專利名稱：白前提取物及其制備方法與應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及白前提取物及其制備方法與應用。

背景技術：
植物性殺蟲、殺菌和除草劑的研究和利用，一直受到世界各國的重視。目前，植物性殺蟲劑的研究相對較多，比較成功的有除蟲菊素、印楝素等。人工種植的印楝樹已經(jīng)遍及世界各地，印楝素類殺蟲劑的產(chǎn)值已經(jīng)超過數(shù)億美元，印楝樹被認為是解決全球化學農(nóng)藥污染的希望之樹。另外，除蟲菊等藥源植物也已經(jīng)在發(fā)達國家的有機生產(chǎn)中廣泛應用，其人工種植技術、活性成分提取技術等均在深入研究之中。目前，各國科學家均在尋找有效的植物資源，以期開發(fā)出更高效的植物源殺蟲殺菌除草劑。
白前為蘿摩科多年生草本植物，約200種，分布于非洲等地區(qū)，我國有50余種，包括老瓜頭Cynanchum komarovii Al.Iljinski、柳葉白前Cynanchumstauntonii(Decne.)Schltr.ex Levl.和芫花葉白前C.glaucescens(Decne.)Hand.-Mazz.等。白前用作中藥，可降氣清痰止咳。其植物形態(tài)如下直立半灌木，高30～50cm；莖圓柱形，稍有細棱；葉對生，長橢圓形，長3～5cm，寬4～14mm，基部楔形，尖端漸尖，背面葉脈稍隆起；聚傘花序腋生，有花3～8；花萼5深裂；花冠紫紅色，輻射狀，內(nèi)面被長柔毛，裂片狹三角形；副花冠裂片橢圓形，5深裂；雄蕊5，與雌蕊合生成蕊柱，花藥2室；柱頭微凸，包于花藥的薄膜內(nèi)；骨突果單生。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種白前提取物及其制備方法。
本發(fā)明所提供的白前提取物按照下述方法制備用酸乙醇浸提白前，得到的浸提液用氯仿進行萃取，收集氯仿層，得到白前提取物； 所述酸乙醇是由無機酸和乙醇組成的溶液； 所述無機酸的摩爾濃度為12mol/L，乙醇的摩爾濃度為17mol/L； 所述無機酸具體可為鹽酸或硫酸。
所述浸提中，所述白前和酸乙醇的配比為1g白前5-20ml酸乙醇，優(yōu)選為1g白前5-8ml酸乙醇或1g白前15-20ml酸乙醇，尤其優(yōu)選為1g白前15ml酸乙醇； 上述方法中，所述浸提時間為12-96小時，優(yōu)選為48-96小時，尤其優(yōu)選為72小時； 上述方法中，所述浸提次數(shù)為1-5次，優(yōu)選為4次。
上述方法中，為了提高提取效果，所述白前在浸提前最好進行粉碎，得到顆粒的粒徑為6-40目，優(yōu)選為16目。
上述方法中，所述白前和酸乙醇的配比為1g白前15ml酸乙醇，所述浸提時間為72小時，所述浸提次數(shù)為4次，所述白前顆粒的粒徑為16目。
上述方法中，所述白前可為植株的地上部分或地下部分，還可為整個植株；所述白前可為老瓜頭Cynanchum komarovii Al.Iljinski.。
上述方法中的浸提溫度可為25-35℃，萃取溫度可為25-35℃。
所述方法中還包括純化的步驟。
所述純化步驟為重復如下方法1-2次將所述白前提取物溶于0.5-0.6mol/L鹽酸水溶液中，用氯仿萃取，收集水層，加氨水調(diào)節(jié)pH值為9-10，再以氯仿萃取，回收氯仿層，除去氯仿。
實驗證明，本發(fā)明方法制備的白前粗提取物0.25mg/ml對小菜蛾3齡幼蟲的非選擇性拒食率為98.27％，對斜紋夜蛾的非選擇性拒食率為95.88％。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種殺蟲劑。
本發(fā)明所提供的殺蟲劑，它的活性成分為上述白前提取物。
