專利名稱：蛇床子素及其復(fù)配物在制備防治水稻稻曲病農(nóng)藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蛇床子素單劑及其復(fù)配組合物，特別是其與腈菌唑、井岡霉素復(fù)配后在制備防治水稻稻曲病農(nóng)藥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
水稻稻曲病又稱偽黑穗病、綠黑穗病、谷花病、青粉病，俗稱“豐產(chǎn)果”，是由Ustilaginoidea virens(Cooke)Tak引起的水稻后期發(fā)生的一種真菌性病害。1874年Cooke在印度首次發(fā)現(xiàn)稻曲病，該病害是世界主要稻作區(qū)普遍發(fā)生的一種病害。有報道其分布范圍包括中國、日本、菲律賓、印度、印尼、美國、巴西、澳大利亞、埃及、孟加拉國、英國等5大洲40多個國家。自20世紀(jì)70年代末以來，該病在我國自南向北相繼大面積發(fā)生，并有加重趨勢，已成為影響我國水稻生產(chǎn)的重要病害之一。一般發(fā)病田塊減產(chǎn)5％～10％，嚴(yán)重發(fā)病田塊減產(chǎn)50％～70％。此外稻曲病菌還可產(chǎn)生有害毒素，影響稻米品質(zhì)，對人、畜、家禽等造成危害。
目前水稻稻曲病主要以有機銅、有機錫類藥劑防治，雖然它們有良好的防效，但是重金屬類藥劑在水稻穗期使用對水稻有藥害作用。長期使用該類藥劑不僅造成嚴(yán)重的農(nóng)田生態(tài)環(huán)境和水質(zhì)污染，而且增加了稻米有毒化學(xué)物質(zhì)的殘留，對人類健康帶來嚴(yán)重危害。因此，研究新型生物殺菌劑對于控制稻曲病的發(fā)生發(fā)展，提高稻米品質(zhì)意義重大。
香豆素類化合物蛇床子素(Osthol)化學(xué)名稱為8-(3-甲基-2-丁烯基)甲醚繖形酮，是傘形花科植物蛇床子中主要成分，也是歐前胡、圓當(dāng)歸、毛當(dāng)歸、栓翅芹的根和根莖，以及蕓香科植物八角、黃皮的根皮，單葉蕓香等的地上部分的活性成分。該化合物的殺蟲抑菌活性已經(jīng)報道。如專利ZL01127083.7“蛇床子素在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用”公開了蛇床子素在殺蟲抑菌、果蔬保鮮和農(nóng)畜產(chǎn)品防腐等方面的應(yīng)用。專利ZL200410069127.5“蛇床子素及其復(fù)配組合物防治作物白粉病”公開了蛇床子素及其復(fù)配組合物防治作物白粉病的使用技術(shù)和效果。關(guān)于蛇床子素、蛇床子素與腈菌唑、井岡霉素復(fù)配物防治水稻稻曲病的應(yīng)用研究未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
1、發(fā)明目的本發(fā)明的目的是針對有機銅、有機錫類藥劑在防治稻曲病方面存在的不足，提供一種高效、低毒的植物源農(nóng)藥及其復(fù)配組合物，以減少重金屬類藥劑的使用量，安全有效地控制稻曲病的發(fā)生發(fā)展。
2、技術(shù)方案本發(fā)明一方面提供了蛇床子素在制備防治水稻稻曲病農(nóng)藥中的應(yīng)用；另一方面還提供了蛇床子素(A)和腈菌唑、或井岡霉素(B)以重量比為A∶B＝1∶1～1∶20，更優(yōu)選為1∶1～10組成的復(fù)配組合物在制備防治水稻稻曲病農(nóng)藥中的應(yīng)用。蛇床子素與其他殺菌劑復(fù)配室內(nèi)配方篩選。
供試病菌及作物 以水稻稻曲病菌Ustilaginoidea virens(Cooke)Tak為供試菌(江蘇省農(nóng)科院食品質(zhì)量安全與檢測研究所提供)，供試水稻品種為“連粳3號”。
