專利名稱：新疆雪蓮花繁育克隆試管苗的大規(guī)模生產(chǎn)工藝及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及人工繁育技術(shù)，具體地說，是涉及新疆雪蓮花克隆試管苗的大規(guī)模生產(chǎn)工藝。
背景技術(shù)：
新疆雪蓮花是新疆的中草藥之一，其制劑在國內(nèi)外深受歡迎。新疆雪蓮花生長在天山雪線附近4000多公尺的懸崖峭壁之上，分布地域狹窄，山勢險峻而難于攀登，故總的藥源供給量有限。近年來國內(nèi)外對雪蓮花需求量與日俱增，只要人跡所能到的地方，均被一掃而光，造成野生雪蓮花資源逐漸枯竭；為了保證雪蓮花藥源的充分供應(yīng)，保護野生種植資源的繁衍恢復(fù)，必須實現(xiàn)雪蓮花的人工栽培。因此，運用生物技術(shù)研制雪蓮花的組織培養(yǎng)，人工培育成大量的試管苗，是目前急待解決的問題之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于彌補現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足之處，而提供一種制備簡便、繁育效果好的克隆試管苗的大規(guī)模生產(chǎn)工藝及其用途。
本發(fā)明的目的是通過如下措施來實現(xiàn)新疆雪蓮花繁育克隆試管苗的大規(guī)模生產(chǎn)工藝把新疆雪蓮花小頭狀花上的組織切去一小塊，接種在MS+BA 2.5～5ml/L+NAA 0.2～0.5ml/L上，形成愈傷組織，然后，把愈傷組織轉(zhuǎn)移到KT、BA、ZT的任一種培養(yǎng)基上，分化出幼芽，20-30天為一個周期，以此類推循環(huán)，無限增殖。
本發(fā)明揭示出雪蓮花的生物學(xué)性狀，陳述如下1、雪蓮花的抗寒性雪蓮花之所以叫“雪”蓮花，是因其生長在天山雪線附近，生長期中遇暴風(fēng)雪也不會死。在冰峰雪原上經(jīng)零下三十多度的嚴(yán)寒而能順利越冬。它是天山上植物分布最高上限的唯一大型高等植物。
研究證明，在五月份，當(dāng)?shù)乇頊囟冗_到0℃以上時，雪蓮花即開始萌發(fā)出新的幼芽，且生長很快。根據(jù)對大量野生雪蓮花的全年定點觀測，在5-6月份，平均每天葉片伸長1-2毫米，到7-8月份每天伸長3毫米以上，達到開花年齡的老植株，則迅速抽苔開花，這樣的生長速度比較穩(wěn)定，不會因高山上變幻莫測的氣候而有明顯的波動。即使在最熱的7月份，高山上月平均氣溫僅3-5℃，這里雪蓮花植株生長迅速，說明雪蓮花有很強的利用有效積溫的生理功能。試驗證明，即使在低到2℃的恒溫環(huán)境中，平均每5天可長出1片新葉。剛移栽到土壤中的幼嫩試管苗，在盆栽露地條件下，也能忍耐-12℃的低溫達一星期之久。
2、雪蓮花抗紫外輻射的能力高山上紫外輻射強，但雪蓮花生長不受影響。據(jù)此可以推測，雪蓮花為了適應(yīng)這種環(huán)境，在長期進化過程中形成了抗紫外線的生理遺傳特征。為了驗證這種假設(shè)，我們用組織培養(yǎng)試管苗作了人工紫外光照射試驗。為了對比，用菊科的菊芋(Heliaothustuberosua L.)作對照材料，用的是田間塊莖長出的小苗。用紫外線殺菌燈作紫外光源，波長254nm，葉面處光照強度210Lux。按理幼嫩的雪蓮花試管小苗較菊芋要嬌嫩得多，但試驗結(jié)果表明，雪蓮花試管苗更抗紫外光的殺傷力。如經(jīng)紫外光照身0.5小時，雪蓮花試管苗存活13天，菊芋大苗僅成活9天，照射時間延長到1.5小時后，雪蓮花尚可成活8天，而菊芋僅存活5天。根據(jù)這個試驗結(jié)果有理由斷定，雪蓮花植株中必定有某種抗紫外輻射的生化成份。這種物質(zhì)可以作為研制新一代防曬化妝品和保健食品的珍貴原料。對雪蓮花抗輻射機理的進一步研究，將為開發(fā)護膚保健品和食品提供理論基礎(chǔ)。
