專利名稱：：ToTV抗性植物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及病毒抗性植物(或抗病毒的植物)以及生產(chǎn)這些植物的方法。具體地，該方法涉及抗番茄灼燒病毒(ToTV)的4直物、生產(chǎn)這些植物的方法以及由此獲得的植物和植物部分。
背景技術(shù)：
：番癡(SoZarut/nZj/cqpersicum,以前為丄少co/ers/c(9"escw/ewfww)易感大量病毒種屬，其中一些最常見的番茄病毒包^舌番茄斑萎病毒TSWV;番茄斑萎病毒屬)、鳳果花葉P印MV;馬鈴薯x病毒屬)和番茄黃曲葉病毒(7bwWoye〃ow/ea/cw/Wn^，TYLCV;菜豆金黃花葉病毒屬)。這些疾病對植物造成的損害從葉子變色、壞死斑至嚴(yán)重的產(chǎn)量損失和植物死亡不等。對于以商業(yè)育種工作者來說，能夠提供抗性植物(resistantplant)是最重要的，而對于某些經(jīng)濟(jì)上損害性最嚴(yán)重的病毒，已經(jīng)生產(chǎn)了抗性;f直物品種。然而，有時(shí)可能一直會有又于農(nóng)作物帶來相當(dāng)損害的新病毒出J見。在1996年，報(bào)道了一種新的番茄病毒，其從1993年開始感染美國和意大利的番茄植物，被命名為番茄褪綠傳染性病毒(7bw"to，TICV;毛形病毒屬/Duffusw"/.、1996)。1998年報(bào)道了相同種屬的另一種新型番茄病毒。已證實(shí)這種病毒從81989年開始感染美國的番茄植物，-陂命名為番茄褪綠病毒(7bmatocWoraw、w7^s，ToCV;Wislerda/.、1998)。且已i正實(shí)這兩種殺斤病毒均通過白蠅傳播，而該昆蟲是一種非常有效的疾病傳播媒介。人們通常i人為，已知病毒的地理分布將增加，且部分由于不同病毒整合形成新毒抹或新病毒而導(dǎo)致新病毒不斷出現(xiàn)。培育抗性品種在這些疾病的成功控制(治療)中可以發(fā)揮重要作用。最近，在西班牙的番茄才直物上發(fā)現(xiàn)了一種新病毒，其引起的癥狀(局部地稱為疾病"灼燒")并不能歸于任何已知病毒。植物葉子出現(xiàn)壞死斑，果實(shí)上出現(xiàn)褐色環(huán)，且表現(xiàn)出生長減'隄。血清學(xué)試-驗(yàn)(ELISA)表明存在鳳果花葉病毒(PepMV)。電子顯孩i鏡研究表明的確存在馬鈴薯X病毒(potexvirus)典型的桿狀顆粒。然而，在受感染葉組織中也發(fā)現(xiàn)了^求形病毒顆粒。研究者能夠^人與PepMV的復(fù)合物中分離該#斤病毒。該新病毒暫時(shí)命名為番茄灼:曉病毒(Tomatotorradovirus，ToTV)、于2004年11月24日保藏在德國孩史生物和纟田月包i咅養(yǎng)中心(DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturenGmbHunder),保藏號為ToTV-EOl(DSM16999),且作為影響番茄的疾病如"灼燒"(西班牙)、"枯萎"或"巧克力"(墨西哥和危i也馬才立)的至丈病因子(病原體，causativeagent)。人們i人為該病毒還能夠引起與在其他茄屬的番茄中所引起癥狀類似的疾病癥狀,特另ll是在辣椒屬(C"戸'c畫s//.，Pepper)和癡子(5b/""wmwe/owgewa，aubergine)中。目前，還沒有攜帶對該新病毒的特異抗性的植物，同時(shí)需要開發(fā)這種抗性植物。
發(fā)明內(nèi)容現(xiàn)在，本發(fā)明發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)抗ToTV的番茄植物。他們發(fā)現(xiàn)，該才直物暴露于所述病毒后，不出J見疾病癥狀，且不能在這些才直物中4企測到該病毒顆?；虿《綬NA。如下文所指出的，將該反應(yīng)(應(yīng)答)定義為抗性。這沖羊的柏—物在開發(fā)抗該新病毒的商用培才直番茄品種時(shí)極具價(jià)值，特別是當(dāng)負(fù)責(zé)該抗性特征或與其相關(guān)的遺傳元件或者在這種監(jiān)測有助于改善育種效率，且可大大改善新開發(fā)的抗性品種上市的時(shí)間。通過雜交試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)負(fù)責(zé)對ToTV抗性的基因在抗性植物中以純合型(同型結(jié)合地，homozygously)存在，而雜合才直物則易感ToTV感染。因此，發(fā)現(xiàn)ToTV抗性由一種隱性基因(recessivegene)賦予。然而，包含兩種形式等位基因的植物，即雜合植物對于植物育種工作者也同樣有用，因?yàn)槠淇稍陔s交和自交中用作母本，以生成純合型子代植物。因此，在第一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種番茄才直物，其基因組內(nèi)部具有可賦予對番茄灼燒病毒(ToTV)抗性的基因的至少一個(gè)等位基因，所述病毒已經(jīng)于2004年11月24日保藏在德國^鼓生物和細(xì)胞培養(yǎng)中心，保藏號為ToTV-EOl(DSM16999)。迄今為止，人們尚不了解抗ToTV的番茄植物。經(jīng)過后續(xù)的實(shí)驗(yàn)，本發(fā)明發(fā)明人發(fā)現(xiàn)這些抗ToTV植物中的抗性緊密連鎖(連接，linkto)于多種AFLP標(biāo)記物。不希望受任何理i侖限制，且盡管這些標(biāo)記物中大多凄t在基因組上的定位尚未確定，但認(rèn)為負(fù)責(zé)該特性的基因位于4號染色體上。因此，在所述第一方面的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，包含賦予番茄灼燒病毒(ToTV)抗性的基因的等位基因位于與AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282、Pll/M35-F-216、P21/M61畫F畫583、P25/M51-F-131、P15/M49-F-330和/或P13/M38-F-311/313,優(yōu)選AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282、P11/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313，最優(yōu)選AFLP標(biāo)記物Pll/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313連鎖的基因組區(qū)域。在所述第一方面的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述等位基因定位于4號染色體上，優(yōu)選定位于AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282與P11/M35-F-216之間的基因組區(qū)域內(nèi)。在所述第一方面的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述等位基因以純合子形式(homozygousform)存在，乂人而得到表達(dá)該抗性表型的柏:物。在所述第一方面的另外一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述番茄植物是一種番茄種屬的植物，優(yōu)選培植的番茄植物。在所述第一方面的另外一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述抗性表示為將所述才直物暴露于至少最^f氐感染劑量的ToTV后對該病毒感染的抗性。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，可通過對易感性植物進(jìn)行常規(guī)實(shí)驗(yàn)而確定最4氐有歲文劑量。在所述第一方面的另外一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述4直物在涉及ToTV感染的抗性生物分析中加以鑒定，或者其中所述植物通過篩查是否存在至少一個(gè)連鎖于所述ToTV抗性基因的所述等位基因的分子標(biāo)i己物而加以鑒定。在所述第一方面的另外一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述才直物通過一種涉及篩查是否存在至少一個(gè)連鎖于所述ToTV抗性基因的所述等位基因的方法而生產(chǎn)。另一方面，本發(fā)明涉及源自本發(fā)明的植物的植物部分。植物部分的實(shí)例包括但不限于花粉、胚珠、葉子、胚芽、根、根尖、花藥、花、果實(shí)、莖、枝條和種子的單個(gè)細(xì)胞和組織；以及花粉、胚珠、葉子、胚芽、根、根尖、花藥、花、果實(shí)、莖、枝條、幼枝、根莖、種子、原生質(zhì)體、胼胝體等的單個(gè)細(xì)胞和組織。伊C選所述部分是果實(shí)或種子。植物部分的其他優(yōu)選實(shí)施方式包括用于無性繁殖的部分，包括優(yōu)選的部分如小孢子、花粉、胚珠、葉子、胚芽、根、根尖、花藥、花、果實(shí)、莖枝條、莖、枝條、幼枝、根莖、原生質(zhì)體、胼胝體和擬分生組織等。另一方面，本發(fā)明涉及用于選擇本文所定義的抗番茄灼燒病毒(ToTV)的番茄才直物的方法，所述方法包4舌以下步驟a)^是供所述病毒的接種物；b)使番茄植物暴露于所述接種物；c)給予足夠的孵育時(shí)間，以及d)如果隨著孵育時(shí)間的^i移，所述^i物中未形成感染，則選^棒所述番茄植物。另一方面，本發(fā)明涉及用于選4奪其基因組包含賦予如本文所定義番茄灼燒病毒(ToTV)抗性的基因的至少一個(gè)等位基因的方法，所述方法包括一個(gè)步艱《即篩查番茄才直物基因組中與AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282、Pll/M35-F-216、P21/M61畫F畫583、P25/M51-F-131、P15/M49-F-330和/或P13/M38-F-311/313，優(yōu)選AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282、P11/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313，最優(yōu)選AFLP標(biāo)記物P11/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313連鎖的基因組區(qū)i或的存在。