專利名稱：秸稈有機(jī)肥料及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及秸稈有機(jī)肥料及其制備方法。
背景技術(shù)：
農(nóng)作物秸稈是一種潛在的非競(jìng)爭資源，具有數(shù)量大、分布廣和種類多等特點(diǎn)。
據(jù)報(bào)道，我國各類農(nóng)作物秸稈年總產(chǎn)量達(dá)7億噸以上，其中稻草2.3億噸，玉米秸 稈2.2億噸，豆類和秋雜糧秸稈10億噸，花生、薯類藤蔓和甜菜葉等1.0億噸， 占世界總秸稈量的30%左右。但是，這些秸稈資源卻長期沒有得到合理的開發(fā)，傳 統(tǒng)上，秸稈被作為農(nóng)戶生產(chǎn)燃料或用于牲畜的粗飼料，少量用于造紙。近年來，由 于農(nóng)戶生活燃料銳減，秸稈直接還田或腐熟還田量少，而田間直接焚燒量大，全國 每年約有2/3的秸稈被直接焚燒。所有的秸稈中經(jīng)過技術(shù)處理后利用的僅占2. 6%。
秸稈中碳占絕大部分，其次為鉀、硅、鈣、鎂、硫、磷，焚燒后的產(chǎn)物主要有 C02、 C0、 S02、 N02和N20，這些有害氣體進(jìn)入大氣后造成了嚴(yán)重的環(huán)境污染。如果將 這些秸稈堆腐后還田，將成為豐富的有機(jī)肥培肥土壤，改善土壤性狀。 '
自然狀態(tài)下，纖維素降解主要通過三種方式
1)物理方式，包括粉碎、蒸煮、熱噴等；2)化學(xué)方式，包括酸性水解、堿性 水解、氨化和氧化降解；3)微生物降解。物理或化學(xué)方法處理秸稈，只能略為提 高半纖維素的消化率，對(duì)纖維素和木質(zhì)素的作用不大，未能提高秸稈的營養(yǎng)價(jià)值和 消化率?；瘜W(xué)方法能破壞木質(zhì)素與多糖之間的酯鍵結(jié)合，使纖維素、半纖維素與木 質(zhì)素分離，將不溶的木質(zhì)素變成較易溶解的羥基木質(zhì)素，使秸稈結(jié)構(gòu)變得疏松，結(jié) 晶纖維素變成無定型纖維素，進(jìn)而使得秸稈易于分解。但化學(xué)方法的缺點(diǎn)在于纖 維素含量太高，蛋白質(zhì)含量低(5%-10%左右)；礦物質(zhì)含量不平衡,缺乏維生素A、 維生素D和維生素E等；能量值低等(錢輝躍，2004;楊連玉，2001)。微生物 對(duì)纖維素的降解是通過分泌到胞外的游離纖維素酶，以水解酶機(jī)制和氧化酶機(jī)制降 解纖維素(張穎，2005)。利用微生物可將纖維素最終分解成為二氧化碳和水，而 通過微生物自身的生長又可產(chǎn)生大量的菌體蛋白，因此運(yùn)用微生物法處理秸稈，可 以大幅度提高其營養(yǎng)價(jià)值，與物理化學(xué)方法相比，具有許多無可比擬的優(yōu)點(diǎn)。
上世紀(jì)70年代報(bào)道了利用混合菌株發(fā)酵可以提高纖維素酶的產(chǎn)率和活性。在
4我國，利用混合菌株發(fā)酵提高纖維素酶的產(chǎn)率和活性也引起研究者的廣泛關(guān)注。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種秸稈有機(jī)肥料及其制備方法。
本發(fā)明所提供的秸稈有機(jī)肥料的制備方法，是用降解秸稈的菌劑發(fā)酵秸稈得到 肥料；所述降解秸稈的菌劑的活性成份包括綠色木霉(7ric力6^er/M 、黃
纟錄木毒(7>_z'c/ ooferzi7<3 <3i/reoi/7.2\z'flfe)禾口詞半斗類芽抱桿菌(尸3e/ iZ acj72w51 ;m/5wJ力。
本發(fā)明所提供的降解秸稈的菌劑的活性成份也可僅有由所述的綠色木霉 (7]ric力oo^i7ag K2>_zVe)、 黃綠木霉(7Wc力oafer鵬卵reoF7."Ve)禾口飼茅斗類芽孢 豐干菌(尸se/^'力3ci77w51 ; 3力w7力纟且成。
所述降解秸稈的菌劑可為液體制劑，也可為固體制劑。在液體制劑中加入吸附 劑即可獲得固體制劑，如加入輕質(zhì)碳酸鈣或草炭等。
