專(zhuān)利名稱(chēng)：華北半葉紫菜絲狀體純系的制種方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種華北半葉紫菜絲狀體純系的制種方法。
背景技術(shù)：
紫菜是重要的經(jīng)濟(jì)海藻，但只有少數(shù)種類(lèi)被人工栽培，而且主要集中在東南亞國(guó)家如中國(guó)、日本和韓國(guó)。華北半葉紫菜是我國(guó)北方黃渤海潮間帶特有的紫菜種類(lèi)，目前尚未成為栽培種類(lèi)，但由于其藻體呈鮮亮的紫紅色或紅褐色，與我國(guó)常見(jiàn)的種類(lèi)相比，可能含有較多的藻膽蛋白；而且其藻體光澤好，抗附著，生長(zhǎng)季節(jié)在晚冬和早春，可在溫度較低的地區(qū)進(jìn)行人工育苗栽培，所以有較高的潛在經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
紫菜的葉狀體是配子體階段，而易于保存的種質(zhì)是絲狀孢子體階段。純系絲狀體種質(zhì)的獲得方法與葉狀體的性別排列方式密切相關(guān)。華北半葉紫菜葉狀體野生種群的性別組成不是單一的，這就決定了獲得各種性別個(gè)體的純系絲狀體方法不盡相同。其種群組成特點(diǎn)是多數(shù)個(gè)體(約占97％)為雌雄同體且雌雄組織各占葉狀體藻體的不等半邊，也就是說(shuō)，這些個(gè)體在性別上是雌雄同體種類(lèi)卻具有雌雄異體種類(lèi)(如壇紫菜)的生物學(xué)特征。與上述種類(lèi)不同的是藻體的不同性別組織區(qū)在藻體發(fā)育的早期(即繁殖器官尚未形成時(shí))即可分辨出；另外，約有各1.5％的個(gè)體為全雌個(gè)體和全雄個(gè)體。
目前，獲得本種紫菜絲狀體種質(zhì)一般有兩條途徑一條是通過(guò)采集野生藻體上的果孢子在室內(nèi)培養(yǎng)獲得絲狀體；另一條是分別切取雌雄營(yíng)養(yǎng)組織，然后二者共培養(yǎng)使之成熟后雜交形成雜種果孢子，萌發(fā)后分離獲得絲狀體；而根據(jù)目前的研究結(jié)果，華北半葉紫菜的雌雄半葉可能分別起源于不同的親本。以上兩種方法的共同特征是不能確定獲得的絲狀體是否是遺傳上的純系，而且無(wú)法獲得來(lái)自全雄個(gè)體的絲狀體種質(zhì)。
鑒于華北半葉紫菜的栽培前景和生產(chǎn)上對(duì)種質(zhì)遺傳來(lái)源越來(lái)越高的要求，及相應(yīng)開(kāi)展華北半葉紫菜遺傳學(xué)研究的需要，建立絲狀體純系的制種方法是非常必要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種獲得華北半葉紫菜絲狀體純系的制種方法，它能克服現(xiàn)有技術(shù)的上述缺點(diǎn)，獲得遺傳上的純系，滿(mǎn)足未來(lái)生產(chǎn)和研究對(duì)純種的需求。
一種華北半葉紫菜絲狀體純系的制種方法，其特征是先從華北半葉紫菜的野生種群中挑選葉狀體個(gè)體，并按性別特征分成不同群體；將選定的藻體在海水中用脫脂棉球進(jìn)行刷洗；將洗過(guò)的藻體貼在平整的干凈平面上，瀝掉過(guò)量水分；在雌雄同體的藻體基部靠近雌雄分界線的位置切下1～2mm見(jiàn)方的藻片；若是全雌或全雄個(gè)體，則在靠近藻體中基部的位置切下同樣大小的藻片；在顯微鏡下檢查確定全部細(xì)胞都是營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞；將來(lái)自不同群體的藻片分別用超聲波清洗，然后鏡檢確定藻片的兩面均無(wú)雜藻或原生動(dòng)物附著；將處理干凈的一片藻片在15～20℃、光強(qiáng)1000～6000lux、光照時(shí)間10～14小時(shí)的條件下培養(yǎng)；1～3個(gè)月后將有紅色的絲狀體藻落長(zhǎng)出；將單個(gè)藻落分出培養(yǎng)擴(kuò)增。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)1、所用的起始材料很小，整個(gè)操作過(guò)程沒(méi)有外來(lái)遺傳物質(zhì)的引入，可保證獲得的絲狀體的遺傳來(lái)源是單一的；2、由于華北半葉紫菜群體中既有雌雄同體個(gè)體，又有全雌和全雄個(gè)體，此方法對(duì)不同性別特征的個(gè)體都適用；3、從一株雌雄同體的個(gè)體可由雌性營(yíng)養(yǎng)組織和雄性營(yíng)養(yǎng)組織分別獲得絲狀體純系，即從一株藻獲得2個(gè)絲狀體純系，它們的生態(tài)特征有差別，表明其遺傳來(lái)源不同；4、采用超聲波清除表面的雜藻和原生動(dòng)物，成功率達(dá)95％以上；5、通過(guò)驗(yàn)證，本方法在具有相同性別特征的紫菜種類(lèi)中可能有普遍的適用性，如，北美大西洋種類(lèi)Porphyra purpurea葉狀體的性別排列與種群組成與華北半葉紫菜相似，可用同樣的方法獲得絲狀體純系。