專利名稱：多菌種微生物發(fā)酵劑的制作方法及其在奶牛精飼料中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種多菌種微生物發(fā)酵劑的制作方法及其在奶牛精飼料中的應(yīng)用，屬于生物工程中微生物發(fā)酵領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
目前，對于奶牛精飼料的研究與開發(fā)，僅限于玉米、麩皮、餅粕的混合及魚粉、肉骨粉，羽毛粉、玉米蛋白的比例，或加入酶制劑、礦物元素和抗生素的配方研究，造成配方中能量有余，蛋白質(zhì)飼料單一氨基酸搭配不當(dāng)，礦物質(zhì)、微量元素和維生素嚴(yán)重缺乏，以致造成飼料的轉(zhuǎn)化效率低，產(chǎn)奶量、乳脂率的乳蛋白率低，奶牛瘤胃酸中毒，營養(yǎng)代謝病發(fā)癥較高，奶牛三脂淘汰率高和利用年限短，影響了奶牛生產(chǎn)潛力的發(fā)揮。且飼料成本高。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明的目的在于提供一種抗病能力強，明顯減少奶牛瘤胃酸中毒和腹瀉現(xiàn)象，延長泌乳時間，提高了乳脂含量且成本低的多菌種微生物發(fā)酵劑的制作方法及其在奶牛精飼料中的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的多菌種微生物發(fā)酵劑的制作方法及其在奶牛精飼料中的應(yīng)用，其特征在于發(fā)酵劑的制作步驟如下菌種培養(yǎng)(1)原斜面菌種1)8種細(xì)菌雙氮纖維單胞細(xì)胞Cellulomnas biazotea；產(chǎn)黃纖維單胞細(xì)胞Cellulominas flavigena；枯草桿菌10264 Bacillus subtilis；凝結(jié)芽孢干菌Bacillus coagulans；嗜酸乳桿菌Lactobacillus acidophilus；淀粉乳桿菌Lactobacillusamylophllus；費氏丙酸桿菌propionibacterium freudenreichii，枯草芽子胞干菌Bacillus subtilis TO13055；2)3種酵母菌產(chǎn)朊假絲酵母Candida utilis；糖化酵母Saccharomycesdiastaticus；釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae3)3種霉菌斜臥青霉Penicillium decumbers、米根霉Rhizopusoryzar、黑曲霉Aspergillus niger；(2)純種分離從原斜面菌種取1環(huán)放入殺過菌且裝有玻璃珠和100ml水的三角瓶中搖勻，以無菌操作，用無菌吸管取1ml放入已殺菌并裝有培養(yǎng)基的平皿中，用無菌玻璃刮刀將菌液刮勻，并用該刮刀連續(xù)刮入第二、第三、第四、第五個相同的平皿即為不同的稀釋分離平皿，放入25-38℃保溫箱中培養(yǎng)；(3)斜面培養(yǎng)雙氮纖維單孢菌，產(chǎn)黃纖維單孢菌，用稻草粉培養(yǎng)基稻草3-5％煮沸10分鐘加酵母粉少許，自然PH；枯草桿菌10264、枯草芽孢桿菌TQ13055，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，牛肉膏0.5％蛋白胨1％、氯化鈉0.5％、PH7.2-7.6；凝結(jié)芽孢桿菌酵母粉0.8％、蛋白胨1％、葡萄糖0.7％、磷酸二氫鉀0.18％、硫酸鎂0.11％、PH7.0-7.2；費氏丙酸菌酵母粉0.8％、蛋白胨1％、蔗糖1.5％、磷酸銨0.4-0.6％、PH6.8-7.0；嗜酸乳桿菌脫脂奶粉10％、糖5％、加瓊脂1.5-2％、自然PH、溫度38-39℃、培養(yǎng)4-8小時；淀粉乳桿菌酵母膏1％、蛋白胨1.0％、(NH4)2SO4 0.5％、蔗糖2.0％、PH7.2-7.4；將平皿中長出的單個菌落各取一種接入相應(yīng)培養(yǎng)基中，液體培養(yǎng)基加瓊脂1.5-2％，125℃殺菌后接菌在25-35℃條件下靜止培養(yǎng)培養(yǎng)20-40小時，放入4℃冰箱保存；發(fā)酵培養(yǎng)基雙氮纖維單胞菌、產(chǎn)黃纖維單孢菌、發(fā)酵培養(yǎng)基草粉2％、麩皮0.5％、粉酵母0.5％；PH72-7.4、溫度28-30℃、培養(yǎng)20-22小時；枯草芽孢桿菌10264 