專利名稱：野田村病毒的感染預(yù)防方法和治療方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及野田村病毒(nodavirus)的感染、特別是病毒性神經(jīng)壞死癥等的預(yù)防方法和治療方法。更詳細(xì)地說，本發(fā)明涉及使用非致病性的水生雙RNA病毒(Aquabirnavirus)來預(yù)防和治療特別是由野田村病毒的感染而引起的病毒性神經(jīng)壞死癥等的方法。
背景技術(shù)：
目前，為了保護(hù)和確保海產(chǎn)魚資源，在日本國(guó)內(nèi)養(yǎng)殖有大約40種海產(chǎn)魚。另外，還生產(chǎn)數(shù)種魚苗作為養(yǎng)殖的種苗。對(duì)這種魚的種苗生產(chǎn)技術(shù)和養(yǎng)殖技術(shù)也正在開發(fā)中，但是卻要時(shí)常面對(duì)對(duì)由感染、特別是由病毒感染引起的疾病的控制的困難。例如，報(bào)道有對(duì)魳魚(yellowtail)等的由YAV(魳魚腹水病毒，yellowtail ascites virus)導(dǎo)致的雙RNA病毒(birnavirus)感染，對(duì)石斑魚和比目魚等的由野田村病毒感染導(dǎo)致的VNN(病毒性神經(jīng)壞死癥)等(例如參照非專利文獻(xiàn)1、非專利文獻(xiàn)2)。
其中，特別是由野田村病毒感染導(dǎo)致的病毒性神經(jīng)壞死癥在1990年以后在世界各地的海產(chǎn)魚中發(fā)生，且致死性極高，因此對(duì)種苗生產(chǎn)業(yè)和養(yǎng)殖構(gòu)成威脅。另外，其患病魚種也已超過30種(例如參照非專利文獻(xiàn)2)。
一直以來，對(duì)于病毒性神經(jīng)壞死癥，疫苗療法是有效的(在試驗(yàn)方面)，但該疫苗療法由于是注射接種，故不能適用于幼魚和魚苗。另外，對(duì)于公開的基因重組外覆蛋白質(zhì)疫苗而言，到其疫苗顯現(xiàn)效果還需要3周的較長(zhǎng)時(shí)間(例如參照非專利文獻(xiàn)3、非專利文獻(xiàn)4)。
另外，魚類野田村病毒中有3種不同的血清型，所以需要分別制作每個(gè)血清型的疫苗(例如參照非專利文獻(xiàn)5)。
而且，用于防止來自于親魚的垂直感染的無病毒親魚的選擇需要病毒基因的檢測(cè)技術(shù)和為此所用的裝置，還需要受精卵的消毒。另外，需要用于為了防止水平感染而進(jìn)行飼養(yǎng)水的殺菌的臭氧或紫外線裝置。這些防止對(duì)策都具有非常麻煩和花費(fèi)大量費(fèi)用的缺點(diǎn)(例如參照非專利文獻(xiàn)6、非專利文獻(xiàn)7)。
除此以外，對(duì)于病毒性神經(jīng)壞死癥，特別是對(duì)于幼魚期以后的發(fā)病，其現(xiàn)狀是有效的預(yù)防和治療方法完全沒有實(shí)用化。所以，對(duì)于幼魚期以后的病毒性神經(jīng)壞死癥也強(qiáng)烈要求其有效的預(yù)防和治療方法的開發(fā)。
另一方面，有報(bào)道說由非致死性水生雙RNA病毒(ABV)一次感染后的比目魚對(duì)由以腎臟等內(nèi)臟各器官為目標(biāo)的病毒出血性敗血癥病毒(VHSVviral haemorrhagic septicaemia virus)引起的二次感染的抵抗性增加(例如參照非專利文獻(xiàn)8、非專利文獻(xiàn)9)。但是，該VHSV是以腎臟等內(nèi)臟各器官為目標(biāo)的病毒，而ABV對(duì)以野田村病毒為病因的、作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)所患的疾病的病毒性神經(jīng)壞死癥也是有效的報(bào)道卻完全沒有。
非專利文獻(xiàn)1Takano，R.，et al.，F(xiàn)ish Pathology，36(3)，153～169，2001.9非專利文獻(xiàn)2Munday，B.L.，et al.，Journal of Fish Diseases，25，127～142，2002非專利文獻(xiàn)3Tanaka，S.，et al.，Journal of Fish Diseases，24，15～22，2001非專利文獻(xiàn)4Yuasa，K.，et al.，Journal of Fish Diseases，25，53～56，2002非專利文獻(xiàn)5Mori，K.，et al.，Diseases of Aquatic Organisms，57，19～26，2003非專利文獻(xiàn)6養(yǎng)殖，10，pp.21～22，2001非專利文獻(xiàn)7Tsuchihashi，Y.，et al.，SUISANZOSHOKU 50(3)，355～361，2002