用本發(fā)明方法制備的白前提取物對鱗翅目害蟲，如斜紋夜蛾有很好的殺蟲效果。
本發(fā)明根據(jù)白前屬植物的生物學特性，從植株不同部位、材料粒徑、浸提溶劑、浸提時間、浸提次數(shù)、分離技術等工藝條件進行了深入研究，摸索出其生物堿提取制備的工藝。本發(fā)明制備的白前提取物對鱗翅目害蟲具有較高的非選擇性拒食活性。利用本發(fā)明的白前提取物制備的殺蟲劑具有綠色環(huán)保、低毒無害等優(yōu)點，符合可持續(xù)發(fā)展的目標。本發(fā)明為充分利用我國現(xiàn)有的藥源植物資源開發(fā)出一種或多種植物性殺蟲或抗菌劑提供切實可行的關鍵技術，為擴大我國植物性殺蟲或抗菌劑的應用范圍，提高植物性殺蟲或抗菌劑的殺滅效果提供新的技術支持，為此類中草藥植物的綜合開發(fā)利用提供新的技術手段。



圖1為材料粒徑對白前精制提取物的影響 圖2為浸提物固液比對白前精制提取物的影響 圖3為浸提時間對白前精制提取物的影響 圖4為浸提次數(shù)對白前精制提取物的影響
具體實施例方式 實施例1、白前提取物的制備 該實施例中所用的白前為老瓜頭(Cynanchum komarovii Al.Iljinski)，用成熟后采收的植株進行下述實驗。其中，植株的地上部分包括莖、葉、果實，植株的地下部分由根組成。
一、選擇浸提溶劑、分離方法、植株部位 1、浸提溶劑對白前精制提取物的影響 用2L工業(yè)酒精(乙醇的體積百分濃度96％)、2L酸乙醇(其中鹽酸的摩爾濃度為12mol/L，乙醇的摩爾濃度為17mol/L)、2L酸水(0.15mol/L鹽酸水溶液)、2L無水乙醇四種浸提溶劑，分別浸提0.2kg白前全株6目干粉72小時，浸提4次，將4次的浸提液混合，得到浸膏。將浸膏溶于0.5-0.6mol/L鹽酸水溶液中，用氯仿萃取，收集水層，加氨水調(diào)節(jié)pH值為9-10，再以氯仿萃取，回收氯仿層，除去氯仿，得到的即為白前粗制提取物，實驗設三次重復。
采用試管檢測法測定浸膏中白前粗制提取物和精制提取物的含量。稱取干凈的三角瓶的重量，把含有白前提取物的氯仿萃取液置于瓶中旋干以除去氯仿，再稱其總重，兩者相減就是粗制提取物的重量。粗制提取物的產(chǎn)率＝(粗制提取物的質(zhì)量/白前干粉的質(zhì)量)×100％。將上述粗制提取物溶于0.5-0.6mol/L鹽酸水溶液中，用氯仿萃取，收集水層，加氨水調(diào)節(jié)pH值為9-10，再以氯仿萃取，回收氯仿層，除去氯仿，得到的即為白前精制提取物。
用四種浸提溶劑分別對0.2kg白前全株6目干粉進行浸提，結(jié)果表明，用工業(yè)酒精提取，可得到70.74g浸膏，該70.74g浸膏經(jīng)過進一步提取得到0.284g粗制提取物，粗制提取物提取率為0.142％，再經(jīng)過精制可以得到0.078g精制提取物；用酸水提取，可得到95.31g浸膏，浸膏經(jīng)過進一步提取得到0.330g粗制提取物，再經(jīng)過精制可以得到0.116g精制提取物；用無水乙醇提取，可得到13.73g浸膏，浸膏經(jīng)過進一步提取得到0.036g粗制提取物，再經(jīng)過精制可以得到0.012g精制提取物；用酸乙醇提取，可得到105.75g浸膏，浸膏經(jīng)過進一步提取得到0.303g粗制提取物，再經(jīng)過精制可以得到0.110g精制提取物。表明用酸水做浸提溶劑時，雖然粗、精制提取物的得率比較高，但是浸泡和提取過程麻煩，所以不采用。用酸乙醇做浸提溶劑時，其浸膏、粗、精制提取物的得率都比較高，粗制提取物提取率為0.152％，精制提取物的提取率為0.055％，而且工藝流程簡單，所以采用酸乙醇作為浸提溶劑較好。