供試藥劑 94.7％蛇床子素溶解于95％乙醇，制成10000μg/ml母液備用；95％腈菌唑(江蘇省江陰市福達(dá)農(nóng)化有限公司生產(chǎn))、86％井岡霉素(上海市農(nóng)藥研究所生產(chǎn))，分別溶解于水和丙酮，制成10000μg/ml母液備用。
表1蛇床子素和其他殺菌劑復(fù)配比例 注表中所列比例均按藥劑有效成分計算。
菌種培養(yǎng) 在100ml PS培養(yǎng)基中接種已在PSA培養(yǎng)基上培養(yǎng)了7d的菌絲塊(直徑4mm)3塊，25℃恒溫水浴搖培7d的孢子菌絲懸浮液，以單層滅菌醫(yī)用沙布過濾去菌絲，孢子懸浮液供測試用。
復(fù)配組合物制備 通過預(yù)備試驗和所測定的單劑毒力曲線進行配比設(shè)計，按照表1的復(fù)配比例進行復(fù)配，各復(fù)配劑均溶于丙酮，制成10000μg/ml母液備用。
毒力測定方法 將上述各單劑及復(fù)配母液按表2用PS培養(yǎng)基稀釋成系列濃度。每50ml的三角瓶中裝稀釋液30ml，設(shè)空白對照和溶劑對照，每濃度3瓶。稀釋時嚴(yán)格無菌操作。然后，每瓶加已培養(yǎng)備用的菌種2.5ml，28℃恒溫?fù)u培7d(轉(zhuǎn)速120r/min)。收集菌絲，冷凍真空干燥，稱取菌絲干重，計算菌絲干重抑制率。表2各藥劑系列稀釋濃度 計算方法 EC50(理論值)＝(a+b)/(a/EC50(a)+b/EC50(b))； SR＝EC50(理論值)/EC50(實際值)。
通過菌絲干重抑制率的機率值和系列藥劑濃度的對數(shù)值之間的線性回歸分析，求出各藥劑的毒力曲線Y＝a+bx和EC50。根據(jù)Wadley方法評價混配劑的相互作用，a、b是各組分在混劑中含量比例。以SR值分析混配的效果。其中，SR＝0.5～1.5，則兩種藥劑混配有加和作用，SR≤0.5，則兩種藥劑混配有拮抗作用，SR≥1.5，則2種藥劑混配有增效作用。
結(jié)果與分析 蛇床子素和其他殺菌劑復(fù)配制劑田間藥效試驗。
試驗設(shè)計 具體試驗設(shè)計見表4表4田間藥效試驗設(shè)計 試驗藥劑 1％蛇床子素EW 250×(“×”表示稀釋倍數(shù)下同)，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，有效濃度為40μg/ml。
12.5％腈菌唑WP 1500×，張家港市七洲農(nóng)藥化工有限公司生產(chǎn)，有效濃度為83.3μg/ml。
20％井岡霉素WG 3000×，浙江省金豐農(nóng)化有限公司生產(chǎn)，有效濃度為66.7μg/ml。
2％蛇床子素·腈菌唑SE 400×(有效成分1％蛇床子素+1％腈菌唑)，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，有效濃度為25μg/ml蛇床子素+25μg/ml腈菌唑。
3％蛇床子素·腈菌唑SE 500×(有效成分1％蛇床子素+2％腈菌唑)，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，有效濃度為20μg/ml蛇床子素+40μg/ml腈菌唑。
4％蛇床子素·腈菌唑SE 600×(有效成分1％蛇床子素+3％腈菌唑)，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，有效濃度為16.7μg/ml蛇床子素+51μg/ml腈菌唑。
11％蛇床子素·腈菌唑SE 800×(有效成分1％蛇床子素+10％腈菌唑)，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，有效濃度為12.5μg/ml蛇床子素+125μg/ml腈菌唑。
4％蛇床子素·井岡霉素SE600×(有效成分1％蛇床子素+3％井岡霉素)，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，有效濃度為16.7μg/ml蛇床子素+50μg/ml井岡霉素。