3、雪蓮花耐低氧空氣環(huán)境的能力在海拔高達4000公尺的冰川上，由于空氣中氧分壓比平原低，故汽車易熄火，打火機點不燃，大部分人有高山反應(yīng)。而雪蓮花卻能在這種少氧狀態(tài)下旺盛地生長。經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，雪蓮花植株有一套適應(yīng)缺氧環(huán)境的形態(tài)解剖通氣結(jié)構(gòu)。首先，雪蓮花的莖從下到上，全部中空，這種通氣孔道直達每個小頭狀花序的基部。其次，葉部組織結(jié)構(gòu)也有利于氣體交換，葉表面角質(zhì)層不發(fā)達，葉片質(zhì)地薄而柔軟，葉肉細(xì)胞排列疏松，氣孔發(fā)達，即使在強烈蒸騰缺水狀態(tài)下，氣孔也不關(guān)閉。上述植物組織器官上形成的適應(yīng)性狀，保證了雪蓮花植株呼吸作用的正常進行。
4、雪蓮花年齡的鑒別雪蓮花為多年生植物，但它的生長周期的年限，以往無正式資料記載，經(jīng)過我們對大量野生雪蓮花植株的調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，在雪蓮花植株基部，以每年形成一輪多層蓮座狀葉片的同時，其莖軸心就長成一個致密的橫隔，有幾層橫隔就有幾輪枯葉。一般在開花的植株上，基部橫隔在4-6層左右，這個性狀是識別雪蓮花植株生長年齡的可靠指標(biāo)。在已開花的植株的分枝上，有的只有2-3個橫隔，由此可以判斷，該分枝是從主莖上第幾年長出來的。
5、雪蓮花的分布下限以往一般均認(rèn)為，雪蓮花只能生長在雪線附近。但通過我們近幾年的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在不同地區(qū)的兩千多公尺(已到云杉分布地帶)的山崖上，均發(fā)現(xiàn)有不少雪蓮花旺盛地生長著，有的還成片分布。結(jié)合對群眾的訪問，證明歷史上這些地區(qū)野生雪蓮花很多。由于它艷麗的花朵和藥用價值日益被人們發(fā)現(xiàn)，遭到大量破壞性地采挖而日益減少，最后以致絕跡。只有在人跡難到的懸崖上，得以留下少量個體而得以保留到今天。雪蓮花目前這種生態(tài)分布狀況，完全是歷史上多年人工選擇壓力造成的，而且這種趨勢還以更快的速度在繼續(xù)著。上述發(fā)現(xiàn)，對于開發(fā)野生雪蓮花的人工栽培很有啟示，因為有可能在海拔高度更低的地帶實現(xiàn)人工種植，從而恢復(fù)歷史上曾經(jīng)有過的野生雪蓮花較廣闊的生態(tài)分布范圍及其資源。在烏魯木齊作了小量的大田人工栽培，也成功地越冬和越夏。這一發(fā)現(xiàn)也改變了冰川凍土學(xué)者關(guān)于雪蓮花是同冰川相伴而生的傳統(tǒng)觀念。
培養(yǎng)基介紹如下NAA萘乙酸KT激動素BA六芐氨基嘌呤ZT玉米素本發(fā)明的優(yōu)點是雪蓮花人工繁育技術(shù)是開創(chuàng)性工作，是前人沒有的技術(shù)，一方面保護自然種質(zhì)資源，同時開辟了人工栽培，源源不斷供應(yīng)雪蓮花藥源，而且本發(fā)明技術(shù)已實現(xiàn)了大規(guī)模生產(chǎn)，使產(chǎn)量大幅度提高。
具體實施方法下面列舉1個實施例，對本發(fā)明加以進一步說明。但本發(fā)明不只限于這個實施例。
實施例1把新疆新鮮幼嫩的雪蓮花植株的小頭狀花序剪開，接種在MS+BA2.5ml/L+NAA 0.2ml/L上，經(jīng)15天，愈傷組織開始形成，誘導(dǎo)率達85％以上，然后，把愈傷組織轉(zhuǎn)到KT、BA、ZT的任一種培養(yǎng)基上，20-30天，愈傷組織長滿三角瓶，再進行剪切。
從1988年至今，已進行25年多的培育，若一個月一次，已有300多代克隆無性系。每代的繁殖系數(shù)為5-10。
用200毫升三角瓶為容器，經(jīng)20-30天，從一百瓶繁殖成幾千瓶的克隆苗，說明已是工業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模。