按照下述方法測定不同浸提溶劑提取的白前精制提取物對斜紋夜蛾拒食率的影響。采用傳統(tǒng)的葉碟法，將0.25mg用不同浸提溶劑提取的精制提取物用100ml無水乙醇溶解成0.0025mg/ml的溶液，然后選取潔凈的甘藍葉片，用打孔器打出葉碟，將葉碟在上述用乙醇溶解的精制提取物中浸1s后取出，放在潔凈的臺面上自然晾干，然后將葉碟置于墊有保濕濾紙的9cm培養(yǎng)皿中；另設只浸泡無水乙醇的甘藍葉片為對照，每皿4片葉，放入三齡的斜紋夜蛾1頭。24h、48h后用葉面積測定儀分別測定剩余葉面積，據(jù)此計算取食葉面積和拒食率。選擇性拒食率＝(對照組取食葉面積-處理組取食葉面積)÷(處理組取食葉面積+對照組取食葉面積)。實驗設3次重復。結(jié)果如表1所示，表1中的數(shù)據(jù)為三次重復的平均值±標準差。
表1不同浸提溶劑提取的白前提取物對斜紋夜蛾拒食率的影響 結(jié)果表明，用酸乙醇做浸提溶劑時，白前精制提取物對斜紋夜蛾拒食率的影響較大，所以采用酸乙醇作為浸提溶劑較好。
2、分離技術對白前精制提取物含量的影響 用2L酸乙醇(其中鹽酸的摩爾濃度為12mol/L，乙醇的摩爾濃度為17mol/L)浸提0.2kg白前全株6目干粉72小時，浸提4次，將4次的浸提液混合。將浸膏均分為兩份，一份在上述浸提液中加入1L的0.5-0.6mol/L鹽酸水溶液溶解，用氯仿萃取，收集水層，加氨水調(diào)節(jié)pH值為9-10，再以氯仿萃取，回收氯仿層，旋干以除去氯仿，得到白前粗制提取物。將上述粗制提取物溶于0.5-0.6mol/L鹽酸水溶液中，用氯仿萃取，收集水層，加氨水調(diào)節(jié)pH值為9-10，再以氯仿萃取，回收氯仿層，旋干以除去氯仿，得到白前精制提取物，結(jié)果得到0.137g精制提取物。另一份浸提液在高速離心機下以10000r/min的速度離心10分鐘收集沉淀，將沉淀用氯仿溶解，過濾后旋干氯仿液，得到0.080g精制提取物。實驗設三次重復。
結(jié)果表明，萃取得到0.137±0.0024g(平均值±標準差)精制提取物，離心得到0.080±0.0015g(平均值±標準差)精制提取物。表明用萃取和離心兩種方法進行提取時，萃取方法得到的白前精制提取物含量遠大于離心方法得到的白前精制提取物含量。在萃取和離心后，用生物活性成分顯色劑(碘-碘化鉀和碘化鉍鉀)檢測剩余液中提取物的含量，結(jié)果表明，用萃取方法幾乎完全提取了白前的提取物；而用離心方法對白前提取物的提取不完全，還有很多提取物殘留。通過調(diào)整離心機轉(zhuǎn)速和延長離心時間都不能使之完全提取。
按照步驟1的方法測定萃取和離心得到的精制提取物對斜紋夜蛾的拒食率。實驗設三次重復。0.0025mg/ml的精制提取物對斜紋夜蛾的選擇性拒食率的影響結(jié)果如表2所示。
表2不同分離技術得到的白前精制提取物對斜紋夜蛾拒食率的影響 結(jié)果表明，用萃取方法得到的白前精制提取物對斜紋夜蛾拒食率的影響較大，所以采用萃取方法來分離白前精制提取物較好。
3、提取部位對斜紋夜蛾的拒食活性的影響 用0.5L酸乙醇(其中鹽酸的摩爾濃度為12mol/L，乙醇的摩爾濃度為17mol/L)分別浸提0.05kg白前地上和地下部分6目干粉，浸提4次，每次72小時，將4次的浸提混合，在上述浸提液中加入1L的0.5-0.6mol/L鹽酸水溶液，用氯仿萃取，收集水層，加氨水調(diào)節(jié)其pH值為9-10，再以氯仿萃取，回收氯仿層，旋干以除去氯仿，得到白前粗制提取物。將上述粗制提取物溶于0.5-0.6mol/L鹽酸水溶液中，用氯仿萃取，收集水層，加氨水調(diào)節(jié)pH值為9-10，再以氯仿萃取，回收氯仿層，旋干以除去氯仿，得到白前精制提取物，實驗設三次重復。結(jié)果表明0.05kg白前地下部分6目干粉，經(jīng)酸乙醇浸提后得到20.718g浸膏，進一步提取后得到0.280g粗制提取物，再精制得到0.125g精制提取物；0.05kg白前地上部分6目干粉，經(jīng)同樣方法浸提后得到19.263g浸膏，進一步提取后得到0.120g粗制提取物，再精制得到0.066g精制提取物。