另外一方面，本發(fā)明涉及用于生產(chǎn)番茄植物的方法，包括通過實(shí)施根據(jù)本發(fā)明的用于選擇番茄植物的方法，而選擇基因組內(nèi)包含至少一個(gè)賦予如本文所定義的番茄灼燒病毒(ToTV)抗性的等位基因(或基因的等位基因)的植物，并使所述選定植物與自身或另一種番茄植物雜交而產(chǎn)生種子，以及將所述種子培育成番茄植物。另一方面，本發(fā)明涉及用于生產(chǎn)如本文所定義的抗番茄灼燒病毒(ToTV)的番茄植物的方法，所述方法包括以下步驟a)通過實(shí)施根據(jù)本發(fā)明的用于選4奪番茄植物的方法而選擇基因組內(nèi)包含賦予所述番茄灼燒病毒(ToTV)抗性的基因的至少一個(gè)等位基因的植物；b)使所述選定植物與另一種番茄植物或自身雜交而產(chǎn)生種子；c)將所述種子培育成番茄植物以生成子代植物；d)可選地重復(fù)步驟b)和c)的雜交和培育步驟，以及e)從子代植物中選擇其中所述等位基因以純合子形式存在的植物。在所述方法的優(yōu)選實(shí)施方式中，步驟e)中的選擇通過篩查所述子^才直物的DNA中與AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282、Pll/M35畫F-216、P21/M61-F曙583、P25/M51國F國131、P15/M49-F-330和/或P13/M38-F-311/313,優(yōu)選AFLP標(biāo)記物P14/M49匿F-282、P11/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313,最優(yōu)選AFLP標(biāo)記物P11/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313連鎖的所述基因組區(qū)域的純合子形式存在與否而實(shí)施?？商娲?，步驟e)中的選擇通過利用所述ToTV病毒的抗性生物分析或如本文所描述的任何其他恰當(dāng)?shù)姆椒ǘ鴮?shí)施。13在所述方法的另一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述番茄植物是番茄種的一種植物，更優(yōu)選一種培植的番茄植物。在其他方面，本發(fā)明涉及一種可通過本發(fā)明所述方法獲得的番茄植物，以及涉及源自所述新發(fā)明的番茄植物的植物部分，優(yōu)選果實(shí)或種子。在可替代的優(yōu)選實(shí)施方式中，所述才直物部分包括適于無性繁殖的才直物部分。在其他方面，本發(fā)明涉及賦予ToTV抗性的等位基因的用途，該等位基因位于與番茄4號染色體上的AFLP標(biāo)記物P14緒9-F-282、Pll/M35-F-216、P21/M61-F-583、P25/M51-F-131、P15/M49-F-330、P13/M38-F-311/313和/或COSII/CAPS標(biāo)記物C2—At5g25900,優(yōu)選AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282、P11/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313，最優(yōu)選AFLP標(biāo)記物P11/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313和/或COSII/CAPS標(biāo)記物C2—At5g25900連鎖的基因組區(qū)域中-用于選擇ToTV抗性番茄植物，或者-用于通過增加所述品種中抗性等位基因的存在頻率而在ToTV易感性番茄品種中貝武予ToTV抗性。在其他方面，本發(fā)明涉及ToTV抗性才直物用于增加所述才直物產(chǎn)量和/或用于防止所述才直物由于ToTV感染而導(dǎo)致產(chǎn)量損失的用途，其中所述ToTV抗性植物的特征在于，位于與番茄4號染色體上的AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282、Pll/M35-F-216、P21/M61-F-583、P25/M51-F-131、P15/M49-F-330、P13/M38-F-311/313和/或COSII/CAPS標(biāo)記物C2—At5g25900，優(yōu)選AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282、P11/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313，最優(yōu)選AFLP標(biāo)記物P11/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313和/或COSII/CAPS標(biāo)記物C2—At5g25900連鎖的基因組區(qū)域中存在純合型等位基因。在其他方面，本發(fā)明涉及本發(fā)明的ToTV抗性植物的種子的用途，用于生產(chǎn)ToTV抗性植物或用于防止才直物中或才直物種群中發(fā)生灼火克疾病(torradodisease)(或者才目關(guān)疾病，例^口才古萎或-5克力王茲病)的用途。在其他方面，本發(fā)明涉及包含至少一個(gè)賦予ToTV抗性的等位基因或者賦予ToTV抗性等位基因是純合型的植物的應(yīng)用，其中作為ToTV抗性番茄植物或者在旨在提供具有由所述等位基因純合型導(dǎo)致的ToTV抗性表型的其他植物的育種項(xiàng)目中用作親本植林，所述等^f立基因^f立于與番茄4號染色體上的AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282、Pll/M35-F-216、P21/M61-F-583、P25/M51-F-131、P15/M49-F-330、P13/M38-F-311/313和/或COSII/CAPS標(biāo)記物C2At5g25900,優(yōu)選AFLP標(biāo)^己物P14/M49-F-282、P11/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313,最優(yōu)選AFLP標(biāo)記物P11/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313和/或COSII/CAPS標(biāo)記物C2—At5g25900連鎖的基因組區(qū)域中。在其4也方面，本發(fā)明涉及標(biāo)記物P11/M35-F-216、P13/M38-F-311/313和/或C2—At5g25900用于4全測才直物中賦予ToTV抗性的等位基因是否存在的用途。這種用途通常涉及核酸檢測方法，包括分離DNA、用標(biāo)記物特異性引物擴(kuò)增所述分離的DNA以及檢查所擴(kuò)增DNA片段的預(yù)期長度(堿基對，bp),可選地，在消化所述擴(kuò)增的DNA片段之后，以表明存在與抗性等位基因相關(guān)的核香酸多態(tài)性的步驟。15在本發(fā)明上述用途方面的優(yōu)選實(shí)施方式中，所述植物優(yōu)選是番茄植物，最優(yōu)選有商業(yè)價(jià)值的番茄植物例如包含商業(yè)所需特征(特別是如本文所描述的特征)的番茄才直物。圖1示出了番茄基因組中代表4號染色體的示意圖，并指出了多個(gè)熟知標(biāo)記物的最近期定位。圖2示出了用特異性限制內(nèi)切酶消化的PCR片段的瓊脂糖凝膠，以表明存在或不存在用于ToTV抗性的抗性等位基因，如實(shí)施例2中i羊細(xì)闡述的。具體實(shí)施例方式如本文中使用的，術(shù)語"等位基因"表示基因的一種或多種可替代形式中的任何一種，所有等位基因均涉及至少一種性狀或特征。在二倍體細(xì)胞或有機(jī)體中，指定基因的兩個(gè)等位基因占據(jù)一對同源染色體上的對應(yīng)位置。因?yàn)楸景l(fā)明涉及的方法包括鑒定基因組區(qū)域的步驟，該基因組區(qū)域可包括一種或多種基因以及調(diào)節(jié)性序列，因此在某些情形中，其可更精確地稱為"單倍體或單4咅型(haplotype)"(即染色體節(jié)段的一個(gè)等位基因)而非"等位基因"，然而，在那些情形中，術(shù)語"等位基因"應(yīng)該理解為包括術(shù)語"單倍體"。本文中，"基因"定義為有機(jī)體內(nèi)占據(jù)染色體上特定位置且包含用作特定特性或性狀的遺傳指示的由DNA序列組成的遺傳單位(hereditaryunit)。本文中，"位點(diǎn)或座位(locus)"定義為在癥會定物種染色體上指定基因占據(jù)的位置。如本文中^f吏用的，術(shù)i吾"雜合或雜合子(heterozygous)"表示同源染色體上對應(yīng)位置上存在不同等位基因的遺傳情形。如本文中^f吏用的，術(shù)語"純合或純合子(homozygous)"表示同源染色體上對應(yīng)位置上存在相同等位基因的遺傳情形。如在本文中^f吏用的，術(shù)語"分子標(biāo)記物"指在用于〗吏核酸序列特征差異可視化的方法中采用的指示劑。這些指示劑的實(shí)例為限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)標(biāo)記物、擴(kuò)增片段長度多態(tài)性(AFLP)標(biāo)記物、單核香酸多態(tài)性(SNP)、微衛(wèi)星標(biāo)記物(例如SSR)、序列特4i性擴(kuò)增區(qū)域(SCAR)標(biāo)記物、酶切擴(kuò)增多態(tài)序列(CAPS)標(biāo)記物或同功酶標(biāo)記物或者本文所述的限定特定遺傳和染色體定^f立的標(biāo)記物的組合。如本文中使用的，術(shù)語"番茄"表示番茄屬的任何植物、品系或種群，包4舌^f旦不卩艮于^^々么^v^(丄ycope^/co"cerarw/orwe)、契-斤曼c(diǎn)/n7em^)、奇美留斯凱番癡(Z^coperw'coMc/2附/e/e將Ai/)、漆-潘,W,^"(Zyco/eAS7'co"pe""e〃")、癡、,番^"(Z^yco/er57'co",漆(5b/cwwm/少copeAs/co/cfes)。J見^番茄的里于生相關(guān)才直物已歸類到番茄種屬內(nèi)，如潘,W番-、多毛,#、癡、##^、治埋#^、V、花,^、奇美留斯凱番茄、契斯曼尼番茄、^^##^和于醋栗番茄。在過去的幾年內(nèi)，在番茄研究者和才直物學(xué)家中，關(guān)于是否對這些種屬的名稱進(jìn)行重新分類還存在爭議?，F(xiàn)代番茄的新l是議科學(xué)名稱是番茄(So/a"ww/_ycope"/c"w)。