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明人將2001年春天采自青島太平角潮間帶的華北半葉紫菜葉狀體個(gè)體帶回實(shí)驗(yàn)室，經(jīng)過(guò)初步分檢挑出雌雄同體、全雌和全雄的個(gè)體；分別挑選具有目的性狀的個(gè)體，在過(guò)濾海水中用脫脂棉球做初步的清洗，以除去藻體表面主要的附著生物，一般需清洗2～3遍；將挑出的藻體在紙面或培養(yǎng)皿中展開(kāi)并瀝掉多余的水分，由于華北半葉紫菜不耐干，特別要注意的是操作時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)以免藻體細(xì)胞由于過(guò)度失水而死亡；或在藻體將要干的時(shí)候，用滴管取少量的干凈海水滴到藻體上；然后用干凈的刀片切下?tīng)I(yíng)養(yǎng)組織小塊(一般1～2mm見(jiàn)方)，對(duì)雌雄同體型個(gè)體，選取位置一般是藻體的基部靠近雌雄分界線的位置；對(duì)全雌或全雄個(gè)體，一般選取靠近藻體基部的位置；鏡檢確定切取的藻片全部由營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞組成；將由單株藻體的單一性別部分獲得的藻片放在10ml的離心管或50ml的小燒杯中，加入煮沸后冷卻的海水(為容器的1/2～2/3高度)，用超聲波粉碎儀進(jìn)行雜藻和原生動(dòng)物的清除；本發(fā)明人用的是美國(guó)SONICS-MAREIALS公司的超聲波粉碎儀VC750，使用振幅為35％；由于華北半葉紫菜的藻體薄，每次處理5秒左右以免時(shí)間過(guò)長(zhǎng)對(duì)細(xì)胞造成傷害，重復(fù)3次，每次換水清洗。處理完后，鏡檢藻片的兩面均無(wú)雜藻和原生動(dòng)物污染即達(dá)到目的，若仍有雜藻，可重復(fù)以上的超聲波處理步驟，但為了保證不損傷藻體細(xì)胞，對(duì)每次持續(xù)的時(shí)間應(yīng)有所減少。然后，將每片藻片放在100ml的三角瓶或燒杯培養(yǎng)，溫度為18℃，光強(qiáng)1500lx，光照時(shí)間每天12小時(shí)，2～3周換一次培養(yǎng)海水。2個(gè)月后，瓶底和藻片上都有絲狀體藻落長(zhǎng)出；將單個(gè)藻落挑出在一個(gè)250ml的三角瓶中單獨(dú)培養(yǎng)，1～3個(gè)月后可長(zhǎng)出相當(dāng)量的絲狀體，即為來(lái)自不同性別藻體的目的產(chǎn)物絲狀體純系。
用本發(fā)明的方法最初由雌雄同體個(gè)體的雄性組織和全雄個(gè)體的雄性組織獲得的絲狀體量一般較少，分離的時(shí)間可適當(dāng)推遲；而由雌性組織獲得的絲狀體量一般較多，為了便于獲得單個(gè)藻落，肉眼可見(jiàn)的藻落要盡早分離。
權(quán)利要求
1.一種華北半葉紫菜絲狀體純系的制種方法，其特征是先從華北半葉紫菜的野生種群中挑選葉狀體個(gè)體，并按性別特征分成不同群體；將選定的藻體在海水中用脫脂棉球進(jìn)行刷洗；將洗過(guò)的藻體貼在平整的干凈平面上，瀝掉過(guò)量水分；在雌雄同體的藻體基部靠近雌雄分界線的位置切下1～2mm見(jiàn)方的藻片；若是全雌或全雄個(gè)體，則在靠近藻體中基部的位置切下同樣大小的藻片；在顯微鏡下檢查確定全部細(xì)胞都是營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞；將來(lái)自不同群體的藻片分別用超聲波清洗，然后鏡檢確定藻片的兩面均無(wú)雜藻或原生動(dòng)物附著；將處理干凈的一片藻片在15～20℃、光強(qiáng)1000～6000lux、光照時(shí)間10～14小時(shí)的條件下培養(yǎng)；1～3個(gè)月后將有紅色的絲狀體藻落長(zhǎng)出；將單個(gè)藻落分出培養(yǎng)擴(kuò)增。
全文摘要
一種華北半葉紫菜絲狀體純系的制種方法，特征是從野生種群挑選不同性別特征的個(gè)體；用脫脂棉球刷洗后貼在平面上，瀝掉過(guò)量海水；在雌雄同體的藻體基部靠近雌雄分界線的位置切下1～2mm見(jiàn)方的藻片；對(duì)單性個(gè)體，則在藻體中基部切下同樣大小的藻片；確定全部細(xì)胞都是營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞；分別用超聲波清洗；在15～20℃，1000～6000lux，光照10～14小時(shí)的條件下培養(yǎng)；1～3個(gè)月將有絲狀體藻落長(zhǎng)出；將單個(gè)藻落分出培養(yǎng)擴(kuò)增。本方法的優(yōu)點(diǎn)獲得的絲狀體是純系；對(duì)不同性別特征的個(gè)體都適用；從一株雌雄同體的個(gè)體可獲得2個(gè)絲狀體純系；用超聲波清除污染生物，成功率高；在具有相同性別特征的紫菜種類(lèi)中可能有普遍的適用性。
文檔編號(hào)A01H4/00GK1593108SQ200410024419
公開(kāi)日2005年3月16日 申請(qǐng)日期2004年6月25日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月25日
發(fā)明者湯曉榮 申請(qǐng)人:中國(guó)海洋大學(xué)