其中，所述降解秸稈的菌劑中，所述綠色木霉(7>&力0&17^ KirjWe)、所述 黃綠木霉(7Wc^/Wer鵬az/re。K2'nVe)禾口所述飼料類芽孢桿菌(尸ae"iAacy22〃s p3Zwh')的集落形成單位數(shù)目比為(0.8-1.2) : (0.8-1.2) : (0.8-1.2)。所述 綠色木霉(rric力ocfer鵬為綠色木霉(Wc力ocfer鵬W"Ve) ACCC 30166， 所述黃綠木霉(Wc力oofer細(xì)sw reoKJ'"'ofe)為黃綠木霉(7ryc力oofer船ai/reow>We) ACCC 32248，所述飼料類芽孢桿菌(尸se/7^aci^i^ ; s力wh')為飼料類芽孢桿菌 (尸ae"i^3Cj7Jws / sZwJ力ACCC 10273。
所述降解秸稈的菌劑中，所述綠色木霉(7^'c力ot/er/z a KiwVe) ACCC 30166、 所述黃綠木霉(7^'c力oofer//73朋reow'nWe) ACCC 32248和所述飼料類芽孢桿菌 (尸ae^7^cW7^ paiwh')ACCC 10273可分別獨(dú)立包裝，也可混合在一起。
當(dāng)所述綠色木霉(7^'c力cx/e/7Z7a w'nVe) ACCC 30166、所述黃綠木霉 (7^'c/ oofer/z^ s"reow>_zVe) ACCC 32248和所述飼料類芽孢桿菌(尸a朋Wac^AA pa/w")ACCC 10273分別獨(dú)立包裝時(shí)，所述方法中，所述黃綠木霉(7ric力oJez7^
ACCC 32248和所述飼料類芽孢桿菌(尸ae/ i力a"Wws / a力W力ACCC 10273接入秸稈中，堆肥發(fā)酵1-2天后，然后接入所述綠色木霉(7>&力0&27^ Fj'nWe) ACCC 30166,再發(fā)酵20-30天。所述黃綠木霉(7yic力oder/i7a aareow>jVe) ACCC 32248的接入量為1Xl(^-lX10s孢子數(shù)/kg秸稈；所述飼料類芽孢桿菌 (尸s朋Waci^"s/ a/b〃h') ACCC 10273的接入量為1 X 104-1 X 1()5孢子數(shù)/kg秸稈； 所述綠色木霉(7^ic力Wer鵬WrWe) ACCC 30166的接入量為1 X 104-1 X 105孢子 數(shù)/kg秸稈。所述綠色木霉(7^'c力oofenz a i^'nVe) ACCC 30166的接入量為1 X 104-1 X 105孢子 數(shù)/kg秸稈。
當(dāng)所述綠色木霉(7>v'c/ oc/e27ra ACCC 30166、所述黃綠木霉
(7^'c力c^ei7z 3 awreori'n'ofe) ACCC 32248和所述飼料類芽孢桿菌(尸ae/n'力aw7)"s ps力W力ACCC 10273混合在一起時(shí)，所述方法中，所述降解秸稈的菌劑接入秸稈中， 發(fā)酵20-30天。所述降解秸稈的菌劑接入量為1 X 104-1 X 105黃綠木霉(7>i'c》^/ei7773 3〃re術(shù)-"'ofe) ACCC 32248孢子/kg秸稈。
本發(fā)明的降解秸稈制備肥料的方法能快速腐熟秸稈制備肥料，比正常堆腐發(fā)酵 時(shí)間至少提前15天。施用本發(fā)明制備的肥料的土壤中堿解氮、速效磷、鉀和有機(jī) 質(zhì)含量均比直接使用秸稈和未使用肥料的土壤高，本發(fā)明制備的肥料用作基肥，可 顯著改善蔬菜的品質(zhì)，施用本發(fā)明制備的肥料的油菜和白菜，其葉綠素含量可維持 在較高水平，與直接施用秸稈的油菜和白菜相比，生長中期油菜和白菜葉綠素含量 分別提高25. 99%和10. 98%;同時(shí)可促進(jìn)油菜和白菜對(duì)氮、磷、鉀的吸收利用，與 直接施用秸稈的油菜和白菜相比，油菜和白菜產(chǎn)量分別提高22. 97%和2. 80%;并且， 油菜還原糖與Vc含量分別提高21. 8%和6. 89%;白菜還原糖與Vc含量分別提高9% 和23.53%。