TQ13055牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，牛肉膏0.5％、蛋白胨1％、氯化鈉0.5％、葡萄糖0.2％、PH7.2-7.6；溫度25-30℃、時間22-24小時；凝結(jié)芽孢桿菌酵母膏1.0％、蛋白胨1.0％、葡萄糖0.6％、磷酸二氫鉀0.2％、硫酸錳0.1％、硫酸鎂0.11％、PH7.0；溫度25-30℃、時間22-24；費氏丙酸菌玉米槳0.5％、葡萄糖0.2％、磷酸銨0.02％、K2HPO40.08％、CoCl2(0.1％取0.04ml)蒸溜水100ml、PH6.8-7.0、溫度25-30時間24-28小時；嗜酸乳桿菌蛋白胨1.0％、牛肉膏1.0％、酵母膏0.5％葡萄糖2％、K2HPO40.2％、醋酸鈉0.5％、檸檬酸二鈉0.2％、MgSO4·7H2O 0.2％、MnSO4·4H2O 0.1％、奶粉1％、吐溫80.1％、PH6.0-6.5、溫度38-39℃、培養(yǎng)4-8小時；淀粉乳桿菌可溶性淀粉2.0％、MgSO4·7H2O 0.05％、KNO30.1％、FeSO40.001％、NaCL 0.05％、K2HPO40.05％、PH7.2-7.4、溫度25-30℃、時間26-28小時；酵母菌產(chǎn)朊假絲酵母Candida utilis；糖化酵母Saccharomycesdiastaticus斜面培養(yǎng)基蛋白胨1.0％、酵母粉0.5％、葡萄糖2.0％、PH6.5或自然PH；釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae斜面培養(yǎng)基5％玉米水解液加MgSO4·7H2O 0.3％、K2HPO40.15％、CaCO30.5％、酵母粉0.5％、PH5-6、時間24小時；霉菌斜臥青霉Penicillum decumbers斜面培養(yǎng)基土豆20％、蔗糖2％、K2HPO40.3％、MgSO4·7H2O 0.15％、瓊脂2.0％、PH6.0；
發(fā)酵培養(yǎng)基NaNO30.3％、KCl 0.05％、K2HPO40.1％、FeSO40.001％、蔗糖3％、MgSO4·7H2O 0.05％、PH6.7、時間48-56小時；米根霉斜面培養(yǎng)基同斜臥青霉；米根霉Rhizopus oryzar發(fā)酵培養(yǎng)基Vogel′s液4％、半纖維素1％、微量元素0.01％(2NHcl 5ml、FeSO40.25g、MnSO4H2O 0.98g、Zndl20.83g、CoCl21.0g蒸溜水100ml)、溫度28-30、時間2天；黑曲霉Aspergillus niger斜面培養(yǎng)基NaNO30.3％、KCl0.05％、K2HPO40.1％、FeSO40.001％、蔗糖3.0％、MgSO4·7H2O0.05％、瓊脂2.0％PH6.7、時間28-32小時；發(fā)酵培養(yǎng)基Vogel′s母液4％、微晶纖維素1％、微量元素0.01；其配方同米根霉；(4)搖管從長好的斜面菌種中取一環(huán)接入已殺菌裝有10ml液體培養(yǎng)基試管中，除嗜酸乳桿菌、費氏丙酸菌靜止培養(yǎng)外，其余菌種在25-38℃條件下?lián)u床培養(yǎng)1-2天；(5)三角瓶培養(yǎng)用500ml三角瓶裝入相應(yīng)的培養(yǎng)基100-120ml殺菌后，將搖培好的試管在酒精燈下倒入三角瓶中25-38℃搖培1-2天；(6)上罐擴大培養(yǎng)將各菌種所需相應(yīng)的液體培養(yǎng)基配制后，高壓滅菌0.1MPa、時間20-50分鐘，冷卻到30-38℃用無菌操作，將已培養(yǎng)好的三角瓶菌種接入罐中，接種量為2-10％、在25-38℃條件下，通風(fēng)或不通風(fēng)培養(yǎng)，通風(fēng)培養(yǎng)8-12m3/h，罐壓0.01-0.08Mpa，培養(yǎng)時間18-24小時，不通風(fēng)需隔4-5小時攪拌一次。