雪蓮花的藥用保健價值雪蓮花治病對風(fēng)濕性和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的醫(yī)療效果最為明顯，經(jīng)幾十萬支雪蓮花注射劑的臨床應(yīng)用證明，總有效率達78％，且無不良反應(yīng)，病人普遍反應(yīng)療效顯著。有的病人已多年不能工作，夏天還穿棉衣，甚至被診斷為不可逆轉(zhuǎn)的類風(fēng)濕，經(jīng)注射雪蓮花制劑后，關(guān)節(jié)腫脹疼痛完全消失，并恢復(fù)了工作能力。多年的醫(yī)療實踐證明，目前常用的抗風(fēng)濕藥和激素類藥物，是不能和雪蓮花制劑相比的。
用雪蓮花復(fù)方藥外用治療，可減輕多種婦科病引起的外陰炎癥、搔癢、白帶等，顯效率65％，總有效率達100％，深受廣大婦女患者的歡迎。
雪蓮花其他奇特的醫(yī)療效果，正在探索之中，如哈薩克族牧民，處居深山草原，當(dāng)婦女分娩后，如遇胎衣不下，他們就用水煎雪蓮花口服來治療，效果較好。此外，他們還將雪蓮花用于治療肺寒咳嗽和支氣管炎，治雪盲、牙痛、麻疹不透、外傷出血等。
雪雞和雪蓮花為少數(shù)民族醫(yī)藥寶庫中的“雙雪”二寶，雪雞之所以珍貴，很重要的一部分是雞嗦子(胃)，他們將完整的雞嗉子取出泡酒供藥用，究其原因，雪雞胃中食物的重要成份是雪蓮花。
目前，以雪蓮花為主要成份，已研制開發(fā)成一系列重要的中成藥和保健食用品，如雪蓮花注射液、雪蓮花婦用保健帶、雪蓮花蘆筍口服液、雪蓮花護膚霜等，根據(jù)雪蓮花所具有的許多寶貴習(xí)性，進一步開發(fā)許多環(huán)境適應(yīng)型藥物和保健食品，將有廣闊的前景。如它的抗缺氧和抗寒特點，可研制供沙漠、高山野外工作人員的食品； 它的較強的抗紫外輻射能力，可用來開發(fā)護膚用品等。
野生雪蓮花組織培養(yǎng)的成功，為大規(guī)模的工廠化育苗打下了基礎(chǔ)，每年可以人工繁育出成千萬株小苗，供大面積人工栽培，從而實現(xiàn)雪蓮花野生變家養(yǎng)的美好愿望。此外，還可將大量小苗投放到野生雪蓮花生長的大自然環(huán)境中去，恢復(fù)被嚴(yán)重破壞了的雪蓮花生態(tài)，使原來寶貴的野生雪蓮花資源得以再生。
雪蓮花克隆苗和野生雪蓮花的生化成分完全一致，在許多重要氨基酸含量上超過野生雪蓮花。雪蓮花用作保健品、化妝品和藥品。
權(quán)利要求
1.新疆雪蓮花繁育克隆試管苗的大規(guī)模生產(chǎn)工藝，其特征在于把新疆雪蓮花小頭狀花上的組織切下一小塊，接種在MS+BA2.5～5ml/L+NAA 0.2～0.5ml/L上，形成愈傷組織，然后，把愈傷組織轉(zhuǎn)移到KT、BA、ZT任一種培養(yǎng)基上，分化出幼芽，20-30天為一個周期，以此類推循環(huán)。
2.新疆雪蓮花繁育克隆試管苗的用途，把克隆苗直接作保健品、化妝品和藥品的原料。
全文摘要
本發(fā)明涉及新疆雪蓮花繁育克隆試管苗的大規(guī)模生產(chǎn)工藝及其用途。本發(fā)明是把新鮮幼嫩雪蓮花小頭狀花上的組織切去一小塊，接種在MS+BA2.5～5ml/L+NAA 0.2～0.5ml/L上，形成愈傷組織，然后，把愈傷組織轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基上，分化出幼芽，20－30天為一個周期，以此類推循環(huán)。本發(fā)明優(yōu)點是雪蓮花人工繁育技術(shù)是開創(chuàng)性工作，前人沒有的技術(shù)，一方面保護種植資源，同時開辟了人工栽培，源源不斷供應(yīng)雪蓮花藥源，本發(fā)明技術(shù)還實現(xiàn)了克隆苗的大規(guī)模生產(chǎn)，使產(chǎn)量大幅度提高。直接將雪蓮花的克隆苗用作保健品、化妝品和藥品。
文檔編號A01H4/00GK1606905SQ200310100158
公開日2005年4月20日 申請日期2003年10月14日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月14日
發(fā)明者劉杰龍, 瓦·古巴諾娃 申請人:劉杰龍, 郭小平, 陸燕, 卓婭, 鄭小仙, 尼娜