具體實(shí)施例方式
如下實(shí)施例所用菌種來自于中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與農(nóng)業(yè)區(qū)劃研究所中, 農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心(簡稱ACCC，地址北京市海淀區(qū)中關(guān)村南大街12, 號(hào)，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與農(nóng)業(yè)區(qū)劃研究所，郵編100081)。
實(shí)施例l、降解秸稈制備肥料
1)降解秸稈的菌劑的制備
降解秸稈的菌劑由試劑A、試劑B和試劑H組成，試劑A、試劑B和試劑H獨(dú) 立包裝。試劑A、試劑B和試劑H按照如下方法制備
菌株發(fā)酵培養(yǎng)基玉米面0.5g/L、玉米秸稈粉15g/L、麩皮0.25g/L、豆餅 粉0.25 g/L、 4 ml/100ml Vogel， s母液，pH值8. 5。
綠色木霉(7yyc/wtferaa Wric/e) ACCC 30166，在菌株發(fā)酵培養(yǎng)基中28°C ， 200r/min搖床振蕩培養(yǎng)3d，收集所有的發(fā)酵液作為試劑A。
黃綠木霉(7Wc力oofei7^ awreow'nVe) ACCC 32248，在菌株發(fā)酵培養(yǎng)基中28 °C， 200r/rain搖床振蕩培養(yǎng)3d，收集所有的發(fā)酵液作為試劑B。飼料類芽孢桿菌(尸ae/nT7sw77^ paZw7i) ACCC 10273在菌株發(fā)酵培養(yǎng)基中28 °C， 200r/min搖床振蕩培養(yǎng)3d，收集所有的發(fā)酵液作為試劑H。
試劑A中綠色木霉(7^'c力t^er歷3 w'nVe) ACCC 30166，試劑B中黃綠木霉 (7^'c/ oder/Ha 3f/reow'nVe) ACCC 32248，和試劑H中飼料類芽孢桿菌 (尸a朋^3"W^ paZw力')的集落形成單位數(shù)目比為1: 1: 1 。
2) 用于降解秸稈的菌劑中的纖維素酶活、濾紙酶活和P-葡萄糖苷酶活 測(cè)定用于降解秸稈的菌劑中纖維素酶活、濾紙酶活和P -葡萄糖苷酶活。 DNS還原糖法測(cè)定纖維素酶活方法如下首先采用3， 5-二硝基水楊酸(DNS)，
550nra處測(cè)定吸光度，以無水葡萄糖梯度溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；(用CMC酶活力 (CMCase activity)代表內(nèi)切酶活，取1. 5mL 0.05 mo1/ L醋酸鈉的醋酸溶液配制 的1. 0%羧甲基纖維素鈉溶液加入0. 5raL適當(dāng)稀釋降用于解秸稈的菌劑，5(TC反應(yīng) 30 min后加入3mL DNS試劑，沸水浴5min，冷卻后加水稀釋到25mL，在550mn測(cè) 還原糖。
濾紙酶活(filter paper activity, FPA)的測(cè)定方法如下取1. 5mL 0. 05 mo1/ L的醋酸鈉的醋酸溶液加入1.5mL適當(dāng)稀釋的用于降解秸稈的菌劑和1條Whatman No. 1濾紙條(約50mg， lcmX6cm) ， 5(TC保溫60min后加入3mL DNS試劑，沸水浴 5rain，冷卻后加水稀釋至25mL，在550nm測(cè)還原糖。
e-葡萄糖苷酶活力的測(cè)定方法如下取1.5 mL 0.05 mo1/ L醋酸鈉的醋酸溶 液配制的1.0%水楊苷溶液加入0.5 mL適當(dāng)稀釋的用于降解秸稈的菌劑，5(TC反應(yīng) 30 min后加入3mL DNS試劑，沸水浴5min，冷卻后加水稀釋到25mL，在550mn測(cè) 還原糖，然后根據(jù)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算酶活數(shù)值。
