專利名稱：利用試管微扦插快速繁殖牛大力種苗的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種利用試管莖段微扦插 快速繁殖牛大力種苗的方法。
背景技術(shù)：
牛大力屬蝶形花科雞血藤屬，始載于《生草藥性備要》，功能為 補虛潤肺，強筋活絡(luò)。用于腰肌勞損，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，治肺熱，肺虛
咳嗽，肺結(jié)核，慢性支氣管炎，慢性肝炎，遺精，白帶等。70年代開 始作為壯腰健腎丸、強力健身膠囊等的原料而用于中成藥的生產(chǎn)，在 兩廣地區(qū)得到廣泛應(yīng)用；上世紀(jì)末本開始，廣東、香港、澳門等地民 間普遍使用牛大力熬制靚湯，用量己經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過制藥企業(yè)，并有逐年 增長之勢。牛大力以根入藥， 一般在秋季挖取生長4 5年的牛大力的 圓柱狀或紡綞狀塊根供應(yīng)市場。由于牛大力均來自野生資源，不斷的 濫采濫挖，使野生牛大力資源瀕臨滅絕。
牛大力傳統(tǒng)的繁殖方法為種子繁殖，該方法存在的問題是(1) 種子資源緊缺，批量采集困難；(2)種子壽命短，不能低溫儲存， 因此不能定期播種育苗；(3)種子發(fā)芽率低，僅達(dá)到45%左右；(4) 種子苗根系以主根為主，塊根形成數(shù)量少，產(chǎn)量低。
近幾年來，扦插繁殖和組培繁殖成為牛大力種苗繁殖的研究重 點。扦插繁殖現(xiàn)存的問題是(1)扦插繁殖成活率低，甚至全部死
亡；(2)插條資源緊缺，批量繁殖困難。組培繁殖目前采用愈傷組 織誘導(dǎo)、愈傷組織分化增殖和不定芽生根的方式獲得無菌苗，這種方 式存在的問題是(1)誘導(dǎo)愈傷組織過程時間較長；(2)愈傷組織 分化為不定芽的頻率較低，分化出的不定芽變異率提高；(3)愈傷 組織分化出的不定芽伸長速度慢，達(dá)到生根標(biāo)準(zhǔn)的時間長。這些問題 嚴(yán)重阻礙了牛大力種苗的規(guī)模化生產(chǎn)，因而無法滿足市場對牛大力的 需求。為此，必須建立能大量、快速擴繁牛大力種苗的生產(chǎn)技術(shù)體系。
牛大力屬蝶形花科雞血藤屬，始載于《生草藥性備要》，功能為 補虛潤肺，強筋活絡(luò)。用于腰肌勞損，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，治肺熱，肺虛 咳嗽，肺結(jié)核，慢性支氣管炎，慢性肝炎，遺精，白帶等。70年代開 始作為壯腰健腎丸、強力健身膠囊等的原料而用于中成藥的生產(chǎn)，在 兩廣地區(qū)得到廣泛應(yīng)用；上世紀(jì)末本開始，廣東、香港、澳門等地民 間普遍使用牛大力熬制靚湯，用量已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過制藥企業(yè)，并有逐年 增長之勢。牛大力以根入藥， 一般在秋季挖取生長4 5年的牛大力的 圓柱狀或紡錘狀塊根供應(yīng)市場。由于牛大力均來自野生資源，不斷的 濫采濫挖，使野生牛大力資源瀕臨滅絕。
牛大力傳統(tǒng)的繁殖方法為種子繁殖，該方法存在的問題是(1) 種子資源緊缺，批量采集困難；(2)種子壽命短，不能低溫儲存， 因此不能定期播種育苗；(3)種子發(fā)芽率低，僅達(dá)到45%左右；(4) 種子苗根系以主根為主，塊根形成數(shù)量少，產(chǎn)量低。
近幾年來，扦插繁殖和組培繁殖成為牛大力種苗繁殖的研究重 點。扦插繁殖現(xiàn)存的問題是(1)扦插繁殖成活率低，甚至全部死
亡；(2)插條資源緊缺，批量繁殖困難。組培繁殖目前采用愈傷組 織誘導(dǎo)、愈傷組織分化增殖和不定芽生根的方式獲得無菌苗，這種方 式存在的問題是(1)誘導(dǎo)愈傷組織過程時間較長；(2)愈傷組織 分化為不定芽的頻率較低，分化出的不定芽變異率提高；(3)愈傷 組織分化出的不定芽伸長速度慢，達(dá)到生根標(biāo)準(zhǔn)的時間長。這些問題 嚴(yán)重阻礙了牛大力種苗的規(guī)?；a(chǎn)，因而無法滿足市場對牛大力的 需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種利用試管微扦插快速繁殖牛大力種苗 的方法，是一種利用試管中莖段側(cè)芽萌發(fā)和伸長速度快的特點，實現(xiàn) 了牛大力種苗大規(guī)模擴繁的目的。