按照步驟1的方法分別測定白前地上部分得到的浸膏和地下部分得到的浸膏中精制提取物對斜紋夜蛾拒食率的影響。實驗設三次重復。0.0025mg/ml精制提取物對斜紋夜蛾的選擇性拒食率的影響如表3所示。
表3不同部位材料對斜紋夜蛾拒食率的影響 結(jié)果表明，白前地下部分材料精制提取物含量高于地上部分，對斜紋夜蛾拒食率的影響較大，因此選擇白前地下部分材料作為實驗材料。
二、正交實驗確定各因素對白前精制提取物含量的影響 1、白前干粉和浸提溶劑的固液比對精制提取物的影響 分別用0.25L、0.4L、0.5L、0.75L和1L的酸乙醇(其中鹽酸的摩爾濃度為12mol/L，乙醇的摩爾濃度為17mol/L)浸提白前地下部分10目干粉0.05kg，浸提24小時，提取一次，在浸膏中加入1L的0.5-0.6mol/L鹽酸水溶液，用氯仿萃取，收集水層，加氨水調(diào)節(jié)pH值為9-10，再以氯仿萃取，回收氯仿層，旋干以除去氯仿，得到白前粗制提取物。將上述粗制提取物溶于0.5-0.6mol/L鹽酸水溶液中，用氯仿萃取，收集水層，加氨水調(diào)節(jié)pH值為9-10，再以氯仿萃取，回收氯仿層，旋干以除去氯仿，得到白前精制提取物，精制提取物的質(zhì)量分別為0.070g、0.071g、0.054g、0.079g和0.067g。實驗設三次重復。結(jié)果如圖2所示，結(jié)果表明，不同固液比條件下，白前精制提取物含量有一定波動，采用1g白前15ml酸乙醇的配比進行浸提時，精制提取物含量最高，圖2中的數(shù)值為三次重復的平均值。
2、浸提時間對精制提取物提取的影響 用0.5L酸乙醇(其中鹽酸的摩爾濃度為12mol/L，乙醇的摩爾濃度為17mol/L)浸提白前地下部分10目干粉0.05kg，浸提時間設置為12h、24h、48h、72h和96h，提取一次，比較不同浸提時間下精制提取物的含量。在上述浸提液中加入1L的0.5-0.6mol/L鹽酸水溶液，用氯仿萃取，收集水層，加氨水調(diào)節(jié)pH值為9-10，再以氯仿萃取，回收氯仿層，旋干以除去氯仿，得到白前粗制提取物。將上述粗制提取物溶于0.5-0.6mol/L鹽酸水溶液中，用氯仿萃取，收集水層，加氨水調(diào)節(jié)pH值為9-10，再以氯仿萃取，回收氯仿層，旋干以除去氯仿，得到白前精制提取物，實驗設三次重復。結(jié)果如圖3所示，結(jié)果表明，浸提時間對精制提取物含量的影響較大，精制提取物含量隨著浸提時間的延長而增大，浸提72小時，精制提取物含量最高。
3、浸提次數(shù)對精制提取物的影響 用0.5L酸乙醇(其中鹽酸的摩爾濃度為12mol/L，乙醇的摩爾濃度為17mol/L)浸提白前地下部分10目干粉0.05kg，浸提24h，浸提1次、2次、3次、4次和5次，比較浸提次數(shù)不同時精制提取物的含量。在上述浸膏中加入1L的0.5-0.6mol/L鹽酸水溶液，用氯仿萃取，收集水層，加氨水調(diào)節(jié)pH值為9-10，再以氯仿萃取，回收氯仿層，旋干以除去氯仿，得到白前粗制提取物。將上述粗制提取物溶于0.5-0.6mol/L鹽酸水溶液中，用氯仿萃取，收集水層，加氨水調(diào)節(jié)pH值為9-10，再以氯仿萃取，回收氯仿層，旋干以除去氯仿，得到白前精制提取物，實驗設三次重復。結(jié)果如圖4所示，結(jié)果表明，隨著浸提次數(shù)的增加，白前浸提液中精制提取物的含量有很大提高，精制提取物含量隨浸提次數(shù)的增加而增加，但是在浸提第五次以后，得到的精制提取物反而有所下降，推測可能是浸提次數(shù)過多，時間過長而破壞了其中的成分，造成精制提取物含量降低。浸提4次時，浸提液中的精制提取物含量達到最高。