6％蛇床子素·井岡霉素SE 750×(有效成分1％蛇床子素+5％井岡霉素)，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，有效濃度為13.3μg/ml蛇床子素+66.7μg/ml井岡霉素。
8％蛇床子素·井岡霉素SE 900×(有效成分1％蛇床子素+7％井岡霉素)，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，有效濃度為11.1μg/ml蛇床子素+77.8μg/ml井岡霉素。
11％蛇床子素·井岡霉素SE 1000×(有效成分1％蛇床子素+10％井岡霉素)，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，有效濃度為10μg/ml蛇床子素+100μg/ml井岡霉素。
對照藥劑 20％瘟曲克星WP，100g/667m2，浙江禾本農(nóng)化有限公司。
空白對照清水。
其中，EW表示水乳劑，WP表示可濕性粉劑，WG表示水溶性粒劑，SE表示水懸乳劑。
小區(qū)設(shè)置及試驗方法 根據(jù)預(yù)備試驗的結(jié)果設(shè)置系列濃度進行小區(qū)試驗，設(shè)空白對照，每小區(qū)20m2，每處理4次重復(fù)。于水稻破口前、破口期和齊穗期各施一次藥，用工農(nóng)-16型噴霧器噴霧，用藥液量50kg/畝。
調(diào)查方法 最后一次施藥后10d觀察安全性，病情穩(wěn)定期調(diào)查防治效果。采用對角線5點取樣，每處理調(diào)查5點，共100叢，調(diào)查各處理的病穗數(shù)、病粒數(shù)，計算病穗率、病粒率、病穗防效和病粒防效。并用DPS2000數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進行分析和差異顯著性檢驗(Duncan’S新復(fù)極差法)。
藥效計算方法 病穗率(％)＝病穗數(shù)/調(diào)查總數(shù)×100。
病穗防治效果(％)＝(對照病穗率-處理病穗率)/對照病穗率×100。
病粒率(％)＝病粒數(shù)/調(diào)查總數(shù)×100。
病粒防治效果(％)＝(對照病粒率-處理病粒率)/對照病粒率×100。
對作物安全性 根據(jù)觀察，各藥劑對水稻生長安全，無藥害。
試驗結(jié)果 各藥劑對水稻稻曲病的田間防治效果見表5，1％蛇床子素EW250×、12.5％腈菌唑WP1500×、2％蛇床子素·腈菌唑SE400×、3％蛇床子素·腈菌唑SE 500×、4％蛇床子素·腈菌唑SE 600×、11％蛇床子素·腈菌唑SE 800×等藥劑的病穗防效分別為72.3％、78.1％、84.0％、86.7％、88.4％、86.5％，病粒防效分別為75.2％、81.6％、87.7％、90.1％、89.6％、87.6％，對照藥劑20％瘟曲克星WP 100g/667m2的病穗防效和病粒防效分別為87.3％和82.3％。方差分析結(jié)果表明，處理藥劑2％蛇床子素·腈菌唑SE 400×、3％蛇床子素·腈菌唑SE 500×、4％蛇床子素·腈菌唑SE 600×、11％蛇床子素·腈菌唑SE 800×與對照藥劑20％瘟曲克星WP 100g/667m2的防效之間無顯著差異，而與兩單劑1％蛇床子素EW250×、12.5％腈菌唑WP1500×的防效之間差異達(dá)極顯著水平。
1％蛇床子素EW250×、20％井岡霉素WG、4％蛇床子素·井岡霉素SE600×、6％蛇床子素·井岡霉素SE 750×、8％蛇床子素·井岡霉素SE 900×、11％蛇床子素·井岡霉素SE 1000×等藥劑對水稻稻曲病的病穗防效分別為72.3％、65.6％、80.3％、82.9％、88.7％、85.6％，病粒防效分別為75.2％、67.8％、81.5％、84.1％、86.7％、88.3％，對照藥劑20％瘟曲克星WP 100g/667m2的病穗防效和病粒防效分別為87.3％和82.3％。方差分析結(jié)果表明，處理藥劑4％蛇床子素·井岡霉素SE600×、6％蛇床子素·井岡霉素SE750×、8％蛇床子素·井岡霉素SE 900×、11％蛇床子素·井岡霉素SE 1000×與對照藥劑20％瘟曲克星WP 100g/667m2的防效之間無顯著差異，而與兩單劑1％蛇床子素EW250×、20％井岡霉素WG的防效之間差異達(dá)極顯著水平。