各菌種的配比將培養(yǎng)好的細(xì)菌按1∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1配合成細(xì)菌發(fā)酵劑，將培養(yǎng)好的酵母菌按1∶1∶0.5本合成酵母發(fā)酵劑，將培養(yǎng)好的霉菌按1∶1∶1制成霉菌發(fā)酵劑，將三種發(fā)酵劑按0.5∶1∶1；0.5∶2∶1；0.5∶3∶1；1∶0.5∶1；1∶1∶1；1∶2∶1；1∶3∶1；2∶0.5∶1；2∶1∶1；2∶3∶1配成不同的比例菌種作為精飼料發(fā)酵的發(fā)酵劑；將農(nóng)作物玉米400-600Kg、葵餅150-200Kg、葫麻餅50-150Kg、豆餅50-150Kg、麩皮30-80Kg、秸桿粉30-50Kg、礦物質(zhì)20-50Kg、尿素2.5-10Kg等原料粉碎后，經(jīng)20目過篩后，配合拌勻，加水量為40-50％，加水后潤料1小時，潤好的原料按1000Kg添加100L混合好的發(fā)酵劑，原料與水的混合比例為1∶0.5-1，混合均勻后裝袋發(fā)酵，每袋裝20-40kg，發(fā)酵時間可根據(jù)菌種而定，如用自然發(fā)酵夏天4-7天，春秋天12-17天，冬天1-2個月，發(fā)酵后即為成品。
本發(fā)明具有如下特點1、產(chǎn)生有機酸主要為乳酸，直接參與機體代謝，供給能量；2、無殘留、無毒害、不產(chǎn)生抗藥性；3、防止和治療腹瀉；4、降低腸道內(nèi)PH值，抑制腐敗菌生長，激活蛋白酶；5、提高免疫力并保持腸道生態(tài)平穩(wěn)；6、增加奶的產(chǎn)量和質(zhì)量；7、改善飼料風(fēng)味；8、增強食欲，提高進食量。
四、發(fā)明效果多菌種微生物菌群使奶牛瘤胃益生菌大量增加。使微生物發(fā)酵奶牛精飼料具有香味，適用性好，無明顯換料期，對奶牛的產(chǎn)奶量沒有明顯的影響。奶牛體質(zhì)明顯提高，表現(xiàn)為奶牛毛色光澤，糞便正常，奶牛的泌乳產(chǎn)量穩(wěn)定，經(jīng)一般飼料飼喂的奶牛產(chǎn)奶量日均提高0.5-1Kg，并且有利于延長泌乳期。促進奶牛產(chǎn)后恢復(fù)，一般奶牛產(chǎn)后需半個月以上才能恢復(fù)，而飼喂多菌種微生物發(fā)酵奶牛精飼料的奶牛只需3-8天即可恢復(fù)體質(zhì)，提前進入旺奶期。
多菌種微生物發(fā)酵奶牛精飼料已達無公害綠色飼料的標(biāo)準(zhǔn)。一般飼料中都需添加激素和抗生素等添加劑，長期積累奶牛體內(nèi)，嚴(yán)重影響牛的食用安全性，而發(fā)酵微生物菌群中具有腸道益生菌群，對奶牛無任何副作用，并會促進消化吸收，抑制腸道致病菌滋生，達到予防疫和增強奶牛抵抗力和作用。在喂養(yǎng)實驗中，雖然在多菌種微生物發(fā)酵奶牛精飼料沒有添加抗生素等添加劑，食用實驗組奶牛在實驗期從未見脹肚、腹瀉現(xiàn)象。而對照組經(jīng)常出現(xiàn)牛脹肚和腹瀉癥狀。乳腺炎是奶牛的常見病，該病會明顯影響奶牛的產(chǎn)奶量，并需要使用抗生素，而飼喂多菌種微生物發(fā)酵奶牛精飼料期間的實驗?zāi)膛]發(fā)生乳腺炎。所以本發(fā)明的產(chǎn)品可達到綠色飼料的要求，實現(xiàn)安全飼養(yǎng)。
節(jié)約糧食提高飼料利用率。多菌種微生物發(fā)酵奶牛精飼料中，用秸桿粉替代3％-5％的糧食，實現(xiàn)了節(jié)糧的目的，并且發(fā)酵飼料具有獨特的酸香味和滋味，增加奶牛的食欲，進食速度明顯提高，采食時間縮短到了3-10分鐘，即可將所有飼喂的發(fā)酵飼料食凈，沒有殘留，提高飼料利用率15％，減少飼料浪費，而且經(jīng)對飼料進行分析粗蛋白提高20％-25％，粗纖維降低10％-15％，飼料成本大大降低，企業(yè)效益明顯。
多菌種微生物發(fā)酵奶牛精飼料有明顯的經(jīng)濟效益(1)對于用戶來講，目前一般精飼料的價格在0.6-0.8元/500克，而飼喂相同能量的多菌種微生物發(fā)酵奶牛精飼料的成本在0.5元/500克。每日每頭奶牛平均食用10Kg發(fā)酵精飼料，即可節(jié)約成本2-6元。且飼喂多菌種微生物發(fā)酵奶牛精飼料，奶牛日增產(chǎn)0.5-1Kg鮮奶，年增加收入274.5-509元。兩項合計每頭奶牛中每年可增加收入1004.5-2179元，經(jīng)濟效益非常明顯。
