專利名稱：一種鐵皮石斛芽的生根法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種鐵皮石斛芽的生根法。
背景技術(shù)：
利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖鐵皮石斛試管苗，是目前鐵皮石斛大規(guī) 模生產(chǎn)的普遍方法。目前在鐵皮石斛試管苗的繁殖體系中，生根培養(yǎng)基往往 采用固體培養(yǎng)基，瓊脂或卡拉膠一般是固體培養(yǎng)基中最常用的凝固劑。固體
培養(yǎng)基的應(yīng)用，不但增加了生產(chǎn)成本(據(jù)計算培養(yǎng)基中瓊脂的成本占50%左 右)；另外，在2個月左右的生根周期中，由于是固體培養(yǎng)基，因此芽只能吸 收局部營養(yǎng)成分，造成營養(yǎng)成分供應(yīng)不充分或浪費現(xiàn)象，而且在取苗以及清 洗根部瓊脂等步驟時容易對根部苗體造成損傷，加劇病蟲害的侵入，進而使 移栽存活率下降，導致提高了生產(chǎn)成本，因此嚴重影響并制約著該產(chǎn)業(yè)的高 效持續(xù)發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種能降低生產(chǎn)成本并能提高移栽存活 率的鐵皮石斛芽的生根法。
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種鐵皮石斛芽的生根法，依次進 行以下步驟
1)、將生根培養(yǎng)液倒入培養(yǎng)容器內(nèi)，向培養(yǎng)容器內(nèi)添加濾紙橋或脫脂棉， 直至膨脹后的濾紙橋或脫脂棉與生根培養(yǎng)液齊平；然后密封培養(yǎng)容器，進行
高溫滅菌；滅菌條件為滅菌壓力為0.09 0.11MPa，溫度為119 123t:，滅 菌時間為15 min 30min;
2) 、割取2.5 6.0cm高的單株的鐵皮石斛芽，并將高度差為0 士0.5 cm 的鐵皮石斛芽接種到同一培養(yǎng)容器內(nèi)進行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為16小時光照， 光照強度20 40pmoln^.s"，溫度為26 28。C; 8小時暗培養(yǎng)，溫度為20 22 °C;上述光照和暗培養(yǎng)交替進行；
3) 、待上述培養(yǎng)容器內(nèi)的每個芽上都長出每條均長于2 cm的至少3條根
時，得試管苗；停止培養(yǎng)，將上述試管苗移出培養(yǎng)容器。
作為本發(fā)明的鐵皮石斛芽的生根法的改進步驟l)中的生根培養(yǎng)液為 1/2MS基本培養(yǎng)基+0.01 0.5mg/lNAA+15 20g/1糖，pH為5.0 5.5。
作為本發(fā)明的鐵皮石斛芽的生根法的改進步驟l)中的滅菌條件為滅
菌壓力為0.1MPa，溫度為12rC。
在本發(fā)明的鐵皮石斛芽的生根法中
1、 步驟l)中一般選用3cm高的濾紙橋、或者選用醫(yī)用脫脂棉。 濾紙橋或脫脂棉是用于固定下述步驟中的芽。
2、 步驟l)中的生根培養(yǎng)液的制作方法具體如下以1/2MS基本培養(yǎng)基 (即溶液中所有物質(zhì)的含量為MS基本培養(yǎng)基的一半)作為基礎(chǔ)，分別加入
NAA (萘乙酸)和糖，均勻混合，每1L的1/2MS基本培養(yǎng)基加入0.01 0.5 mg NAA和15 20g糖；再利用lmol/L的KOH或lmol/L的HCl調(diào)節(jié)pH為5.0 5.5。
3、 步驟2)中的培養(yǎng)時間(生根周期) 一般為45天左右。 本發(fā)明的鐵皮石斛芽的生根法，屬于一種誘導鐵皮石斛芽生根的組織培
養(yǎng)方法。在本發(fā)明的方法中，將生根培養(yǎng)基配置成液體培養(yǎng)基，有助于提高