類似的，野生種的4立丁名稱也可以更文。丄./e"we〃//("潘^^^/#^^^n為So/amw7pe""e〃//、丄.perav/""i/m、以及5*.corwe/z'o附we〃e"'，L/"rwy7orw附變?yōu)?".weon'cA://，Z^.c/z附/e/ewsA://艾為5*.c/wz/e/ewsA://,丄.c/n7ewse^Tf為5".c/n'/em^、丄.c/ze^s附aw/ofe"^T^T為51c/ze&swtw/"e減5*.g""/a/"ge朋e,(SolanaceaGenomeNetwork(2005)SpoonerandKnapp;http:〃www.sgn.cornell.edu/help/about/solanum—nomenclature.html).根據(jù)本發(fā)明所述的植物在自然界中存在。然而，其是作為技術(shù)過程的結(jié)果而鑒定的。本發(fā)明4皮露了兩種鑒定這種植物的主要方法。在第一個(gè)方法中，該才直物通過利用抗性生物分析而鑒定，該分析涉及將候選植物暴露于有效劑量的番茄灼燒病毒(ToTV)(通過在田地里進(jìn)行機(jī)械傳纟番或暴露)，如本文所述。如果候選植物保持無病狀態(tài)，其疾病癥狀包才舌壞死斑，最終形成4直物材沖牛尤其是葉片的灼傷樣完全壞死和才直物死亡和/或果實(shí)上同心環(huán)形的壞死斑則稱所述植物具有抗性。利用該方法鑒定的才直物所包括的兩個(gè)等位基因均包括可賦予番茄灼燒病毒(ToTV)抗性的基因，因此對該性狀是純合型。術(shù)語"抗ToTV"的意思包4舌對ToTV(包4舌deposited4朱ToTV-E01(DSM16999))以及相關(guān)病毒的抗性。本發(fā)明上下文中的相關(guān)病毒不僅是屬于相同分類學(xué)種屬如ToTV的病毒，而且可以定義為其抗性由本文所述抗性等位基因賦予的病毒。本發(fā)明所述植物包括至少一種賦予ToTV抗性的基因。該基因的座位與本文鑒定的多種AFLP標(biāo)記物連鎖。然而，這些AFLP標(biāo)記物中的多種在番茄基因組圖鐠上的定位尚不知曉。因此，該基因在基因組內(nèi)的位置還未完全確定。因?yàn)闃?biāo)記物P14/M49-F-282位于4號染色體上，因此有力地表明了該座位位于4號染色體上。當(dāng)比較/>知標(biāo)記物的位置與P14/M49-F-282的位置時(shí)，看起來該基因位于由CT264(TomatoEXPEN2000position86cM)和標(biāo)記物TGI63(TomatoEXPEN2000position135cM)限定邊界的區(qū)域內(nèi)。因此，本發(fā)明的植物的特征可以在于4號染色體上在標(biāo)記物CT264與TG163之間的位置上具有ToTV抗性基因。在對包括抗性和易感性植物的實(shí)-驗(yàn)番茄種群中存在的標(biāo)記物進(jìn)行更詳細(xì)分析時(shí)，發(fā)現(xiàn)在該種群中兩個(gè)標(biāo)記物是多態(tài)性的，且與抗性等位基因COSII/CAPS標(biāo)記物C2_At5g25900(參見實(shí)施例)和稱為P13/M38-F-311/313的雙等位基因標(biāo)記物的存在與否緊密相關(guān)。這些標(biāo)記物位于番茄的4號染色體上，且AU見察到的重組頻率可以計(jì)算出這些標(biāo)"^己物分隔開大約3cM的距離。圖1中給出了C2—At5g25900的位置。由于受試種群中缺乏已知圖i普位置的其他多態(tài)標(biāo)記物，因此未能確立P13/M38-F-311/313相對于C2_At5g25900的位置。因此，迄今可以推斷的是，賦予番茄中ToTV抗性的基因與一個(gè)區(qū)域相關(guān)，該區(qū)域特4正在于多態(tài)標(biāo)記物C2—At5g25900(特別是當(dāng)用Msel消化時(shí)可產(chǎn)生420bp和260bp片段的標(biāo)記物，該標(biāo)記物連接于抗性等位基因)和P13/M38-F-311/313(特別是P13/M38-F-313，其連鎖于抗性等位基因)，所述區(qū)域覆蓋4號染色體上代表約3cM、較優(yōu)選0-10cM、更加優(yōu)選0-3.6cM、最優(yōu)選小于3cM的遺傳距離的一段DNA。本領(lǐng)域4支術(shù)人員將能夠分辨該兩個(gè)標(biāo)記物在番茄遺傳圖上相3t4皮此的定向(例如，類合乂于圖2,當(dāng)每一個(gè)標(biāo)"i己物與第三個(gè)標(biāo)i己物的距離均可確定時(shí))。這些試驗(yàn)在屬于本領(lǐng)域技術(shù)人員能力范圍。已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的植物可抵抗病毒劑，其引起在墨西哥稱為"枯萎(marchitez)"的番茄疾病，且i人為該病毒劑與以登陸號DSM16999保藏并命名為番茄灼燒病毒(ToTV)的病毒相同。ToTV是西班牙語稱為"灼燒"的類似疾病的病原體。研究發(fā)現(xiàn)，如本文中所述連鎖于ToTV病毒抗性且以登陸號DSM16999保藏的標(biāo)記物，也19連鎖于"枯萎"抗性。所以，如本文中定義的植物對"灼燒"以及"枯萎"均有抗性。因而，如本文中所述植物可賦予對以下病毒的抗性-所有可作為疾病的病原體而在番茄植物中引起與保藏病毒ToTVDSM1699所引起疾病的癥4犬相同或類4以的疾病的病毒；-所有與ToTV屬于相同分類單位的植物病毒(其中，分類等級仍需要確定)，優(yōu)選相同科，較優(yōu)選相同屬，更優(yōu)選相同種的植物；-ToTVDSM16999在一種鑒定本發(fā)明天然植物的替代性方法中，通過篩查是否存在至少一個(gè)與所述ToTV抗性基因的所述至少一個(gè)等位基因連鎖的分子標(biāo)記物而鑒定才直物?，F(xiàn)在本發(fā)明4皮露了多種適用于該篩查分析的AFLP標(biāo)記物，因?yàn)橐寻l(fā)現(xiàn)它們不同程度地連鎖于番茄植物中存在的抗性基因。恰當(dāng)?shù)姆肿訕?biāo)記物可選自由AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282、Pll/M35-F-216、P21/M61-F-583、P25/M51-F-131、P15/M49-F-330和P13/M38-F-311/313組成的組，優(yōu)選選自由AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282、P11/M35-F-216和P13/M38-F-311/313組成的組、最4尤選選自由AFLP標(biāo)記物P11/M35-F-216和P13/M38-F-311/313組成的組。實(shí)施例更加具體i也描述了這些標(biāo)記物與抗性特性之間的偶:f關(guān)。本發(fā)明進(jìn)一步涉及用于一種鑒定抗ToTV才直物或其部分的方法，現(xiàn)在存在多種鑒定抗ToTV植物的可能性。在這種方法的第一組實(shí)施方式中，可采用活性/傳染性病毒或者全長傳染性克隆，而在可替代性實(shí)施方式中可^f又采用病毒才全測裝置(或方法)。用于利用活性/傳染性病毒鑒定抗ToTV才直物的方法的第一步包括使植物或植物部分例如葉或莖節(jié)段暴露于傳染劑量的ToTV，目的在于實(shí)現(xiàn)感染。在多種情況下，該暴露涉及到建立物理接觸。傳染劑量可以因植物和受試ToTV-isolates不同而發(fā)生變化。理論上，約l-10個(gè)至約500-5000個(gè)所述病毒的病毒顆?；蚱浜怂釋⒁炎銐?。這種方式的感染可通過在1*康4直物上通過積4成4妄種純化病毒顆粒或病毒核酸而實(shí)現(xiàn)，或者例如通過經(jīng)由暴露于已感染植物的被動接種而實(shí)J見?？商娲?，感染可通過以下方式獲得，例如-在受ToTV感染的根莖上培育健康幼枝，或者反過來也可以；-將健康植物暴露于含該病毒的傳播々某介(包括受感染植物例如寄生才直物如菟絲子種(Cw5"cwMspp.));-將攜帶ToTV病毒基因組編碼區(qū)的表達(dá)載體導(dǎo)入健康植物內(nèi)；-采用農(nóng)作物傳染性克隆，例如包含攜帶ToTV病毒基因組編石馬區(qū)的表達(dá)載體的才艮癌農(nóng)4干菌才朱(爿groZj"cter/w附？WAweyiarc/e似strains)。在本發(fā)明中，用于將才直物或植物部分暴露于傳染劑量ToTV的方法不限于任何特定的方法。如上文所述，感染可包4舌在i建康才直物上才幾才戒4妄種病毒。例如，患病葉片的一部分可直接擦在待感染植物的葉片上。在一種替代性過程中，接種可例如通過用研缽和研棒或任何恰當(dāng)類型的勻漿器研磨含病毒的植物組織，優(yōu)選表現(xiàn)出癥狀的嫩葉而制備，在例如適于接種的恰當(dāng)緩沖液(例如0.03M的磷酸鹽緩沖液、pH7.7)中進(jìn)行。研磨后，優(yōu)選通過例如紗布過濾得到的組織勻漿(汁液，sap)。隨后可4妾種該汁液，例如通過用一定量汁液溫和地4妾觸葉片。優(yōu)選預(yù)21處理葉片，以破壞下表皮并促進(jìn)病毒進(jìn)入。這一點(diǎn)可通過例如用碳化硅粉末預(yù)先撒在葉片上而實(shí)現(xiàn)。優(yōu)選避免過度創(chuàng)傷。優(yōu)選采用具有顯微小角形粒子的碳化硅顆粒(400-500目)的碳化硅粉末。還可將石灰化石圭粉末直4妾加入該汁液中，其中，可省略預(yù)處理步驟。汁液可例如由食指、浸過汁、液的泡沫或纖維墊或甚至通過用于研磨的研棒、玻璃刮刀、硬毛刷或噴槍而涂布。接種后，優(yōu)選立即用水沖洗葉片。用于鑒定抗ToTV才直物的方法的第二步包4舌在暴露后，如果i)嚴(yán)重降^[氏或相對于易感和/或每文感對照4直物局部化，和/或ii)所述植物或植物部分中不存在ToTV病毒或ToTV基因組序列或至少在凄t量上所述4直物中的ToTV病毒相^"于易感的^f照才直物有所降^f氐，則鑒定所述植物為抗ToTV植物。如本文中使用的，術(shù)語局部化意思為限于所接種的葉片。確定受染才直物中ToTV所i秀導(dǎo)疾病癥4犬的形成可通過定量方法，例如其中可i己錄形成可辨別(例如可見)疾病癥爿犬所需時(shí)間，或者通過定量方法其中在推移特定時(shí)間后，檢查該植物是否表現(xiàn)出癥狀，并指示癥狀的存在或嚴(yán)重度。除了確定ToTV所i秀導(dǎo)疾病癥狀的形成之外，或作為其備選方案，才艮據(jù)待檢測ToTV抗性的不同，可才企測植物或植物部分中病毒的存在情況。為了檢測受試植物中病毒的缺乏，原則上可采用任何方法。