專利名稱:綠色食品蔬菜田中防治害蟲的生物源殺蟲復(fù)配劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及一種殺蟲劑,具體涉及一種用于綠色食品蔬菜田中防治害蟲的殺蟲劑。
背景技術(shù):
農(nóng)業(yè)害蟲每年給種植業(yè)都造成了巨大的損失。雖然化學(xué)防治取得顯著成效,但同時也帶來了環(huán)境污染、抗藥性等一系列問題。從20世紀(jì)70年代開始,生物防治受到了各國政府的重視。1992年“世界環(huán)境和發(fā)展大會”的第21條決議提出“到2000年要在全球范圍內(nèi)控制化學(xué)農(nóng)藥的銷售和使用,生物農(nóng)藥的產(chǎn)量達(dá)到60%”。90年代以來,全世界化學(xué)農(nóng)藥的銷售量不斷下降,代之而起的是微生物農(nóng)藥。我國政府也十分重視土地及水資源環(huán)境保護(hù),將“綠色食品和生物農(nóng)藥的發(fā)展”列入21世紀(jì)議程。作為生物防治重要內(nèi)容的微生物農(nóng)藥,具有對人、畜及害蟲天敵極少或完全沒有毒害作用的特點(diǎn),不污染環(huán)境、保持生態(tài)平衡,保持農(nóng)業(yè)、林業(yè)的可持續(xù)發(fā)展,適應(yīng)人們對無公害農(nóng)副產(chǎn)品、綠色食品的需求。
我國加入WTO后,在國際農(nóng)產(chǎn)品和食品貿(mào)易中,將面對國際綠色壁壘的嚴(yán)峻挑戰(zhàn),即苛刻的農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)。此舉導(dǎo)致我國對歐美日等國家的農(nóng)產(chǎn)品出口受限。解決農(nóng)藥毒性超標(biāo)的最佳途徑就是用生物農(nóng)藥代替?zhèn)鹘y(tǒng)的高毒、高殘留的化學(xué)農(nóng)藥?,F(xiàn)有的蘇云金芽孢桿菌生物農(nóng)藥普遍存在著殺蟲見效慢的現(xiàn)象,一般是用藥后第4天才開始效果比較明顯,而且還存在蘇云金芽孢桿菌Bt單一制劑對夜蛾科害蟲防治不佳的問題。
發(fā)明內(nèi)容
為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的不足,本發(fā)明提供一種綠色食品蔬菜田中防治害蟲的生物源殺蟲復(fù)配劑。
本發(fā)明的殺蟲復(fù)配劑為蘇云金芽孢桿菌Bt與success,其中文名稱為菜禧的復(fù)配劑。
Success為美國陶氏益農(nóng)惠贈,主要起輔助殺蟲作用,是胃毒劑,Success可以持續(xù)激活靶標(biāo)昆蟲乙酰膽堿煙堿型受體,但是其結(jié)合位點(diǎn)不同于煙堿和吡蟲啉。多殺菌素也可以影響GABA受體,來起殺蟲作用。Success其主要成分為spinosynAC41H65NO16和spinosynBC42H67NO16,分子結(jié)構(gòu)式為 本發(fā)明殺蟲劑的殺蟲譜為甘藍(lán)夜蛾、小菜蛾、草地螟等。
現(xiàn)有的蘇云金芽孢桿菌生物農(nóng)藥普遍存在著殺蟲見效慢的現(xiàn)象,一般是用藥后第4天開始效果比較明顯,而使用本配方在當(dāng)天或第二天的殺蟲效果就比較明顯;同時,殺蟲效果也比原來的蘇云金芽孢桿菌生物農(nóng)藥殺蟲效果明顯。從整體殺蟲效果上來講,本發(fā)明的殺蟲配方的殺蟲效果明顯優(yōu)于以往的同類產(chǎn)品。