測(cè)定結(jié)果表明，用于降解秸稈的菌劑的CMC酶活(CMCA)達(dá)3813.06U/mL，濾紙 酶活(FPA)達(dá)2107. 57 U/mL， P -葡萄糖苷酶達(dá)3227. 17U/mL。
上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明三菌株間不僅存在FPA酶和0 -葡萄糖苷酶的優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，而 且降低了整體的纖維素酶類對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的依賴性和代謝產(chǎn)物抑制的敏感性，使酶活 力在較長時(shí)間內(nèi)維持高水平。
3) 制備秸稈有機(jī)肥料
將玉米秸稈用粉粹機(jī)粉粹，獲得的秸稈片段小于1.0cm，作為處理物。向處理 物中按照15kg尿素/噸秸稈的比例加入尿素，按照IX 1()Scfu黃綠木霉(7^ic/w^77Ha a"reoWnWe) ACCC 32248孢子/kg秸稈接入實(shí)施例1的試劑B;然后按照1X 105cfu飼料類芽孢桿菌(/^e/ "acW7^; aZwh')ACCC 10273孢子/kg秸稈接入實(shí)施例1的 試劑H發(fā)酵1. 5天；最后，按照1X 105cfu綠色木霉(7yic力oo^J777a w'nVe)ACCC 30166 孢子/kg秸稈接入實(shí)施例1的試劑A，發(fā)酵25d，制得秸稈有機(jī)肥料l。
3)步驟2)制備的秸稈有機(jī)肥料1的水溶性碳(WSC)和總有機(jī)氮測(cè)定
秸稈有機(jī)肥料1總有機(jī)氮測(cè)定采用H2S04- HA消煮，凱氏定氮法，秸稈有機(jī)肥 料1的WSC (水溶性碳)測(cè)定采用重鉻酸鉀容量法。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
WSC和總有機(jī)氮的測(cè)定結(jié)果表明，秸稈有機(jī)肥料1的WSC (水溶性碳)為 6.42g/kg ， WSC與總有機(jī)氮的比值為0.71， T值(終點(diǎn)C/N與起始C/N的比值)為 0.44，達(dá)到腐熟要求，比正常堆腐發(fā)酵時(shí)間至少提前15天。上述數(shù)值均為3次重 復(fù)的平均值。
實(shí)施例2、降解秸稈制備肥料
1) 降解秸稈的菌劑的制備
降解秸稈的菌劑由試劑A、試劑B和試劑H組成，試劑A、試劑B和試劑H混 合均勻制成降解秸稈的菌劑。
試劑A、試劑B和試劑H按照如下方法制備
菌株發(fā)酵培養(yǎng)基玉米面0. 5g/L、玉米秸稈粉15g/L、麩皮0. 25g/L、豆餅粉 0. 25g/L、 4 ml/100ml Vogel， s母液，pH值8. 5。
綠色木霉(7^'c力oofei7^ ACCC 30166，在菌株發(fā)酵培養(yǎng)基中28°C，
200r/min搖床振蕩培養(yǎng)3d，收集所有的發(fā)酵液作為試劑A。
黃綠木霉(7^'c力oofe7肪3wre0w'wVe) ACCC 32248，在菌株發(fā)酵培養(yǎng)基中28 'C， 200r/rain搖床振蕩培養(yǎng)3d，收集所有的發(fā)酵液作為試劑B。
飼料類芽孢桿菌(尸3e/^'力aw77ws ACCC 10273。在菌株發(fā)酵培養(yǎng)基中
2S。C， 200r/min搖床振蕩培養(yǎng)4d，收集所有的發(fā)酵液作為試劑H。
試劑A、試劑B和試劑H混合均勻后制得的用于降解秸稈的菌劑中綠色木霉 (7!rz.c力oofer/z 3 KZ>_/Gfe) ACCC 30166、黃纟錄木毒(7jric/ oGfenz a <3i/reoKJ'r_z.cfe) ACCC 32248和飼料類芽孢桿菌(/^ew7 acW2ws ACCC 10273的集落形成單位數(shù)