4、白前干粉粒徑對精制提取物的影響 用0.5L酸乙醇(其中鹽酸的摩爾濃度為12mol/L，乙醇的摩爾濃度為17mol/L)浸提白前地下部分6目、10目、16目、20目和40目干粉各0.05kg，浸提24h，浸提1次，比較白前干粉粒徑不同時浸提液中精制提取物含量。在上述浸膏中加入1L的0.5-0.6mol/L鹽酸水溶液，用氯仿萃取，收集水層，加氨水調(diào)節(jié)pH值為9-10，再以氯仿萃取，回收氯仿層，旋干以除去氯仿，得到白前粗制提取物。將上述粗制提取物溶于0.5-0.6mol/L鹽酸水溶液中，用氯仿萃取，收集水層，加氨水調(diào)節(jié)pH值為9-10，再以氯仿萃取，回收氯仿層，旋干以除去氯仿，得到白前精制提取物，實驗設三次重復。結(jié)果如圖1所示，結(jié)果表明，白前干粉粒徑對精制提取物含量的影響受上面幾個因素制約，白前干粉粒徑不同時，浸提液中精制提取物含量有一定波動，采用16目的白前干粉進行浸提時，浸提液中的精制提取物含量最高。
5、正交實驗確定較佳的工藝條件 根據(jù)以上單因素試驗結(jié)果，設計L9(34)正交表，對試驗結(jié)果進行分析，確定最佳的提取條件。結(jié)果如表6、表7和表8所示。其中，A表示白前干粉粒徑，B表示固液比，C表示浸提時間，D表示浸提次數(shù)。
表6多因素水平正交結(jié)果極差分析
表7因素變量表 注水平列括號中的數(shù)據(jù)為水平的取值。
表8方差分析表

從以上表中的數(shù)據(jù)可以看出，因素A、B、C、D對精制提取物的含量均有顯著影響，四因素對精制提取物影響的主次順序為B＞A＞C＞D，最佳提取條件為B1A3C3D2。
實施例2、本發(fā)明制備的白前提取物對鱗翅目害蟲非選擇性拒食活性的影響 1、白前提取物的制備 1)用2L酸乙醇(其中鹽酸的摩爾濃度為12mol/L，乙醇的摩爾濃度為17mol/L)浸提0.2kg白前地下部分16目的干粉72小時后，分別收集浸提液和殘渣；該浸提液為第一次浸提液，體積1.5-1.6L。
2)將步驟1)收集的殘渣再用2L酸乙醇(其中鹽酸的摩爾濃度為12mol/L，乙醇的摩爾濃度為17mol/L)浸提72小時，分別收集浸提液和殘渣；該浸提液為第二次浸提液，體積1.6-1.8L L。
3)將步驟2)收集的殘渣再用2L酸乙醇(其中鹽酸的摩爾濃度為12mol/L，乙醇的摩爾濃度為17mol/L)浸提72小時，分別收集浸提液和殘渣；該浸提液為第三次浸提液，體積1.7-1.8L L。
4)將步驟3)收集的殘渣再用2L酸乙醇(其中鹽酸的摩爾濃度為12mol/L，乙醇的摩爾濃度為17mol/L)浸提72小時，分別收集浸提液和殘渣；該浸提液為第四次浸提液，體積1.8-1.9L。
5)將上述四次浸提液混合后，旋干，加入2.5L的0.5-0.6mol/L鹽酸水溶液中，用氯仿萃取，收集水層，加氨水調(diào)節(jié)pH值為9-10，再以氯仿萃取，回收氯仿層，旋干以除去氯仿，得到白前粗制提取物。將上述粗制提取物溶于0.5-0.6mol/L鹽酸水溶液中，用氯仿萃取，收集水層，加氨水調(diào)節(jié)pH值為9-10，再以氯仿萃取，回收氯仿層，旋干以除去氯仿，得到白前精制提取物，實驗設三次重復。結(jié)果表明，0.2kg白前地下部分16目的干粉共得到0.382±0.0041g(平均值±標準差)粗制提取物。該粗制提取物經(jīng)精制共得到0.187±0.0038g(平均值±標準差)精制提取物。
