專利名稱：茅蒼術(shù)組培繁殖的種質(zhì)保存方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物的種質(zhì)保存方法，特指茅蒼術(shù)組培繁殖的種質(zhì)保存技術(shù)。
背景技術(shù)：
茅蒼術(shù)(Atractylodes lancea(thunb.)DC)為菊科植物，是多年生草本植物。茅蒼術(shù)是道地中藥材，可用于治療消化不良、胃痛及夜盲癥等癥，科學(xué)研究正不斷豐富人類對它的藥理認(rèn)識。現(xiàn)在人們還利用它預(yù)防感冒和SARS、治療竇性心動過速、糖尿病、細(xì)菌性痢疾等上。
但是，由于生態(tài)環(huán)境的破壞和過去掠奪式的采挖，野生茅蒼術(shù)的資源日漸稀缺，已處于瀕危狀態(tài)。藥材市場上茅蒼術(shù)是有價(jià)無貨的。目前，全國各大藥材市場上均為北蒼術(shù)，其質(zhì)量和療效均遜于茅蒼術(shù)。除了保護(hù)茅蒼術(shù)的生境外，人工馴化和栽培就成為拯救茅蒼術(shù)資源的重要手段。目前的研究發(fā)現(xiàn)，野生茅蒼術(shù)具有多種類型，各種類型的產(chǎn)量和品質(zhì)具有較大的差異，因此栽培優(yōu)質(zhì)茅蒼術(shù)成為高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)栽培的關(guān)鍵。而選擇優(yōu)良無性系，保存優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源又是栽培優(yōu)質(zhì)茅蒼術(shù)的關(guān)鍵。
茅蒼術(shù)的繁殖主要通過兩種途徑一是有性繁殖，即通過種子繁衍下一代種苗；由于，野生茅蒼術(shù)具有多種類型，長期混栽，將會引起不同類型的茅蒼術(shù)之間的天然雜交，種質(zhì)資源迅速退化。另一種繁殖途徑是無性繁殖，即通過分根的方法，這類繁殖方法受季節(jié)性及自然條件的限制，同時(shí)一旦母株感染了病蟲害等，通過無性繁殖很快地造成病菌蔓延，也將使茅蒼術(shù)的產(chǎn)量和質(zhì)量受到很大影響。因此，很有必要利用組織培養(yǎng)技術(shù)來解決茅蒼術(shù)優(yōu)質(zhì)資源的種質(zhì)保存問題。但迄今未有茅蒼術(shù)優(yōu)質(zhì)資源的種質(zhì)保存成功的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，提供一種茅蒼術(shù)種質(zhì)保存技術(shù)，該技術(shù)不受自然條件或地區(qū)差異的限制，有利于種質(zhì)的長期保存，隨時(shí)能提供優(yōu)質(zhì)純化的種苗，且保存后栽培的幼苗生長快，能使茅蒼術(shù)達(dá)到優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案茅蒼術(shù)組培繁殖的種質(zhì)保存方法，包括選用無性系的根莖為外植體，在附加激素的MS培養(yǎng)基上直接誘導(dǎo)出芽，芽經(jīng)增殖、繼代、生根、試管苗移栽，完成優(yōu)質(zhì)資源的種質(zhì)保存過程，基本培養(yǎng)基選用MS附加蔗糖3％、瓊脂0.8％；芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)基選用MS+6-BA 2.0～3.0mg/l+NAA0.1～0.2mg/l；繼代培養(yǎng)基選用MS+6-BA 1.0mg/l+NAA0.05～0.1mg/l；生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.2mg/l或1/2MS+IBA1.0mg/l，pH5.4～5.8，常規(guī)高壓滅菌；試管苗培養(yǎng)條件選20±2℃；光照12h/d，光照強(qiáng)度1500～2000Lux。
上述方法可選用生殖生長期的根莖為外植體。
上述方法根莖的取材時(shí)期選擇進(jìn)人生殖生長期、植株開始結(jié)實(shí)的季節(jié)。
上述方法外植體選擇長度0.5-1.5厘米的根莖。
上述方法可以根據(jù)需要進(jìn)行繼代培養(yǎng)，常規(guī)情況應(yīng)每隔1-2月繼代培養(yǎng)一次。
試管苗的移栽選擇在生根培養(yǎng)10-15天后，小苗莖葉長4-6厘米時(shí)，在移栽前2-3天打開瓶蓋，待葉色加深，再移栽到溫室，開始一周使?jié)穸缺３衷?0％以上，其后使?jié)穸缺３衷?5％左右，10-15天后栽到露地，再經(jīng)一月定植田間。
與常規(guī)方法相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于1、與以種子進(jìn)行種質(zhì)保存的方法相比，本發(fā)明不受自然條件或地區(qū)差異的限制。種子繁殖受所在地區(qū)的氣候及地理?xiàng)l件的限制，而本發(fā)明是通過對營養(yǎng)體進(jìn)行組織培養(yǎng)獲得種苗，不受氣候條件的限制，由于組培苗能長期繼代培養(yǎng)保存，因此一旦需要可以隨時(shí)提供種苗。
