專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種有廣譜高效殺菌作用的酶組合殺菌制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：一種有廣譜高效殺菌作用的酶組合殺菌制劑及其制備方法，本發(fā)明涉及食品安全和酶制劑
技術(shù)領(lǐng)域：
。還涉及替代詞料中抗生素，動(dòng)植物產(chǎn)品的保藏領(lǐng)域，具體說(shuō)是一種具有廣譜高效殺菌作用酶的組合。
背景技術(shù)：
：抗生素是一類(lèi)應(yīng)用最廣泛的抗菌藥物，不僅用于臨床，也用于畜禽詞養(yǎng)和農(nóng)業(yè)方面。在過(guò)去的50多年中，由于抗生素長(zhǎng)期使用導(dǎo)致大量耐藥菌株的產(chǎn)生，且病原菌抗藥性逐年增強(qiáng)，致使療效下降，劑量提高。因此，世界衛(wèi)生組織于1994年就細(xì)菌耐藥性的監(jiān)測(cè)結(jié)果給全世界提出了警示細(xì)菌對(duì)抗生素產(chǎn)生的耐藥性正在以驚人的速度增加，而現(xiàn)有的抗生素藥物正在失去原來(lái)的療效。因此尋求廣譜、高效的新一代抗菌藥物己成為迫在眉睫的擺在人類(lèi)面前的課題。酶廣泛存在于生物體內(nèi)，參與新陳代謝等多種生理功能，其中對(duì)微生物細(xì)胞壁具有水解功能的酶類(lèi)能夠溶解微生物細(xì)胞壁而使微生物死亡。由于水解酶的特異性很強(qiáng)，微生物的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成又存在差異，因此一種酶只能對(duì)某一類(lèi)微生物有水解作用。即使對(duì)于某一特定微生物，由于細(xì)胞壁化學(xué)組成的復(fù)雜性，也需要不同類(lèi)型水解酶的組合，才能有更好的作用效果。水解酶的殺菌作用與傳統(tǒng)的抗生素藥物相比，具有對(duì)某一病原菌所有血清型都有效的優(yōu)點(diǎn)，當(dāng)幾種酶復(fù)合后，對(duì)不同類(lèi)型的病原菌均有效，克服了一種抗生素只能預(yù)防一種或其中一種血清型病原菌的不足，更不存在藥物殘留和耐藥性的問(wèn)題。溶菌酶在醫(yī)藥和食品中已開(kāi)始使用，作為畜禽飼料添加劑則剛剛起步，僅前蘇聯(lián)、法國(guó)、德國(guó)和美國(guó)做了一些初步研究，目前，國(guó)內(nèi)也開(kāi)始進(jìn)行相關(guān)研究。而復(fù)合殺菌酶藥物的研究國(guó)內(nèi)外均剛剛起步。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種有廣譜高效殺菌作用的酶組合殺菌制劑及其制備方法，是一種光譜高效、無(wú)殘留，無(wú)污染、適用范圍廣的殺菌制劑。本發(fā)明的技術(shù)方案一種酶組合殺菌制劑，以制劑中酶活含量計(jì)，按溶菌酶4001000U/g、卩-l，3-葡聚糖酶2000080000U/g、卩-甘露聚糖酶5000~10000U/g和中性蛋白酶80000~140000U/g的配比配制為組合酶，采用海藻糖30%~50%、黃原膠20%~40%、羧甲基纖維素鈉15%~30%和茁霉多糖5°/。~10%的配比配制為包被劑，將組合酶進(jìn)行包被得酶組合殺菌制劑。所述酶組合殺菌制劑的制備方法1)組合酶的配制根據(jù)所用酶的酶活含量換算成質(zhì)量，按組合酶的配比稱(chēng)取相應(yīng)質(zhì)量的溶菌酶、P-l，3-葡聚糖酶、P-甘露聚糖酶和中性蛋白酶，然后混合均勻?yàn)榻M合酶；2)酶的包被保護(hù)按包被劑配比稱(chēng)取海藻糖、黃原膠、羧甲基纖維素鈉和茁霉多糖，混合均勻?yàn)榘粍?，用包被劑重?