專利名稱：長筒石蒜快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用組織培養(yǎng)快速繁殖長筒石蒜的方法，特別是一種用自制培養(yǎng)基先誘導(dǎo)長筒石蒜產(chǎn)生不定芽，進(jìn)而誘導(dǎo)小鱗莖的發(fā)生。
背景技術(shù)：
石蒜屬植物約有20種，我國有15種，占全球總數(shù)的分四分之三。該屬植物花色艷麗，花型奇特，是頗有發(fā)展前途的鮮切花材料；冬春地被凋零，一片枯黃，而石蒜屬植物卻茁壯生長，為大地蓋上了一層綠色的地毯，在寒風(fēng)中顯得生機(jī)盎然，是長江中下游地區(qū)不可多得的冬春的地被植物，同時石蒜屬植物鱗莖含有石蒜堿，是治療老年癡呆疾病的良藥。石蒜屬植物的繁殖除種子繁殖外，主要依靠自然分球、鱗片繁殖等，繁殖系數(shù)較低，難以滿足市場需求。
我國臺灣省對當(dāng)?shù)胤植嫉膬蓚€種，即忽地笑(Lycoris aurea_)和石蒜(L.radiata)研究較多，通過設(shè)施栽培進(jìn)行工廠化生產(chǎn)，每年向日本和東南亞各地出口數(shù)以百萬計的忽地笑和石蒜的鮮切花。黃麗春(1989)采用忽地笑雙鱗片法為外植體，在MS+BA30mg/L+NAA30mg/L培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)3個月，再繼代于MS+BA10mg/L+NAA3mg/L的培養(yǎng)基上光培養(yǎng)，將小鱗莖轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根形成完整小植株，培養(yǎng)時間長，增殖速度慢，未能進(jìn)入規(guī)?；a(chǎn)。
長筒石蒜(Lycoris longituba)為石蒜屬植物的一個種，原產(chǎn)我國，花色和花型的變異在石蒜屬植物中是最為豐富的，有的花大而形似百合，有的呈現(xiàn)長筒喇叭狀，花色有白色、乳黃色、深黃色、淡紫色、淡綠色或白色帶紅條、紫色帶藍(lán)暈等，花梗粗壯挺拔，是理想的切花材料。本申請人已收集了大量的長筒石蒜的種質(zhì)資源，并采用組織培養(yǎng)方法大量繁殖的鱗莖，為快速繁殖種球提供了有效途徑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種能夠快速生產(chǎn)小鱗莖的長筒石蒜繁殖方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是一種長筒石蒜繁殖方法，其特征在于該方法包括以下步驟1、將長筒石蒜鱗莖接種于含有6-芐基嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)的基本培養(yǎng)基MS(MuraShige Skoog)上誘導(dǎo)不定芽；2、將已產(chǎn)生的不定芽長筒石蒜鱗莖轉(zhuǎn)接于含有蔗糖、萘乙酸和6-芐基嘌呤的基本培養(yǎng)基或含有蔗糖、玉米素(ZT)和6-芐基嘌呤的基本培養(yǎng)基上誘導(dǎo)小鱗莖；3、將已展葉的小鱗莖置于瓊脂上，并光照下誘導(dǎo)生根；4、將已生根的鱗莖即再生植株移栽于培養(yǎng)土上，噴水。
其中在步驟1中所述誘導(dǎo)不定芽的培養(yǎng)基中6-芐基嘌呤的濃度為0.5-2.0mg/L，萘乙酸的濃度為0.01-0.5mg/L。
在步驟2中當(dāng)將已產(chǎn)生的不定芽長筒石蒜鱗莖轉(zhuǎn)接于含有蔗糖、萘乙酸和6-芐基嘌呤的基本培養(yǎng)基上時，6-芐基嘌呤的濃度為0.5-5.0mg/L，萘乙酸的濃度為0.1-0.5mg/L；轉(zhuǎn)接于含有蔗糖、玉米素和6-芐基嘌呤的基本培養(yǎng)基上時，玉米素的濃度為0.1-1.0mg/L，6-芐基嘌呤的濃度為3.5-7.5mg/L。誘導(dǎo)小鱗莖的培養(yǎng)基中添加茉莉酸甲酯，其濃度為0.1-1.0mg/L。誘導(dǎo)小鱗莖的培養(yǎng)基中蔗糖濃度從3％增加到4-7.5％，提高培養(yǎng)基的滲透壓。
在步驟3中所述瓊脂的含量為0.5-0.7％，pH值為5.7-5.8。
在步驟4中所述的光照時間為14-16小時、光照強(qiáng)度1200-1300Lux，溫度25～28℃。所述的光為紅光和藍(lán)光。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其顯著優(yōu)點是本發(fā)明以長筒石蒜帶莖盤鱗片為外植體，采用“兩步法”，即先誘導(dǎo)不定芽，進(jìn)而誘導(dǎo)小鱗莖的發(fā)生。以MS為基本培養(yǎng)基，附加不同種類和濃度的植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)誘導(dǎo)小鱗莖。通過本方法小鱗莖(芽)每20天增殖率可達(dá)480％，一年可生產(chǎn)百萬個小鱗莖。
具體實施例方式
下面的實施例可以使本領(lǐng)域技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
實施例1選用生長健壯的長筒石蒜鱗莖，剝?nèi)[莖外褐色鱗皮及干鱗片，切除球頸及根系，流水沖洗1～2小時，置于75％乙醇滅菌1分鐘，再用0.1％氯化汞溶液消毒15分鐘，無菌水沖洗5次。將鱗莖分割成6份，每份分別以4片鱗片為單位(帶有與鱗片基部相連接的基盤)接種于誘導(dǎo)不定芽的培養(yǎng)基MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L(BA濃度在0.5-2.0mg/L均可，NAA濃度在0.01-0.5mg/L均可)，不定芽產(chǎn)生后，轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)小鱗莖的培養(yǎng)基MS+NAA0.1(可至0.5)mg/L+6-BA5.0(可至0.5)mg/L+6％蔗糖濃度；將已展葉的小鱗莖置于生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根，瓊脂0.6％(可在0.5-0.7％范圍內(nèi))，pH5.7或5.8，每日光照14-16小時，光照強(qiáng)度1200-1300Lux，溫度25～28℃。再生植株移栽于市售培養(yǎng)土，每日噴水兩次，促進(jìn)小苗生長。