(2)對生產(chǎn)者來講，按每日100噸產(chǎn)量計可創(chuàng)收2-6萬元，如果按投入1000萬元，投資回收期，以最保守計算不足兩年，效益更明顯。
五具體實施例方式(本發(fā)明的最佳實施例)發(fā)酵劑的制作步驟如下原斜面菌種→純種分離→接入斜面→搖管培養(yǎng)→三角瓶擴大培養(yǎng)→上罐培養(yǎng)→將十四種菌種發(fā)酵產(chǎn)物按不同的比例混合均勻→發(fā)酵劑。
多菌種微生物發(fā)酵劑的制作方法及其在奶牛精飼料中的應(yīng)用，其特征在于發(fā)酵劑的制作步驟如下菌種培養(yǎng)(1)原斜面菌種1)8種細(xì)菌雙氮纖維單胞細(xì)胞Cellulomnas biazotea；產(chǎn)黃纖維單胞細(xì)胞Cellulominas flavigena；枯草桿菌10264 Bacillus subtilis；凝結(jié)芽孢干菌Bacillus coagulans；嗜酸乳桿菌Lactobacillus acidophilus；淀粉乳桿菌Lactobacillusamylophllus；費氏丙酸桿菌propionibacterium freudenreichii，枯草芽子胞干菌Bacillus subtilis TO13055；2)3種酵母菌產(chǎn)朊假絲酵母Candida utilis；糖化酵母Saccharomyces diastaticus；釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae3)3種霉菌斜臥青霉Penicillium decumbers、米根霉Rhizopusoryzar、黑曲霉Aspergillus niger；(2)純種分離從原斜面菌種取1環(huán)放入殺過菌且裝有玻璃珠和100ml水的三角瓶中搖勻，以無菌操作，用無菌吸管取1ml放入已殺菌并裝有培養(yǎng)基的平皿中，用無菌玻璃刮刀將菌液刮勻，并用該刮刀連續(xù)刮入第二、第三、第四、第五個相同的平皿即為不同的稀釋分離平皿，放入25-38℃保溫箱中培養(yǎng)；(3)斜面培養(yǎng)雙氮纖維單孢菌，產(chǎn)黃纖維單孢菌，用稻草粉培養(yǎng)基稻草3-5％煮沸10分鐘加酵母粉少許，自然PH；枯草桿菌10264、枯草芽孢桿菌TQ13055，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，牛肉膏0.5％蛋白胨1％、氯化鈉0.5％、PH7.2-7.6；凝結(jié)芽孢桿菌酵母粉0.8％、蛋白胨1％、葡萄糖0.7％、磷酸二氫鉀0.18％、硫酸鎂0.11％、PH7.0-7.2；費氏丙酸菌酵母粉0.8％、蛋白胨1％、蔗糖1.5％、磷酸銨0.4-0.6％、PH6.8-7.0；嗜酸乳桿菌脫脂奶粉10％、糖5％、加瓊脂1.5-2％、自然PH、溫度38-39℃、培養(yǎng)4-8小時；淀粉乳桿菌酵母膏1％、蛋白胨1.0％、(NH4)2SO4 0.5％、蔗糖2.0％、PH7.2-7.4；將平皿中長出的單個菌落各取一種接入相應(yīng)培養(yǎng)基中，液體培養(yǎng)基加瓊脂1.5-2％ 125℃殺菌后接菌，在25-35℃條件下靜止培養(yǎng)培養(yǎng)20-40小時，放入4℃冰箱保存；發(fā)酵培養(yǎng)基雙氮纖維單胞菌、產(chǎn)黃纖維單孢菌、發(fā)酵培養(yǎng)基草粉2％、麩皮0.5％、粉酵母0.5％；PH72-7.4、溫度28-30℃、培養(yǎng)20-22小時；枯草芽孢桿菌10264 TQ13055牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，牛肉膏0.5％、蛋白胨1％、氯化鈉0.5％、葡萄糖0.2％、PH7.2-7.6；溫度25-30℃、時間22-24小時；凝結(jié)芽孢桿菌酵母膏1.0％、蛋白胨1.0％、葡萄糖0.6％、磷酸二氫鉀0.2％、硫酸錳0.1％、硫酸鎂0.11％、PH7.0；溫度25-30℃、時間22-24；費氏丙酸菌玉米槳0.5％、葡萄糖0.2％、磷酸銨0.02％、K2HPO40.08％、CoCl2(0.1％取0.04ml)蒸溜水100ml、PH6.8-7.0、溫度25-30時間24-28小時；嗜酸乳桿菌蛋白胨1.0％、牛肉膏1.0％、酵母膏0.5％葡萄糖2％、K2HPO40.2％、醋酸鈉0.5％、檸檬酸二鈉0.2％、MgSO4·7H2O 