2、方便保存后的栽培由于組培苗繁殖系數(shù)高，速度快，可以迅速提供優(yōu)質(zhì)苗，移栽后的苗的生長速度快，有利于大規(guī)模的栽培。
3、減少常規(guī)的無性系種質(zhì)保存的用地常規(guī)的無性系保存種質(zhì)需要占用一定的土地，且易感染病毒、病害造成種質(zhì)資源退化。利用本發(fā)明技術(shù)，可以減少用地，同時(shí)可以對生長過弱、嚴(yán)重感染病毒、病害的無性系在培養(yǎng)基上進(jìn)行脫毒培養(yǎng)，使無性系復(fù)壯、純化，達(dá)到種質(zhì)長期保存的目的。
4、本發(fā)明技術(shù)穩(wěn)定可靠，可重復(fù)性強(qiáng)，可以滿足既擴(kuò)繁又保存種質(zhì)資源的目的。
5、本發(fā)明技術(shù)提供的種質(zhì)資源移栽到田間后苗齊、生長健壯，抗性強(qiáng)、生長勢勝于種子培育的苗且能保持培養(yǎng)前的無性系的優(yōu)良性狀。


圖1為繼代培養(yǎng)9次的組培苗
具體實(shí)施例方式
下面用實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。
實(shí)施例一選用茅蒼術(shù)優(yōu)良無性系的根莖為外植體，根莖的取材時(shí)期選在當(dāng)年10月份，外植體選擇長度0.5厘米的根莖。在附加不同種類和濃度激素的MS培養(yǎng)基上直接誘導(dǎo)出芽，然后通過增殖、繼代、生根到試管苗移栽培完成種質(zhì)保存過程；上述繁殖的培養(yǎng)基選用MS附加蔗糖3％、瓊脂0.8％，芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)基選用MS+6-BA2.0mg/l+NAA0.1mg/l；繼代培養(yǎng)基選用MS+6-BA 1.0mg/l+NAA0.05mg/l；生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.2mg/l，pH為5.5，常規(guī)高壓滅菌；試管苗培養(yǎng)條件選20±2℃；光照12h/d，光照強(qiáng)度為1500Lux，繼代培養(yǎng)1次。
試管苗的移栽選擇在生根培養(yǎng)10天后，小苗莖葉長4厘米時(shí)，在移栽前2天打開瓶蓋，待葉色加深，再移栽到溫室，開始一周使?jié)穸缺３衷?0％以上，其后使?jié)穸缺３衷?5％左右，10天后栽到露地，再經(jīng)一月定植田間。
定植后的組培苗生長健壯整齊，通過一系列生物學(xué)性狀調(diào)查及統(tǒng)計(jì)，組培小苗表現(xiàn)出與上代母株極大的一致性，同一來源的無性系的田間植株長勢整齊，各無性系之間仍保持原有品系的明顯特征。
實(shí)施例二選用茅蒼術(shù)優(yōu)良無性系的根莖為外植體，根莖的取材時(shí)期選在當(dāng)年12月份，外植體選擇長度1.0厘米的根莖。在附加不同種類和濃度激素的MS培養(yǎng)基上直接誘導(dǎo)出芽，然后通過增殖、繼代、生根到試管苗移栽培完成種質(zhì)保存過程；上述繁殖的培養(yǎng)基選用MS附加蔗糖3％、瓊脂0.8％，芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)基選用MS+6-BA3.0mg/l+NAA0.2mg/l；繼代培養(yǎng)基選用MS+6-BA 1.0mg/l+NAA0.1mg/l；生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA1.0mg/l，pH為5.6，常規(guī)高壓滅菌；試管苗培養(yǎng)條件選20±2℃；光照12h/d，光照強(qiáng)度為1800Lux，繼代培養(yǎng)1次。
試管苗的移栽選擇在生根培養(yǎng)12天后，小苗莖葉長5厘米時(shí)，在移栽前3天打開瓶蓋，待葉色加深，再移栽到溫室，開始一周使?jié)穸缺３衷?0％以上，其后使?jié)穸缺３衷?5％左右，12天后栽到露地，再經(jīng)一月定植田間。
定植后的組培苗生長健壯整齊，通過一系列生物學(xué)性狀調(diào)查及統(tǒng)計(jì)，組培小苗表現(xiàn)出與上代母株極大的一致性，同一來源的無性系的田間植株長勢整齊，各無性系之間仍保持原有品系的明顯特征。
