專利名稱：羅非魚選擇育種個體標(biāo)記方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于在水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域中魚類個體標(biāo)記技術(shù)，是一種在羅非魚育 種中實現(xiàn)識別大數(shù)量檢測每一條魚的技術(shù)方法。
背景技術(shù)：
目前，在羅非魚的選擇育種中，通過標(biāo)記可以追蹤每條魚的群體來源、 父母本、系譜、生產(chǎn)表現(xiàn)以及魚的出廠和銷售去向等情況，同時在進(jìn)行與 經(jīng)濟(jì)性狀相關(guān)的檢測時，需要將不同來源的、于同一環(huán)境直至養(yǎng)成的羅非 魚幼體，實現(xiàn)在同一養(yǎng)殖環(huán)境下的4全測，以便提高遺傳參數(shù)估計的準(zhǔn)確性。 中國科學(xué)研究院水生生物研究所張?zhí)昧值仍隰~類標(biāo)志技術(shù)的研究進(jìn)展(《中 國水產(chǎn)科學(xué)》，2003年，第3期第6巻，246-253)研究中，提出始于19世紀(jì) 20年代的切鰭標(biāo)記，將羅非魚的左胸鰭或右胸鰭剪掉，對魚的傷害較小， 從而對魚體本身生長的影響較小，可以較容易的對比試驗前后標(biāo)記魚與未 標(biāo)記魚的性狀差別；但本方法由于受到羅非魚鰭條數(shù)的限制以及剪掉太多 鰭條直接影響魚的正?；顒拥纫蛩氐挠绊?，難以滿足大規(guī)模羅非魚的選育 育種標(biāo)記的需要；中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心董在杰等申請的 專利"一種羅非魚個體標(biāo)記的方法"(申請?zhí)?200810018667.9 )，主要是 把PIT標(biāo)記芯片注射入羅非魚體內(nèi)進(jìn)行個體標(biāo)記；但是受PIT標(biāo)記芯片大小 的影響，這種標(biāo)記方法要求魚需長到一定的規(guī)格(一般應(yīng)用于魚成體的標(biāo) 記)；并且PIT標(biāo)記芯片目前市場價格較高(價格 一個PIT標(biāo)記芯片，國產(chǎn) IO元人民幣左右；國外進(jìn)口約合25元人民幣)，再是芯片檢測需有專門的 設(shè)備，其自動檢測儀價格昂貴(約1000美元)，對于大規(guī)模羅非魚的選育育 種無疑成本太高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是在羅非魚的選擇育種中，通過標(biāo)記追蹤每條魚的群 體來源、父母本、系譜、生產(chǎn)表現(xiàn)以及魚的出廠和銷售去向等情況，同時 在進(jìn)行與經(jīng)濟(jì)性狀相關(guān)的檢測時，對混養(yǎng)的不同個體和家系進(jìn)行識別，提 高遺傳參數(shù)估計的準(zhǔn)確性，同時為魚的留種親本提供身份標(biāo)記，實現(xiàn)羅非魚交配可控性，避免近交衰退。
本發(fā)明所采用的技術(shù)方法包括1、標(biāo)記前的準(zhǔn)備；2、魚的麻醉；3、 魚體的才示i己。
1、 標(biāo)記前的準(zhǔn)備選取膠針(小的、平的呈"工"字型)、吊牌槍和 魚類識別標(biāo)記，同時準(zhǔn)備瓢網(wǎng)、毛巾、裝有清水的盆子和充氣的氣石，并 用酒精對吊牌槍、膠針、閉環(huán)塑料標(biāo)簽進(jìn)行消毒；
