專利名稱：綠色食品蔬菜田中防治害蟲的生物源殺蟲復配劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種殺蟲劑，具體涉及一種用于綠色食品蔬菜田中防治害蟲的殺蟲劑。
背景技術：
農業(yè)害蟲每年給種植業(yè)都造成了巨大的損失。雖然化學防治取得顯著成效，但同時也帶來了環(huán)境污染、抗藥性等一系列問題。從20世紀70年代開始，生物防治受到了各國政府的重視。1992年“世界環(huán)境和發(fā)展大會”的第21條決議提出“到2000年要在全球范圍內控制化學農藥的銷售和使用，生物農藥的產量達到60％”。90年代以來，全世界化學農藥的銷售量不斷下降，代之而起的是微生物農藥。我國政府也十分重視土地及水資源環(huán)境保護，將“綠色食品和生物農藥的發(fā)展”列入21世紀議程。作為生物防治重要內容的微生物農藥，具有對人、畜及害蟲天敵極少或完全沒有毒害作用的特點，不污染環(huán)境、保持生態(tài)平衡，保持農業(yè)、林業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，適應人們對無公害農副產品、綠色食品的需求。
我國加入WTO后，在國際農產品和食品貿易中，將面對國際綠色壁壘的嚴峻挑戰(zhàn)，即苛刻的農藥殘留標準。此舉導致我國對歐美日等國家的農產品出口受限。解決農藥毒性超標的最佳途徑就是用生物農藥代替?zhèn)鹘y(tǒng)的高毒、高殘留的化學農藥。
現(xiàn)有的蘇云金芽孢桿菌生物農藥普遍存在著殺蟲見效慢的現(xiàn)象，一般是用藥后第4天才開始效果比較明顯，而且還存在Bt單一制劑對夜蛾科害蟲防治不佳的問題。