目比為O. 8: 0.8: 1.2。
2) 制備有機(jī)肥料
將小麥秸稈用粉粹機(jī)粉粹，獲得的秸稈片段小于1 0cm，作為處理物。向處埋 物中按照15kg尿素/噸秸稈的比例加入尿素，按照1.0XK)4cfu黃綠木霉(7^'c力oofer/zA3朋reow力Ve) ACCC 32248孢子/kg秸稈或按照1. 5X 104cfu飼料類 芽孢桿菌(尸ae/n'力3CJ'72ws ; a/w7力ACCC 10273孢子/kg秸稈或按照1. OX 104cfu綠 色木霉(7Wc力oofenz 3 w'wVe) ACCC 30166孢子/kg秸稈接入實(shí)施例2的制備的用 于降解秸稈的菌劑發(fā)酵30d，制得秸稈有機(jī)肥料2。
3)步驟2)制備的有機(jī)肥料2的WSC和總有機(jī)氮測(cè)定 秸稈有機(jī)肥料的WSC和總有機(jī)氮測(cè)定方法同實(shí)施例1。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。 WSC和總有機(jī)氮的測(cè)定結(jié)果表明，有機(jī)肥料2的WSC (水溶性碳)為6. 40g/kg ， WSC與總有機(jī)氮的比值為0.70， T值(終點(diǎn)C/N與起始C/N的比值)為0.48，達(dá)到腐 熟要求，比正常堆腐發(fā)酵時(shí)間至少提前10天。上述數(shù)值均為3次重復(fù)的平均值。 實(shí)施例3、降解秸稈制備肥料
1) 降解秸稈的菌劑的制備
降解秸稈的菌劑由試劑A、試劑B和試劑H組成，試劑A、試劑B和試劑H分 別獨(dú)立包裝。試劑A和試劑B按照如下方法制備
木霉菌株發(fā)酵培養(yǎng)基玉米面0.5 g/L、玉米秸稈粉15 g/L、麩皮0.25 g/L、 豆餅粉0. 25 g/L、 4 ml/100ml Vogel， s母液，pH值8. 5。
綠色木霉(7^'c力oJe2mg WrjWe) ACCC 30166，在菌株發(fā)酵培養(yǎng)基中28°C ， 200r/min搖床振蕩培養(yǎng)5d，收集所有的發(fā)酵液作為試劑A。
黃綠木霉(7^'c力oofer鵬awreow'nVe) ACCC 32248，在菌株發(fā)酵培養(yǎng)基中28 °C， 200r/min搖床振蕩培養(yǎng)5d，收集所有的發(fā)酵液作為試劑B。
飼料類芽孢桿菌(尸ae^7^cj7^As A3力w7力ACCC 10273。在木霉菌株發(fā)酵培養(yǎng) 基中28"C， 200r/min搖床振蕩培養(yǎng)3d，收集所有的發(fā)酵液作為試劑H。
試劑A、試劑B和試劑H混合均勻后制得的用于降解秸稈的菌劑中綠色木霉 (Wc力oofer鵬KZ>_z'ofe) ACCC 30166、黃綠木霉(7yic力oofer鵬ai/reonWc/e) ACCC 32248和飼料類芽孢桿菌(尸aew'te""ws paZw7力ACCC 10273的集落形成單位數(shù) 目比1.2: 1.2: 0.8。
2) 制備有機(jī)肥料
將玉米秸稈用粉粹機(jī)粉粹，獲得的秸稈片段小于1.0cm，作為處理物。向處理 物中按照15kg尿素/噸秸稈的比例加入尿素，按照1. 5X 104cfu黃綠木霉
(7^'c力oofei7^ awreow'wVe) ACCC 32248孢子/kg秸稈接入實(shí)施例1的試劑B;然 后按照1. 0X105cfu飼料類芽孢桿菌(尸aew'力acj7A/s p3力w力')ACCC 10273孢子/kg秸稈接入實(shí)施例1的試劑H發(fā)酵2天；最后按照1. 5X lOVfu綠色木霉(7^'c力^/er歷s w'^Ve) ACCC 30166孢子/kg秸稈接入實(shí)施例1的試劑A，發(fā)酵20d，制得秸稈有 機(jī)肥料3。
