專利名稱：：雷竹種胚培養(yǎng)基及組培育苗方法雷竹種胚培養(yǎng)基及組培育苗方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種生物組織的培養(yǎng)基和組織培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
：雷竹(戶力/〃M"cAj^/7raecor乂又名早竹、早園竹、雷公竹，禾本科竹亞科剛竹屬竹種。雷竹是一種優(yōu)良的,用竹種，年畝產(chǎn)竹筍高達2噸，年畝產(chǎn)值超2萬元人民幣。雷竹通過覆蓋、施肥、增溫措施，不但增產(chǎn)顯著，而且能提前在春節(jié)前的冬季出夢，給春節(jié)市場提供人們渴求的鮮夢，成為搶手年貨和贈送禮品。雷竹的適應性強，在低山緩坡地、房前屋后地、廢耕地、河灘地均宜栽種，近年我國南方農(nóng)村自發(fā)開劈雷竹林地的熱情很高，發(fā)展很快，但都是依靠傳統(tǒng)的移栽母竹或竹鞭來繁殖，速度慢、用地多、運輸不便、成本高并受季節(jié)限制，而且長此以往，無法克服竹種品質(zhì)劣化和成片同時開花死亡的災難性后果的產(chǎn)生。雷竹，作為一種中徑的散生竹，至今未見通過組織培養(yǎng)、快速育成種苗，解決竹農(nóng)急需雷竹苗的問題的有關(guān)報道和實物問世。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明針對至今尚未成功地培育出雷竹組培苗的現(xiàn)實情況，存在著無法向急需雷竹種苗的竹農(nóng)快速而充足提供的缺憾，本發(fā)明要解決的問題是提供一種雷竹種胚培養(yǎng)基和用該培養(yǎng)基培養(yǎng)雷竹種苗的整套方法。解決上述問題的技術(shù)方案是本雷竹種胚培養(yǎng)基，由下列成分及其份量組成MS鹽類+MT維生素+或0.3或1或3mg/L的BA即節(jié)氨基腺嘌呤+0.05或0.1或lmg/L的NAA即oc-奈乙酸+0，05或0.1或0.5mg/L的氨氯吡咬酸+0.0001或0.001或0.01mg/L的TDZ即噻二唑苯基脲+20g/L的葡萄糖+100mg/L的肌醇+10mg/L的硫酸腺噪呤+O.5g/L的麥芽抽提物，培養(yǎng)基的pH值為5.0—6.0。本雷竹種胚培養(yǎng)基組培育苗方法包括如下操作步驟(1)外植體的采集與選擇取雷竹種子長度>0.6cm，種胚長度l-2mm，選擇心形期胚與魚雷形期胚；(2)種子的洗凈、滅菌與取種胚將剛采集的種子去掉外籜，用蒸餾水沖洗干凈，放入1%濃度的NaClO的溶液中真空抽濾滅菌10min，再用無菌水沖洗5次，在無菌操作臺上用解剖鏡和小鑷子剝?nèi)シN皮，并用小刀尖挑取種胚；(3)接種與培養(yǎng)將切得的雷竹種胚接種到如權(quán)利要求1所述的雷竹種胚培養(yǎng)基中，暗培養(yǎng)2d后再置于光照周期16h/d、光照強度2W0Lux的光下、環(huán)境溫度25±2t:中繼續(xù)培養(yǎng)26d,共28d,便出現(xiàn)新綠色的生有根的試管苗，發(fā)芽率達50%;(4)繼代或移栽培養(yǎng)將該生根的試管苗進行繼代培養(yǎng)，或置于馴化室，強光20000Lux下馴化2周，先用清水洗去根部培養(yǎng)基，種植于體積比為蛭石珍珠巖泥炭-l:1:1的盆裝基質(zhì)中，逐個套透明塑料袋，該袋每二天剪一小口，一周后棄袋移入溫室栽種。本發(fā)明的有益效果是首創(chuàng)了雷竹這一中徑散生竹用種胚作外植體組培育苗的整套方法，提供了雷竹種胚育苗的優(yōu)良培養(yǎng)介質(zhì)，為進一步探索雷竹的基因工程、拓寬外植體材料等奠定了基礎(chǔ)。另一方面，為具有極高經(jīng)濟價值、竹農(nóng)渴望栽種的雷竹苗，提供了充足而快速的供苗途徑，而且還具有省地、運輸方便、成本低、不受季節(jié)限制等優(yōu)點。具體實施方式本發(fā)明下面結(jié)合實施例作進一步說明培養(yǎng)基選用的原料及配比是除MS鹽類、MT維生素外，還有BA(O、0.3、1、3mg/L)、NAA(0、0.05、0.1、lmg/L)、氨氯吡咬酸(0.05、0，1、0.5mg/L)、TDZ(0.0001、0.001、0.01mg/L)，再加入權(quán)利要求1中記栽的營養(yǎng)劑和凝固劑，這里MS、MT、營養(yǎng)劑、凝固劑為最佳的固定加入量以外(其中的MS、MT加入量按產(chǎn)品說明書執(zhí)行)，BA和NAA除都有不加和加的兩種情況。