發(fā)明內容
為了解決以往使用生物農藥見效慢，Bt單一制劑對夜蛾科害蟲防治不佳，化學農藥毒性超標的問題，本發(fā)明研制了一種綠色食品蔬菜田中防治害蟲的生物源殺蟲復配劑，該殺蟲復配劑的組成為每100ml成品中含吐溫-60或吐溫-802克、檸檬酸1～3克、甲基纖維素1～4克、硅藻土0.2～0.4克、苯甲酸鈉0.5～2克、蘇云金芽孢桿菌(Bacillus Thuringiensis)庫斯塔克亞種HD-73(subsp.kurstaki)芽孢數(shù)2×109～7×109個、重量濃度為2.5％的success(菜禧)0.01～004ml。
本發(fā)明的蘇云金芽孢桿菌(Bacillus Thuringiensis)庫斯塔克亞種HD-73(subsp.kurstaki)簡稱HD-73，所述HD-73為標準菌株(美國孟山都公司)，它在殺蟲劑中起殺蟲作用，即蘇云金芽孢桿菌在它的芽孢中會分泌一種稱為“內毒素”的蛋白質晶體，這種內毒素是無毒的，昆蟲吃了蘇云金芽孢桿菌的芽孢后，內毒素晶體在昆蟲的腸道中溶解，并經過昆蟲腸道中的蛋白酶加工，被激活變成了有毒性的蛋白毒素，與腸道細胞表面上的受體結合，插入膜內，形成孔洞或離子通道導致膜完全性的破壞，引起離子滲漏，水隨之進入細胞，細胞因膨脹而解體、死亡，最終昆蟲死亡。
Success為美國陶氏益農惠贈，主要起輔助殺蟲作用，是胃毒劑，Success可以持續(xù)激活靶標昆蟲乙酰膽堿煙堿型受體，但是其結合位點不同于煙堿和吡蟲啉。多殺菌素也可以影響GABA受體，來起殺蟲作用。Success其主要成分為spinosynAC41H65NO16和spinosynBC42H67NO16，分子結構式為 本發(fā)明殺蟲復配劑的殺蟲譜為菜青蟲、菜蛾、草地螟、油松毛蟲、甘藍夜蛾等。
現(xiàn)有的蘇云金芽孢桿菌生物農藥普遍存在著殺蟲見效慢的現(xiàn)象，一般是用藥后第4天開始效果比較明顯，而使用本配方在當天或第二天的殺蟲效果就比較明顯；同時，殺蟲效果也比原來的蘇云金芽孢桿菌生物農藥殺蟲效果明顯。從整體殺蟲效果上來講，本研究的殺蟲配方的殺蟲效果明顯優(yōu)于以往的同類產品。
本發(fā)明研制的生物殺蟲劑是高活性蘇云金桿菌菌株和來自于微生物的success復合制劑。通過生物測定方法和對芽孢活力測定篩選出了與蘇云金芽孢桿菌相容性好的高活性生物殺蟲劑success，并將其作為系列蘇云金芽孢桿菌復合殺蟲劑的另一重要殺蟲組分，通過室內測定、盆栽和田間小區(qū)防治試驗，取得了令人滿意的防治效果，不但能提高蘇云金芽孢桿菌的殺蟲效果，而且能提高蘇云金芽孢桿菌殺蟲的速效性，使目標害蟲致死時間提高24小時以上。此種生物制劑配方在國內還尚屬首次。本發(fā)明的生物農藥是符合AA級綠色食品和國際有機農業(yè)生產標準的生物制劑。本發(fā)明解決了以往使用生物農藥時見效慢的問題；用生物農藥代替?zhèn)鹘y(tǒng)的高毒、高殘留的化學農藥來解決農藥毒性超標，具有如下優(yōu)點1、降低蔬菜中的農藥殘留；2、加速生物農藥的見效時間；3、降低農藥對人、畜及害蟲天敵的毒害作用；4、減少化學農藥對的環(huán)境污染、保持生態(tài)平衡，保持農業(yè)、林業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，適應人們對無公害農副產品、綠色食品的需求。
具體實施例方式
具體實施方式
一本實施方式的殺蟲復配劑的組成為每100ml成品中含吐溫-60或吐溫-802克、檸檬酸1～3克、甲基纖維素1～4克、硅藻土0.2～0.4克、苯甲酸鈉0.5～2克、HD-73芽孢數(shù)2×109～7×109個、重量濃度為2.5％的success0.01～004ml。
本實施方式中芽孢計數(shù)按照如下方法進行在無菌室內，向已培養(yǎng)好的斜面中加入2ml無菌水，刮下菌苔，用移液器反復抽打使其在無菌水中充分混勻，將菌液移入無菌小瓶中；然后按梯度稀釋104～5倍；在血球計數(shù)板上滴幾滴已稀釋的菌液，蓋好蓋玻片，在顯微鏡下查數(shù)并記錄平均每格芽孢個數(shù)，計算每毫升菌液含芽孢數(shù)，求出原菌液濃度。
具體實施例方式
二本實施方式的殺蟲復配劑的組成為每100ml成品中含吐溫-60或吐溫-802克、檸檬酸3克、甲基纖維素4克、硅藻土0.4克、苯甲酸鈉2克、HD-73芽孢數(shù)7×109個、重量濃度為2.5％的success004ml。
具體實施例方式
三本實施方式的殺蟲復配劑的組成為每100ml成品中含吐溫-60或吐溫-802克、檸檬酸1克、甲基纖維素1克、硅藻土0.2克、苯甲酸鈉0.5克、HD-73芽孢數(shù)2×109個、重量濃度為2.5％的success0.01ml。
具體實施例方式
四本實施方式的殺蟲復配劑的組成為每100ml成品中含吐溫-60或吐溫-802克、檸檬酸1.5克、甲基纖維素2.6克、硅藻土0.3克、苯甲酸鈉1克、HD-73芽孢數(shù)4×109個、重量濃度為2.5％的success0.02ml。上述殺蟲劑的藥效試驗如下1、高活性蘇云金桿菌菌株的篩選篩選方法用甘藍葉片浸蘇云金桿菌發(fā)酵液，風干后飼喂小菜蛾，于24、72、120、168小時觀察小菜蛾的死亡情況，計算死亡率和校正死亡率。對照處理是用清水浸甘藍葉片。
經初步篩選，得到蘇云金桿菌菌株HD-73的殺蟲活性在所選菌株中最強，其校正死亡率為73.20％，具體結果見表1。
表1 47株蘇云金桿菌菌株對菜蛾的室內生物測定

