專利名稱：利用6-二甲氨基嘌呤誘導牡蠣四倍體的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種誘導貝類四倍體方法，特別是涉及一種利用6-二甲氨基嘌呤誘導牡蠣四倍體的方法。
背景技術：
目前國內外誘導貝類四倍體方法有二種一種是采用二倍體精卵受精，用細胞松弛素B作抑制劑抑制第一極體和第一次卵裂方法誘導四倍體；另一種是采用三倍體的卵子和二倍體的精子受精，用細胞松弛素B抑制第一極體釋放的方法誘導四倍體。由于細胞松弛素B是一種毒性很強的化學物品，易對人體和環(huán)境造成危害，并且還有價格昂貴、受精卵孵化率低等缺點，不宜在社會上推廣應用。另外采用二倍體精卵受精誘導四倍體，還有四倍體產率低，后代的四倍體不能存活等缺點。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種利用6-二甲氨基嘌呤誘導牡蠣四倍體的方法，它能克服現(xiàn)有技術的上述缺點。
一種利用6-二甲氨基嘌呤誘導牡蠣四倍體的方法，包括獲取三倍體牡蠣產生的卵子并使之與二倍體產生的精子受精，然后采用抑制劑抑制第一極體或第二極體，其特征是所述的抑制劑為6-二甲氨基嘌呤。
本發(fā)明采用的誘導劑6-DMAP具有價格便宜、低毒等特點，克服了以往所用細胞松弛素B價格昂貴、毒副作用大、易對工作人員身體和環(huán)境造成危害等缺點。通過抑制三倍體受精卵第二極體釋放獲得的四倍體也不同于以往的四倍體，其細胞中雖然也含有相當于四套染色體的染色體數(shù)目，但實質上含有三套完整的染色體和兩個相同的半套染色體，其本質屬于非整倍體類型，與傳統(tǒng)意義上的四倍體有著遺傳學上的本質區(qū)別。
具體實施例方式
本發(fā)明的誘導牡蠣四倍體方法包括1、三倍體卵子的獲取及倍性快速檢測取三倍體群牡蠣解剖后鏡檢，區(qū)分雌雄，留雌棄雄。剖取卵子，用500目篩絹過濾洗卵，用過濾海水浸泡1h后，卵子呈圓形。三倍體的卵子較大，平均卵徑59.51微米(57.5-61.8微米)，比二倍體(平均卵徑51.3微米)增大16.05％，卵子體積增大56.49％。此時通過目微尺側卵徑大小可快速準確的檢測倍性。
2、采用6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)抑制三倍體受精卵第一極體釋放獲得四倍體在22～24℃下，使上述的三倍體牡蠣的卵子與二倍體牡蠣的精子受精，當觀察到受精卵中出現(xiàn)第一個極體時即開始加入70mg/L的6-DMAP進行處理，持續(xù)處理20min后，濾洗受精卵，除去藥液后，放入新鮮過濾海水中孵化。采用流式細胞儀檢測，D形幼蟲的四倍體率最高達62.18％，平均51.9％(38.17-62.18％)。
本實施例中的第2步是通過抑制第一極體而得到四倍體的，這一步也可以改成采用6-DMAP抑制三倍體受精卵第二極體釋放獲得四倍體，即當30-40％的三倍體受精卵釋放出第一極體時，加入70mg/L的6-DMAP進行處理，處理持續(xù)時間為15-20min。處理完畢后，濾掉藥液，放入新鮮過濾海水中孵化。D形幼蟲的四倍體率最高達68.87％，平均58.71％(50.45-68.87％)。
權利要求
1.一種利用6-二甲氨基嘌呤誘導牡蠣四倍體的方法，包括獲取三倍體牡蠣產生的卵子并使之與二倍體產生的精子受精，然后采用抑制劑抑制第一極體或第二極體，其特征是所述的抑制劑為6-二甲氨基嘌呤。
2.如權利要求1所述的方法，其特征是所述的獲取三倍體卵子的雌體的倍性是通過卵徑大小測量檢測的。
全文摘要
一種利用6－二甲氨基嘌呤誘導牡蠣四倍體的方法，包括獲取三倍體牡蠣產生的卵子并使之與二倍體產生的精子受精，然后采用抑制劑抑制第一極體或第二極體，其特征是所述的抑制劑為6－二甲氨基嘌呤。本發(fā)明采用的誘導劑6－DMAP具有價格便宜、低毒等特點，克服了以往所用細胞松弛素B價格昂貴、毒副作用大、易對工作人員身體和環(huán)境造成危害等缺點。通過抑制三倍體受精卵第二極體釋放獲得的四倍體也不同于以往的四倍體，其細胞中雖然也含有相當于四套染色體的染色體數(shù)目，但實質上含有三套完整的染色體和兩個相同的半套染色體，其本質屬于非整倍體類型，與傳統(tǒng)意義上的四倍體有著遺傳學上的本質區(qū)別。
文檔編號A01K67/00GK1545873SQ20031011449
公開日2004年11月17日 申請日期2003年12月16日 優(yōu)先權日2003年12月16日
發(fā)明者王昭萍, 于瑞海, 王如才, 鄭小東, 李慷均, 姜波 申請人:中國海洋大學