實(shí)施例三選用茅蒼術(shù)優(yōu)良無性系的根莖為外植體，根莖的取材時(shí)期選在后一年2月份，外植體選擇長度1.5厘米的根莖。在附加不同種類和濃度激素的MS培養(yǎng)基上直接誘導(dǎo)出芽，然后通過增殖、繼代、生根到試管苗移栽培完成種質(zhì)保存過程；上述繁殖的培養(yǎng)基選用MS附加蔗糖3％、瓊脂0.8％，芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)基選用MS+6-BA2.0mg/l+NAA0.1mg/l；繼代培養(yǎng)基選用MS+6-BA 1.0mg/l+NAA0.05mg/l；生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.2mg/l，pH為5.8，常規(guī)高壓滅菌；試管苗培養(yǎng)條件選20±2℃；光照12h/d，光照強(qiáng)度為2000Lux，繼代培養(yǎng)1次。
試管苗的移栽選擇在生根培養(yǎng)15天后，小苗莖葉長6厘米時(shí)，在移栽前2天打開瓶蓋，待葉色加深，再移栽到溫室，開始一周使?jié)穸缺３衷?0％以上，其后使?jié)穸缺３衷?5％左右，15天后栽到露地，再經(jīng)一月定植田間。
定植后的組培苗生長健壯整齊，通過一系列生物學(xué)性狀調(diào)查及統(tǒng)計(jì)，組培小苗表現(xiàn)出與上代母株極大的一致性，同一來源的無性系的田間植株長勢整齊，各無性系之間仍保持原有品系的明顯特征。
實(shí)施例四取用材料為實(shí)施例一中繼代培養(yǎng)1次的組培苗，繼續(xù)繼代培養(yǎng)，8次后再進(jìn)行生根和試管苗的移栽，如圖1所示，通過田間生物學(xué)性狀調(diào)查及統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，通過300多天繼代保存后的試管苗仍保持良好的生活力，同一來源的無性系植株，田間生長勢整齊，仍保持原有無性系的明顯特征。由此可以看出本發(fā)明對茅蒼術(shù)種質(zhì)的保存表現(xiàn)出明顯的效果。
權(quán)利要求
1.一種茅蒼術(shù)組培繁殖的種質(zhì)保存方法，其特征在于種質(zhì)保存過程為選用無性系的根莖為外植體，在附加激素的MS培養(yǎng)基上直接誘導(dǎo)出芽，芽經(jīng)增殖、繼代、生根、試管苗移栽，其中基本培養(yǎng)基選用MS附加蔗糖3％、瓊脂0.8％，芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)基選用MS+6-BA 2.0～3.0mg/l+NAA0.1～0.2mg/l；繼代培養(yǎng)基選用MS+6-BA 1.0mg/l+NAA0.05～0.1mg/l；生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.2mg/l或1/2MS+IBA1.0mg/l，pH5.4～5.8，常規(guī)高壓滅菌；試管苗培養(yǎng)條件選20±2℃；光照12h/d，光照強(qiáng)度1500～2000Lux。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種茅蒼術(shù)組培繁殖的種質(zhì)保存方法，其特征是選用生殖生長期的根莖為外植體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種茅蒼術(shù)組培繁殖的種質(zhì)保存方法，其特征是選擇長度0.5～1.5厘米的根莖作為外植體。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種茅蒼術(shù)組培繁殖的種質(zhì)保存方法，其特征是可以每隔1-2月繼代培養(yǎng)一次。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種茅蒼術(shù)組培繁殖的種質(zhì)保存方法，其特征是試管苗的移栽選擇在生根培養(yǎng)10～15天后，小苗莖葉長4～6厘米時(shí)，在移栽前2～3天打開瓶蓋，待葉色加深，再移栽到溫室，開始一周使?jié)穸缺３衷?0％以上，其后使?jié)穸缺３衷?5％左右，10～15天后栽到露地，再經(jīng)一月定植田間。
全文摘要
本發(fā)明提供了茅蒼術(shù)組培繁殖的種質(zhì)保存技術(shù)，包括選用優(yōu)良無性系的根莖為外植體，在附加不同種類和濃度激素的MS培養(yǎng)基上直接誘導(dǎo)出芽，然后通過增殖、繼代、生根、試管苗移栽，完成優(yōu)質(zhì)資源的種質(zhì)保存過程。本發(fā)明技術(shù)穩(wěn)定可靠，可重復(fù)性強(qiáng)，種質(zhì)保存的時(shí)間長，經(jīng)過保存的茅蒼術(shù)的試管苗，移栽到田間后苗齊、生長健壯，抗性強(qiáng)、生長勢優(yōu)于種子培育的苗且能保持培養(yǎng)前的無性系的優(yōu)良性狀。
文檔編號A01H4/00GK1653889SQ200510037859
公開日2005年8月17日 申請日期2005年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月25日
發(fā)明者吳沿友, 李萍萍, 李西騰, 趙新政 申請人:江蘇大學(xué)