2、白前粗制提取物對斜紋夜蛾生物活性的影響 按照如下方法測定步驟1制備的白前粗制提取物對斜紋夜蛾的非選擇性拒食活性的影響。采用傳統(tǒng)的葉碟法，將步驟1提取的粗制提取物用無水乙醇溶解成如表9所示的不同濃度的溶液，然后選取潔凈的甘藍葉片，用打孔器打出葉碟，將葉碟在上述不同濃度的粗制提取物中浸1sec后取出，放在潔凈的臺面上自然晾干，然后將葉碟置于墊有保濕濾紙的9cm培養(yǎng)皿中；另設只浸泡無水乙醇的甘藍葉片為對照。每皿4片葉，放入三齡和五齡的斜紋夜蛾各1頭。每個處理重復10次。24h、48h后用葉面積測定儀分別測定剩余葉面積，據(jù)此計算取食葉面積和拒食率。非選擇性拒食率＝(對照組取食葉面積-處理組取食葉面積)÷對照組取食葉面積。測定結(jié)果如表9所示。面積表示活性測定中吃掉的面積。
表9白前提取物對鱗翅目害蟲的非選擇性拒食活性的影響 表中數(shù)據(jù)為10次重復的平均值±SE；“拒食率％”列數(shù)據(jù)后標不同字母者，表示經(jīng)LSD法于5％水平有顯著差異，大寫字母表示在1％水平有極限著差異。
結(jié)果表明，用步驟1制備的白前粗制提取物對斜紋夜蛾幼蟲有較強的非選擇性拒食活性，拒食活性隨粗制提取物濃度的增加而增加，且對3齡幼蟲的拒食活性強于5齡幼蟲。濃度為0.5mg/ml的粗制提取物對斜紋夜蛾5齡幼蟲的拒食率可以達到95％以上；對3齡幼蟲，在濃度為0.25mg/ml時拒食率就在95％以上。濃度為0.05mg/ml時5齡的拒食率僅為42.71％，而3齡的拒食率已經(jīng)達到79.40％。在低濃度下(0.01mg/ml)3齡和5齡的拒食率差不多，這個濃度對3齡和5齡幼蟲的的拒食效果均不明顯。
3、白前粗制提取物對小菜蛾生物活性的影響 按照如下方法測定步驟1制備的白前粗制提取物對小菜蛾生物活性的影響。
(1)選擇性拒食活性測定 將新鮮平整均一的甘藍葉片，用打孔器打成葉碟，放入不同濃度的粗制提取物乙醇稀釋液中浸泡1s，待葉碟晾干后，放入直徑為9cm的培養(yǎng)皿中(內(nèi)墊濾紙保濕)，每皿擺入處理和對照(無水乙醇)葉片各4片，相對排列。每皿中放入小菜蛾3齡幼蟲10頭，每個濃度重復3次。24h后用方格紙測定剩下葉面積，計算取食葉面積和拒食率。測定結(jié)果如表10所示。
表10白前粗制提取物對小菜蛾的選擇性拒食活性的影響 表中數(shù)據(jù)為3次重復的平均值±SE。
結(jié)果表明，用實施例1方法制備的白前提取物中粗制提取物對小菜蛾三齡幼蟲有較強的拒食活性，選擇性拒食活性隨粗制提取物濃度的增加而增加。濃度為0.25mg/ml、0.1mg/ml、0.05mg/ml、0.025mg/ml、0.01mg/ml的粗制提取物，選擇性拒食率分別為98.25％、94.81％、85.71％、63.51％、49.80％。
(2)非選擇性拒食活性測定 將新鮮平整均一的甘藍葉片，用打孔器打成葉碟，放入不同濃度的粗制提取物乙醇稀釋液中浸泡1sec，待葉碟晾干后，放入直徑為9cm的培養(yǎng)皿中(內(nèi)墊濾紙保濕)，每皿擺入處理和對照(無水乙醇)葉片各4片，相對排列。每皿中放入小菜蛾3齡幼蟲10頭，每個濃度重復3次。24h后用方格紙測定剩下葉面積。計算取食葉面積和拒食率。測定結(jié)果如表11所示。

表11白前提粗制提取物對小菜蛾的非選擇性拒食活性的影響 表中數(shù)據(jù)為3次重復的平均值±SE。
結(jié)果表明，用實施例1方法制備的白前粗制提取物對小菜蛾三齡幼蟲有較強的拒食活性，且拒食活性隨粗制提取物濃度的增加而增加。濃度為0.25mg/ml、0.1mg/ml、0.05mg/ml、0.025mg/ml、0.01mg/ml的粗制提取物，非選擇性拒食率分別為98.27％、93.68％、90.04％、61.29％、56.79％。
權(quán)利要求
