專利名稱：一種三疣梭子蟹快速生長品系的構(gòu)建方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及水產(chǎn)遺傳育種領(lǐng)域，具體說是一種三疣梭子蟹快速生長品系的構(gòu)建方法。
背景技術(shù)：
水產(chǎn)動物的遺傳育種傳統(tǒng)上采用群體選育或雜交的方法進行，目前也有嘗試借鑒在蓄禽中采用的家系選育的方法。由于一般水產(chǎn)動物產(chǎn)卵量大、后代數(shù)量多，使家系選育非常繁瑣，操作困難。群體選育耗時長，收效慢。近年來，國內(nèi)外學(xué)者一直非常關(guān)注分子標記輔助育種，但在實際應(yīng)用中尤其在水產(chǎn)動物的遺傳育種上還未見成效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種快速、有效并且操作簡便的三疣梭子蟹快速生長品系的構(gòu)建方法。 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為 三疣梭子蟹快速生長品系的構(gòu)建方法利用選育材料的基因組微衛(wèi)星作為分子標記，根據(jù)分子標記得到遺傳結(jié)構(gòu)中存在生殖隔離明顯的群體作為雜交群體，雜交群體進行雜交組合，即得三疣梭子蟹快速生長品系。 所述選育材料的基因組微衛(wèi)星作為分子標記為以選育材料的基因組DNA為模板，以上游引物5' -CTGTCTGATGAG TGAGGCTAC-3'和下游引物5' -TGACCACGAGGAAAGGAG-3'以及上游引物5' -GCCACTATCTTGCTGAGGTTGA-3'和下游引物5' -GCCATAGCACGAACACTTTTGA-3'兩對引物進行體外雙重PCR擴增，獲得選育材料的基因組微衛(wèi)星序列片段，選育材料為三疣梭子蟹野生群體。所述PCR擴增時PCR總反應(yīng)體積為25uL，其中含dNTP (10mM) 0. 5ul，每個引物0. 2Fmo1，0. 4U Taq酶，10XPCR Buffer2. 5ul (含1. 5mmo1 Mgcl2) 。 PCR擴增條件94°C 2min ;然后94°C 30s，57。C 30s，72。C 40s，循環(huán)29次；最后72°C 10min。所述選育材料遺傳結(jié)構(gòu)中存在生殖隔離明顯的雜交組合群體為雄體為山東萊州灣群體、雌體為廣東南澳島群體。 本發(fā)明所具有的優(yōu)點 1.本發(fā)明育種的遺傳背景清晰，避免了傳統(tǒng)育種的盲目性。利用基因組微衛(wèi)星作
為分子標記，解析了我國野生三疣梭子蟹群體的遺傳結(jié)構(gòu)，明確了各地理種群間的遺傳關(guān)
系，使育種材料的選擇具有更強的目的性，并且采用分子標記輔助選育和雜交并行的方法
構(gòu)建三疣梭子蟹快速生長品系，加快了育種進程，也提高了育種的有效性。 2.本發(fā)明以遺傳上顯示生殖隔離的兩個群體-山東萊州灣群體和廣東南澳島群
體作為雜交的基本材料，在有效利用遺傳資源的同時，也有效緩解了由于小群體繁殖造成
的近交衰退現(xiàn)象。 3.本發(fā)明雜交組合的父本為山東萊州灣群體的雄性個體，借鑒了家蓄中先進的育種經(jīng)驗，充分考慮了父本性狀在育種中的重要作用。
4.本發(fā)明方法大大減少了選育環(huán)節(jié)，加快了育種進程，同時有效避免了小群體繁殖造成的近交衰退現(xiàn)象，尤其適合于生長特性的選育。


圖la為本發(fā)明選育材料基因組微衛(wèi)星標記顯示三疣梭子蟹山東萊州灣群體的遺傳結(jié)構(gòu)。 圖lb為本發(fā)明選育材料基因組微衛(wèi)星標記顯示三疣梭子蟹廣東南澳島群體的遺傳結(jié)構(gòu)。 圖2a為本發(fā)明構(gòu)建的三疣梭子蟹雜交組合子代與野生群體的生長性狀比較圖(其中黑色柱形圖示雜交組合($山東萊州灣X早廣東南澳島)子代)。
圖2b為本發(fā)明構(gòu)建的三疣梭子蟹雜交組合子代與野生群體的生長性狀比較圖(其中黑色柱形圖示雜交組合($山東萊州灣X早廣東南澳島)子代)。
具體實施方式
實施例1 以選育材料的基因組微衛(wèi)星作為分子標記，選育材料為三疣梭子蟹野生群體，以選育材料的基因組DNA為模板，以上游引物5' -CTGTCTGATGAGTGAGGCTAC-3'和下游引物5' -TGACCACGAGGAAAGGAG-3'以及上游引物5' -GCCACTATCTTGCTGAGGTTGA-3'和下游引物5' -GCCATAGCACGAACACTTTTGA-3'兩對引物進行體外雙重PCR擴增，PCR總反應(yīng)體積為25uL，其中含dNTP(10mM)0. 5ul，每個引物0. 2Fmo1，0. 4U Taq酶，10XPCR Buffer2. 5ul(含1. 5,1 Mgcl2) 。 PCR擴增條件94。C 2min ;然后94°C 30s，57。C 30s，72。C 40s，循環(huán)29次;最后72t: 10min。 PCR擴增產(chǎn)物在0. 7 %聚丙烯酰胺凝膠電泳、經(jīng)銀染顯色，通過所示的電泳條帶即可確定個體的遺傳背景，根據(jù)分子標記得到遺傳結(jié)構(gòu)中存在生殖隔離明顯的群體作為雜交群體(參見圖la和圖lb)，雜交群體進行雜交組合，雜交組合群體為雄體為山東萊州灣群體、雌體為廣東南澳島群體，即得三疣梭子蟹快速生長品系。 由圖la和圖lb可知三疣梭子蟹山東萊州灣群體和廣東南澳島群體的遺傳結(jié)構(gòu)存