例如，可采用其中應(yīng)用4艮據(jù)本發(fā)明所述ToTV特異性抗體、引物對或探針的方法?？商娲?，可4吏受試植物的一部分與易感性指示才直物((TV./ze^eWs)'67A，)，以確定該受試才直物中是否存在病毒。本領(lǐng)域4支術(shù)人員將能理解，對于這些方法而言，重要的是排除受試植物表面的污染，以區(qū)分傳播媒介、耐受性受試植物和抗性受試才直物，因?yàn)?又需要確定才直物細(xì)胞內(nèi)病毒的存在情況。在實(shí)施用于鑒定抗ToTV植物的方法的第二步時(shí)，可得到下列結(jié)果。在成功接種后(例如，已在將引起易感且敏感的對照植物中感染的條件下建立植物-病毒接觸后)，如果i)疾病癥狀仍然未出現(xiàn)；或者未沖企測到病毒顆?；虿《綬NA:則植物是抗性的；ii)疾病癥狀推遲出現(xiàn)或嚴(yán)重度降低；或可檢測到整體效價(jià)(滴度)較低的病毒顆?；虿《綬NA:則植物是部分抗性的；iii)疾病癥狀嚴(yán)重但保持在局部，限于接種的葉片且除接種組織外未引起系統(tǒng)性傳播；或僅局部檢測到病毒顆?；虿《綬NA:則植物是高度敏感的；iv)如果疾病癥狀仍然未出現(xiàn)；且可4全測到病毒RNA:則才直物是耐受性的。v)如果才直物出現(xiàn)疾病癥狀，且具有4交高的整體病毒效-階，則植物易感且敏感。這種植物的實(shí)例是可分離出本發(fā)明所述病毒的植物。在本發(fā)明所述的方法中，這些才直物可作為恰當(dāng)?shù)膶φ詹胖蔽?。為了得到抗性植物，且從植物衛(wèi)生的觀點(diǎn)，僅認(rèn)為結(jié)果i)、ii)和iii)是感興趣的。為了獲得適于生產(chǎn)無癥狀農(nóng)作物和產(chǎn)品的植物，也可認(rèn)為結(jié)局iv)是商業(yè)上尤其感興趣的。在用于鑒定抗ToTV才直物的方法的一個(gè)替代實(shí)施方式中，<又采用病毒4企測方法。例如，抗ToTV植物可通過在有癥狀植物中觀察或鑒定無癥狀植物，并通過實(shí)施病毒檢測方法而確定所述植物中不存在病毒。當(dāng)實(shí)施這種方法時(shí)，伊C選采用ToTV選4奪性多核香酸或抗體。優(yōu)選地，鑒定抗ToTV才直物的方法需要采用該病毒或病毒選擇性多核苷酸或抗體。現(xiàn)在，本發(fā)明4皮露了另外一種通過確定是否純合子存在連鎖于公認(rèn)ToTV抗性基因的標(biāo)記物而鑒定抗ToTV植物的方法，且提供了幾個(gè)關(guān)于所述標(biāo)i己物的實(shí)施例。本發(fā)明進(jìn)一步涉及生產(chǎn)4元ToTV才直物或其部分的方法。一旦已經(jīng)鑒定了一種抗ToTV4直物，該4直物可用作遺傳物質(zhì)的供體才直物，該遺傳物質(zhì)從所述供體植物轉(zhuǎn)移至受體植物，以提供所述含有該遺傳物質(zhì)的受體植物。遺傳物質(zhì)從供體植物轉(zhuǎn)移至受體植物可通過本領(lǐng)域中任何已知的恰當(dāng)方法而實(shí)現(xiàn)。多數(shù)情況下，遺傳物質(zhì)為基因組物質(zhì)。然而，重要的是，轉(zhuǎn)移供體植物基因組中至少賦予抗性的部分。如果缺乏用于鑒定供體植物基因組中哪個(gè)部分賦予ToTV抗性的方法，可通過轉(zhuǎn)移全染色體而實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)移。優(yōu)選地，抗ToTV柏:物在雜交中用作父本或母本植物，用于生產(chǎn)抗性子代才直物，該子代植物從而接受來自抗性供體的基因組物質(zhì)并用作受體植物。盡管嚴(yán)格講雜交中的易感性親本并不必須是受體植物，但在本文中，這種易感性親本也將包含在術(shù)語受體植物中。在一種用于生產(chǎn)抗ToTV才直物的方法中，原生質(zhì)體融合也可用于將賦予抗性的基因組物質(zhì)從供體植物轉(zhuǎn)移至受體植物，即作為一種雜交所述4直物的方式。原生質(zhì)體融合是兩種或多種原生質(zhì)體(其細(xì)胞的細(xì)胞壁通過酶處理而去除)之間的"i秀導(dǎo)或自發(fā)結(jié)合，如體纟田胞雜交，以產(chǎn)生單個(gè)的雙核或多核細(xì)胞。該融合細(xì)胞(其甚至可利用自然界中不能進(jìn);f亍品種間雜交的才直物種屬而獲得)可經(jīng)組織培養(yǎng)入表現(xiàn)出期望特性組合的雜種#_物內(nèi)。更具體地，第一原生質(zhì)體可從番茄植物或其他表現(xiàn)出對ToTV感染抗性的林系而獲得。例如，可采用來自抗ToTV番茄品系的原生質(zhì)體。第二原生質(zhì)體可從易感性的第二4朱系，可選地/人另一種才直物種屬或品種，優(yōu)選/人相同才直物種屬或品種而獲得，其包含商業(yè)所需特性，例如^f旦不限于疾病抗性、昆蟲抗性、有價(jià)值的果實(shí)特性等。隨后該原生質(zhì)體利用常規(guī)原生質(zhì)體融合步驟而融合，這在本領(lǐng)域中是已知的用來生成雜交體?？商娴?，胚杏S殺丈(embryorescue)可用于^l尋貝武予4元寸生的基因組物質(zhì)從供體植物轉(zhuǎn)移至受體植物，即作為一種形成雜交體的方式，其中植物不能產(chǎn)生可育性種子。在該過程中，植物的受精子房或未成熟種子經(jīng)組織J咅養(yǎng)而生成新才直物(該方法在Pierik、1999中詳細(xì)描述)。因此，在一個(gè)實(shí)施方式中，生產(chǎn)抗ToTV植物的方法包括以下步驟鑒定抗ToTV的供體植物或包括如本文所述抗性基因(載體植物)的至少一個(gè)等位基因的4直物，以及4吏所述抗ToTV的供體才直物或所述載體植物與受體植物雜交。接下來，通過進(jìn)一步雜交和自交，可獲得抗病毒的純合型才直物。一種生產(chǎn)抗ToTV才直物的方法進(jìn)一步包括通過實(shí)施上文所述用于鑒定抗ToTV植物的方法而從子代植物選擇抗性植物的步驟。優(yōu)選地，所述受體植物是番茄屬的番茄一直物，4交優(yōu)選具有商業(yè)所需特性的番茄植物。該受體植物可以為ToTV易感性植物、ToTV每文感性才直物或ToTV抗性才直物。如上文所解釋的，利用該抗性特性為隱性的這個(gè)事實(shí)來確定植物的選擇。本領(lǐng)域技術(shù)人員已注意到，現(xiàn)在已有多種解決這些問題的方法。此外，本發(fā)明一個(gè)方面是可利用本發(fā)明獲得的抗ToTV植物或其部分。一種用于生產(chǎn)抗ToTV才直物的方法，可包括通過雜交所述才直物，^f吏貝武予抗性的核酸序列乂人4元ToTV的供體沖直物或具有雜合形式4元性基因的植物經(jīng)基因滲入而轉(zhuǎn)移到受體植物內(nèi)。25在一種稱為譜系育種的方法中，表現(xiàn)出對ToTV抗性(純合)的供體植物可與受體植物雜交，該受體植物優(yōu)選表現(xiàn)出商業(yè)所需特性例如但不限于疾病抗性、昆蟲抗性、有價(jià)值的果實(shí)特性等。所得到的植物種群(代表F1雜種)隨后自交并允許結(jié)籽(F2種子)。然后篩查從F2種子培育的F2植物對ToTV的抗性或其中連鎖于該抗性基因的標(biāo)記物的純合存在。因而，可用多種方式篩查子代種群。通過轉(zhuǎn)基因法生產(chǎn)抗ToTV的番茄植物才艮據(jù)本發(fā)明另一方面，包含至少一個(gè)連鎖于如本文所鑒定的ToTV抗性基因的標(biāo)記物的核酸序列(優(yōu)選DNA)可用于生產(chǎn)抗ToTV的番茄植物。一旦在恰當(dāng)?shù)墓w番茄植物中鑒定出，則該包的受體植物中。例如，所述核酸序列可通過使ToTV抗性供體番茄植物與易感性受體番茄植物雜交(即通過基因滲入)、通過轉(zhuǎn)化、通過原生質(zhì)體融合、通過重雙單倍體技術(shù)或通過胚拯;故或通過任何其他核酸轉(zhuǎn)移系統(tǒng)而轉(zhuǎn)移，可選地，隨后選擇包含純合或雜合基因和/或表現(xiàn)出ToTV抗性的子代植物。對于轉(zhuǎn)移包含ToTV抗性基因的核酸序列的轉(zhuǎn)基因方法，該核酸序列可利用本領(lǐng)域中已知的方法而從所述供體植物分離，且如此分離的核酸序列可通過轉(zhuǎn)基因方法例如借助載體或用任4可其他恰當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)移元件如涂布有所述核酸的彈道粒子(ballisticparticle)而轉(zhuǎn)移到受體。植物轉(zhuǎn)化通常涉及構(gòu)建將在植物細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用的表達(dá)載體。在本發(fā)明中，這種載體包括含ToTV抗性基因的核酸序列，該載體可包括賦予ToTV抗性的基因，其處于調(diào)節(jié)元件如啟動子的控制之下或與其可才喿作性連接。該表達(dá)載體可包含一個(gè)或多個(gè)這種可操作性連接的基因/調(diào)節(jié)元件組合，只要該組合所含基因中至少一個(gè)編碼ToTV抗性。該載體可為質(zhì)粒形式，且可單獨(dú)或與其他質(zhì)粒一起使26用，以利用本領(lǐng)域中已知的轉(zhuǎn)化方法如農(nóng)桿菌屬轉(zhuǎn)化系統(tǒng)提供抗ToTV的轉(zhuǎn)基因植物。表達(dá)載體可包括至少一種標(biāo)記基因，可操作性連接于調(diào)節(jié)元件(如啟動子)，其允許包含該標(biāo)記物的轉(zhuǎn)化細(xì)胞通過陰性選擇(通過抑制不含可選擇標(biāo)記基因的細(xì)胞生長)或者通過陽性選擇(通過篩查由該標(biāo)記基因編碼的產(chǎn)物)而恢復(fù)(回收，recover)。幾種用例如編碼可通過代i射去除選纟奪性化學(xué)試劑(其可為抗生素或除草劑)的酶的基因或者編碼對抑制劑不敏感的已改變靶標(biāo)的基因。已知本領(lǐng)域中有幾種陽性選擇方法，例如甘露糖選擇?？商娲?，無標(biāo)記物的轉(zhuǎn)化可用來獲得不含所提到標(biāo)記基因的植物，用于該轉(zhuǎn)化的技術(shù)在本領(lǐng)域中已經(jīng)為人所知?；到y(tǒng)(參見例如Horsch",1985)。才艮瘤土i裏桿菌(A^we/flc/e"s)和發(fā)才艮農(nóng)4干菌(」W/zoge""9是才直物的至文病土土裏細(xì)菌，其可遺傳轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞。根瘤土壤桿菌和發(fā)根農(nóng)桿菌的Ti和Ri質(zhì)粒各自均攜帶負(fù)責(zé)植物遺傳轉(zhuǎn)化的基因(參見例如Kado、1991)。