非專利文獻(xiàn)8Pakingking，R.Jr.，et al.，F(xiàn)ish & Shellfish Immunology，印刷中(2004)非專利文獻(xiàn)9Pakingking，R.Jr.，et al.，F(xiàn)ish Pathology，38，15～21，200
發(fā)明內(nèi)容以上述的現(xiàn)有技術(shù)為背景，本發(fā)明人等對(duì)非致病性的隱性感染的水生雙RNA病毒(ABV)進(jìn)行了銳意研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ABV對(duì)由野田村病毒感染引起的病毒性神經(jīng)壞死癥是有效的，從而完成了本發(fā)明。
因此，本發(fā)明目的在于提供一種使用非致病性的水生雙RNA病毒來預(yù)防和治療野田村病毒感染的方法。
為了達(dá)成上述目的，本發(fā)明提供一種使用為非致病性的隱性感染的水生雙RNA病毒來預(yù)防由于野田村病毒感染而引起的疾病的預(yù)防方法。
本發(fā)明還提供一種使用為非致病性的隱性感染的水生雙RNA病毒來治療由野田村病毒感染而引起的疾病的治療方法。
另外，本發(fā)明還提供通過將水生雙RNA病毒口服給藥來預(yù)防由野田村病毒感染引起的疾病的發(fā)病的預(yù)防方法和治療上述疾病的治療方法。


圖1是表示比目魚的腎臟和腦中的野田村病毒效價(jià)的變化的圖。
圖2是表示野田村病毒導(dǎo)致的石斑魚的累積死亡率的圖。
圖3是表示石斑魚的腎臟和腦中的野田村病毒效價(jià)的變化的圖。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的野田村病毒感染預(yù)防方法和由該感染引起的疾病的治療方法的特征在于，對(duì)于適用對(duì)象魚種，通過使用為非致病性的隱性感染的水生雙RNA病毒(ABV)，從而預(yù)防野田村病毒感染和/或治療由野田村病毒感染引起的疾病。
已知水生雙RNA病毒(ABV)為非致病性或弱毒性，雖然對(duì)環(huán)境是無害的，但對(duì)大多數(shù)的天然魚是隱性感染的。
因此，本發(fā)明中所用的ABV可以容易地從比目魚等隱性感染的海產(chǎn)魚等的自然界中分離。如此從自然界分離的無毒性或弱毒性的ABV不僅可以接種于其宿主魚，而且可以接種于其它魚類的細(xì)胞，并可以進(jìn)行培養(yǎng)而容易地使其增殖。
為了將如上所述培養(yǎng)并增殖了的水生雙RNA病毒(ABV)用于魚類，不僅可以通過ABV溶液的注射來給藥，也可以通過混合有ABV的飼料的喂食或通過浸漬在含有ABV的溶液中等來給藥。這可以說，雖然感染ABV的天然魚的感染途徑較多，但由于是通過保有ABV的浮游生物的攝取而導(dǎo)致的經(jīng)口感染，所以當(dāng)然是能感染的方法。
本發(fā)明中，將水生雙RNA病毒(ABV)混合在飼料中喂食時(shí)，例如相對(duì)于1g全飼料，通?？梢园凑占s107～108TCID50的比例進(jìn)行混合。浸漬在ABV溶液中時(shí)，相對(duì)于1ml溶液，通常可以按照約105～106TCID50的比例進(jìn)行混合。使用ABV注射液時(shí)，相對(duì)于1ml注射液，通?？梢园凑占s107～108TCID50的比例進(jìn)行混合。
另外，作為本發(fā)明的預(yù)防方法和治療方法可以適用的魚種，沒有特別限定，只要是感染了野田村病毒的魚種或有可能感染的魚種即可。而且，從種苗到包括魚苗、親魚的成長(zhǎng)魚，無論魚的大小(生長(zhǎng)階段)，都可以使用。
以下，通過實(shí)施例詳細(xì)地對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說明，但本發(fā)明并不是通過下述實(shí)施例來限定，下述實(shí)施例只是為了更具體地說明本發(fā)明而舉例說明。