BA還有0.3、1、3mg/L三種不同的加入量，NAA有O.05、0.1、lmg/L三種不同加入量，氨氯吡啶酸有0.05、0.1、0.5三種不同加入量，TDZ有0.0001、0.001、0.Ol三種不同加入量，培養(yǎng)基的pH值也分別有5、5,2、5.7、6四種情況，所以共組合了多種配方，分別置于160支試管內(nèi)，對雷竹種胚進行組培，其生根發(fā)芽與褐化與否的情況如表l:(表l)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>從表中可看出，序號為7、3、6的生長竹苗的情況最好，所有八組試驗，都沒有褐化發(fā)生。由此選擇序號7、6、3的配方組合成優(yōu)選的pH值為5.7，優(yōu)選的BA加入量度為0.3mg/L、NAA的加入量為0.lmg/L;其它原料的最佳加入量按權(quán)利要求確定值和MS、MT的說明書規(guī)定值辦。上面給出的是一個點的數(shù)值的加入量，實際上從最低到最高的整個區(qū)間值的加入量也都是可行的。本雷竹種胚組培育苗方法包括如下操作步驟(1)外植體的采集與選擇取雷竹種子長度>0.6cm，種胚長度l-2mm，選擇心形期胚與魚雷形期胚；(2)種子的洗凈、滅菌與取種胚將剛采集的種子去掉外籜，用蒸餾水沖洗干凈，放入1%濃度的NaClO的溶液中真空抽濾滅菌10min，再用無菌水沖洗5次，在無菌操作臺上用解剖鏡和小鑷子剝?nèi)シN皮，并用小刀尖挑取種胚；(3)接種與培養(yǎng)將切得的雷竹種胚接種到如權(quán)利要求1所述的雷竹種胚培養(yǎng)基中，暗培養(yǎng)2d后再置于光照周期16h/d、光照強度M00Lux的光下、環(huán)境溫度25±2。C中繼續(xù)培養(yǎng)26d,共28d，便出現(xiàn)新綠色的生有根的試管苗，發(fā)芽率達50%;(4)繼代或移栽培養(yǎng)將該生根的試管苗進行繼代培養(yǎng)，或置于馴化室，強光20000Lux下馴化2周，先用清水洗去根部培養(yǎng)基，種植于體積比為蛭石珍珠巖泥炭-l:1:1的盆裝基質(zhì)中，逐個套透明塑料袋，該袋每二天剪一小口，一周后棄袋移入溫室栽種。權(quán)利要求1、一種雷竹種胚培養(yǎng)基，其特征是由下列原料及其份量組成MS鹽類+MT維生素+或0.3或1或3mg/L的BA即芐氨基腺嘌呤+0.05或0.1或1mg/L的NAA即α-奈乙酸+0.05或0.1或0.5mg/L的氨氯吡啶酸+0.0001或0.001或0.01mg/L的TDZ即噻二唑苯基脲+20g/L的葡萄糖+100mg/L的肌醇+10mg/L的硫酸腺嘌呤+0.5g/L的麥芽抽提物，培養(yǎng)基的pH值為5.0-6.0。2、如權(quán)利要求1所述的雷竹種胚培養(yǎng)基組培育苗方法，包括如下操作步驟(1)外植體的釆集與選擇取雷竹種子長度>0.6cm，種胚長度1-2mm，選擇心形期胚與魚雷形期胚；(2)種子的洗凈、滅菌與取種胚將剛采集的種子去掉外籜，用蒸餾水沖洗干凈，放入1%濃度的NaClO的溶液中真空抽濾滅菌10min，再用無菌水沖洗5次，在無菌操作臺上用解剖鏡和小鑷子剝?nèi)シN皮，并用小刀尖挑取種胚；(3)接種與培養(yǎng)將切得的雷竹種胚接種到如權(quán)利要求1所述的雷竹種胚培養(yǎng)基中，暗培養(yǎng)2d后再置于光照周期16h/d、光照強度2400Lux的光下、環(huán)境溫度25±中繼續(xù)培養(yǎng)26d，共28d，便出現(xiàn)新綠色的生有根的試管苗，發(fā)芽率達50%;(4)繼代或移栽培養(yǎng)將該生根的試管苗進行繼代培養(yǎng)，或置于馴化室，強光20000Lux下馴化2周，先用清水洗去根部培養(yǎng)基，種植于體積比為蛭石珍珠巖泥炭-l:1:l的盆裝基質(zhì)中，逐個套透明塑料袋，該袋每二天剪一小口，一周后棄袋移入溫室栽種。全文摘要一種雷竹種胚培養(yǎng)基，由下列原料及其份量組成MS鹽類+MT維生素+或0.3或1或3mg/L的BA即芐氨基腺嘌呤+0.1mg/L的NAA即α-奈乙酸+0.1mg/L的氨氯吡啶酸+0.001mg/L的TDZ即噻二唑苯基脲+20g/L的葡萄糖+100mg/L的肌醇+10mg/L的硫酸腺嘌呤+0.5g/L的麥芽抽提物，培養(yǎng)基的pH值為5.0-6.0。用本培養(yǎng)基組培育苗包括下列操作步驟外植體的采集與選擇、種子的洗凈滅菌與取種胚、接種與培養(yǎng)、繼代或移栽培養(yǎng)。用本培養(yǎng)基與組培方法，首創(chuàng)了雷竹這一經(jīng)濟價值高的中徑散生竹的優(yōu)良培養(yǎng)基與種苗組培方法，為雷竹的進一步研究、探索新的生物工程打下基礎(chǔ)，實現(xiàn)快速而充足提供雷竹種苗的希望在即。文檔編號A01H4/00GK101336614SQ20081006338公開日2009年1月7日申請日期2008年8月12日優(yōu)先權(quán)日2008年8月12日發(fā)明者偉方,朱圓圓,林新春,桂仁意,裴海燕,黃麗春申請人:浙江林學院