將表達(dá)載體導(dǎo)入才直物組織內(nèi)的方法包括用才艮瘤土i裏桿菌直^妄感染才直物細(xì)胞或與才直物細(xì)月包共同培育(Horsch"a/.、1985)。Gruber和Crosby，1993以及Moloney爭，1989提供了對用于農(nóng)桿菌屬介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移的農(nóng)桿菌屬載體系統(tǒng)和方法的描述。還可參見美國專利5,591,616。對植物表達(dá)載體和報(bào)告基因及轉(zhuǎn)化過程的一般性描述以及對農(nóng)桿菌屬介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移的農(nóng)桿菌屬載體系統(tǒng)和方法的描述可在GmberandCrosby,1993查到。培養(yǎng)才直物組織的一般方法由例如Miki"a/.,1993和P羅ps、"a/.，1988提供。用于分子克隆4支術(shù)和恰當(dāng)表達(dá)系統(tǒng)的適當(dāng)參考手冊是SambrookandRussell(2001)。化，其中DNA攜帶于孩i粒表面上。表達(dá)載體通過遺傳轉(zhuǎn)化(生物彈道，biolistic)裝置導(dǎo)入植物組織內(nèi)，該裝置將^L粒加速至300-600m/s的速度，其足夠穿透細(xì)胞壁和膜(參見Sanforde^/.,1987,1993;Sanford,1988，1990;Klein""/.，1988,1992)。另一種用于將DNA導(dǎo)入才直物內(nèi)的方法是4昔助于草巴細(xì)l包超聲處理(參見Zhangwa/.、1991)?？蒦#代地，脂質(zhì)體或質(zhì)體融合已用來將表達(dá)載體導(dǎo)入才直物內(nèi)(見侈'H口Deshayes"1985和Christoua/.、1987)。已有才艮道利用CaCl2沉淀反應(yīng)、聚乙烯醇或聚L-鳥氨酸將DNA直接攝入yf、生質(zhì)體內(nèi)(參見侈寸^口，Hain"1985andDraper"a/"1982)。還描述了原生質(zhì)體和全細(xì)胞以及組織的電穿孑L(D'HalluinW"/.、1992andLaursenWa/.、1994)。轉(zhuǎn)化番茄耙組織后，上述可選擇標(biāo)記基因的表達(dá)可允許利用本領(lǐng)域中為人熟知的再生和選擇方法優(yōu)先選擇所轉(zhuǎn)化細(xì)胞、組織和/或才直物。如本文所定義的標(biāo)i己物也可用于該目的。通過非轉(zhuǎn)基因方法生產(chǎn)ToTV抗性番茄才直物在一個(gè)用于生產(chǎn)ToTV抗性番茄植物的替代性實(shí)施方式中，原生質(zhì)體融合可用于將核酸從供體植物轉(zhuǎn)移至受體植物。原生質(zhì)體融合是兩個(gè)或多個(gè)原生質(zhì)體(該細(xì)胞的細(xì)胞壁通過酶處理而去除)之間誘導(dǎo)或自發(fā)結(jié)合，例如體細(xì)胞雜交，以產(chǎn)生單個(gè)的雙核或多核細(xì)胞。該融合細(xì)胞(其甚至可利用自然界中不能進(jìn)行品種間雜交的植物種屬而獲得)可經(jīng)組織培養(yǎng)入表現(xiàn)出期望特性組合的雜種植物內(nèi)。更具體地，第一原生質(zhì)體可乂人番茄才直物或表現(xiàn)出ToTV感染抗性的其他4朱系而獲得。例如，可采用來自如實(shí)施例部分所指出的抗性品系中任何一種的原生質(zhì)體。第二原生質(zhì)體可乂人第二種番茄或其他植物品種優(yōu)選從包含商業(yè)所需特特性的番茄品系獲得，所述特性例如但不限于疾病抗性、昆蟲抗性、有價(jià)值的果實(shí)特性等。隨后該原生質(zhì)體利用本領(lǐng)域中已知的常^L原生質(zhì)體融合步艱《而融合。可替代地，胚拯救可用于將抗性基因從供體植物轉(zhuǎn)移至受體植物。胚拯救可用作從雜交體分離胚芽的步驟，其中植物未能產(chǎn)生可育性種子。在該過程中，植物的受精子房或未成熟種子經(jīng)組織培養(yǎng)而生成—#斤才直物(Pierik、1999)。本發(fā)明還涉及生產(chǎn)4元ToTV番茄才直物的方法，包纟舌以下步驟按照本發(fā)明上文所述，纟僉測供體番茄中是否存在與ToTV抗性基因相關(guān)的等位基因，并將包含所述如此檢測到的等位基因的核酸序列/人所述供體4直物轉(zhuǎn)移至ToTV易感性受體番茄才直物。所述核酸序列的轉(zhuǎn)移可通過本文上述方法中的任何一種來實(shí)施。該方法的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式包括通過雜交所述4直物使所述來自ToTV抗性供體番茄植物的核酸序列基因滲入到ToTV易感受體番癡才直物。/人而該轉(zhuǎn)移可恰當(dāng)?shù)赝ㄟ^利用常失見育種l支術(shù)而實(shí)現(xiàn)。ToTV4元寸生基因4尤選通過利用才示i己庫肅助育種(marker-assistedbreeding,MAS)而基因滲入到商用番茄品種中。標(biāo)記輔助育種或標(biāo)記輔助選4奪涉及到將一種或多種分子標(biāo)記物用于鑒定和選^奪包含一種或多種編碼所需特性的基因的子代植物。在本發(fā)明情況中，該鑒定和選4奪優(yōu)選基于選擇與本文所鑒定抗性基因相關(guān)的標(biāo)記物。ToTV抗性番茄纟直物和種子是可通過本發(fā)明所述方法獲得的ToTV抗性番茄才直物或其部分也本發(fā)明的一個(gè)方面。系繁殖、雜種、單倍體、乂又單倍體、單性結(jié)實(shí)(parthenocarp)或壽爭基因。此外，對于該抗性特4正，本發(fā)明所述才直物可為雜合或純合型，優(yōu)選純合型。盡管可將本發(fā)明中鑒定的等位基因轉(zhuǎn)移至任何植物，以提供ToTV抗性植物，但本發(fā)明所述方法和植物優(yōu)選與茄科，較優(yōu)選與番茄相關(guān)。同系繁殖的ToTV4元性番茄4朱系可利用重復(fù)選擇和回交(backcrossing)、自交和/或雙單倍體或任何其他用來產(chǎn)生親本品系的4支術(shù)而i咅育。在一種選擇和回交的方法中，ToTV抗性可通過l吏回歸親本與第一供體才直物(其不同于回歸親本(recurrentparent),本文中一爾為"非回歸親本(non-recurrentparent)")基因滲入輩巴受體才直物(稱為回歸親本)中?；貧w親本是無抗性植物或者具有較低ToTV抗性水平的植物，其具有商業(yè)需要特性例如^f旦不限于疾病抗性、昆蟲抗性、有價(jià)值的果實(shí)特征等。非回歸親本表現(xiàn)出ToTV抗性，且包含編碼ToTV抗性的核酸序列。該非回歸親本可為與回歸親本雜交結(jié)實(shí)(cross-fertile)的4壬4可才直物品種或同系繁殖品系。^!夸回歸親本與非回歸親本之間雜交纟尋到的子4氣與該回歸親本回交。然后篩查所;得到的才直物種群，且該種群可以多種不同方式進(jìn)4亍篩選。例如，該種群可利用本文已述的抗性分析或一見野篩選(fieldscreen)進(jìn)4亍篩選。表現(xiàn)出抗ToTV表型的Fl雜種植物包含編碼ToTV抗性必需的核酸序列，且具有商業(yè)所需特性，隨后可經(jīng)選擇、自交和選擇直至多代(直到5、6、7或8代)，從而使該番茄植物逐漸同系繁殖?？蓪?-5代或更多代開展該持續(xù)自交和選擇過程。這種育種和選擇的結(jié)果是得到與ToTV抗性相關(guān)基因以及其他與商業(yè)感興趣特性相關(guān)基因?yàn)檫z傳同源的品系?？衫蒙衔乃龇肿訕?biāo)記物、雜交探針或多核苷酸中的一種或多種來開展MAS而非表型病理學(xué)篩查的生物分析，以鑒定包含編碼ToTV抗性的核酸序列的子代?？商娲?，MAS可用來證實(shí)從定量生物分析得到的結(jié)果。一旦作出恰當(dāng)?shù)倪x擇，就可重復(fù)該過程。回交至該回歸親本且選擇ToTV抗性的過程可重復(fù)約5代或更多代。從該過程得到的子代，對編碼ToTV抗性的一種或多種基因而言是雜合的。然后，使末次回交世代自交，以提供純合ToTV抗性的純系繁育子代。本文所述的抗ToTV的同系繁殖番茄品系可用于其他雜交中，以生成抗ToTV的雜種才直物。例如，本發(fā)明的第一種抗ToTV的同系繁殖番茄植物可與具有商業(yè)所需特性如^f旦不限于疾病抗性、昆蟲抗性、所需果實(shí)特性等的第二種同系繁殖番茄雜交。該第二種同系繁殖番茄品系可4元或不^iToTV,但j尤選具有至少一個(gè)用于ToTV抗性的等位基因，如與本文所定義標(biāo)記物連鎖的，使子代才直物中至少50。/。表達(dá)抗ToTV表型。較優(yōu)選地，該第二種同系繁殖番茄品系也抗ToTV,因此不管如何雜交，均保持抗性表型。以這種方式，本發(fā)明的第一種抗ToTV的同系繁殖番茄才直物可用來將另一種可遺傳特性基因滲入到第二種同系繁殖番茄植物品系中。本發(fā)明的另一方面涉及生產(chǎn)可生長成#元ToTV的番茄才直物的種子的方法。在一個(gè)實(shí)施方式中，該方法包括以下步驟4是供本發(fā)明的抗ToTV的番茄才直物、使所述抗ToTV的才直物與另一種抗ToTV的番茄植物雜交，并收集從所述雜交得到的種子，如果培育，所述種子生成抗ToTV的雜種番茄4直物。在另一個(gè)實(shí)施方式中，該方法包括以下步驟*提供本發(fā)明的抗ToTV的番茄植物；使所述抗ToTV的植物與番茄植物雜交；收集從所述雜交得到的種子；使所述種子重新生成植物；通過本文所述方法中任何一種選擇抗ToTV的植物；使所選植物自交達(dá)到足夠代數(shù)，以獲得固有可賦予植物以ToTV抗性的等位基因的植物；使如此得到的植物與具有所需表型特性的番茄植物回交達(dá)足夠代數(shù)，以得到抗ToTV且具有所需表型特性的番茄植物；以及收集末次回交所得植物生成的種子，如果培育，所述種子生成抗ToTV的番茄植物。本發(fā)明的實(shí)施例將以舉例而^—限制的形式給出。實(shí)施例實(shí)施例1在番茄中鑒定與ToTV抗性基因連鎖的標(biāo)記物本實(shí)-驗(yàn)的目標(biāo)在于通過采用BulkSegregantAnalysis(BSA;Michelmore、R.W.、I.ParanandR.V.Kesseli、1991.Proc.Natl.Acad.Sci.USA、88:9828-9832)在番茄中鑒定與ToTV4元性連鎖的AFLP標(biāo)記物。已發(fā)現(xiàn)ToTV抗性是一種單基因隱性遺傳性狀。該分析在150個(gè)F2番茄雜交品種中進(jìn)行，其中測定F3植物的表型。為了確定可靠的表型，對其中一'J、組F2植物，在F3植物上測定表型重復(fù)幾次。