本發(fā)明研制的生物殺蟲劑是高活性蘇云金芽孢桿菌菌株和來自于微生物的success復(fù)合制劑。通過生物測定方法和對蘇云金芽孢桿菌-Bt20活力測定篩選出了與蘇云金芽孢桿菌相容性好的高活性生物殺蟲劑success,并將其作為系列蘇云金芽孢桿菌復(fù)合殺蟲劑的另一重要?dú)⑾x組分,通過室內(nèi)測定、盆栽和田間小區(qū)防治試驗,取得了另人滿意的防治效果,不但能提高蘇云金芽孢桿菌的殺蟲效果,而且能提高蘇云金芽孢桿菌殺蟲的速效性,使目標(biāo)害蟲致死時間提高24小時以上。此種生物制劑配方在國內(nèi)尚屬首次。本發(fā)明的生物農(nóng)藥是符合AA級綠色食品和國際有機(jī)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)的生物制劑。本發(fā)明解決了以往使用生物農(nóng)藥時見效慢的問題;用生物農(nóng)藥代替?zhèn)鹘y(tǒng)的高毒、高殘留的化學(xué)農(nóng)藥來解決農(nóng)藥毒性超標(biāo),具有如下優(yōu)點(diǎn)1、降低蔬菜中的農(nóng)藥殘留;2、加速生物農(nóng)藥的見效時間;
3、降低農(nóng)藥對人、畜及害蟲天敵的毒害作用;4、減少化學(xué)農(nóng)藥對環(huán)境的污染、保持生態(tài)平衡,保持農(nóng)業(yè)、林業(yè)的可持續(xù)發(fā)展,適應(yīng)人們對無公害農(nóng)副產(chǎn)品、綠色食品的需求。
具體實施例方式
具體實施方式
一本實施方式的殺蟲復(fù)配劑為蘇云金芽孢桿菌Bt與success(其中文名稱為菜禧)的復(fù)配劑,其中每100ml復(fù)配劑中含蘇云金芽孢桿菌Bt芽孢數(shù)2×109~7×109個、菜禧0.01~004ml。
具體實施例方式
二本實施方式的蘇云金芽孢桿菌Bt采用蘇云金芽孢桿菌(Bacillus Thuringiensis)Bt20,其殺蟲復(fù)配劑的組成為每100ml成品中含吐溫-60或吐溫-80(60、80是吐溫的商品名)2克、檸檬酸1~3克、甲基纖維素1~4克、硅藻土0.2~0.4克、苯甲酸鈉0.5~2克、蘇云金芽孢桿菌(BacillusThuringiensis)Bt20芽孢數(shù)2×109~7×109個、success0.01~0.04ml。
本實施方式中所用的菌株蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)Bt20簡稱Bt20,于2006年5月11日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏,保藏編號為CGMCC NO.1710。它在殺蟲劑中起殺蟲作用,即蘇云金芽孢桿菌可形成一種稱為“內(nèi)毒素”的蛋白質(zhì)晶體,這種內(nèi)毒素對人、畜無毒,昆蟲取食蘇云金芽孢桿菌后,內(nèi)毒素晶體在昆蟲的腸道中溶解,經(jīng)過昆蟲腸道中的蛋白酶加工作用,降解成有毒性的蛋白毒素,與腸道細(xì)胞表面上的受體結(jié)合,插入膜內(nèi),形成孔洞或離子通道導(dǎo)致膜完全性的破壞,引起離子滲漏,水隨之進(jìn)入細(xì)胞,細(xì)胞因膨脹而解體、死亡,最終昆蟲死亡。
本實施方式中,所述success的質(zhì)量濃度為2.5%。
本實施方式中芽孢計數(shù)按照如下方法進(jìn)行在無菌室內(nèi),向已培養(yǎng)好的斜面中加入2ml無菌水,刮下菌苔,用移液器反復(fù)吹打使其在無菌水中充分混勻,將菌液移入無菌小瓶中;然后按梯度稀釋104~105倍;在血球計數(shù)板上滴幾滴已稀釋的菌液,蓋好蓋玻片,在顯微鏡下查數(shù)并記錄平均每格芽孢個數(shù),計算每毫升菌液含芽孢數(shù),求出原菌液濃度。
本實施方式的Bt20可從土壤中分離獲得,具體獲得方法為(1)主要材料無菌水、多粘菌素B、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、待分離病原的土壤、顯微鏡。
(2)操作步驟i.將1克土壤懸浮于10毫升無菌水中,強(qiáng)烈振蕩,然后靜置5分鐘。
ii.用滅菌吸管將上層懸浮轉(zhuǎn)入一個滅菌試管中,用無菌水進(jìn)行10倍系列稀釋,將每個稀釋度的懸浮1/10毫升放入已滅菌并倒好牛肉膏蛋白胨的瓊脂培養(yǎng)基中(pH=8.5,含5ppm的多粘菌素B),用滅菌三角玻璃刮鏟攤平,30℃,2天,就可分離到Bt20。
值得注意的是iBt20的培養(yǎng)性狀見表1。