0.2％、MnSO4·4H2O 0.1％、奶粉1％、吐溫80.1％、PH6.0-6.5、溫度38-39℃、培養(yǎng)4-8小時；淀粉乳桿菌可溶性淀粉2.0％、MgSO4·7H2O 0.05％、KNO30.1％、FeSO40.001％、NaCL 0.05％、K2HPO40.05％、PH7.2-7.4、溫度25-30℃、時間26-28小時；酵母菌產(chǎn)朊假絲酵母Candida utilis；糖化酵母Saccharomyces斜面培養(yǎng)基蛋白胨1.0％、酵母粉0.5％、葡萄糖2.0％、PH6.5或自然PH；釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae斜面培養(yǎng)基5％玉米水解液加MgSO4·7H2O 0.3％、K2HPO40.15％、CaCO30.5％、酵母粉0.5％、PH5-6、時間24小時；霉菌斜臥青霉Penicillum decumbers斜面培養(yǎng)基土豆20％、蔗糖2％、K2HPO40.3％、MgSO4·7H2O 0.15％、瓊脂2.0％、PH6.0發(fā)酵培養(yǎng)基NaNO30.3％、KCl 0.05％、K2HPO40.1％、FeSO40.001％、蔗糖3％、MgSO4·7H2O 0.05％、PH6.7、時間48-56小時；米根霉斜面培養(yǎng)基同斜臥青霉米根霉Rhizopus oryzar發(fā)酵培養(yǎng)基Vogel′s母液4％、半纖維素1％、微量元素0.01％(2NHCl 5ml、FeSO40.25g、MnSO4H2O 0.98g、Zndl20.83g、CoCl21.0g蒸溜水100ml)、溫度28-30、時間2天；黑曲霉Aspergillus niger斜面培養(yǎng)基NaNO30.3％、KCl0.05％、K2HPO40.1％、FeSO40.001％、蔗糖3.0％、MgSO4·7H2O0.05％、瓊脂2.0％PH6.7、時間28-32小時；發(fā)酵培養(yǎng)基Vogel′s母液4％、微晶纖維素1％、微量元素0.01；其配方同米根霉；(4)搖管從長好的斜面菌種中取一環(huán)接入已殺菌裝有10ml液體培養(yǎng)基試管中，除嗜酸乳桿菌、費氏丙酸菌靜止培養(yǎng)外，其余菌種在25-38℃條件下?lián)u床培養(yǎng)1-2天；(5)三角瓶培養(yǎng)用500ml三角瓶裝入相應(yīng)的培養(yǎng)基100-120ml殺菌后，將搖培好的試管在酒精燈下倒入三角瓶中25-38℃搖培1-2天；
(6)上罐擴大培養(yǎng)將各菌種所需相應(yīng)的液體培養(yǎng)基配制后，高壓滅菌0.1MPa、時間20-50分鐘，冷卻到30-38℃用無菌操作，將已培養(yǎng)好的三角瓶菌種接入罐中，接種量為2-10％、在25-38℃條件下，通風(fēng)或不通風(fēng)培養(yǎng)，通風(fēng)培養(yǎng)8-12m3/h，罐壓0.01-0.08Mpa，培養(yǎng)時間18-24小時，不通風(fēng)需隔4-5小時攪拌一次。
各菌種的配比將培養(yǎng)好的細(xì)菌按1∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1配合成細(xì)菌發(fā)酵劑，將培養(yǎng)好的酵母菌按1∶1∶0.5本合成酵母發(fā)酵劑，將培養(yǎng)好的霉菌按1∶1∶1制成霉菌發(fā)酵劑，將三種發(fā)酵劑按0.5∶1∶1；0.5∶2∶1；0.5∶3∶1；1∶0.5∶1；1∶1∶1；1∶2∶1；1∶3∶1；2∶0.5∶1；2∶1∶1；2∶3∶1配成不同的比例菌種作為精飼料發(fā)酵的發(fā)酵劑；實施例一生產(chǎn)1000kg多菌種微生物發(fā)酵劑的制作方法及其在奶牛精飼料中的應(yīng)用將農(nóng)作物玉米410Kg、葵餅160Kg、葫麻餅135Kg、豆餅130Kg、麩皮70Kg、秸桿粉50Kg、礦物質(zhì)40Kg(包括CaCO340-60％、CaHPO4·2H2O15-25％、NaCl20-30％、MgSO4·7H2O0.3-0.8％、Se20-70PPm、I1000-150PPm、Co20-30PPm、Mn0.05-0.15％)、尿素5Kg等原料粉碎后，經(jīng)20目過篩后，加水量為100Kg加水后潤料1小時，潤好的原料按1000Kg添加100L混合好的發(fā)酵劑，原料與水的混合比例為1∶0.5-1，混合均勻后裝袋發(fā)酵，每袋裝20-40kg，發(fā)酵時間可根據(jù)菌種而定，如用自然發(fā)酵夏天4-7天，春秋天12-17天，冬天1-2個月，發(fā)酵后即為成品。