根據(jù)重復(fù)測定表型獲得的結(jié)果，表明18個(gè)個(gè)體有可靠的抗性，9種植物為可靠的易感。這些植物用于BSA。表l中列出了來自這些個(gè)體的表型信息。標(biāo)i己物鑒定和-驗(yàn)i正標(biāo)記錄命^通常指示AFLP引物組合的代碼例如是P14/M49-F-282,其中P和M是共用的尸WI和i^elI物序列或者通用引物(Vos，1995;Bai""/.,2003)，其后是2個(gè)或3個(gè)虐貞夕卜的選4奪'〖生石威基，^口由兩個(gè)凄t字?jǐn)U展代碼表示的。兩個(gè)H字?jǐn)U展代碼如下ll:AA;13:AG;14:AT;15:CA;21:GG;25:TG;35:ACA;38:ACT;49:CAG;51:CCA;61:CTG。282bp是所得多態(tài)片段的大致大小(給定大小±2bp)。該大小通常四舍五入，《旦也可以小翁J合出。在所研究才直物中才廣i曾it片#殳。引4勿和才妄頭序歹l1(adaptersequence)由Bai"a/.2003詳細(xì)描述。才示i己物TGI63(Expen2000;SOLGenomicsNetwork基因纟且學(xué)網(wǎng)；http:〃www.sgn.cornell.edu/index.pl)由下歹寸序歹'J的正向和反向引物組成正向序列ACTCTCACTGAGCC反向序列TGGAGGGGGATATACTGGAGTGATACAAACATTAATAAAAGACACAAGAAAAGACACAGATGi樹辨共有300種F2植物的葉材料用于評估，其中，共有150種植物基于來自這些F2植物的F3植物的表型而測定表型(分型，phenotyped)。從這150種已確定表型的植物葉材料中分離基因組DNA(表1),并從這些DNA樣品生成用于AFLP指紋法的Pstl/Msel模板。隨后，通過在所有植物上應(yīng)用引物組合P14/M50而生成試驗(yàn)指紋。5&4以及^個(gè)沐丄迷/六驗(yàn)證BSA通過在一批包含10個(gè)抗ToTV的個(gè)體和一4比包含9個(gè)對ToTV易感性的個(gè)體上篩查96個(gè)引物組合開始(表2)。該篩查鑒定出了3種候選標(biāo)記物(P11/M54-F-233/235(雙等位基因)、P14/M49-F畫282和P15/M49-F畫330)，隨后在32個(gè)個(gè)體上加以-驗(yàn)i正，其中包括總共18個(gè)可用的抗ToTV個(gè)體、9個(gè)ToTV易感性個(gè)體以及5個(gè)表型沒有清楚評價(jià)的個(gè)體(表3)?；谠摵Y查，標(biāo)記物P14/M49-F-282似乎是與ToTV抗性基因最緊密連鎖的標(biāo)記物。實(shí)施了第二次BSA，其中在R-批和S-批(分別由9個(gè)和8個(gè)個(gè)體構(gòu)成)上篩查96個(gè)引物組合。該篩查鑒定出兩種4美選標(biāo)i己物(P21/M61-F-583和P25/M51-F-131),將其與來自之前BSA篩查的一種標(biāo)記物(P15/M49-F-330)在32個(gè)前述個(gè)體上進(jìn)4亍-驗(yàn)i正(表3)。其他篩查出的標(biāo)記物中沒有一個(gè)看起來是比第一4侖BSA中所鑒定連鎖最好的標(biāo)i己物P14/M49-F-282更緊密連鎖。因?yàn)闃?biāo)i己物P14/M49-F-282看起來是最緊密連鎖的才示"i己物，因此決定在所有150種測定表現(xiàn)的個(gè)體(phenotypedindividual)上篩查該標(biāo)記物。結(jié)果示于表5中。共鑒定出17個(gè)重組體(表4)。表型分為3類-抗性(A)=總感染率(％)4氐于25%-隔離(H)=總感染率(％)在25%-75%之間-易感(B)5悉感染率(％)高于75%基于這種分類以及標(biāo)記物P14/M49-F-282的表型，共鑒定出28個(gè)重組體，其對應(yīng)該標(biāo)記物與ToTV抗性基因之間約9.5cM的距離。這與所計(jì)算出的窗口大小(9cM)—致，其中該ToTV抗性基因位于標(biāo)i己物P14/M49-F-282與P11/M35-F-216之間(表3)。該計(jì)算基于用于BSA的品系(長散布重復(fù)片段，line)，且認(rèn)為其表型最可靠。由于P14/M49-F-282(其看起來與所有受試標(biāo)記物連鎖最緊密)與基因座仍有一段較大距離，因此需要連鎖更為緊密的標(biāo)記物。所以，實(shí)施了第三次BSA篩查，其中篩查了72個(gè)引物組合，使得所篩查引物組合的總數(shù)達(dá)到263個(gè)。在該第三次篩查中，鑒定出9種候選標(biāo)記物(在6個(gè)引物組合中)，其在8種抗性和8種易感性個(gè)體上加以^S正(表3)。兩個(gè)標(biāo)記物(P11/M35-F-216和雙等^f立基因標(biāo)記物P13/M38-F-311/313)看起來是最緊密連鎖的。應(yīng)該強(qiáng)調(diào)，目前標(biāo)記物P11/M35-216的位置是假設(shè)性的，因?yàn)槠湮恢没趩蝹€(gè)重組體。隨后在更大組無可用表型信息的個(gè)體中篩查所述兩個(gè)標(biāo)記物P11/M35-F-216和P13/M38-F-311/313,包4舌17個(gè)重組體以及28個(gè)抗性且易感的個(gè)體(表5)。將標(biāo)記物P13/M38-F-311連鎖于專文感性等位基因。在該引物之間擴(kuò)增的311個(gè)堿基對(bp)的片段具有以下序列(311個(gè)堿基中已經(jīng)可靠i也測定了278個(gè))AGCTCTTGCAAGTTGTTCATCTTCTTTCAGTTGTGATTCACCCTTGAACACATATGATGGGAAGT將標(biāo)記物P13/M38-F-313連鎖于抗性等位基因。在該引物之間擴(kuò)增的313個(gè)石咸基對的片革殳具有以下序列(313個(gè)石咸基中已經(jīng)可靠地測定了284個(gè))AGCTCTTGCAAGTTGTTCATCTTCTTTCAGTTGTGATTCACGCCTTGAACACATATGATGGGAAGTTTACT將標(biāo)記物P11/M35-F-216連鎖于抗性等位基因。在該引物之間擴(kuò)增的216個(gè)堿基對的片段具有以下序列(216個(gè)堿基中已經(jīng)可靠地測定了185個(gè))AATGAGGGAACATTCTTTTGGGCAAAGTGGCATTTTCTGAAAAATTGTTTACT卩ger附//osw//"es9丄廢查兩神候逸遽^^^/3凝兩種標(biāo)記物P11/M35-F-216和P13/M38-F-311/313^皮鑒定為與ToTV抗性緊密連鎖。應(yīng)該注意到，基因與標(biāo)記物之間的距離難以確定，因?yàn)楸硇偷呐凶x對所計(jì)算的距離影響較大。在一組共83個(gè)種質(zhì)個(gè)體上篩查這些標(biāo)記物。才艮據(jù)該篩查，標(biāo)記物P11/M35-F-21636似乎具有90.4%的預(yù)測值，而標(biāo)記物P13/M38-F-311/313似乎具有96.4%的預(yù)測值(表6)。7b7T拔^在#^差西紐丄的定位實(shí)驗(yàn)證據(jù)以及番茄標(biāo)記物的特有基因組圖語表明，標(biāo)記物P14/M49-F-282定4立于4號染色體上。因此，預(yù)期ToTV抗性的遺傳基礎(chǔ)位于4號染色體上。發(fā)現(xiàn)了4號染色體上的兩個(gè)側(cè)翼標(biāo)記物雙等位基因標(biāo)記物P13/M38-F-311/313和COSII/CAPS標(biāo)記物C2—At5g25900(參見實(shí)施例2)。當(dāng)用Msel消化COSII/CAPS標(biāo)記物時(shí)，敏感(純合易感)表型提供分別為360bp和260bp的兩個(gè)片段，而(純合)抗性表型提供分別為420bp和260bp的兩個(gè)片段；表現(xiàn)全部三種片段的植物具有兩種等位基因，且為雜合的(即，易感的)(參見圖2，一個(gè)代表性的凝膠圖，示出了由全部三種類型植物組成的受試種群的消化后PCR產(chǎn)物；/人下向上遷移，大小標(biāo)記物表示100、200、300bp等片,殳)。用于番茄屬COSII/CAPS標(biāo)記物C2_At5g25900的單一基因序列(ID:SGN-U228314，基于2004年6月30日的數(shù)據(jù)；單一基因SGN-U332034,基于2007年4月5日的數(shù)據(jù))如下AAATTGGGCTGAAACTTATGGACCTATTTATTCCATCAAAGCATTGAAACAAGCTTTGGG結(jié)論通過在兩批抗性且易感的個(gè)體上篩查共263個(gè)Pstl/MselPC以及隨后的-驗(yàn)證步驟，顯示共有4種標(biāo)記物(一個(gè)雙等位基因)連鎖于ToTV抗性。標(biāo)記物與ToTV抗性基因之間的距離難以測定，但基于翻譯出的表型以及標(biāo)記物P14/M49-F-282的基因型，估計(jì)距離為9.5cM。這與所計(jì)算的窗口大小9cM—致，ToTV抗性基因位于其中。該計(jì)算基于人們認(rèn)為表型最可靠的長散布重復(fù)片段。將標(biāo)記物Pll/M35-F-216和P13/M38-F-311/313(雙等位基因)在83個(gè)種質(zhì)個(gè)體上加以驗(yàn)證。根據(jù)該篩查，所述標(biāo)記物分別具有90.4%和96.4%的預(yù)測<直?？赏ㄟ^在ToTV座位的等位基因變異或重組而解釋出現(xiàn)偏離個(gè)體。ToTV抗性基因最可能位于4號染色體上，如由該染色體上存在標(biāo)記物P14/M49-F-282所表明的?；诶?63種PC鑒定的凄t量相對4交多的4美選連鎖標(biāo)記物，ToTV抗性基因可能是來自野生番茄發(fā)作(accession)的基因滲入。<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>表2:在用于BSA的批次中使用的F2個(gè)體<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>*僅在第一次BSA中使用的個(gè)體表3:使用BSA鑒定的標(biāo)記物概述并且這些標(biāo)記物隨后在32個(gè)F2植物上進(jìn)4亍篩查。標(biāo)記物以最期望順序排序。探究標(biāo)記物P11/M35-F-216是否正確定4立。丄^月A-純合P1(=易感的).8."-.