表1 Bt20的在牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面上的培養(yǎng)性狀
iiBt 20有4條酯酶區(qū)帶,強(qiáng)帶在Ef值與43處,與庫斯塔克亞種酯酶型相同,見表2。
表2 Bt20菌株區(qū)帶數(shù)及Ef值
具體實施方式
三本實施方式的殺蟲復(fù)配劑的組成為每100ml成品中含吐溫-60或吐溫-802克、檸檬酸1克、甲基纖維素1克、硅藻土0.2克、苯甲酸鈉0.5克、蘇云金芽孢桿菌(Bacillus Thuringiensis)Bt20芽孢數(shù)2×109個、質(zhì)量濃度為2.5%的success0.01ml。
具體實施例方式
四本實施方式的殺蟲復(fù)配劑的組成為每100ml成品中含吐溫-60或吐溫-802克、檸檬酸3克、甲基纖維素4克、硅藻土0.4克、苯甲酸鈉2克、蘇云金芽孢桿菌(Bacillus Thuringiensis)Bt20芽孢數(shù)7×109個、質(zhì)量濃度為2.5%的success004ml。
具體實施例方式
五本實施方式的殺蟲復(fù)配劑的組成為每100ml成品中含吐溫-60或吐溫-802克、檸檬酸1.5克、甲基纖維素2.6克、硅藻土0.3克、苯甲酸鈉1克、蘇云金芽孢桿菌(Bacillus Thuringiensis)Bt20芽孢數(shù)4×109個、質(zhì)量濃度為2.5%的success0.02ml。上述殺蟲劑的藥效試驗如下1、高活性蘇云金桿菌菌株的篩選篩選方法用甘藍(lán)葉片浸蘇云金桿菌發(fā)酵液,風(fēng)干后飼喂小菜蛾,于24、72、120、168小時觀察小菜蛾的死亡情況,計算死亡率和校正死亡率。對照處理是用清水浸甘藍(lán)葉片。
經(jīng)初步篩選,得到Bt20的殺蟲活性在所選菌株中最強(qiáng),其校正死亡率為85.40%,具體結(jié)果見表3。
表3 蘇云金桿菌菌株對菜蛾的室內(nèi)生物測定
2、蘇云金桿菌與Success混用對主要蔬菜害蟲的防效測定將Bt20菌種按每毫升含芽孢1×108的菌液,分別與稀釋6000倍、9000倍液的Success混用,對菜蛾進(jìn)行室內(nèi)、室外殺蟲活性測定,通過2年試驗結(jié)果表明Success對蘇云金桿菌有明顯的增效作用,藥后48~72h對菜蛾室內(nèi)防效達(dá)90%以上,田間小區(qū)防治效果穩(wěn)定在80%~85%以上。對菜青蟲、甘藍(lán)夜蛾的室內(nèi)防治效果為60%~70%(表4~6)。
表4 Success混用對菜蛾防效的室內(nèi)測定
從表4可以看出Success對菜蛾有一定的防治效果,但其防治效果僅為48~66%;將Success稀釋到9000倍還是6000倍時對菜蛾防治的效果差異不大。
表5 Bt20與success混配及單獨(dú)使用時菜蛾的校正死亡率
從表5可以看出Bt20與success混配的殺蟲效果明顯優(yōu)于單獨(dú)Bt20和success的單獨(dú)使用;同時,也可以看出Success稀釋到9000倍還是6000倍與Bt20混合使用對菜蛾的防治效果影響不大。
表6 田間小區(qū)菌株Bt20與Success混用對菜蛾幼蟲的防治效果
從表6可以看出蘇云金芽孢桿菌Bt20與success混配的防治菜蛾幼蟲的效果明顯優(yōu)于單獨(dú)Bt20和success的單獨(dú)使用;而且,明顯優(yōu)于常用的菜蛾殺蟲劑2.5%功夫菊酯。同時,也可以看出success稀釋到9000倍還是6000倍與Bt20混合使用對菜蛾的防治效果影響不大。
3、生物殺蟲劑的室內(nèi)殺蟲活性及田間防治效果(表7~9)用本實施方式所配制復(fù)配制劑對菜青蟲、甘藍(lán)夜蛾、草地螟等重要農(nóng)林害蟲進(jìn)行了殺蟲活性測定。結(jié)果表明,對菜青蟲防效達(dá)89.1%(72h)、甘藍(lán)夜蛾84.8%(72h)、草地螟86.7%(48h)。室外盆栽及小區(qū)試驗,對對2齡甘藍(lán)夜蛾的防治效果達(dá)70~100%(96h)。
表7 Bt20菌株與Success及助劑混配后對草地螟的防治效果
