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絨白乳菇菌絲體發(fā)酵液防治楊樹葉枯病制劑的制備方法

文檔序號(hào):325331閱讀:466來源:國知局
專利名稱:絨白乳菇菌絲體發(fā)酵液防治楊樹葉枯病制劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種絨白乳菇防治楊樹葉枯病的絨白乳菇菌絲體發(fā)酵液及其活性物質(zhì)防治楊樹葉枯病制劑的制備方法。
背景技術(shù)
目前,楊樹葉枯病為東北地區(qū)苗圃近年來較為流行的主要病害之一。該病危害楊樹苗木的葉片及嫩莖,在葉片及嫩莖上形成黑色的霉層,造成枯葉、枯梢,引起莖部潰瘍?,F(xiàn)今已造成了嚴(yán)重的環(huán)境與經(jīng)濟(jì)損失。該病多發(fā)生于苗圃,由于苗圃病害發(fā)病快、流行快的特點(diǎn),以往通常采用化學(xué)藥劑防治。經(jīng)常使用化學(xué)藥劑防治不僅提高病原物的抗病性,而且造成嚴(yán)重的環(huán)境污染。
毒蕈是一類對(duì)人和動(dòng)物有毒的、不能直接食用的大型真菌,俗稱毒蘑菇、毒菌、毒苷等。全世界已發(fā)現(xiàn)的毒蕈有200余種,我國有180多種。真菌毒素(mycotoxin)是真菌產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物,目前已知有200多種不同的真菌毒素。研究較為深入的對(duì)象集中在十幾種對(duì)人類危害大的真菌毒素及植物病原毒素,其中包括黃曲霉毒素、展青霉素、玉米赤霉烯酮、串珠鐮刀菌素,長蠕孢(Helminthosporium spp.)、鏈格孢菌(Alternariaspp.)、輪枝孢菌(Verticillium 8pp.)、尾孢菌(Cercosporaspp.)等產(chǎn)生的毒素。經(jīng)檢索未發(fā)現(xiàn)與本發(fā)明相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的任務(wù)在于提供一種絨白乳菇菌絲體發(fā)酵液防治楊樹葉枯病制劑的制備方法。
為了達(dá)到上述目的,本發(fā)明采用的技術(shù)方案是絨白乳菇子實(shí)體鑒別-菌種分離、純化-菌株鑒定-菌絲體液體培養(yǎng)-抑菌活性物質(zhì)萃取。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是本發(fā)明采用的原料來源豐富,價(jià)廉對(duì)楊樹葉枯病防治具有突出效果,具有很好的前景,絨白絲菌體發(fā)酵液高效、低毒、無公害。
具體實(shí)施例方式
下面對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
本發(fā)明制備方法是絨白乳菇子實(shí)體鑒別-菌種分離、純化-菌株鑒定-菌絲體液體培養(yǎng)-抑菌活性物質(zhì)萃取。
絨白乳菇子實(shí)體鑒別子實(shí)體群聲,菌蓋直徑6-10cm,初期白色,扁半球形,中央下陷呈漏斗狀,老后米黃色,表面干燥密被細(xì)絨毛,邊緣內(nèi)卷至伸展,菌肉白色,厚,乳汁少,白色,不變色,味苦,菌褶直生至稍下延,不等長,菌柄短粗,圓柱形,長3-5cm,直徑1.5-2.5cm,內(nèi)實(shí),白色,有絨毛。
菌種分離、純化采用組織分離法,無菌條件下,挑取菌柄與菌蓋之間的組織接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)平板培養(yǎng)基上,待組織塊上長出菌絲,將菌絲轉(zhuǎn)接到馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)斜面培養(yǎng)基上,馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基礎(chǔ)配方馬鈴薯200g、葡萄糖17-20g、瓊脂17-20g、水1000ml。
菌株鑒定采用分子生物學(xué)鑒定方法,將子實(shí)體與分離得到的菌絲體分別進(jìn)行rDNAITS序列鑒定、比對(duì),以證明分離得到的菌株來自于所分離的子實(shí)體。
液體培養(yǎng)采用PD培養(yǎng)基(配方馬鈴薯200g、葡萄糖17-20g、水1000ml),25℃、120rmp/min搖床培養(yǎng)20d。
抑菌活性物質(zhì)萃取將上述培養(yǎng)液超聲破碎2h,過濾除菌后與正丁醇以1∶3比例萃取3h。
絨白乳菇菌絲體發(fā)酵液在防治、抑制楊樹葉枯病菌(Alternariaalternate)菌絲生長及孢子萌發(fā),同時(shí)楊樹葉銹病菌(Melampsorslarici\populina)楊樹爛皮病菌(Cytospora chrysosperma)的制劑藥物的應(yīng)用。