-10倍量的30-5(TC的水浸泡3-5小時(shí)，加入工序l)所得組合酶，用膠體磨研磨兩遍，采用白炭黑吸附制備成粉末顆粒，或采用噴霧干燥制備成微膠囊。酶組合殺菌制劑的應(yīng)用，用于飼料中組合酶以粉末形式添加到飼料中直接使用，添加量酶組合殺菌制劑/全價(jià)飼料為40-50g/噸；或用于食品保藏將組合酶用適量水溶解后，再用快速濾紙過(guò)濾，取濾液使用，酶組合殺菌制劑溶液濃度為0.03%-0.05%。本發(fā)明的有益效果1、殺菌譜廣能夠殺滅革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌，特別是致病菌，如對(duì)沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌有很好的殺菌效果，且對(duì)真菌也有殺菌作用。2、殺菌能力強(qiáng)幾種酶的組合殺菌制劑，不但具有殺菌譜廣的特點(diǎn)，而且具有殺菌能力強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)，不同酶組合可以增強(qiáng)殺菌效果，比單一使用溶菌酶殺菌能力增加IO倍以上。3、無(wú)耐藥性和殘留酶的殺菌機(jī)理是裂解細(xì)菌的細(xì)胞壁，細(xì)菌不會(huì)產(chǎn)生耐藥性，不會(huì)殘留在組織器官中，同時(shí)酶是蛋白質(zhì)，在食品烹調(diào)過(guò)程中變性失活，有利于保障食品安全，改善人類(lèi)健康。4、抗逆性強(qiáng)包被成微膠囊的酶組合殺菌劑能夠有效耐受加工過(guò)程中的高溫、強(qiáng)氧化劑和低酸，保持高的殺菌活力，可以滿(mǎn)足不同條件下使用的需要。5、實(shí)用范圍廣可以替代飼料中的抗生素，作為獸藥用于動(dòng)物疾病的治療；也可用于食品工業(yè)，用于動(dòng)植物產(chǎn)品的保藏，延長(zhǎng)貨架壽命，改善食品品質(zhì)；在醫(yī)療上可以作為消毒劑使用。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例詳述本發(fā)明。實(shí)施例1酶組合殺菌制劑的配制以制劑中酶活含量計(jì)，將溶菌酶400~1000U/g、p-l，3-葡聚糖酶20000~80000U/g、卩-甘露聚糖酶500010000U/g和中性蛋白酶80000-140000U/g組合。采用海藻糖30%50%、黃原膠20%40%、羧甲基纖維素鈉15%~30%和茁霉多糖5%10%的包被劑，將組合酶制備成微膠囊或粉末酶組合殺菌制劑。其制備方法為1)組合酶的配制根據(jù)酶的酶活含量，將酶活換算成所需的質(zhì)量，稱(chēng)取相應(yīng)質(zhì)量的溶菌酶、P-l，3-葡聚糖酶、P-甘露聚糖酶和中性蛋白酶，混合均勻。2)酶活力保護(hù)采用海藻糖30%~50%、黃原膠20%~40%、羧甲基纖維素鈉15%~30°/。和茁霉多糖5%10%的包被劑配方，用適量溫水(8-10倍量、30-50°C)溶解浸泡包被劑3-5小時(shí)，將組合酶和包被劑按配比混合，用膠體磨研磨兩遍，采用白炭黑吸附制備成粉末顆粒，或采用噴霧干燥制備成微膠囊。如用于飼料中可直接使用，如用于食品保藏需要將該制劑溶于適量水中，用快速濾紙過(guò)濾，取濾液使用，酶組合殺菌制劑溶液濃度為0.03%-0.05%。實(shí)施例2沙門(mén)氏菌培養(yǎng)5h后，在1號(hào)試管加最佳濃度的溶菌酶液0.5mL，2號(hào)試管加酶組合殺菌劑液0.5mL(巳將固體殺菌劑配成溶液，其中各酶的酶活在權(quán)利要求l所述的范圍內(nèi)，下同)，3號(hào)試管加入磷酸緩沖液0.5mL，每號(hào)管做三個(gè)重復(fù)。再置于水浴中恒溫振蕩培養(yǎng)10分鐘后取出。