2、Success對Bt芽孢存活的影響將Bt菌液與Success混合10d，然后采用稀釋法將HD-73稀釋成含有一定芽孢數(shù)的菌液，接入平皿培養(yǎng)基中培養(yǎng)48h，檢測處理與對照的芽孢萌發(fā)率，確定Success對Bt芽孢存活是否有傷害作用。結果表明，Success與Bt芽孢相容性好，對芽孢無殺傷作用，從而確定Success是與Bt混用的理想的高效低毒的殺蟲組分，具體影響結果見表2。
表2 Success對菌株HD-73芽孢萌發(fā)的影響


3、蘇云金桿菌與Success混用對主要蔬菜害蟲的防效測定將HD-73菌種按每毫升含芽孢1×108的菌液，分別與稀釋6000倍、9000倍液的Success混用，對菜蛾進行室內、室外殺蟲活性測定，通過2年試驗結果表明Success對蘇云金桿菌有明顯的增效作用，藥后48～72h對菜蛾室內防效達90％以上，田間小區(qū)防治效果穩(wěn)定在80～85％以上。對菜青蟲、甘藍夜蛾的室內防治效果分別為84～95％、60～70％，參見表3～8。
表3 Success混用對菜蛾防效的室內測定

從表3可以看出Success對菜蛾有一定的防治效果，但其防治效果僅為48％～66％；將Success稀釋到9000倍還是6000倍時對菜蛾防治的效果差異不大。
表4 菌株HD-73與success混配及二者單獨使用時對甘藍夜蛾的防治效果

從表4可以看出菌株HD-73與success混配合使用均優(yōu)于二者單獨作用時對甘藍夜蛾的防治效果，而且success稀釋到3000或6000倍時，對殺蟲效果影響不大。
表5HD-73和20與success混配及單獨使用時菜蛾的校正死亡率

從表5可以看出HD-73與success混配的殺蟲效果明顯優(yōu)于HD-73或success的單獨使用；同時，也可以看出Success稀釋到9000倍還是6000倍與HD-73混合使用對菜蛾的防治效果影響不大。
表6HD-73與success混配及二者單獨使用時對菜青蟲的防治效果

從表6可以看出HD-73與success混配的防治菜青蟲的效果明顯優(yōu)于HD-73或success的單獨使用；同時，也可以看出Success稀釋到9000倍、6000倍還是3000倍與HD-73混合使用對菜蛾的防治效果影響不大。蘇云金芽孢桿菌HD-73的芽孢數(shù)為108時的殺蟲效果略優(yōu)于其芽孢數(shù)為109。
表7菌株與success及助劑混配后對菜蛾的防治效果


注助劑是指配方中除了蘇云金芽孢桿菌和success以外的其它成份組合。
從表7可以看出助劑對菜蛾沒有殺蟲效果；復配劑、success、success+HD-73對菜蛾均有較高的活性，但從不同的處理時間來看，本實施方式的復配劑對菜蛾的防治效果最好，明顯優(yōu)于success、success+HD-73的防治效果。
4、生物殺蟲劑的室內殺蟲活性及田間防治效果(表9～12)用本實施方式所配制的復配劑對菜蛾、菜青蟲、甘藍夜蛾、草地螟、松毛蟲等重要農林害蟲進行殺蟲活性測定。結果表明，對菜蛾防效達100％(48h)、菜青蟲89.1％(72h)、甘藍夜蛾84.8％(72h)、草地螟86.7％(48h)、松毛蟲91.7％(168h)。室外盆栽及小區(qū)試驗，對菜蛾的防治效果達80～87％(48h)、97～100％(72h)，對2齡甘藍夜蛾的防治效果達70～100％(96h)。
表9菌株與Success及助劑混配后對草地螟的防治效果