純合P2(=抗'性的')HN雜合評分D^^A和H之間二C'-SB和H之間「U-未知評分|R-抗性個(gè)體'!:'S-易感個(gè)體__________■」■■■,X7,■■..翻譯后的表型KG<-_A二總感染。/。〉75"B=總感染％<25!^25<總感染％<75!!■一■———，sD刀s盡-TRAZ勸CISf丄BB8BBCDBCDKDBBBB一"一8卩二廠AAA<!《.<A一A一ABBfr"i:nB、brD3BBBBBCnBr-一BCO08AAAAA<CAA-.一A,s浙%今吝BA，^"anBBCDBOQSSBSBBBSSRSGiBCDBAAAAAA-A.<C-A8j918~—6一nj，仏一TITjTjHT.TT一Totu力一nu2一oi23,，.r力，o-「力gw布一亞pip界5ggpC4一334j7..76!o一o1i二，一l::BTS844j①4i,4121-1ln1一2f1j1-11射2!u隊(duì)延膝^J^服寂j松」1.;,l.,.l一.J57fto37-7ocuo."1"rl142表4:基于標(biāo)記物P14/M49-F-282<N>,通過DeRuiterSeeds選擇的重組體。<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>表5:使用三種連鎖最好的標(biāo)記物產(chǎn)生的凄t據(jù)。標(biāo)記物P14/M49-F-282在150個(gè)表型品系上篩查而才示記物P11/M35-F-216和雙等^立基因P13/M38-F-311/313在一個(gè)亞組上篩查。<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>表6:通過在83個(gè)種質(zhì)品系上篩查對ToTV抗性的兩種候選連鎖標(biāo)記物產(chǎn)生的數(shù)據(jù)。<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>實(shí)施例2利用才示i己物C2_At5g25900和卩艮制'性內(nèi)4刀酶MseI檢測對ToTV的隱性抗性。樣品來自受試種群每一種植物的番茄組織的DNA樣品通過采用標(biāo)準(zhǔn)制備才支術(shù)制備(microprep,例長口參見FultonTM、ChunwongseJ、andTanksleySD.(1995)MicroprepProtocolforExtractionofDNAfromTomatoandotherHerbaceousPlants.PlantMolecularBiologyReporter13(3):207-209.)。PCR化學(xué)試劑如下-dNTP(2mM儲存液)(AmershamBioscience)-SuperTherm聚合酶(Integra)-正向引凈勿(10ng/fil)5，TGCTAATTGGGCTGAAACTTATGG-反向引4勿(10ng/pl)5，TGTTAGCTTTCTAGTTGAGATGGATG-10xPCR緩沖液25mMMgCl2-加樣緩沖液畫溴化乙錠(10mg/ml)畫lxTE-0.5XTBE(Duchefa)-P艮制性內(nèi)+刀酶MseI(NewEnglandBiolabs)PCR混合物由以下《且成(每個(gè)才羊品)2.0pi10xPCR緩沖液(25mMMgCl2)2.0dNTP混合物(2mM的每種dNTP))3.0fil正向引物(lOng/jil)3.0pl反向引物(lOng/pl)0.05|ilSuperTherm聚合酶8.95plH201.1)il模板DNAPCR熱循環(huán)〗義才莫式如下94。C3min;32個(gè)循環(huán)(94。C30s;65。C1min、以及72。C1min);4。C保持。PCR產(chǎn)物才艮據(jù)制造商的說明書利用Msel消化，在1.5%瓊脂糖;疑月交中進(jìn)4亍電;永。標(biāo)記物評分評分1=360bp+260bp=純合，易感評分2=420bp+360bp+260bp=雜合評分3=420bp+260bp=純合，抗性表型獨(dú)立于雜種進(jìn)行評分。47結(jié)果和討論圖2中展示了該凝膠的照片，示出了由所有三種類型的植物組成受試群的已消化PCR產(chǎn)物；從下至上遷移，大小標(biāo)記物表示100、200、300bp等片段)。表I:ToTVToTV標(biāo)記物評分表型植物100222植物100322植物100422植物100622植物100722植物101022植物101122植物101222植物101422植物101522表II:ToTVToTV標(biāo)記物評分表型植物101633植物101733植物101833植物101933植物103733植物103833植物104033植物104133植物104233植物104333植物104433植物104533植物104633植物104733植物104833植物104933植物105133植物105233植物105433植物105533植物106133植物106233植物106433植物106533植物106633植物106733植物106833植物106933植物107033植物107133植物107233植物107333植物107433植物107533植物107633植物107733植物107833植物107933植物108033植物108133植物108233植物108333植物108433植物108933植物1090331049表III:植物1020植物1021植物1022植物1024植物1025植物1026植物1027植物1028植物1029植物1030植物1031植物1032植物1033植物1034植物1035植物1036植物1056植物1057植物1058植物1059植物1085植物1086植物1087植物1088植物1039植物1050植物1053ToTV標(biāo)記物評分ToTV表型1015植物1023未知植物1005植物1008植物1013標(biāo)i己物C2_At5g25900最初在86個(gè)品系中加以測試。這些品系中有三種由于表型不清楚或者沒有標(biāo)記物結(jié)果而無法進(jìn)行分析(見表III中的"未知")。-10個(gè)品系評分為"2"，而表型為雜合易感。-24個(gè)品系評分為"1"，而表型為純合易感。-45個(gè)品系評分為"3",而表型為雜合抗性。畫該標(biāo)記物評分(markerscore)與95%所測試才才泮+中乂見察到的表型一致。結(jié)論可以推斷該標(biāo)記物可以可靠地(95%準(zhǔn)確性)用于表型預(yù)測和抗性等位基因的4企測。對標(biāo)記物C2—At5g25900與抗性等位基因之間的遺傳距離進(jìn)行了部分繪圖?；谠摌?biāo)記物，數(shù)據(jù)是非決定性的，并且與基因的距離l又能可靠地確定處于0和10cM的范圍之間。當(dāng)對相同樣品測試標(biāo)記物P13/M38-F-311/313時(shí)，共可解釋55個(gè)樣品中的2個(gè)重組體，表示該標(biāo)記物與0cM至3.6cM之間的抗性基因之間的連鎖。5權(quán)利要求1.一種植物，其基因組內(nèi)具有可賦予對番茄灼燒病毒(ToTV)的抗性的基因的至少一個(gè)等位基因，所述病毒已經(jīng)于2004年11月24日保藏在德國微生物和細(xì)胞培養(yǎng)中心，保藏號為ToTV-E01(DSM16999)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物，其中，所述植物是茄科屬植物，更優(yōu)選為番茄植物。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物，其中，所述植物是番茄種植物。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的植物，其中，所述等位基因位于與AFLP標(biāo)記物P14錯(cuò)9-F隱282、Pll/M35-F-216、P21/M61-F-583、P25/M51-F-131、P15/M49畫F畫330、P13/M38-F-311/313和/或COSII/CAPS標(biāo)記物C2—At5g25900,優(yōu)選與AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282、P11/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313,最優(yōu)選與AFLP標(biāo)記物P11/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313和/或COSII/CAPS標(biāo)記物C2—At5g25900連鎖的基因組區(qū)域內(nèi)。5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的植物，其中，所述等位基因位于4號染色體上，優(yōu)選在位于AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282和P11/M35-F-216之間，4交優(yōu)選位于AFLP標(biāo)記物P13/M38-F-311/313和COSII/CAPS標(biāo)記物C2一At5g25900之間的基因癥且區(qū)i或內(nèi)。6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的植物，其中，所述等位基因以純合形式存在。7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的植物，其中，所述抗性以對感染的建立的抗性表示。8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的植物，其中，所述植物在涉及利用權(quán)利要求1中所述的番茄灼燒病毒(ToTV)感染的抗性生物分析，可選地，隨后是涉及篩查是否存在至少一個(gè)與所述ToTV抗性基因的所述等位基因連鎖的分子標(biāo)記物的方法中加以鑒定。9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的植物，其中，所述植物通過一種涉及篩查是否存在至少一個(gè)與所述ToTV抗性基因的所述等位基因連鎖的分子標(biāo)記物的方法，可選地，隨后是涉及利用權(quán)利要求1所述的番茄灼燒病毒(ToTV)感染的抗性生物分才斤而生產(chǎn)。