3)步驟2)制備的有機(jī)肥料3的WSC和總有機(jī)氮測(cè)定 WSC和總有機(jī)氮的測(cè)定方法同實(shí)施例1。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。 秸稈有機(jī)肥料3的WSC (水溶性碳)為5.82g/kg ， WSC與總有機(jī)氮的比值為
0. 75T值(終點(diǎn)C/N與起始C/N的比值)為0.42，達(dá)到腐熟要求，比正常堆腐發(fā)酵時(shí) 間至少提前20天。
實(shí)施例4、有機(jī)肥料的田間實(shí)驗(yàn)
田間實(shí)驗(yàn)分別選擇油菜和白菜田，采用完全隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，3個(gè)區(qū)組，每個(gè)區(qū) 組設(shè)5個(gè)小區(qū)，試驗(yàn)組為秸稈有機(jī)肥料l、 2和3在播種期或移栽期作為基肥施用， 對(duì)照l為直接施用秸稈，對(duì)照2為未使用任何肥料，每小區(qū)面積為15平方米。
對(duì)照與試驗(yàn)組除施肥不同外，其他田間管理均相同。
在移栽40天后測(cè)定土壤中的堿解氮、速效磷、鉀和有機(jī)質(zhì)含量及土壤脲酶活 性和纖維素酶活。
以堿解擴(kuò)散法測(cè)定土壤堿解氮；用0.5mol' L—iNaHC03法測(cè)定土壤速效磷；用 濃貼04-1(2(>204容量法一外加熱法測(cè)定土壤有機(jī)質(zhì)含量；用DNS還原比色法測(cè)定纖 維素酶活性；用苯酚鈉比色法測(cè)定脲酶活性。
測(cè)定結(jié)果表明，使用秸稈有機(jī)肥料1的土壤中堿解氮、速效磷、鉀和有機(jī)質(zhì)含 量與對(duì)照2相比分別提高7. 38 ±1. 54 mg/kg、 8, 52 ±2. 36 mg/kg、 15. 30 ±5. 60 mg/kg， 1. lg/kg±0.43， 土壤脲酶活性與對(duì)照2相比平均提高14. 38±1.35%，纖維 素酶活與對(duì)照2相比平均提高103. 61±12. 58%，且比對(duì)照1高49.23士6. 32%。
使用秸稈有機(jī)肥料2的土壤中堿解氮、速效磷、鉀和有機(jī)質(zhì)含量與對(duì)照2相比 分別提高7. 08±2. 40mg/kg、 8. 00± 1. 58mg/kg、 13. 25±4. 56mg/kg，
1. 31±0. 15mg/kg， 土壤脲酶活性與對(duì)照2相比平均提高15. 00±3. 65%，纖維素酶 活與對(duì)照2相比平均提高106. 37±5. 84%，且比對(duì)照1高55. 45 ±7. 56%。
使用秸稈有機(jī)肥料3的土壤中堿解氮、速效磷、鉀和有機(jī)質(zhì)含量與對(duì)照2相比 分別提高6.23土1. 50mg/kg、 6. 78± 1. 84mg/kg、 10. 34±5. 21mg/kg， L76土0.62mg/kg， 土壤脲酶活性與對(duì)照2相比平均提高16±2.35%，纖維素酶活與 對(duì)照2相比平均提高95. 37±13. 42%，且比對(duì)照1高56. 47 ±9. 65%。
10在生長中期，測(cè)定油菜和白菜葉綠素；在移栽26天后測(cè)定油菜和白菜的還原 糖與Vc含量；在收獲期測(cè)定油菜和白菜的產(chǎn)量，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。 葉綠素測(cè)定方法如下
分別取新鮮除去葉脈的油菜和白菜葉片，剪碎置于20ml具塞刻度管中，加乙 醇和丙酮按體積比l : l混合的混合液，30"C浸泡過夜，分別在440nm、 644 nm、 662 nm處測(cè)定浸提液吸光度，根據(jù)Ca二9. 784XD662-0. 990XD644、 Cb=21. 426XD644-4. 650 X D662 、 Ca+b=5. 134 X D662+20. 436 X D644、 Cc=4. 695 X D柳-O. 268 X (Ca +Cb)等公式計(jì) 算葉綠素含量(mg/L)。計(jì)算葉綠素含量(mg/L)。