本發(fā)明利用少量種子獲得無菌苗，以無菌苗莖段為外植體，通過 試管微扦插促進(jìn)側(cè)芽不斷萌發(fā)進(jìn)行快速增殖，實現(xiàn)牛大力種苗大規(guī)模
本發(fā)明所采用的技術(shù)方案 一種利用試管微扦插快速繁殖牛大力 種苗的方法，包括無菌苗的獲得過程、莖段微扦插過程、莖段生根過 程。
1、 無菌苗的獲得過程
選取牛大力的莢果經(jīng)消毒后將種子剝出，將種子接種到發(fā)芽培養(yǎng)
基進(jìn)行培養(yǎng)至長成幼苗，所述發(fā)芽培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng) 基并附加6-芐基腺嘌呤、a-萘乙酸。
2、 莖段微扦插過程
將步驟1所獲得的幼苗切成莖段，將莖段的基部向下插入微扦插 培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)至長出側(cè)芽，再將側(cè)芽切成莖段，然后將其基部向
下插入新鮮的微扦插培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。所述微扦插培養(yǎng)基是以MS 培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基并附加6-芐基腺嘌呤、吲哚乙酸。 3、莖段生根過程
將步驟2所獲得的側(cè)芽切成莖段，并將其接種到生根培養(yǎng)基上， 先暗培養(yǎng)再進(jìn)行光照培養(yǎng)，至莖段生根即可獲得牛大力種苗。所述生 根培養(yǎng)基是以1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基并附加蛋白胨、IAA、 IBA、
生物素。
本發(fā)明工藝簡單易行，操作簡單，增殖速度快，解決了利用牛大 力種子繁殖種苗中種子數(shù)量少、發(fā)芽率低、繁殖速度慢的問題，實現(xiàn) 了牛大力種苗的長期大規(guī)?？焖僭鲋?，可大量、快速、持續(xù)獲得高質(zhì) 量的牛大力試管苗，實用性強，為牛大力大規(guī)模擴繁增殖提供了高效 的方法，為牛大力種苗的規(guī)?；?、工廠化生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)，為穩(wěn)定牛 大力市場供應(yīng)提供了保障，也為保護野生牛大力種質(zhì)開辟了一條切實 可行的途徑。
具體實施方式
下面對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
本發(fā)明所提供的利用試管微扦插快速繁殖牛大力種苗的方法，包 括無菌苗的獲得過程、莖段微扦插過程、莖段生根過程。 1)、無菌苗的獲得過程
選取牛大力的莢果經(jīng)消毒后將種子剝出，將種子接種到發(fā)芽培泰 基進(jìn)行培養(yǎng)至長成幼苗，培養(yǎng)溫度度為25 28'C，光照強度為15 20 toiol*m-2*s"，光照時間為8h'cT1，培養(yǎng)40-60天；所述發(fā)芽培養(yǎng) 基是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基并附加6-芐基腺嘌呤0. 5 mg丄"、a -萘乙酸O. lmg丄"。
2) 、莖段微扦插過程
將步驟1所獲得的幼苗切成帶1~2節(jié)的莖段，將莖段的基部向下 插入微扦插培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)至長出側(cè)芽，再將側(cè)芽切成帶1~2節(jié)的 莖段，然后將其基部向下插入新鮮的微扦插培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng) 溫度度為27~29°C，光照強度為30 40jnmo1 m.2 s",光照時間為8 h d";所述微扦插培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基并附加6_芐 基腺嘌呤2. 0 mg.L"、吲哚乙酸0. 1 mg丄-1。