成品性狀顏色金黃色或原料原色，有酸香味質(zhì)地柔軟；精飼料發(fā)酵后粗蛋白18-22％、粗纖維6-12％、灰分7-8％、水分45-50％、磷0.7-0.9％、鈣1.15-1.30％；各種酶含量纖維素酶98-105％單位/g、半纖維素酶18-21單位/g、果膠酶50-93單位/g、蛋白酶850-950單位/g、葡聚糖苷酶60-70單位/g。
實施例二生產(chǎn)1000kg多菌種微生物發(fā)酵劑的制作方法及其在奶牛精飼料中的應(yīng)用將農(nóng)作物玉米500Kg、葵餅170Kg、葫麻餅100Kg、豆餅100Kg、麩皮50Kg、秸桿粉40Kg、礦物質(zhì)32Kg(包括CaCO340-60％、CaHPO4·2H2O15-25％、NaCl20-30％、MgSO4·7H2O0.3-0.8％、Se20-70PPm、I100-150PPm、Co20-30PPm、Mn0.05-0.15％)、尿素8Kg等原料粉碎后，經(jīng)20目過篩后，加水量為100Kg加水后潤料1小時，潤好的原料按1000Kg添加100L混合好的發(fā)酵劑，原料與水的混合比例為1∶0.5-1，混合均勻后裝袋發(fā)酵，每袋裝20-40kg，發(fā)酵時間可根據(jù)菌種而定，如用自然發(fā)酵夏天4-7天，春秋天12-17天，冬天1-2個月，發(fā)酵后即為成品。
實施例三生產(chǎn)1000kg多菌種微生物發(fā)酵劑的制作方法及其在奶牛精飼料中的應(yīng)用將農(nóng)作物玉米550Kg、葵餅180Kg、葫麻餅60Kg、豆餅73Kg、麩皮60Kg、秸桿粉40Kg、礦物質(zhì)30Kg(包括CaCO340-60％、CaHPO4·2H2O15-25％、NaCl20-30％、MgSO4·7H2O0.3-0.8％、Se20-70PPm、I1000-150PPm、Co20-30PPm、Mn0.05-0.15％)、尿素3Kg等原料粉碎后，經(jīng)20目過篩后，加水量為100Kg加水后潤料1小時，潤好的原料按1000Kg添加100L混合好的發(fā)酵劑，原料與水的混合比例為1∶0.5-1，混合均勻后裝袋發(fā)酵，每袋裝20-40kg，發(fā)酵時間可根據(jù)菌種而定，如用自然發(fā)酵夏天4-7天，春秋天12-17天，冬天1-2個月，發(fā)酵后即為成品。
權(quán)利要求
1.一種多菌種微生物發(fā)酵劑的制作方法及其在奶牛精飼料中的應(yīng)用，其特征在于發(fā)酵劑的制作步驟如下菌種培養(yǎng)(1)原斜面菌種1)8種細(xì)菌雙氮纖維單胞細(xì)胞Cellulomnasbiazotea；產(chǎn)黃纖維單胞細(xì)胞Cellulominas flavigena；枯草桿菌10264Bacillus subtilis；凝結(jié)芽孢干菌Bacillus coagulans；嗜酸乳桿菌Lactobacillus acidophilus；淀粉乳桿菌Lactobacillus amylophllus；費氏丙酸桿菌propionibacterium freudenreichii，枯草芽胞桿菌Bacillus subtilis TO13055；2)3種酵母菌產(chǎn)朊假絲酵母Candida utilis；糖化酵母Saccharomyces diastaticus；釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae；3)3種霉菌斜臥青霉Penicillium decumbers；米根霉Rhizopusoryzar；黑曲霉Aspergillus