往一般認(rèn)為養(yǎng)魚困難的魚。
另外，能夠促進(jìn)在某種程度上成長(zhǎng)的魚苗的生長(zhǎng)發(fā)育，可以使糞便粘稠，防止水渾濁，生長(zhǎng)環(huán)境得以改善。
還有，低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物適合于這種飼養(yǎng)量是可能的。
也就是說(shuō)，根據(jù)本發(fā)明，肌醇六磷酸含量極少，而且用釩鉬酸吸光光度法檢測(cè)為檢測(cè)界限以下的低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物是可能的。另外，與樹(shù)脂吸附法的低肌醇六磷酸鈣鎂大豆蛋白水解物相比較，本發(fā)明方法的低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物的風(fēng)味優(yōu)異(據(jù)推測(cè)是因?yàn)榧〈剂姿岬姆纸馕?。
另外，本發(fā)明的低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物的分子量小，肌醇六磷酸極少，因此用于消化吸收功能不夠發(fā)達(dá)的魚苗和生后成活的動(dòng)物用飼料中時(shí)，消化吸收性優(yōu)異，對(duì)促進(jìn)鈣等微量金屬的吸收極其有效。
權(quán)利要求
1.一種幼魚苗用飼料，其特征在于在飼料原料中含有肌醇六磷酸含量為0.05重量％或以下(干燥固形物計(jì))的植物蛋白水解物。
2.權(quán)利要求1所述的幼魚苗用飼料，其中，所述的植物蛋白水解物是平均分子量為200～10000的植物蛋白水解物。
3.權(quán)利要求1或2所述的幼魚苗用飼料，其中，所述的飼料的形式是以保持幼魚易于攝取的粒徑、浮游性、沉降速度且在水中營(yíng)養(yǎng)素不溶出的，在消化道中被消化吸收的微膠囊化的微粒飼料。
4.一種低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物的制造方法，其特征在于，該方法包括(a)用蛋白分解酶分解蛋白質(zhì)的工序和(b)用分解肌醇六磷酸的酶分解肌醇六磷酸的工序。
5.權(quán)利要求4所述的制造方法，其中，用蛋白分解酶分解大豆蛋白后，用分解肌醇六磷酸的酶分解肌醇六磷酸。
6.權(quán)利要求4所述的制造方法，其中，用分解肌醇六磷酸的酶分解未干燥的大豆蛋白后，用蛋白分解酶分解蛋白質(zhì)。
7.權(quán)利要求4～6中任意一項(xiàng)所述的制造方法，其中，所述的分解肌醇六磷酸的酶是肌醇六磷酸酶。
8.權(quán)利要求4～7中任意一項(xiàng)所述的制造方法，其中，所述的肌醇六磷酸酶處理的pH為6～9。
9.權(quán)利要求4～8中任意一項(xiàng)所述的制造方法，其中，所述的低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物的平均分子量為200～10000。
10.權(quán)利要求4～9中任意一項(xiàng)所述的制造方法，其中，所述的低肌醇六磷酸植物蛋白水解物中以干燥固形物計(jì)的肌醇六磷酸含量顯示為，用釩鉬酸吸光光度法(檢測(cè)界限5mg/100g)檢測(cè)不出肌醇六磷酸。
全文摘要
本發(fā)明的目的在于提供適合于提高消化吸收功能不夠發(fā)達(dá)的幼魚苗的存活率和促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育的飼料，以及獲得用于該飼料中的植物蛋白水解物。為了得到該低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物，提供了低肌醇六磷酸鈣鎂植物蛋白水解物的制造方法，該方法包括(a)用蛋白分解酶分解蛋白質(zhì)的工序和(b)用分解肌醇六磷酸的酶分解肌醇六磷酸的工序。例如，植物蛋白為大豆蛋白的場(chǎng)合，低肌醇六磷酸鈣鎂大豆蛋白水解物的平均分子量?jī)?yōu)選為200～10000。另外，肌醇六磷酸含量?jī)?yōu)選為0.05重量％或以下(以干燥固形物計(jì))。用含有這種低肌醇六磷酸鈣鎂大豆蛋白水解物的小魚用飼料，可以使促進(jìn)幼魚苗的生長(zhǎng)發(fā)育、提高存活率的幼魚苗用飼料成為可能。
文檔編號(hào)A23K1/165GK1671294SQ0381770
公開(kāi)日2005年9月21日 申請(qǐng)日期2003年7月23日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月24日
發(fā)明者中森俊宏, 古田均 申請(qǐng)人:不二制油株式會(huì)社