實(shí)施例1(水生雙RNA病毒(FBV株)的性狀)本實(shí)施例中所使用的水生雙RNA病毒(FBV株)屬于雙RNA病毒科水生雙RNA病毒屬，是不具有包膜(envelope)的直徑約為60nm的球形病毒，并具有雙鏈RNA作為核酸。該FBV株同樣屬于雙RNA病毒科水生雙RNA病毒屬，由于其被用作為魳魚的致病病毒而為人所知的YTAV(魳魚腹水病毒，yellowtail ascites virus)制作的兔抗血清完全地中和，所以分類為與YTAV相同的血清型。另外，該FBV株與作為屬于雙RNA病毒科的鮭科魚類的致病病毒而為人所知的IPNV(傳染性胰腺壞死病毒，infectious pancreatic necrosis virus)在血清學(xué)方面是不同的。而且，該FBV株通過來源于魚類的株化細(xì)胞的RTG-2細(xì)胞良好地增殖。
實(shí)施例2(水生雙RNA病毒(FBV株)對(duì)比目魚的安全性試驗(yàn))水生雙RNA病毒(FBV株)是將RTG-2細(xì)胞在培養(yǎng)基(Eagle’sMEM，牛胎兒血清)中培養(yǎng)而得到的。如此得到的FBV株在-80℃下保存。該冷凍保存株經(jīng)過6個(gè)月以上也仍然是有效的。
將如此冷凍保存的FBV株接種于平均體重為18g的比目魚(人工養(yǎng)殖)的肌肉內(nèi)(接種量106.9TCID50/條，供試條數(shù)20)。在水溫為20℃下觀察3周，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)死亡魚和異常魚。另外，也未發(fā)現(xiàn)該FBV株對(duì)比目魚幼魚(0.5g)的致病性。
實(shí)施例3(水生雙RNA病毒(FBV株)對(duì)石斑魚的安全性試驗(yàn))水生雙RNA病毒(FBV株)與實(shí)施例2相同，是將RTG-2細(xì)胞在培養(yǎng)基(Eagle’s MEM，牛胎兒血清)中培養(yǎng)而得到的。得到的FBV株在冷凍(-80℃)下保存。該冷凍保存株經(jīng)過6個(gè)月以上也仍然是有效的。
將如此冷凍保存的FBV株接種于平均體重為12g的石斑魚(人工養(yǎng)殖)的肌肉內(nèi)(接種量107.1TCID50/條，供試條數(shù)20)。在水溫為25℃下觀察3周，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)死亡魚和異常魚。
實(shí)施例4(水生雙RNA病毒(FBV株)對(duì)比目魚的野田村病毒感染的阻止效果)水生雙RNA病毒(FBV株)與實(shí)施例2相同，是使用RTG-2細(xì)胞在培養(yǎng)基(Eagle’s MEM，牛胎兒血清)中培養(yǎng)而得到的。得到的FBV株在冷凍(-80℃)下保存。該冷凍保存株經(jīng)過6個(gè)月以上也仍然是有效的。
將如此冷凍保存的FBV株接種于平均體重為12g的比目魚(人工養(yǎng)殖)的肌肉內(nèi)(接種量106.6TCID50/條)。在水溫為20℃下飼養(yǎng)7天后，將用E-11細(xì)胞培養(yǎng)的魚類野田村病毒RGNNV(SGWak97株)接種于肌肉內(nèi)(接種量108.6TCID50/條)，并在3天、7天、14天后測(cè)定。腎臟和腦的RGNNV量。
另外，將不接種FBV株而單獨(dú)感染RGNNV的魚作為對(duì)照組。本實(shí)施例中，無論有無FBV株的接種，均未發(fā)現(xiàn)RGNNV引起的感染死亡。
如圖1所示，在任一測(cè)定時(shí)，預(yù)先接種有ABV的魚的腎臟和腦內(nèi)的RGNNV量與對(duì)照組相比，均顯著降低。
實(shí)施例5(水生雙RNA病毒(FBV株)對(duì)石斑魚的野田村病毒感染的阻止效果)水生雙RNA病毒(FBV株)與實(shí)施例2相同，是將RTG-2細(xì)胞在培養(yǎng)基(Eagle’s MEM，牛胎兒血清)中培養(yǎng)而得到的。如此得到的FBV株同樣地冷凍保存。將冷凍保存的FBV株接種于平均體重為12g的石斑魚(人工養(yǎng)殖)的肌肉內(nèi)(接種量107.1TCID50/條)。在水溫為25℃下飼養(yǎng)7天后，將用E-11細(xì)胞培養(yǎng)的魚類野田村病毒RGNNV(SGWak97株)接種于肌肉內(nèi)(接種量105.1TCID50/條)。另外，將不接種FBV株而單獨(dú)感染RGNNV的魚作為對(duì)照組。