絨白乳菇菌絲體發(fā)酵液對(duì)楊樹葉枯病菌(Alternaria alternate)菌絲生長的抑制率為61.44%,對(duì)孢子萌發(fā)抑制率超過90%以上;絨白乳菇抑菌活性成分(發(fā)酵液經(jīng)過濾后與正丁醇以1∶3比例萃取3h,萃取1次)對(duì)葉枯病菌菌絲體生長抑制率為98.03%,對(duì)孢子萌發(fā)抑制率為96.98%。對(duì)小白鼠的LD50為8570.8mg/kg,為低毒,在楊樹葉片上殘留毒性較低。
權(quán)利要求
1.一種絨白乳菇菌絲體發(fā)酵液防治楊樹葉枯病制劑的制備方法,其特征在于絨白乳菇子實(shí)體鑒別菌種分離、純化菌株鑒定菌絲體液體培養(yǎng)抑菌活性物質(zhì)萃取。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的絨白乳菇菌絲體發(fā)酵液防治楊樹葉枯病制劑的制備方法,其特征在于絨白乳菇子實(shí)體鑒別子實(shí)體群聲,菌蓋直徑6-10cm,初期白色,扁半球形,中央下陷呈漏斗狀,老后米黃色,表面干燥密被細(xì)絨毛,邊緣內(nèi)卷至伸展,菌肉白色,厚,乳汁少,白色,不變色,味苦,菌褶直生至稍下延,不等長,菌柄短粗,圓柱形,長3-5cm,直徑1.5-2.5cm,內(nèi)實(shí),白色,有絨毛。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的絨白乳菇菌絲體發(fā)酵液防治楊樹葉枯病制劑的制備方法,其特征在于菌種分離、純化采用組織分離法,無菌條件下,挑取菌柄與菌蓋之間的組織接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)平板培養(yǎng)基上,待組織塊上長出菌絲,將菌絲轉(zhuǎn)接到馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)斜面培養(yǎng)基上,馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基礎(chǔ)配方馬鈴薯200g、葡萄糖17-20g、瓊脂17-20g、水1000ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的絨白乳菇菌絲體發(fā)酵液防治楊樹葉枯病制劑的制備方法,其特征在于菌株鑒定采用分子生物學(xué)鑒定方法,將子實(shí)體與分離得到的菌絲體分別進(jìn)行rDNAITS序列鑒定、比對(duì),以證明分離得到的菌株來自于所分離的子實(shí)體。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的絨白乳菇菌絲體發(fā)酵液防治楊樹葉枯病制劑的制備方法,其特征在于液體培養(yǎng)采用PD培養(yǎng)基(配方馬鈴薯200g、葡萄糖17-20g、水1000ml),25℃、120rmp/min搖床培養(yǎng)20d。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的絨白乳菇菌絲體發(fā)酵液防治楊樹葉枯病制劑的制備方法,其特征在于抑菌活性物質(zhì)萃取將上述培養(yǎng)液超聲破碎2h,過濾除菌后與正丁醇以1∶3比例萃取3h。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的絨白乳菇菌絲體發(fā)酵液防治楊樹葉枯病制劑,其特征在于絨白乳菇菌絲體發(fā)酵液在防治、抑制楊樹葉枯病菌(Alternariaalternate)菌絲生長及孢子萌發(fā),同時(shí)楊樹葉銹病菌(Melampsorslarici\populina)楊樹爛皮病菌(Cytospora chrysosperma)的制劑藥物的應(yīng)用。
全文摘要
一種絨白乳菇菌絲體發(fā)酵液防治楊樹葉枯病制劑的制備方法。絨白乳菇子實(shí)體鑒別-菌種分離、純化-菌株鑒定-菌絲體液體培養(yǎng)-抑菌活性物質(zhì)萃取。本發(fā)明采用的原料來源豐富,價(jià)廉對(duì)楊樹葉枯病防治具有突出效果,具有很好的前景,絨白絲菌體發(fā)酵液高效、低毒、無公害。
文檔編號(hào)A01P1/00GK101084758SQ20061001011
公開日2007年12月12日 申請日期2006年6月6日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月6日
發(fā)明者宋瑞清 申請人:東北林業(yè)大學(xué), 宋瑞清
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