專利名稱：高山杜鵑的組織培養(yǎng)快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種高山杜鵑的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，屬于花卉培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
高山杜鵑(Rhododendron radinum)是杜鵑花科杜鵑花屬灌木類高檔花卉植物，原產(chǎn)我國中西部地區(qū)的高山密林中，后由德國、比利時(shí)等國引種栽培馴化，并改良選育出許多優(yōu)良品種，花色有紅、粉、紫、黃、白等多種，艷麗華貴，深受人們喜愛。高山杜鵑通常無種子，主要靠扦插繁殖，而扦插繁殖受母株材料和繁殖季節(jié)的影響，往往無法滿足市場的需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種繁殖速度快，不受季節(jié)影響的高山杜鵑的組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種高山杜鵑的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，在試管內(nèi)由培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基由下述原料配制外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基1/4MSMS鐵鹽維生素B50.2mg水解乳蛋白300mg蔗糖30g+Kt1.0mg/L叢生芽增殖培養(yǎng)基1/2MSKt0.5mg/L生根培養(yǎng)基1/2MSNAA5mg/L
活性炭0.5％2.一種高山杜鵑的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，采用嫩莖段腋芽培養(yǎng)法及“二步法”的試管苗假植育苗方法，它包括下列步驟一.采用嫩莖段腋芽培養(yǎng)法(1)外植體的準(zhǔn)備a.將進(jìn)口種苗栽種在塑料花盆中養(yǎng)護(hù)，成活后剪去枝條頂端部份，以促進(jìn)分枝生長；b.當(dāng)新抽生的分枝長至5-7厘米，葉片剛轉(zhuǎn)綠平展時(shí)，剪下枝條，去除葉片，用自來水沖洗15分鐘，用洗潔精洗滌二次后吸干；c.在無菌室超凈臺上用73-76％酒精消毒1-2分鐘；用1∶50新潔爾滅液消毒18-22分鐘；再用0.1％氯化汞消毒13-16分鐘；d.用無菌蒸餾水沖洗數(shù)遍后吸干。
(2)無菌培養(yǎng)系的建立與增殖a.在超凈臺上剝?nèi)∏o尖，長度0.5-1.0mm，余下的枝條，切成1cm長的莖段，每段帶1-3個(gè)腋芽節(jié)，淺插于培養(yǎng)基中，外植體誘導(dǎo)初始無菌芽的培養(yǎng)基為1/4MS、MS鐵鹽、維生素B50.2mg、水解乳蛋白300mg、蔗糖30g、Kt1.0mg/L；培養(yǎng)基中瓊脂為6-8g/L，PH5.8；培養(yǎng)室溫度為22℃-24℃，光照12h/d，光照強(qiáng)度為2000LX。
b.叢生芽增殖培養(yǎng)基為1/2MS+Kt0.5mg/L，增殖階段的培養(yǎng)物每30天增殖培養(yǎng)一次。
(3)試管苗的生根培養(yǎng)a.在培養(yǎng)瓶中加入半瓶1/2MS、NAA5mg、活性炭0.5％/L生根培養(yǎng)基作20-30天的壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度為22℃-24℃，光照12h/d，光照強(qiáng)度為2000LX。