從表可9以看出單獨使用助劑時，對草地螟的殺蟲效果不大，可以忽略；復配劑對草地螟的殺蟲效果明顯優(yōu)于success+HD-73對草地螟的防治效果。
表10 Bt制劑對油松毛蟲的防治效果

注Bt懸浮劑8000IU/ml蘇云金桿菌懸浮劑(武漢科諾生物農藥有限公司)。
從表10可以看出本實施方式的復配劑對松毛蟲的殺蟲效果優(yōu)于Bt懸浮劑和菌株HD-73。
表11田間小區(qū)菌劑對菜青蟲的防治結果

從表11可以看出田間小區(qū)試驗中，本實施方式的復配劑對菜青蟲的殺蟲效果優(yōu)于菌株HD-73單獨防治效果。
表12 Bt復配劑對2種蔬菜害蟲的田間小區(qū)防治試驗

從表12可以看出本實施方式的復配劑對菜蛾和甘藍夜蛾都有較好的防效。
權利要求
1.綠色食品蔬菜田中防治害蟲的生物源殺蟲復配劑，其特征在于所述殺蟲復配劑的組成為每100ml成品中含吐溫-60或吐溫-802克、檸檬酸1～3克、甲基纖維素1～4克、硅藻土0.2～0.4克、苯甲酸鈉0.5～2克、蘇云金芽孢桿菌庫斯塔克亞種HD-73芽孢數(shù)2×109～7×109個、重量濃度為2.5％的菜禧0.01～004ml。
2.根據權利要求1所述的綠色食品蔬菜田中防治害蟲的生物源殺蟲復配劑，其特征在于所述殺蟲復配劑的組成為每100ml成品中含吐溫-60或吐溫-802克、檸檬酸3克、甲基纖維素4克、硅藻土0.4克、苯甲酸鈉2克、蘇云金芽孢桿菌庫斯塔克亞種HD-73芽孢數(shù)7×109個、重量濃度為2.5％的菜禧004ml。
3.根據權利要求1所述的綠色食品蔬菜田中防治害蟲的生物源殺蟲復配劑，其特征在于所述殺蟲復配劑的組成為每100ml成品中含吐溫-60或吐溫-802克、檸檬酸1克、甲基纖維素1克、硅藻土0.2克、苯甲酸鈉0.5克、蘇云金芽孢桿菌庫斯塔克亞種HD-73芽孢數(shù)2×109個、重量濃度為2.5％的菜禧0.01ml。
4.根據權利要求1所述的綠色食品蔬菜田中防治害蟲的生物源殺蟲復配劑，其特征在于所述殺蟲復配劑的組成為每100ml成品中含吐溫-60或吐溫-802克、檸檬酸1.5克、甲基纖維素2.6克、硅藻土0.3克、苯甲酸鈉1克、蘇云金芽孢桿菌庫斯塔克亞種HD-73芽孢數(shù)4×109個、重量濃度為2.5％的菜禧0.02ml。
全文摘要
綠色食品蔬菜田中防治害蟲的生物源殺蟲復配劑，涉及一種殺蟲劑。為了解決以往使用生物農藥時見效慢，Bt單一制劑對夜蛾科害蟲防治不佳，化學農藥毒性超標的問題，本發(fā)明殺蟲復配劑的組成為每100ml成品中含吐溫－60或吐溫－802克、檸檬酸1～3克、甲基纖維素1～4克、硅藻土0.2～0.4克、苯甲酸鈉0.5～2克、HD－73芽孢數(shù)2×10
文檔編號A01N25/30GK1823592SQ20061000991
公開日2006年8月30日 申請日期2006年4月7日 優(yōu)先權日2006年4月7日
發(fā)明者趙奎軍, 于洪春, 韓嵐嵐, 樊東, 王曉云, 戴長春 申請人:東北農業(yè)大學