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的植物，其中，所述至少一個(gè)分子標(biāo)記物選自由AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282、P11/M35-F-216、P21/M61-F-583、P25/M51-F-131、P15/M49-F-330、和P13/M38-F-311/313以及COSII/CAPS標(biāo)記物C2—At5g25900組成的組，優(yōu)選選自由AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282、P11/M35-F-216和P13/M38-F-311/313以及COSII/CAPS標(biāo)記物C2—At5g25900組成的組，最4尤選選自由AFLP標(biāo)記物P11/M35-F-216和P13/M38-F-311/313和/或COSII/CAPS標(biāo)記物C2—At5g25900纟且成的纟且。11.一個(gè)來自#4居4又利要求1-10中4壬一項(xiàng)所述的柏:物的才直物部分。12.根據(jù)4又利要求10所述的才直物部分，其中，所述部分是果實(shí)或種子。13.用于選擇如權(quán)利要求1所述的抗番茄灼燒病毒(ToTV)的植物的方法，所述方法包4"舌以下步艱《a)l是供所述病毒的4妻種物；b)使植物暴露于所述接種物；c)允許足夠的孵育時(shí)間；以及d)如果隨著所述孵育時(shí)間的推移，所述植物內(nèi)未形成感染，則選擇所述纟直物。14.用于選擇植物的方法，其中所述植物的基因組內(nèi)具有賦予權(quán)利要求1所述的番茄灼燒病毒(ToTV)抗性的基因的至少一個(gè)等位基因，所述方法包括篩查植物的基因組DNA的步驟，用于篩查是否存在與AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282、P11/M35-F-216、P21/M61-F-583、P25/M51-F-131、P15/M49-F-330和/或P13/M38-F-311/313和/或COSII/CAPS標(biāo)記物C2—At5g25900，優(yōu)選與AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282、P11/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313和/或COSII/CAPS標(biāo)記物C2—At5g25900，最優(yōu)選與AFLP標(biāo)i己物P11/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313和/或COSII/CAPS標(biāo)記物C2一At5g25900連鎖的基因組區(qū)域。15.用于生產(chǎn)植物的方法，包括通過實(shí)施權(quán)利要求13或14中所述的方法來選擇基因組內(nèi)具有可賦予權(quán)利要求1所述的番茄灼燒病毒(ToTV)抗性的基因的至少一個(gè)等位基因的植物，和使所述選擇的植物自身雜交或與另一植物雜交以產(chǎn)生種子，以及將所述種子培育成植物。16.用于生產(chǎn)一又利要求1所述的抗番茄灼燒病毒(ToTV)的植物的方法，所述方法包4舌以下步驟a)通過實(shí)施權(quán)利要求13或14所述的方法來選擇基因組內(nèi)具有賦予番茄灼燒病毒(ToTV)抗性的基因的至少一個(gè)等位基因的植物；b)使所述選擇的植物與另一植物或自身雜交，以產(chǎn)生種子；c)將所述種子培育成植物以產(chǎn)生子代植物；d)可選地重復(fù)步艱《b)和c)的所述雜交和培育步驟；以及e)乂人所述子代才直物中選才奪其中所述等位基因以純合形式存在的植物。17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中，步驟e)中的所述選擇如下實(shí)施通過篩查所述子代才直物的DNA中與AFLP標(biāo)記物AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282、P11/M35-F-216、P21/M61-F-583、P25/M51-F-131、P15/M49-F-330和/或P13/M38-F-311/313和/或COSII/CAPS標(biāo)記物C2—At5g25900，優(yōu)選與AFLP標(biāo)記物P14/M49畫F-282、Pll/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313和/或COSII/CAPS標(biāo)記物C2—At5g25900，最優(yōu)選與AFLP標(biāo)記物P11/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313和/或COSII/CAPS標(biāo)記物C2—At5g25900連鎖的所述基因組區(qū)域是否以純合形式存在。18.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中，步驟e)中的所述選4奪通過利用所述病毒的抗性生物分析而實(shí)施。19.才艮據(jù)權(quán)利要求13-18中任任一項(xiàng)所述的方法，其中所述植物是茄科屬的植物，較優(yōu)選番茄植物，更優(yōu)選番茄種的植物。20.利用權(quán)利要求13-20中任一項(xiàng)所述的方法獲得的植物。21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的植物，其中，所述植物是茄科屬植物，較優(yōu)選番茄植物，更優(yōu)選番茄種的植物。22.來自根據(jù)權(quán)利要求21所述植物的植物部分。23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的植物部分，其中，所述部分是果實(shí)或種子。24.賦予ToTV抗性的等位基因的用途，所述等位基因位于與番茄4號染色體上的AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282、P11/M35-F-216、P21/M61-F-583、P25/M51-F-131、P15艇49-F-330、P13/M38-F-311/313和/或COSII/CAPS標(biāo)記物C2—At5g25900，優(yōu)選AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282、P11/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313,最優(yōu)選AFLP標(biāo)記物P11/M35-F-216和/或P13/M38-F畫311/313和/或COSII/CAPS標(biāo)記物C2一At5g25900連鎖的基因組區(qū)i或內(nèi)-用來選拷ToTV抗性番茄植物，或者-用來通過增加ToTV易感番茄品種中的所述抗性等位基因的存在頻率而在所述品種中貝武予ToTV^L性。25.ToTV抗性#:物用于增加所述#:物產(chǎn)量和/或用于防止所述柏」物由于ToTV感染導(dǎo)致的產(chǎn)量損失的用途，其中，所述ToTV抗性植物特征在于，位于與番茄4號染色體上的AFLP標(biāo)記物P14/M49-F畫282、Pll艇35-F-216、P21/M61-F-583、P25/M51-F-131、P15/M49-F-330、P13/M38-F-311/313和/或COSII/CAPS標(biāo)記物C2—At5g25900,優(yōu)選AFLP標(biāo)記物P14/M49畫F-282、P11/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313,最優(yōu)選AFLP標(biāo)記物P11/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313和/或COSII/CAPS標(biāo)記物C2—At5g25900連鎖的基因組區(qū)域中存在純合型等位基因。26.ToTV抗性4直物的種子的用途，其中，所述4直物在4又利要求1-11、20或21中4壬一項(xiàng)中定義，用于生產(chǎn)ToTV4元性才直物或或巧克力斑疾病)。27.包含至少一個(gè)賦予ToTV抗性的等位基因或者賦予ToTV抗性的等位基因?yàn)榧兒闲偷闹参锏挠猛?，其中所述等位基因位于與番茄4號染色體上的AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282、P11/M35-F-216、P21/M61-F-583、P25/M51-F-131、P15/M49-F-330、P13/M38-F-311/313和/或COSII/CAPS標(biāo)記物C2—At5g25900,優(yōu)選AFLP標(biāo)記物P14/M49-F-282、P11/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313，最優(yōu)選AFLP標(biāo)記物P11/M35-F-216和/或P13/M38-F-311/313和/或COSII/CAPS標(biāo)記物C2一At5g25900連鎖的基因組區(qū)域內(nèi)，作為ToTV抗性番茄植物或作為旨在提供具有由于所述等位基因的純合型存在導(dǎo)致的ToTV抗性表型的其他植物的育種項(xiàng)目中的親本植林。28.AFLP標(biāo)記物P13/M38-F-311/313、P11/M35-F-216和/或COSII/CAPS標(biāo)記物C2—At5g25900的用途，用于才企測才直物中是否存在賦予ToTV抗性的等位基因。29.根據(jù)權(quán)利要求24-28中任一項(xiàng)所述的用途，其中，所述植物是番茄纟直物。全文摘要本發(fā)明涉及一種番茄植物，其基因組內(nèi)部具有賦予番茄灼燒病毒(ToTV)抗性的基因的至少一個(gè)等位基因，所述病毒已經(jīng)于2004年11月24日保藏在德國微生物和細(xì)胞培養(yǎng)中心(DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturenGmbHunder)，其保藏號為ToTV-E01(DSM16999)。文檔編號A01H1/00GK101494969SQ200780027876公開日2009年7月29日申請日期2007年6月1日優(yōu)先權(quán)日2006年6月1日發(fā)明者保盧斯·科內(nèi)利斯·馬里斯,約翰內(nèi)斯·亨德里克斯·瑪麗亞·巴藤,約翰內(nèi)斯·弗朗西斯庫斯·約翰娜·瑪麗亞·范登霍伊維爾,阿妮塔·阿夫克·德哈恩申請人:德魯伊特種子研發(fā)有限公司