二.“二步法”的育苗方法(4)試管苗假植煉苗與穴盤苗的培育a.在培養(yǎng)瓶中加入半瓶50％珍珠巖+50％泥炭混和成的基質(zhì)，經(jīng)高溫120-125℃、高壓1.1大氣壓下消毒并自然冷卻，輕輕取出試管苗，洗凈基部培養(yǎng)基，然后將幼苗切口處在生根粉中蘸一下，再接種至培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，即瓶內(nèi)微型扦插培養(yǎng)，用尼龍薄膜覆蓋密閉，遇晴天強(qiáng)光，用50-75％遮光率的遮陽網(wǎng)遮光；b.三天后根據(jù)氣候適當(dāng)揭開尼龍并繼續(xù)葉面噴霧逐漸煉苗，一星期后新根長出，不蓋尼龍，每天噴霧1-2次，10天后新根新葉均已生長，用0.2硝酸銨+0.2％磷酸二氫鉀葉面噴灑補(bǔ)充養(yǎng)份，15天后用0.1％自配營養(yǎng)液追肥，每月二次；c.幼苗煉苗二個(gè)月后，長度3厘米，3對葉片以上時(shí)，將苗拔起移至泥炭和珍珠巖比例為2∶1的基質(zhì)的塑料穴盤中作穴盤苗培育二個(gè)月。
在應(yīng)用組培技術(shù)進(jìn)行觀賞植物的快速繁殖中，繁殖系數(shù)是決定試管苗生產(chǎn)效益和成本的一個(gè)重要因素。在高山杜鵑的組織培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)，繁殖系數(shù)的高低，主要取決于培養(yǎng)基中kt的用量，培養(yǎng)室溫度的高低也起一定的調(diào)節(jié)作用。繁殖系數(shù)隨kt濃度提高而提高，但kt濃度過高，培養(yǎng)的試管苗細(xì)弱、還容易形成玻璃苗。本研究中，為保證高山杜鵑試管苗的質(zhì)量，當(dāng)培養(yǎng)獲得叢生芽后，以1/2MS+kt0.5mg/L的培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)獲得了較好的效果。
組織培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用成敗很大程度上取決于試管苗移栽的成活率及成活質(zhì)量。我們在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，將無根試管苗置于無任何激素的MS0培養(yǎng)基上壯苗培養(yǎng)1個(gè)月后再生根，對提高試管苗的質(zhì)量及生根率具促進(jìn)作用。在1/2MS+NAA5mg+活性炭0.5％/L的生根培養(yǎng)基上，可達(dá)95％以上的高生根率。將試管苗假植煉苗于1∶1的泥炭土+珍珠巖基質(zhì)中，進(jìn)行肥水管理2個(gè)月后，移栽于2∶1的泥炭土+珍珠巖基質(zhì)的穴盤容器中培育，可達(dá)到苗齊苗壯的目的。這種假植煉苗2步法的育苗技術(shù)能夠確保種苗的移栽成活率。采用這種方法培育的種苗，上盆移栽存活率可達(dá)100％。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是不受季節(jié)影響，生長快，分枝性好，抗逆性強(qiáng)，且花大、花色艷麗純正。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明實(shí)施例供繁殖種為高山杜鵑中的粉紅系品種，名為“火箭(Rocket)”，來源于德國布萊梅。
采用嫩莖段腋芽培養(yǎng)法及“二步法”的試管苗假植育苗方法，它包括下列步驟一.采用嫩莖段腋芽培養(yǎng)法(1)外植體的準(zhǔn)備a.將進(jìn)口種苗栽種在塑料花盆中養(yǎng)護(hù)，成活后剪去枝條頂端部份，以促進(jìn)分枝生長；b.當(dāng)新抽生的分枝長至5-7厘米，葉片剛轉(zhuǎn)綠平展時(shí)，剪下枝條，去除葉片，用自來水沖洗15分鐘，用洗潔精洗滌二次后吸干；c.在無菌室超凈臺上用75％酒精消毒1分鐘；用1∶50新潔爾滅液消毒20分鐘；再用0.1％氯化汞消毒15分鐘；d.用無菌蒸餾水沖洗數(shù)遍后吸干。
(2)無菌培養(yǎng)系的建立與增殖a.在超凈臺上剝?nèi)∏o尖，長度0.5-1.0mm，余下的枝條，切成1cm長的莖段，每段帶1-3個(gè)腋芽節(jié)，淺插于培養(yǎng)基中，外植體誘導(dǎo)初始無菌芽的培養(yǎng)基為1/4MS、MS鐵鹽、維生素B50.2mg、水解乳蛋白300mg、蔗糖30g、Kt1.0mg/L；培養(yǎng)基中瓊脂為7g/L，PH5.8；培養(yǎng)室溫度為22℃-24℃，光照12h/d，光照強(qiáng)度為2000LX。