實施例2按所述相同步驟重復(fù)進(jìn)行實施例1，但是將誘導(dǎo)小鱗莖的培養(yǎng)基更換為MS+ZT0.5(可在0.1-1.0范圍內(nèi))mg/L+6-BA5.0(可在3.5-7.5范圍內(nèi))mg/L+6％蔗糖濃度，可取得與實施例1相當(dāng)?shù)男Ч?br> 實施例3促進(jìn)小鱗莖迅速膨大是保證提早開花的重要條件。按所述相同步驟重復(fù)進(jìn)行實施例1，在誘導(dǎo)小鱗莖階段，在培養(yǎng)基中添加茉莉酸甲酯(濃度為0.1-1.0mg/L)等物質(zhì)進(jìn)行化學(xué)調(diào)控，可明顯促進(jìn)鱗莖膨大。
實施例4按所述相同步驟重復(fù)進(jìn)行實施例1，在誘導(dǎo)小鱗莖階段，提高培養(yǎng)基的滲透壓，可明顯促進(jìn)鱗莖膨大。將誘導(dǎo)小鱗莖的培養(yǎng)基中蔗糖濃度從3％增加到4-7.5％，以提高培養(yǎng)基的滲透壓。
實施例5按所述相同步驟重復(fù)進(jìn)行實施例1，在誘導(dǎo)小鱗莖階段，使用紅光或藍(lán)光進(jìn)行光照，有利于小鱗莖的增大。
權(quán)利要求
1.一種長筒石蒜快速繁殖方法，其特征是該方法包括以下步驟(1)將長筒石蒜鱗莖接種于含有6-芐基嘌呤和萘乙酸的基本培養(yǎng)基MS上誘導(dǎo)不定芽；(2)將已產(chǎn)生的不定芽長筒石蒜鱗莖轉(zhuǎn)接于含有蔗糖、萘乙酸和6-芐基嘌呤的基本培養(yǎng)基或含有蔗糖、玉米素和6-芐基嘌呤的基本培養(yǎng)基上誘導(dǎo)小鱗莖；(3)將已展葉的小鱗莖置于瓊脂上，并光照下誘導(dǎo)生根；(4)將已生根的鱗莖即再生植株移栽于培養(yǎng)土上，噴水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的長筒石蒜快速繁殖方法，其特征在于在步驟(1)中所述誘導(dǎo)不定芽的培養(yǎng)基中6-芐基嘌呤的濃度為0.5-2.0mg/L，萘乙酸的濃度為0.01-0.5mg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的長筒石蒜快速繁殖方法，其特征在于在步驟(2)中當(dāng)將已產(chǎn)生的不定芽長筒石蒜鱗莖轉(zhuǎn)接于含有蔗糖、萘乙酸和6-芐基嘌呤的基本培養(yǎng)基上時，6-芐基嘌呤的濃度為0.5-5.0mg/L，萘乙酸的濃度為0.1-0.5mg/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的長筒石蒜快速繁殖方法，其特征在于在步驟(2)中當(dāng)將已產(chǎn)生的不定芽長筒石蒜鱗莖轉(zhuǎn)接于含有蔗糖、玉米素和6-芐基嘌呤的基本培養(yǎng)基上時，玉米素的濃度為0.1-1.0mg/L，6-芐基嘌呤的濃度為3.5-7.5mg/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的長筒石蒜快速繁殖方法，其特征在于在步驟(2)中誘導(dǎo)小鱗莖的培養(yǎng)基中添加茉莉酸甲酯，其濃度為0.1-1.0mg/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的長筒石蒜快速繁殖方法，其特征在于在步驟(2)中誘導(dǎo)小鱗莖的培養(yǎng)基中蔗糖濃度從3％增加到4-7.5％，提高培養(yǎng)基的滲透壓。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的長筒石蒜快速繁殖方法，其特征在于在步驟(3)中所述瓊脂的含量為0.5-0.7％，pH值為5.7-5.8。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的長筒石蒜快速繁殖方法，其特征在于在步驟(4)中所述的光照時間為14-16小時、光照強(qiáng)度1200-1300Lux，溫度25～28℃。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的長筒石蒜快速繁殖方法，其特征在于在步驟(4)中所述的光為紅光和藍(lán)光。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種長筒石蒜繁殖方法，該方法以長筒石蒜帶莖盤鱗片為外植體，采用“兩步法”，即先誘導(dǎo)不定芽，進(jìn)而誘導(dǎo)小鱗莖的發(fā)生。以MS為基本培養(yǎng)基，附加不同種類和濃度的植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)誘導(dǎo)小鱗莖。通過本方法小鱗莖(芽)每20天增殖率可達(dá)480％，一年可生產(chǎn)百萬個小鱗莖。
文檔編號A01G7/00GK1596600SQ200410041719
公開日2005年3月23日 申請日期2004年8月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月18日
發(fā)明者王光萍, 黃敏仁, 陳英, 諸葛強(qiáng), 張露, 周堅, 王明庥, 蔡友銘, 滕士元, 徐立安 申請人:南京林業(yè)大學(xué)