在本實(shí)施例中，F(xiàn)BV株接種后觀察2周，求出死亡率，并在3天、7天、14天后測(cè)定腎臟和腦的RGNNV量。
其結(jié)果如圖2所示，未接種FBV株的對(duì)照組的死亡率為80％，而預(yù)先接種有FBV株的魚的死亡率為0％。
另外，如圖3所示，在任一測(cè)定時(shí)，預(yù)先接種有ABV的魚的腎臟和腦內(nèi)的RGNNV量與對(duì)照組相比，均顯著降低。此外，雖然數(shù)據(jù)中沒有顯示出來，但RGNNV在8周后從接種有FBV株的魚的腦中消失。
綜上所述，本發(fā)明的預(yù)防方法和治療方法對(duì)廣泛的魚種來說，不僅對(duì)由野田村病毒感染引起的病毒性神經(jīng)壞死癥有效，而且對(duì)以野田村病毒感染為原因的其它感染癥也有效。
另外，本發(fā)明的預(yù)防方法和治療方法不僅可以口服給藥，而且可以通過浸漬法給藥，正因?yàn)槿绱?，還具有對(duì)目前的疫苗治療中無法做到的對(duì)魚苗和幼魚也能給藥的效果。
另外，本發(fā)明的ABV的抗病毒作用因?yàn)槭欠翘禺愋缘?，所以無論哪種血清型都可使用，因此，具有不需要像目前的疫苗治療那樣對(duì)魚類野田村病毒的3個(gè)不同血清型制作每個(gè)血清型的疫苗的優(yōu)點(diǎn)。
除此以外，通過本發(fā)明的水生雙RNA病毒(ABV)的接種，還具有不僅對(duì)野田村病毒感染有預(yù)防效果，而且對(duì)野田村病毒隱性感染了的親魚等也可期待治療效果的很大優(yōu)點(diǎn)。
此外，在本發(fā)明的預(yù)防方法和治療方法中，通過并用ABV和疫苗，不僅可以非特異性地防御，而且也可以誘導(dǎo)特異性防御。
除了上述優(yōu)點(diǎn)以外，本發(fā)明不需要特別的裝置等，所以本發(fā)明中使用的ABV的制備和給藥所需要的經(jīng)費(fèi)也可以比現(xiàn)有的疫苗治療大幅度地減少。
本發(fā)明的預(yù)防方法和治療方法可以適用于廣泛的魚種的種苗生產(chǎn)和養(yǎng)殖。
權(quán)利要求
1.一種方法，其特征在于，通過將水生雙RNA病毒對(duì)魚給藥，從而預(yù)防野田村病毒感染或由野田村病毒感染引起的疾病的發(fā)病或者治療所述疾病。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述疾病為病毒性神經(jīng)壞死癥。
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述水生雙RNA病毒是通過注射或口服來給藥的。
4.如權(quán)利要求1～3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述口服給藥是通過將魚浸漬在含有所述水生雙RNA病毒的溶液中或給魚喂食混合有所述水生雙RNA病毒的飼料來進(jìn)行的。
5.如權(quán)利要求1～3中任一項(xiàng)所述的方法，其中，在將所述水生雙RNA病毒通過注射經(jīng)皮給藥時(shí)，所述水生雙RNA病毒以相對(duì)于1ml注射液為約107～108TCID50的比例進(jìn)行添加；在將所述水生雙RNA病毒通過飼料喂食時(shí)，以相對(duì)于1g全飼料通常為約107～108TCID50的比例進(jìn)行混合；或者，在將所述水生雙RNA病毒通過浸漬給藥時(shí)，以相對(duì)于1ml溶液通常為約105～106TCID50的比例進(jìn)行混合。
全文摘要
本發(fā)明提供一種預(yù)防或治療對(duì)魚的由野田村病毒感染或由野田村病毒感染引起的病毒性神經(jīng)壞死癥等疾病的方法。通過給魚注射等來經(jīng)皮接種水生雙RNA病毒，或者通過將魚浸漬在含有水生雙RNA病毒的溶液中或者通過喂食水生雙RNA病毒混合飼料，從而防止魚感染野田村病毒或預(yù)防由野田村病毒感染引起的病毒性神經(jīng)壞死癥等疾病的發(fā)病或者治療所述疾病。
文檔編號(hào)A23K1/18GK1960740SQ20058000922
公開日2007年5月9日 申請(qǐng)日期2005年3月23日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月24日
發(fā)明者中井敏博 申請(qǐng)人:獨(dú)立行政法人科學(xué)技術(shù)振興機(jī)構(gòu)