b.叢生芽增殖培養(yǎng)基為1/2MS+Kt0.5mg/L，增殖階段的培養(yǎng)物每30天增殖培養(yǎng)一次。
(3)試管苗的生根培養(yǎng)a.在培養(yǎng)瓶中加入半瓶1/2MS、NAA5mg、活性炭0.5％/L生根培養(yǎng)基作20-30天的壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度為22℃-24℃，光照12h/d，光照強(qiáng)度為2000LX。
二.“二步法”的育苗方法(4)試管苗假植煉苗與穴盤苗的培育a.在培養(yǎng)瓶中加入半瓶50％珍珠巖+50％泥炭混和成的基質(zhì)，經(jīng)高溫120125℃、高壓1.1大氣壓下消毒并自然冷卻，輕輕取出試管苗，洗凈基部培養(yǎng)基，然后將幼苗切口處在生根粉中蘸一下，再接種至培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，即瓶內(nèi)微型扦插培養(yǎng)，用尼龍薄膜覆蓋密閉，遇晴天強(qiáng)光，用50-75％遮光率的遮陽網(wǎng)遮光；b.三天后根據(jù)氣候適當(dāng)揭開尼龍并繼續(xù)葉面噴霧逐漸煉苗，一星期后新根長出，不蓋尼龍，每天噴霧1-2次，10天后新根新葉均已生長，用0.2硝酸銨+0.2％磷酸二氫鉀葉面噴灑補(bǔ)充養(yǎng)份，15天后用0.1％自配營養(yǎng)液追肥，每月二次；c.幼苗煉苗二個(gè)月后，長度3厘米，3對葉片以上時(shí)，將苗拔起移至泥炭和珍珠巖比例為2∶1的基質(zhì)的塑料穴盤中作穴盤苗培育二個(gè)月。
本發(fā)明采用嫩莖段腋芽培養(yǎng)法及“二步法”的試管苗假植育苗方法，“二步法”的育苗方法，經(jīng)前后4個(gè)月左右的培養(yǎng)，最后以穴盤苗的標(biāo)準(zhǔn)苗出圃，其種苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為苗高6-8厘米，葉片6-8對，主莖粗0.2-0.3厘米，葉色深綠，葉片肥厚，無病蟲害。其中前二個(gè)月的假植移栽存活率達(dá)98.6％，后二個(gè)月的穴盤苗存活率達(dá)100％，且十分健壯，這種穴盤苗經(jīng)2003年3萬株的作盆花培育養(yǎng)護(hù)的示范推廣，證明上盆后種苗存活率達(dá)100％，生長快，分枝性好，抗逆性強(qiáng)，能耐夏季室外30℃以上的高溫和冬季零下7.0度的低溫，不到一年的養(yǎng)護(hù)已長至20-30厘米高度，且有少量開花，表現(xiàn)花大、花色艷麗純正，與母株無差異，充分顯示出組培苗良好的遺傳穩(wěn)定性和明顯的生長優(yōu)勢。
權(quán)利要求
1.一種高山杜鵑的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，在試管內(nèi)由培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基由下述原料配制外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基1/4MSMS鐵鹽維生素B50.2mg水解乳蛋白300mg蔗糖30g+Kt1.0mg/L叢生芽增殖培養(yǎng)基1/2MSKt0.5mg/L生根培養(yǎng)基1/2MSNAA5mg/L活性炭0.5％