1.一種白前提取物的制備方法，是用酸乙醇浸提白前，得到的浸提液用氯仿進行萃取，收集氯仿層，得到白前提取物；
所述酸乙醇是由無機酸和乙醇組成的溶液；
所述無機酸的摩爾濃度為12mol/L，所述乙醇的摩爾濃度為17mol/L。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述無機酸為鹽酸或硫酸；
所述浸提中，所述白前和酸乙醇的配比為1g白前5-20ml酸乙醇，優(yōu)選為1g白前5-8ml酸乙醇或1g白前15-20ml酸乙醇，尤其優(yōu)選為1g白前15ml酸乙醇；
所述浸提時間為12-96小時，優(yōu)選為48-96小時，尤其優(yōu)選為72小時；
所述浸提次數(shù)為1-5次，優(yōu)選為4次。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于所述白前在浸提前進行粉碎，得到的白前顆粒的粒徑為6-40目，優(yōu)選為16目。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于所述方法中，所述白前和酸乙醇的配比為1g白前15ml酸乙醇，所述浸提時間為72小時，所述浸提次數(shù)為4次，所述白前顆粒的粒徑為16目。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的制備方法，其特征在于所述白前為植株的地上部分、地下部分或整個植株；所述白前為老瓜頭Cynanchum komaroviiAl.Iljinski.。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的制備方法，其特征在于所述方法中還包括純化的步驟。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于所述純化步驟為重復如下方法1-2次將所述白前提取物溶于0.5-0.6mol/L鹽酸水溶液中，用氯仿萃取，收集水層，加氨水調(diào)節(jié)pH值為9-10，再以氯仿萃取，回收氯仿層，除去氯仿。
8.由權(quán)利要求1-7中任一所述方法得到的白前提取物。
9.一種殺蟲劑，它的活性成分是權(quán)利要求8所述的白前提取物。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的殺蟲劑，其特征在于所述殺蟲劑的殺蟲譜為鱗翅目昆蟲，如斜紋夜蛾或小菜蛾。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種白前提取物及其制備方法。本發(fā)明的白前提取物是按照下述方法制備的用酸乙醇(其中鹽酸的摩爾濃度為12mol/L，乙醇的摩爾濃度為17mol/L)浸提白前，得到的浸提液用氯仿進行萃取，收集氯仿層，得到白前提取物。本發(fā)明方法制備的白前提取物對鱗翅目害蟲具有較高的非選擇性拒食活性。利用本發(fā)明的白前提取物制備的殺蟲劑具有綠色環(huán)保、低毒無害等優(yōu)點，符合可持續(xù)發(fā)展的目標。為充分利用我國現(xiàn)有的藥源植物資源開發(fā)出一種或多種植物性殺蟲或抗菌劑提供切實可行的關鍵技術，為擴大我國植物性殺蟲或抗菌劑的應用范圍，提高植物性殺蟲或抗菌劑的殺滅效果提供新的技術支持。
文檔編號A01P7/04GK101156604SQ20071017718
公開日2008年4月9日 申請日期2007年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月12日
發(fā)明者石旺鵬, 王燕燕, 云 凌, 張晨良, 王繼朋, 王迎兒, 旭 陳 申請人:中國農(nóng)業(yè)大學, 北京卉林園景綠化工程有限公司