還原糖測(cè)定采用蒽銅比色法。
Vc含量測(cè)定采用2， 6—二氯靛酚滴定法。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，秸稈有機(jī)肥料1施入土壤可促使油菜和白菜葉綠素含量可維持 在較高水平，與對(duì)照1相比，生長中期油菜和白菜葉綠素含量分別提高 25.99±2. 36%和10. 98±1.48%;秸稈有機(jī)肥料1施入土壤可促進(jìn)油菜和白菜對(duì)薄、 磷、鉀的吸收利用，與對(duì)照2相比，油菜和白菜產(chǎn)量分別提高22.97±3.34%和， 2.80±1.03%;秸稈有機(jī)肥料1施入土壤與對(duì)照2相比，油菜還原糖與Vc含量分別 提高21.8士2. 85%和6. 89±1.52%;白菜還原糖與Vc含量分別提高9±0. 58%和 23. 53 ±3. 59%。
秸稈有機(jī)肥料2施入土壤可促使油菜和白菜葉綠素含量可維持在較高水平，與 對(duì)照1相比，生長中期油菜和白菜葉綠素含量分別提高26. 45±4. 07%和 11.89±2.36%;秸稈有機(jī)肥料2施入土壤可促進(jìn)油菜和白菜對(duì)氮、磷、鉀的吸收利 用，與對(duì)照2相比，油菜和白菜產(chǎn)量分別提高24.05±1.29%和3.25±1.30%;秸稈 有機(jī)肥料2施入土壤與對(duì)照2相比，油菜還原糖與Vc含量分別提高25. 30±2. 87% 和8, 03±1. 29%;白菜還原糖與Vc含量分別提高10. 36±1. 32%和25. 36±2. 20%。
秸稈有機(jī)肥料3施入土壤可促使油菜和白菜葉綠素含量可維持在較高水平，與 對(duì)照1相比，生長中期油菜和白菜葉綠素含量分別提高26. 00±2. 40。/。和 11.28±1.68%;秸稈有機(jī)肥料3施入土壤可促進(jìn)油菜和白菜對(duì)氮、磷、鉀的吸收利 用，與對(duì)照2相比，油菜和白菜產(chǎn)量分別提高21.07±2.34%和1.80±1.03%;秸稈 有機(jī)肥料3施入土壤與對(duì)照2相比，油菜還原糖與Vc含量分別提高19. 8±3. 85% 和7. 69±2. 52%;白菜還原糖與Vc含量分別提高8. 91±1.58%和20. 53±4. 59%。
權(quán)利要求
1、降解秸稈制備肥料的方法，是用降解秸稈的菌劑發(fā)酵秸稈得到肥料；所述降解秸稈的菌劑的活性成份包括綠色木霉(Trichoderma viride)、黃綠木霉(Trichoderma aureoviride)和飼料類芽孢桿菌(Paenibacillus pabuli)。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述降解秸稈的菌劑中，所述綠色木霉(Wc力oofei"7ffi3 w'"Ve)、所述黃綠木霉(7Wc力。t/er鵬s〃reow'"Ve)禾口所述飼料類芽孢桿菌(尸ae/w'力aw7^^ psZw7力的集落形成單位數(shù)目比為(0.8-1.2):(0.8-1.2) :(0.8-1.2)。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于所述綠色木霉(7^'c力o^ r/^w'riVe)為綠色木霉(rric力oofe/7 a w'nVe) ACCC 30166，所述黃綠木霉(rn'c力oofe丄'鵬3"reow'nVe)為黃綠木霉(:Trj'c力oafem3 a"reow'rj'cfe) ACCC 32248，所述飼料類芽孢桿菌(尸a朋j 7)a"7JiAs ; aZwh')為飼料類芽孢桿菌(尸a朋itec^^^ ps力〃7力ACCC10273。