2.一種高山杜鵑的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，采用嫩莖段腋芽培養(yǎng)法及“二步法”的試管苗假植育苗方法，它包括下列步驟一.采用嫩莖段腋芽培養(yǎng)法(1)外植體的準(zhǔn)備a.將進(jìn)口種苗栽種在塑料花盆中養(yǎng)護(hù)，成活后剪去枝條頂端部份，以促進(jìn)分枝生長；b.當(dāng)新抽生的分枝長至5-7厘米，葉片剛轉(zhuǎn)綠平展時(shí)，剪下枝條，去除葉片，用自來水沖洗15分鐘，用洗潔精洗滌二次后吸干；c.在無菌室超凈臺上用73-76％酒精消毒1-2分鐘；用1∶50新潔爾滅液消毒18-22分鐘；再用0.1％氯化汞消毒13-16分鐘；d.用無菌蒸餾水沖洗數(shù)遍后吸干。(2)無菌培養(yǎng)系的建立與增殖a.在超凈臺上剝?nèi)∏o尖，長度0.5-1.0mm，余下的枝條，切成1cm長的莖段，每段帶1-3個(gè)腋芽節(jié)，淺插于培養(yǎng)基中，外植體誘導(dǎo)初始無菌芽的培養(yǎng)基為1/4MS、MS鐵鹽、維生素B50.2mg、水解乳蛋白300mg、蔗糖30g、Kt1.0mg/L；培養(yǎng)基中瓊脂為6-8g/L，PH5.8；培養(yǎng)室溫度為22℃-24℃，光照12h/d，光照強(qiáng)度為2000LX。b.叢生芽增殖培養(yǎng)基為1/2MS+Kt0.5mg/L，增殖階段的培養(yǎng)物每30天增殖培養(yǎng)一次。(3)試管苗的生根培養(yǎng)a.在培養(yǎng)瓶中加入半瓶1/2MS、NAA5mg、活性炭0.5％/L生根培養(yǎng)基作20-30天的壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度為22℃-24℃，光照12h/d，光照強(qiáng)度為2000LX。二.“二步法”的育苗方法(4)試管苗假植煉苗與穴盤苗的培育a.在培養(yǎng)瓶中加入半瓶50％珍珠巖+50％泥炭混和成的基質(zhì)，經(jīng)高溫120-125℃、高壓1.1大氣壓下消毒并自然冷卻，輕輕取出試管苗，洗凈基部培養(yǎng)基，然后將幼苗切口處在生根粉中蘸一下，再接種至培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，用尼龍薄膜覆蓋密閉，遇晴天強(qiáng)光，用50-75％遮光率的遮陽網(wǎng)遮光；b.三天后根據(jù)氣候適當(dāng)揭開尼龍并繼續(xù)葉面噴霧逐漸煉苗，一星期后新根長出，不蓋尼龍，每天噴霧1-2次，10天后新根新葉均已生長，用0.2硝酸銨+0.2％磷酸二氫鉀葉面噴灑補(bǔ)充養(yǎng)份，15天后用0.1％自配營養(yǎng)液追肥，每月二次；c.幼苗煉苗二個(gè)月后，長度3厘米，3對葉片以上時(shí)，將苗拔起移至泥炭和珍珠巖比例為2∶1的基質(zhì)的塑料穴盤中作穴盤苗培育二個(gè)月。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種高山杜鵑的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，在試管內(nèi)由培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基由下述原料配制外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基1/4MS、MS鐵鹽、維生素B50.2mg、水解乳蛋白300mg、蔗糖30g+Kt1.0mg/L；叢生芽增殖培養(yǎng)基1/2MS、Kt0.5mg/L；生根培養(yǎng)基1/2MS；NAA5mg/L、活性炭0.5％；高山杜鵑的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，采用嫩莖段腋芽培養(yǎng)法及“二步法”的試管苗假植育苗方法。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是不受季節(jié)影響，生長快，分枝性好，抗逆性強(qiáng)，且花大、花色艷麗純正。
文檔編號A01H4/00GK1568670SQ200410017920
公開日2005年1月26日 申請日期2004年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月26日
發(fā)明者湯桂鈞 申請人:上海市閔行區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所