藥效評價各復(fù)配劑對水稻稻曲病均有較好的防治效果，防效可達(dá)80％左右，高于各單劑的防效，田間能有效防治水稻稻曲病。
表5蛇床子素及其復(fù)配制劑防治水稻稻曲病田間藥效試驗結(jié)果 注不同小寫字母表示差異達(dá)0.05顯著水平，不同大寫字母表示差異達(dá)0.01顯著水平。
*為4次重復(fù)的平均值。
安全性試驗 在上述與蛇床子素復(fù)配比例的其它殺菌劑中，其用量均為單劑常規(guī)用量一半或一半以下，因此其對人畜的毒性與對作物的安全性是符合要求的，而在上述配方中，蛇床子素的含量最高1％，經(jīng)認(rèn)定機構(gòu)毒性試驗結(jié)果表明1％蛇床子素水乳劑屬于微毒類農(nóng)藥 大鼠急性經(jīng)口毒性

♀＞5000mg/Kg； 大鼠急性經(jīng)皮毒性

♀＞5000mg/Kg； 兔眼刺激積分為0(1h)，48h后為0(1∶100)稀釋，對眼無刺激性； 兔眼刺激積分為0(4h)，對皮膚無刺激性。
3、有益效果本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其顯著優(yōu)點是提供了一種高效、低毒的植物源農(nóng)藥及其復(fù)配組合物農(nóng)藥，以減少重金屬類藥劑的使用量，能安全有效地控制稻曲病的發(fā)生發(fā)展。
具體實施例方式 實施例11％蛇床子素EW 250×(有效濃度為40μg/ml)防治水稻稻曲病在水稻破口前、破口前期各施1次藥，每畝用藥100ml，每畝藥液量30～40千克，噴霧。
實施例23％蛇床子素·腈菌唑SE 500×(有效成分1％蛇床子素+1％腈菌唑，有效濃度為20μg/ml蛇床子素+40μg/ml腈菌唑)防治水稻稻曲病在水稻破口前、破口前期各施1次藥，每畝用藥100ml，每畝藥液量30～40千克，噴霧。
實施例36％蛇床子素·井岡霉素SE 750×(有效成分1％蛇床子素+5％井岡霉素，有效濃度為13.3μg/ml蛇床子素+66.7μg/ml井岡霉素)防治水稻稻曲病在在水稻破口前、破口期各施1次藥，每畝用藥100ml，每畝藥液量30～40千克，噴霧。
權(quán)利要求
1、蛇床子素在制備防治水稻稻曲病農(nóng)藥中的應(yīng)用。
2、蛇床子素和腈菌唑、或井岡霉素組成的復(fù)配組合物在制備防治水稻稻曲病農(nóng)藥中的應(yīng)用。
3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的蛇床子素和腈菌唑、或井岡霉素復(fù)配組合物在制備防治水稻稻曲病農(nóng)藥中的應(yīng)用，其特征是蛇床子素與腈菌唑、或井岡霉素的重量比為1∶1～10。
全文摘要
本發(fā)明公開了蛇床子素在制備防治水稻稻曲病農(nóng)藥中的應(yīng)用；以及蛇床子素和腈菌唑、或井岡霉素組成的復(fù)配組合物在制備防治水稻稻曲病農(nóng)藥中的應(yīng)用。本發(fā)明的優(yōu)點是提供了一種高效、低毒的植物源農(nóng)藥及其復(fù)配組合物農(nóng)藥，以減少重金屬類藥劑的使用量，能安全有效地控制稻曲病的發(fā)生發(fā)展。
文檔編號A01N43/14GK1973626SQ20061009828
公開日2007年6月6日 申請日期2006年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月11日
發(fā)明者石志琦, 王春梅, 范永堅, 陳浩 申請人:江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院