I號(hào)試管稀釋IOOO倍，2號(hào)試管稀釋100倍，3號(hào)試管稀釋100000倍，各取lmL于無(wú)菌培養(yǎng)皿中，倒入營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15mL，冷卻后翻轉(zhuǎn)置于37'C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)后取出計(jì)數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表l。表l沙門(mén)氏菌平板計(jì)數(shù)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>由表1結(jié)果可知，酶組合殺菌劑殺菌效果最強(qiáng)，沙門(mén)氏菌數(shù)目比對(duì)照組減少了10000倍，即使與正對(duì)照的最佳的溶菌酶組相比，也減少了10倍，這充分證實(shí)了酶組合殺菌劑具有更強(qiáng)的殺菌效果。實(shí)施例3金黃色葡萄球菌培養(yǎng)5h后，在1號(hào)試管加最佳濃度的溶菌酶液0.5mL，2號(hào)試管加酶組合殺菌劑液0.5mL，3號(hào)試管加入磷酸緩沖液0.5mL，每號(hào)管做三個(gè)重復(fù)。再置于水浴中恒溫振蕩培養(yǎng)10分鐘后取出。I號(hào)試管稀釋IOOO倍，2號(hào)試管稀釋100倍，3號(hào)試管稀釋100000倍，各取lmL于無(wú)菌培養(yǎng)皿中，倒入營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15mL，冷卻后翻轉(zhuǎn)置于37'C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36小時(shí)后取出計(jì)數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表2。表2金黃色葡萄球菌平板計(jì)數(shù)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>由表2結(jié)果可知，酶組合殺菌劑殺菌效果最強(qiáng)，金黃色葡萄球菌數(shù)目比對(duì)照組減少了約100000倍，即使與正對(duì)照的最佳的溶菌酶組相比，減少了約IOO倍，這充分證實(shí)了酶組合殺菌劑具有更強(qiáng)的殺菌效果。實(shí)施例4大腸桿菌(JM109)培養(yǎng)5h后，在1號(hào)試管加最佳濃度的溶菌酶液0.5mL，2號(hào)試管加酶組合殺菌劑液0.5mL，3號(hào)試管加入磷酸緩沖液0.5mL，每號(hào)管做三個(gè)重復(fù)。再置于水浴中恒溫振蕩培養(yǎng)10分鐘后取出。I號(hào)試管稀釋IOOO倍，2號(hào)試管稀釋100倍，3號(hào)試管稀釋100000倍，各取lmL于無(wú)菌培養(yǎng)皿中，倒入營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15mL，冷卻后翻轉(zhuǎn)置于37'C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36小時(shí)后取出計(jì)數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表3。表3大腸桿菌平板計(jì)數(shù)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>由表3結(jié)果可知，酶組合殺菌劑殺菌效果最強(qiáng)，大腸桿菌數(shù)目比對(duì)照組減少了約100000倍，即使與正對(duì)照的最佳的溶菌酶組相比，減少了約100倍，這充分證實(shí)了酶組合殺菌劑具有更強(qiáng)的殺菌效果。