niger；(2)純種分離從原斜面菌種取1環(huán)放入殺過菌且裝有玻璃珠和100ml水的三角瓶中搖勻，以無菌操作，用無菌吸管取1ml放入已殺菌并裝有培養(yǎng)基的平皿中，用無菌玻璃刮刀將菌液刮勻，并用該刮刀連續(xù)刮第二、第三、第四、第五個相同的平皿即為不同的稀釋分離平皿，放入25-38℃保溫箱中培養(yǎng)；(3)斜面培養(yǎng)雙氮纖維單孢菌，產(chǎn)黃纖維單孢菌，用稻草粉培養(yǎng)基稻草3-5％煮沸10分鐘加酵母粉少許，自然PH；枯草桿菌10264、枯草芽孢桿菌TQ13055，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，牛肉膏0.5％蛋白胨1％、氯化鈉0.5％、PH 7.2-7.6；凝結(jié)芽孢桿菌酵母粉0.8％、蛋白胨1％、葡萄糖0.7％、磷酸二氫鉀0.18％、硫酸鎂0.11％、PH7.0-7.2；費氏丙酸菌酵母粉0.8％、蛋白胨1％、蔗糖1.5％、磷酸銨0.4-0.6％、PH6.8-7.0；嗜酸乳桿菌脫脂奶粉10％、糖5％、加瓊脂1.5-2％、自然PH、溫度38-39℃、培養(yǎng)4-8小時；淀粉乳桿菌酵母膏1％、蛋白胨1.0％、(NH4)2SO40.5％、蔗糖2.0％、PH7.2-7.4；將平皿中長出的單個菌落各取一種接入相應(yīng)培養(yǎng)基中，液體培養(yǎng)基加瓊脂1.5-2％，125℃殺菌后接菌，在25-35℃條件下靜止培養(yǎng)20-40小時，放入4℃冰箱保存；發(fā)酵培養(yǎng)基雙氮纖維單胞菌、產(chǎn)黃纖維單孢菌、發(fā)酵培養(yǎng)基草粉2％、麩皮0.5％、粉酵母0.5％；PH 72-7.4、溫度28-30℃、培養(yǎng)20-22小時；枯草芽孢桿菌10264 TQ13055牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，牛肉膏0.5％、蛋白胨1％、氯化鈉0.5％、葡萄糖0.2％、PH 7.2-7.6；溫度25-30℃、時間22-24小時；凝結(jié)芽孢桿菌酵母膏1.0％、蛋白胨1.0％、葡萄糖0.6％、磷酸二氫鉀0.2％、硫酸錳0.1％、硫酸鎂0.11％、PH 7.0；溫度25-30℃、時間22-24；費氏丙酸菌玉米槳0.5％、葡萄糖0.2％、磷酸銨0.02％、K2HPO40.08％、CoCl2(0.1％取0.04ml)蒸溜水100ml、PH 6.8-7.0、溫度25-30時間24-28小時；嗜酸乳桿菌蛋白胨1.0％、牛肉膏1.0％、酵母膏0.5％葡萄糖2％、K2HPO40.2％、醋酸鈉0.5％、檸檬酸二鈉0.2％、MgSO4·7H2O 0.2％、MnSO4·4H2O 0.1％、奶粉1％、吐溫80.1％、PH6.0-6.5、溫度38-39℃、培養(yǎng)4-8小時；淀粉乳桿菌可溶性淀粉2.0％、MgSO4·7H2O 0.05％、KNO30.1％、FeSO40.001％、NaCL 0.05％、K2HPO40.05％、PH 7.2-7.4、溫度25-30℃、時間26-28小時；酵母菌產(chǎn)朊假絲酵母Candida utilis；糖化酵母Saccharomyces斜面培養(yǎng)基蛋白胨1.0％、酵母粉0.5％、葡萄糖2.0％、PH 6.5或自然PH；釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae斜面培養(yǎng)基5％玉米水解液加MgSO4·7H2O 0.3％、K2HPO40.15％、CaCO30.5％、酵母粉0.5％、PH 5-6、時間24小時；霉菌斜臥青霉Penicillum decumbers斜面培養(yǎng)基土豆20％、蔗糖2％、K2HPO40.3％、MgSO4·7H2O 0.15％、瓊脂2.0％、PH6.0；發(fā)酵培養(yǎng)基NaNO30.3％、KCl 0.05％、K2HPO40.1％、FeSO40.001％、蔗糖3％、MgSO4·7H2O 0.05％、PH 6.7、時間48-56小時；米根霉斜面培養(yǎng)基同斜臥青霉米根霉Rhizopus oryzar發(fā)酵培養(yǎng)基Vogel′s母液4％、半纖維素1％、微量元素0.01％ NHCl 5ml、FeSO40.25g、MnSO4H2O 0.98g、Zndl20.83g、CoCl21.0g蒸溜水100ml、溫度28-30、時間2天；黑曲霉Aspetgillus