3) 、莖段生根過程
將步驟2所獲得的側(cè)芽切成帶1~2節(jié)的莖段，并將其接種到生根 培養(yǎng)基上，先暗培養(yǎng)8 13天再進(jìn)行光照培養(yǎng)20 30天，至莖段生根 即可獲得牛大力種苗。所述生根培養(yǎng)基是以1/2 MS培養(yǎng)基為基本培 養(yǎng)基并附加蛋白胨1.0 g.L"、 IM 0.8 mg.L"、 IBA 0.5 mg丄"、生 物素0.5 mg丄-1。
權(quán)利要求
1、一種利用試管微扦插快速繁殖牛大力種苗的方法，其特征在于包括無菌苗的獲得過程、莖段微扦插過程、莖段生根過程；1)、無菌苗的獲得過程選取牛大力的莢果經(jīng)消毒后將種子剝出，將種子接種到發(fā)芽培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)至長成幼苗，培養(yǎng)溫度度為25～28℃，光照強度為15～20μmol·m-2·s-1，光照時間為8h·d-1，培養(yǎng)40～60天；所述發(fā)芽培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基并附加6-芐基腺嘌呤0.5mg·L-1、α-萘乙酸0.1mg·L-1；2)、莖段微扦插過程將步驟1所獲得的幼苗切成帶1～2節(jié)的莖段，將莖段的基部向下插入微扦插培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)至長出側(cè)芽，再將側(cè)芽切成帶1～2節(jié)的莖段，然后將其基部向下插入新鮮的微扦插培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度度為27～29℃，光照強度為30～40μmol·m-2·s-1，光照時間為8h·d-1；所述微扦插培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基并附加6-芐基腺嘌呤2.0mg·L-1、吲哚乙酸0.1mg·L-1；3)、莖段生根過程將步驟2所獲得的側(cè)芽切成帶1～2節(jié)的莖段，并將其接種到生根培養(yǎng)基上，先暗培養(yǎng)8～13天再進(jìn)行光照培養(yǎng)20～30天，至莖段生根即可獲得牛大力種苗。所述生根培養(yǎng)基是以1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基并附加蛋白胨1.0g·L-1、IAA0.8mg·L-1、IBA0.5mg·L-1、生物素0.5mg·L-1。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用試管微扦插快速繁殖牛大力種苗的方法，是將牛大力的種子接種到發(fā)芽培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)至長成幼苗；將獲得的幼苗切成莖段后插入微扦插培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)至長出側(cè)芽，再將側(cè)芽切成莖段后插入新鮮的微扦插培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)；將獲得的側(cè)芽切成莖段后接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)至莖段生根即可獲得牛大力種苗。本發(fā)明工藝簡單易行，操作簡單，增殖速度快，解決了利用牛大力種子繁殖種苗中種子數(shù)量少、發(fā)芽率低、繁殖速度慢的問題，實現(xiàn)了牛大力種苗的長期大規(guī)?？焖僭鲋常纱罅?、快速、持續(xù)獲得高質(zhì)量的牛大力試管苗，實用性強。
文檔編號A01H4/00GK101379950SQ20081017285
公開日2009年3月11日 申請日期2008年10月24日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月24日
發(fā)明者立 徐, 朱文麗, 李克烈, 李志英, 偉 陳, 馬千全, 黃碧蘭 申請人:中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所