實(shí)施例5試驗(yàn)在江蘇省某家禽試驗(yàn)場(chǎng)進(jìn)行，試驗(yàn)從l日齡開(kāi)始至49日齡結(jié)束，日期為2006年6月25日至2006年8月14日，地面平養(yǎng)、鋸末墊料。對(duì)照組添加藥物(包括球蟲(chóng)藥和抗生素)；試驗(yàn)組除添加殺菌酶組合外，不添加任何其它藥物。表4肉雞試驗(yàn)安排及結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實(shí)施例6試驗(yàn)在福建武坪縣某豬場(chǎng)進(jìn)行，大斷奶仔豬、試驗(yàn)從斷奶開(kāi)始用至斷奶后第三周結(jié)束，日期為2006年7月15日至2006年8月5日。表5斷奶仔豬試驗(yàn)安排及結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注在同一豬場(chǎng)共進(jìn)行兩次類(lèi)似的試驗(yàn)，第一次是去掉詞料中的藥物，保留氧化鋅；第二次是去掉藥物和氧化鋅，均沒(méi)有發(fā)生拉稀和其它疾病。權(quán)利要求1、一種酶組合殺菌制劑，其特征在于以制劑中酶活含量計(jì)，按溶菌酶400～1000U/g、β-1，3-葡聚糖酶20000～80000U/g、β-甘露聚糖酶5000～10000U/g和中性蛋白酶80000～140000U/g的配比配制為組合酶，采用海藻糖30％～50％、黃原膠20％～40％、羧甲基纖維素鈉15％～30％和茁霉多糖5％～10％的配比配制為包被劑，將組合酶進(jìn)行包被得酶組合殺菌制劑。2、一種權(quán)利要求1所述酶組合殺菌制劑的制備方法，其特征在于1)組合酶的配制根據(jù)所用酶的酶活含量換算成質(zhì)量，按組合酶的配比稱(chēng)取相應(yīng)質(zhì)量的溶菌酶、P-l，3-葡聚糖酶、P-甘露聚糖酶和中性蛋白酶，然后混合均勻?yàn)榻M合酶；2)酶的包被保護(hù)按包被劑配比稱(chēng)取海藻糖、黃原膠、羧甲基纖維素鈉和茁霉多糖，混合均勻?yàn)榘粍?，用包被劑重?-10倍量的30-5(TC的水浸泡3-5小時(shí)，加入工序l)所得組合酶，用膠體磨研磨兩遍，采用白炭黑吸附制備成粉末顆粒，或采用噴霧干燥制備成微膠囊。3、權(quán)利要求l的酶組合殺菌制劑的應(yīng)用，其特征是用于飼料中組合酶以粉末形式添加到飼料中直接使用，添加量酶組合殺菌制劑/全價(jià)飼料為40-50g/噸；或用于食品保藏將組合酶用水溶解后，再用快速濾紙過(guò)濾，取濾液使用，酶組合殺菌制劑溶液濃度為0.03%-0.05%。全文摘要一種有廣譜高效殺菌作用的酶組合殺菌制劑及其制備方法，涉及食品安全和酶制劑
技術(shù)領(lǐng)域：
。本發(fā)明提供了一種酶組合殺菌制劑，其由溶菌酶、β-1，3-葡聚糖酶、β-甘露聚糖酶和中性蛋白酶組合，采用海藻糖、黃原膠、羧甲基纖維素鈉和茁霉多糖的包被劑配方，將組合酶進(jìn)行包被。本發(fā)明通過(guò)采用多酶組合和包被技術(shù)，將上述酶優(yōu)化組合，同時(shí)采用包被技術(shù)對(duì)酶進(jìn)行保護(hù)，能夠有效殺滅革蘭氏陽(yáng)性和陰性菌，殺菌譜廣，效力強(qiáng)，可以有效殺滅沙門(mén)氏菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等病原菌，能夠完全替代豬、禽飼料中抗生素，用于動(dòng)植物產(chǎn)品的保藏。包被保護(hù)提高了酶對(duì)溫度、氧化劑和酸的耐受性，提高了酶在不利因素下的殺菌效果，拓展了酶殺菌劑的使用領(lǐng)域。文檔編號(hào)A23K1/17GK101199319SQ20071013541公開(kāi)日2008年6月18日申請(qǐng)日期2007年11月8日優(yōu)先權(quán)日2007年11月8日發(fā)明者樂(lè)國(guó)偉,卉代,鋒史,李永富申請(qǐng)人:江南大學(xué)