芽對培養(yǎng)基內(nèi)營養(yǎng)成分的充分吸收和省去將所得的試管苗移栽時清洗根部瓊 脂等工序；這樣不但可以降低培養(yǎng)基的成本，而且可以保證比相應(yīng)固體培養(yǎng) 基(即為與生根培養(yǎng)液內(nèi)的所有營養(yǎng)成分都相等、加了瓊脂后所成的固體培 養(yǎng)基)更快誘導出一定量的根，還可以保證試管苗出瓶時減少對其根部的傷 害，提高了試管苗的移栽存活率。脫脂棉經(jīng)清洗、消毒等處理后，還能重復 利用；因此可以進一步降低生產(chǎn)成本。
為了充分證明本發(fā)明方法的創(chuàng)造性，發(fā)明人作了如下的對比實驗
將本發(fā)明的步驟O改成下述內(nèi)容
在相同的培養(yǎng)容器內(nèi)放置與生根培養(yǎng)液內(nèi)的所有營養(yǎng)成分都等量的固體
培養(yǎng)基，然后進行高溫滅菌；此時固體培養(yǎng)基在培養(yǎng)容器內(nèi)的高度大致二本 發(fā)明添加濾紙橋/脫脂棉后的生根培養(yǎng)液的高度。 固體培養(yǎng)基的制作方法如下
以1/2MS基本培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)，分別加入NAA、糖和瓊脂，均勻混合， 每1L的1/2MS基本培養(yǎng)基加入0.01 0.5 mg NAA 、 15 20g糖和6 9g瓊脂；再 利用lmol/L的KOH或lmol/L的HCl調(diào)節(jié)pH為5.0 5.5;得固體培養(yǎng)基。
其余步驟和內(nèi)容完全同本發(fā)明(即所選用鐵皮石斛芽的規(guī)格和數(shù)量完全 等同于本發(fā)明)。
然后將對比實驗所得的試管苗與本發(fā)明所得的試管苗進行相同的后期管理。
結(jié)果如下該對比實驗的生根時間比本發(fā)明要多15天(對比實驗需60天)。
在相同的后期管理的前提下，對比實驗所得試管苗的移栽存活率比本發(fā)明要
低感從上述2者的對比可以看出采用本發(fā)明的方法，鐵皮石斛生根培養(yǎng)液
的成本降低了 50%左右，生根周期減少了 15天左右，移栽時省去了清洗根部 瓊脂的工序，培育的試管苗移栽存活率比相應(yīng)固體培養(yǎng)基提高10%。所以， 本發(fā)明的鐵皮石斛芽的生根法，是一種低成本、快速提供優(yōu)質(zhì)鐵皮石斛試管 苗及有助于提高試管苗移栽成活率的方法，本發(fā)明的方法能促進該產(chǎn)業(yè)的高 效持續(xù)發(fā)展。
具體實施例方式
實施例l、 一種鐵皮石斛芽的生根法，依次進行以下步驟
1) 、制作生根培養(yǎng)液
以1/2MS基本培養(yǎng)基(即溶液中所有物質(zhì)的含量為MS基本培養(yǎng)基的一半)
作為基礎(chǔ)，分別加入NAA (萘乙酸)和糖，均勻混合，每1L的1/2MS基本培 養(yǎng)基加入0.01~0.5 mgNAA和15 20g糖；再利用lmol/L的KOH或lmol/L的HCl 調(diào)節(jié)pH為5.0 5.5。
2) 、將上述生根培養(yǎng)液倒入培養(yǎng)容器(呈圓桶形，容積為350ml，高度為 12cm)內(nèi)，向培養(yǎng)容器內(nèi)添加醫(yī)用脫脂棉，直至膨脹后的醫(yī)用脫脂棉與生根 培養(yǎng)液齊平；此時帶有醫(yī)用脫脂棉的生根培養(yǎng)液的高度為3cm左右。然后，密 封該培養(yǎng)容器，進行髙溫滅菌；滅菌條件為滅菌壓力為0.1MPa，溫度為121 °C ，滅菌時間為15 min 30 min。
按照上述方法制作若干個培養(yǎng)容器，供后續(xù)步驟使用。
3) 、割取2.5 cm~6.0 cm高的單株的鐵皮石斛芽(即所得的鐵皮石斛芽為 單株)，并將高度差為0 士0.5 cm的鐵皮石斛芽接種到同一培養(yǎng)容器內(nèi)進行 培養(yǎng)。例如將10株高度為5士0.5 cm的鐵皮石斛芽接種到上述步驟2)所得的