niger斜面培養(yǎng)基NaNO30.3％、KCl0.05％、K2HPO40.1％、FeSO40.001％、蔗糖3.0％、MgSO4·7H2O0.05％、瓊脂2.0％PH 6.7、時間28-32小時；發(fā)酵培養(yǎng)基Vogel′s母液4％、微晶纖維素1％、微量元素0.01；其配方同米根霉；(4)搖管從長好的斜面菌種中取一環(huán)接入已殺菌裝有10ml液體培養(yǎng)基試管中，除嗜酸乳桿菌、費氏丙酸菌靜止培養(yǎng)外，其余菌種在25-38℃條件下?lián)u床培養(yǎng)1-2天；(5)三角瓶培養(yǎng)用500ml三角瓶裝入相應(yīng)的培養(yǎng)基100-120ml殺菌后，將搖培好的試管在酒精燈下倒入三角瓶中25-38℃搖培1-2天；(6)上罐擴大培養(yǎng)將各菌種所需相應(yīng)的液體培養(yǎng)基配制后，高壓滅菌0.1MPa、時間20-50分鐘，冷卻到30-38℃用無菌操作，將已培養(yǎng)好的三角瓶菌種接入罐中，接種量為2-10％、在25-38℃條件下，通風(fēng)或不通風(fēng)培養(yǎng)，通風(fēng)培養(yǎng)8-12m3/h，罐壓0.01-0.08Mpa，培養(yǎng)時間18-24小時，不通風(fēng)需隔4-5小時攪拌一次。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種多菌種微生物發(fā)酵劑的制作方法及其在奶牛精飼料中的應(yīng)用，其特征在于各菌種的配比將培養(yǎng)好的細(xì)菌按1∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1配合成細(xì)菌發(fā)酵劑，將培養(yǎng)好的酵母菌按1∶1∶0.5本合成酵母發(fā)酵劑，將培養(yǎng)好的霉菌按1∶1∶1制成霉菌發(fā)酵劑，將三種發(fā)酵劑按0.5∶1∶1；0.5∶2∶1；0.5∶3∶1；1∶0.5∶1；1∶1∶1；1∶2∶1；1∶3∶1；2∶0.5∶1；2∶1∶1；2∶3∶1配成不同的比例菌種作為精飼料發(fā)酵的發(fā)酵劑；
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種多菌種微生物發(fā)酵劑的制作方法及其在奶牛精飼料中的應(yīng)用，其特征在于將農(nóng)作物玉米400-600Kg、葵餅150-200Kg、葫麻餅50-150Kg、豆餅50-150Kg、麩皮30-80Kg、秸桿粉30-50Kg、礦物質(zhì)20-50Kg、尿素2.5-10Kg等原料粉碎后，經(jīng)20目過篩后，配合拌勻，加水量為40-50％，加水后潤料1小時，潤好的原料按1000Kg添加100L混合好的發(fā)酵劑，原料與水的混合比例為1∶0.5-1，混合均勻后裝袋發(fā)酵，每袋裝20-40kg，發(fā)酵時間可根據(jù)菌種而定，如用自然發(fā)酵夏天4-7天，春秋天12-17天，冬天1-2個月，發(fā)酵后即為成品。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種多菌種微生物發(fā)酵劑的制作方法及其在奶牛精飼料中的應(yīng)用，屬于生物工程中微生物發(fā)酵領(lǐng)域。本發(fā)明采用多種微生物菌種按比例組合制作成發(fā)酵劑，原料與秸稈混合均勻拌入活化后的發(fā)酵劑，裝入容器進行發(fā)酵后即成成品。本發(fā)明發(fā)酵劑制作的飼料，或使奶牛產(chǎn)奶量日均提高0.5－1Kg，延長泌乳期；奶牛產(chǎn)后恢復(fù)快，提前進入旺奶期，消化吸收快，抑制腸道致病菌滋生；具有獨特的酸香味增加奶牛的食欲，進食速度提高，沒有殘留，提高飼料利用率15％。經(jīng)對飼料進行分析粗蛋白提高20％－25％,粗纖維降低10％－15％，飼料成本大大降低，企業(yè)效益明顯。本發(fā)明的產(chǎn)品可達到綠色飼料的要求，實現(xiàn)安全飼養(yǎng)。
文檔編號A23K1/18GK1570082SQ20041003761
公開日2005年1月26日 申請日期2004年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月27日
發(fā)明者方向東, 丁友昉, 秦剛 申請人:包頭市天賦食品有限公司