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于所述降解秸稈的菌劑中，所述綠色木霉(rric力oofenms w>iofe) ACCC 30166、所述黃綠木霉(7>icAo Je/7z7a卵reow'nVe) ACCC 32248和所述飼料類芽孢桿菌(尸ae加'Z^ciWiAs/^力W力ACCC 10273分別獨(dú)立包裝。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述方法中，所述黃綠木霉(7^'c力0(/er歷3 swreoia'r/oW ACCC 32248和所述飼料類芽 包桿菌(尸ae"乃aci^"spato")ACCC 10273接入秸稈中，發(fā)酵l-2天后，再接入所述綠色木霉(rhc力^/er鵬w>jVe) ACCC 30166，再發(fā)酵20-30天。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述黃綠木霉(7>&力0&/7^ACCC 32248的接入量為1 X 104-1 X 107包子數(shù)/kg秸稈；所述飼料類芽孢桿菌(尸ae/2^bacj'"^ paZw7力ACCC 10273的接入量為1 X 104-1 X 105孢子數(shù)/1^秸稈；所述綠色木霉(7Wc力oofer鵬w'nVe) ACCC 30166的接入量為1 X 104-1 X 105孢子數(shù)/kg秸稈。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于所述降解秸稈的菌劑中，所述綠色木霉(Wc/roofe擺ACCC 30166、所述黃綠木霉(Wc/ ode擺at/reow'nVe) ACCC 32248和所述飼料類芽孢桿菌(尸ae"jz'Z^ci^〃5"; a/w7力ACCC 10273混合在一起。
8、 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述方法中，所述降解秸稈的菌劑接入秸稈中，發(fā)酵20-30天。
9、 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于所述降解秸稈的菌劑接入量為iX104-1乂105黃綠木霉(7^'c力oofer鵬朋reow'nVe) ACCC 32248孢子/kg秸稈。
10、 由權(quán)利要求1至9中任一所述的方法制備的肥料。
全文摘要
本發(fā)明公開了秸稈有機(jī)肥料及其制備方法。該降解秸稈制備肥料的方法是用降解秸稈的菌劑發(fā)酵秸稈得到肥料；所述降解秸稈的菌劑的活性成份包括綠色木霉(Trichoderma viride)、黃綠木霉(Trichoderma aureoviride)和飼料類芽孢桿菌(Paenibacillus pabuli)。所述降解秸稈的菌劑中，所述綠色木霉(Trichodermaviride)、所述黃綠木霉(Trichoderma aureoviride)和所述飼料類芽孢桿菌(Paenibacillus pabuli)的集落形成單位數(shù)目比為(0.8-1.2)∶(0.8-1.2)∶(0.8-1.2)。本發(fā)明的降解秸稈的肥料用作基肥，可顯著改善蔬菜的品質(zhì)。
文檔編號(hào)C05F11/08GK101638328SQ20081022424
公開日2010年2月3日 申請(qǐng)日期2008年10月14日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月14日
發(fā)明者劉繼芳, 姜瑞波, 張曉霞, 張瑞穎, 李世貴, 阮志勇, 顧金剛, 馬曉彤 申請(qǐng)人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與農(nóng)業(yè)區(qū)劃研究所