同一個培養(yǎng)容器內(nèi)進行培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為16小時光照，光照強度20 40 iimol m—ls'1，溫度為26 28。C; 8小時暗培養(yǎng)，溫度為20 22t:;上述光照和暗培 養(yǎng)交替進行。
4)、待容器中的每個芽上都長出每條均長于2cm的至少3條根時，得試管 苗；停止培養(yǎng)，將上述試管苗移出培養(yǎng)容器。
上述鐵皮石斛芽所需的培養(yǎng)時間(即生根時間)為45天。 然后按照目前的現(xiàn)有技術(shù)對其進行培育即可。
最后，還需要注意的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的一個具體實施例。顯 然，本發(fā)明不限于以上實施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員 能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認為是本發(fā)明的 保護范圍。
權(quán)利要求
1、一種鐵皮石斛芽的生根法，其特征是依次包括以下步驟1)、將生根培養(yǎng)液倒入培養(yǎng)容器內(nèi)，向培養(yǎng)容器內(nèi)添加濾紙橋或脫脂棉，直至膨脹后的濾紙橋或脫脂棉與生根培養(yǎng)液齊平；然后密封培養(yǎng)容器，進行高溫滅菌；滅菌條件為滅菌壓力為0.09～0.11MPa，溫度為119～123℃，滅菌時間為15min～30min；2)、割取2.5～6.0cm高的單株的鐵皮石斛芽，并將高度差為0～±0.5cm的鐵皮石斛芽接種到同一培養(yǎng)容器內(nèi)進行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為16小時光照，光照強度20～40μmol m-2.s-1，溫度為26～28℃；8小時暗培養(yǎng)，溫度為20～22℃；上述光照和暗培養(yǎng)交替進行；3)、待上述培養(yǎng)容器內(nèi)的每個芽上都長出每條均長于2cm的至少3條根時，得試管苗；停止培養(yǎng)，將上述試管苗移出培養(yǎng)容器。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的鐵皮石斛芽的生根法，其特征是所述步驟l)中 的生根培養(yǎng)液為1/2MS基本培養(yǎng)基+0.01 0.5 mg/1 NAA+15~20g/l糖，pH為
3、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的鐵皮石斛芽的生根法，其特征是所述步驟l) 中的滅菌條件為滅菌壓力為0.1MPa，溫度為121'C。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種鐵皮石斛芽的生根法，依次包括以下步驟1)將生根培養(yǎng)液倒入培養(yǎng)容器內(nèi)，向培養(yǎng)容器內(nèi)添加濾紙橋或脫脂棉，直至膨脹后的濾紙橋或脫脂棉與生根培養(yǎng)液齊平；然后密封培養(yǎng)容器，進行高溫滅菌；2)割取2.5～6.0cm高的單株的鐵皮石斛芽，并將高度差為0～±0.5cm的鐵皮石斛芽接種到同一培養(yǎng)容器內(nèi)進行培養(yǎng)；3)待上述培養(yǎng)容器內(nèi)的每個芽上都長出每條均長于2cm的至少3條根時，得試管苗，停止培養(yǎng)。采用本發(fā)明的鐵皮石斛芽的生根法，能降低生產(chǎn)成本，還能提高試管苗的移栽存活率。
文檔編號A01H4/00GK101352148SQ20081012075
公開日2009年1月28日 申請日期2008年9月11日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月11日
發(fā)明者何云芳, 利 馮, 毛碧增, 滕士元, 郭傳敏 申請人:吳江市苗圃集團有限公司