注助劑是指配方中除了蘇云金芽孢桿菌Bt20和success以外的其它成份組合。
從表7可以看出單獨(dú)使用助劑時,對草地螟的殺蟲效果不大,可以忽略;本實施方式的復(fù)配劑對草地螟的殺蟲效果明顯優(yōu)于success+Bt20對草地螟的防治效果。
表8 田間小區(qū)菌劑對菜青蟲的防治結(jié)果
從表8可以看出田間小區(qū)試驗中,本實施方式的復(fù)配劑對菜青蟲的殺蟲效果優(yōu)于菌株Bt20單獨(dú)防治效果。
表9 Bt復(fù)配劑對蔬菜害蟲的田間小區(qū)防治試驗
從表9可以看出本實施方式的復(fù)配劑對甘藍(lán)夜蛾都有較好的防效。
權(quán)利要求
1.綠色食品蔬菜田中防治害蟲的生物源殺蟲復(fù)配劑,其特征在于所述殺蟲復(fù)配劑為蘇云金芽孢桿菌Bt與success的復(fù)配劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的綠色食品蔬菜田中防治害蟲的生物源殺蟲復(fù)配劑,其特征在于每100ml復(fù)配劑中含蘇云金芽孢桿菌Bt芽孢數(shù)2×109~7×109個、菜禧0.01~004ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的綠色食品蔬菜田中防治害蟲的生物源殺蟲復(fù)配劑,其特征在于所述蘇云金芽孢桿菌Bt為蘇云金芽孢桿菌Bt20。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的綠色食品蔬菜田中防治害蟲的生物源殺蟲復(fù)配劑,其特征在于所述蘇云金芽孢桿菌Bt20于2006年5月11日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏,保藏編號為CGMCC NO.1710。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的綠色食品蔬菜田中防治害蟲的生物源殺蟲復(fù)配劑,其特征在于所述每100ml復(fù)配劑中含吐溫-60或吐溫-802克、檸檬酸1~3克、甲基纖維素1~4克、硅藻土0.2~0.4克、苯甲酸鈉0.5~2克、蘇云金芽孢桿菌Bt20芽孢數(shù)2×109~7×109個、success0.01~004ml。
6.根據(jù)權(quán)利要求所述的綠色食品蔬菜田中防治害蟲的生物源殺蟲復(fù)配劑,其特征在于每100ml復(fù)配劑中含吐溫-60或吐溫-802克、檸檬酸1克、甲基纖維素1克、硅藻土0.2克、苯甲酸鈉0.5克、蘇云金芽孢桿菌Bt20芽孢數(shù)2×109個、success0.01ml。
7.根據(jù)權(quán)利要求所述的綠色食品蔬菜田中防治害蟲的生物源殺蟲復(fù)配劑,其特征在于100ml復(fù)配劑中含吐溫-60或吐溫-802克、檸檬酸3克、甲基纖維素4克、硅藻土0.4克、苯甲酸鈉2克、蘇云金芽孢桿菌Bt20芽孢數(shù)7×109個、success004ml。
8.根據(jù)權(quán)利要求所述的綠色食品蔬菜田中防治害蟲的生物源殺蟲復(fù)配劑,其特征在于每100ml復(fù)配劑中含吐溫-60或吐溫-802克、檸檬酸1.5克、甲基纖維素2.6克、硅藻土0.3克、苯甲酸鈉1克、蘇云金芽孢桿菌Bt20芽孢數(shù)4×109個、success0.02ml。
全文摘要
綠色食品蔬菜田中防治害蟲的生物源殺蟲復(fù)配劑,涉及一種殺蟲劑。本發(fā)明殺蟲復(fù)配劑為蘇云金芽孢桿菌Bt與success的復(fù)配劑,其中每100ml復(fù)配劑中含蘇云金芽孢桿菌Bt芽孢數(shù)2×10
文檔編號A01N43/02GK1875717SQ20061001026
公開日2006年12月13日 申請日期2006年7月7日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月7日
發(fā)明者于洪春, 趙奎軍, 樊東, 韓嵐嵐, 王曉云, 戴長春 申請人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)