在生殖隔離。
實施例2 地點浙江省寧海縣雙盤涂水產(chǎn)養(yǎng)殖公司 2007年9月，在浙江省寧波市寧?？h雙盤涂水產(chǎn)養(yǎng)殖公司進三疣梭子蟹山東萊州灣群體雌性個體20只，雄性個體20只，同時進廣東南澳島群體雌性個體20只，雄性個體20只，放到暫養(yǎng)池暫養(yǎng)。然后，將兩個群體的雌性個體和雄性個體進行雜交，構(gòu)建雜交組合40組。抱卵蟹分別暫養(yǎng)至2008年4月，存活的個體開始陸續(xù)孵化幼體，經(jīng)常規(guī)人工育苗，2008年6月共出苗種Cl-C2期共計0. 75kg，分放2個塘進行養(yǎng)殖。2008年10月，在浙江省寧波市寧海縣雙盤涂水產(chǎn)養(yǎng)殖公司捕獲雜交組合的子代成體，并進行各種形態(tài)學(xué)參數(shù)測量。同時，與同等養(yǎng)殖條件下的當?shù)厝后w進行個體殼長、殼寬等的比較(參見圖2a和圖2b)。
由圖2a和圖2b可知經(jīng)過選育的雜交樣品殼長和殼寬均比普通養(yǎng)殖的增加4%以上。其中黑色柱形圖示雜交組合($山東萊州灣X早廣東南澳島)子代。結(jié)果證明，此雜交組合具有生長優(yōu)勢。
序列表.txtSEQUENCE LISTING〈110〉中國科學(xué)院海洋研究所〈120〉 一種三疣梭子蟹快速生長品系的構(gòu)建方法〈130〉〈160>4〈170>PatentIn version 3. 1〈210>1〈211>21〈212>DNA〈213>人工合成〈220〉〈221>gene〈222>(1).. (21)〈223〉〈400>1ctgtctgatg agtgaggcta c 21〈210>2<211〉18〈212>DNA〈213〉人工合成〈220〉〈221>gene〈222〉 (1) . (18)〈223〉〈400>2tgaccacgag ga朋gg;ag 18〈210>3〈211>22〈212>廳〈213〉人工合成〈220〉〈221>gene〈222〉 (1).. (22)〈223〉〈400>3gccactatct tgctgaggtt ga 22〈210〉4〈211>22
〈212>DNA 〈213〉人工合成 〈220〉 〈221>gene 〈222〉 (1) . (22) 〈223〉 〈400>4 gccatagcac gaacactttt ga 22
權(quán)利要求
一種三疣梭子蟹快速生長品系的構(gòu)建方法，其特征在于利用選育材料的基因組微衛(wèi)星作為分子標記，根據(jù)分子標記得到遺傳結(jié)構(gòu)中存在生殖隔離明顯的群體作為雜交群體，雜交群體進行雜交組合，即得三疣梭子蟹快速生長品系。
2. 按權(quán)利要求1所述的三疣梭子蟹快速生長品系的構(gòu)建方法，其特征在于所述選 育材料的基因組微衛(wèi)星作為分子標記為以選育材料的基因組DNA為模板，以上游引物5' -CTGTCTGATGAG TGAGGCTAC-3'和下游引物5' -TGACCACGAGGAAAGGAG-3'以及上游引物 5' -GCCACTATCTTGCTGAGGTTGA-3'和下游引物5' -GCCATAGCACGAACACTTTTGA-3'兩對引物進 行體外雙重PCR擴增，獲得選育材料的基因組微衛(wèi)星序列片段，選育材料為三疣梭子蟹野 生群體。
3. 按權(quán)利要求2所述的三疣梭子蟹快速生長品系的構(gòu)建方法，其特征在于所述PCR 擴增時PCR總反應(yīng)體積為25uL，其中含dNTP(10mM)0. 5ul，每個引物0. 2Fmo1，0. 4U Taq酶， 10XPCR Buffer 2. 5ul (含1. 5,1 Mgcl2) 。 PCR擴增條件94。C 2min ;然后94°C 30s， 57。C 30s，72。C 40s，循環(huán)29次；最后72。C 10min。
4. 按權(quán)利要求1所述的三疣梭子蟹快速生長品系的構(gòu)建方法，其特征在于所述選育 材料遺傳結(jié)構(gòu)中存在生殖隔離明顯的雜交組合群體為雄體為山東萊州灣群體、雌體為廣東 南澳島群體。
全文摘要
本發(fā)明涉及水產(chǎn)遺傳育種領(lǐng)域，具體說是一種三疣梭子蟹快速生長品系的構(gòu)建方法。利用選育材料的基因組微衛(wèi)星作為分子標記，根據(jù)分子標記得到遺傳結(jié)構(gòu)中存在生殖隔離明顯的群體作為雜交群體，雜交群體進行雜交組合，即得三疣梭子蟹快速生長品系。采用本發(fā)明可最大限度的利用物種遺傳資源的同時，有利于更科學(xué)的培育三疣梭子蟹快速生長品系。
文檔編號A01H1/02GK101736074SQ20081016001
公開日2010年6月16日 申請日期2008年11月7日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月7日
發(fā)明者吳丹華, 崔朝霞, 欒維莎, 王春琳, 譚烽 申請人:中國科學(xué)院海洋研究所