2、 魚的麻醉羅非魚為活體幼魚，體重在3-5克；麻醉前，羅非魚 必須先池養(yǎng)1-2天，魚苗不能進(jìn)食；麻醉劑為'Tricaine methane sulphonate (MS222 )，也可用Tricaine methane sulphate;麻醉劑的濃 度為0. 25 - 0. 45g/L，麻醉時間2 - 3min;麻醉后》文入新鮮淡水中；
3、 魚體的標(biāo)記標(biāo)記時要保持魚游泳的姿勢，面向左側(cè)；在用吊牌槍 槍針插入魚體前，插入點(diǎn)定位在魚體背部前端，用百多邦或紅霉素藥膏涂 抹槍針；然后將標(biāo)記(標(biāo)識牌或閉環(huán)塑料標(biāo)簽)套入到槍針上；將吊牌槍 槍針插入魚體，針要仔細(xì)地穿透肌肉組織，不要碰到任何骨頭或靜脈；直 接用槍推射膠針穿過魚體來固定標(biāo)記，體外膠針留有2 4cm長，然后用百 多邦或紅霉素藥膏涂抹到穿針后的傷口處；調(diào)整標(biāo)記使其位于一端，將標(biāo) 記完的魚放在一定濃度的聚維酮碘溶液中進(jìn)行浸泡消毒。
麻醉劑最佳濃度為0. 33g/L; 酒精濃度為75%; 聚維酮碘溶液濃度為10%。
標(biāo)記為標(biāo)識牌或閉環(huán)塑料標(biāo)簽標(biāo)識牌，材料為貝迪牌白色聚酯復(fù)合紙， 雙層覆膜，形狀為長2厘米，寬O. 8厘米，套4j"孔徑為3. 0毫米左右。在白 色聚酯復(fù)合紙上打印標(biāo)識碼第一個標(biāo)識碼為英文大寫字母，第2-5個為阿 拉伯?dāng)?shù)字(如0000-9999 );閉環(huán)塑料標(biāo)簽，材料為復(fù)合PU膠形狀為 外徑5mm,內(nèi)徑3mm，內(nèi)外徑中間厚度lmm，高度為3mm;帶五位標(biāo)識碼(第一 位為英文大寫字母，其余四位為阿拉伯?dāng)?shù)字)。
本發(fā)明的特點(diǎn)是
1、 本發(fā)明操作簡單，自動化高，對魚體的損傷程度較小，標(biāo)記的保留 率90%以上，有效識別率90%以上，不會影響羅非魚的正常活動，能夠滿足 大規(guī)模羅非魚的選育育種標(biāo)記的需要；
2、 本發(fā)明對魚幼體和成體都可以標(biāo)記，而且通過對標(biāo)記與不標(biāo)記魚的 生長對比發(fā)現(xiàn)，標(biāo)記對羅非魚的生長無影響；3、所用的羅非魚個體標(biāo)記成本非常低(包括呈"工"字型的膠針、吊
牌槍和閉環(huán)塑料標(biāo)簽)，標(biāo)記每條魚的成本為O. 25元人民幣，而且檢測的魚 只需在幼體期標(biāo)記一次將終身攜帶，既節(jié)約了成本，也減少了多次標(biāo)記對 魚體的傷害。


圖1:各類識別標(biāo)記:
A:魚類標(biāo)識牌示意B:魚類閉環(huán)塑料標(biāo)簽示意圖； 圖2:魚類標(biāo)記方法和過程
A:選取膠針、吊牌槍和閉環(huán)塑料標(biāo)簽；
B:將吊牌槍槍針穿透肌肉組織；
C:直接用槍推射膠針穿過魚體來固定標(biāo)記；
D:調(diào)整閉環(huán)塑料標(biāo)簽使其位于一端，并且立刻將標(biāo)記的魚苗安 置在有充氣設(shè)備的淡水盆中。
具體實施例方式
下面通過實例結(jié)合附圖對本發(fā)明4支術(shù)進(jìn)4亍詳細(xì)敘述
本實驗是在河北省滄州臨港中捷羅非魚良種場進(jìn)行的，本發(fā)明其技術(shù) 方法包4舌1、標(biāo)記前的準(zhǔn)備；2、魚的麻醉；3、苗體的標(biāo)記。
1、才示i己前的準(zhǔn)備
1 )、標(biāo)記工具的準(zhǔn)備和消毒
選取一種小的、平的呈"工"字型適宜長度的膠針(本實驗選取50腿， 型號SAGA,材料為聚乙烯)、帶適宜規(guī)格槍針的吊牌槍(本實驗選擇型號 SAGA70L)，見附圖2的A圖)和閉環(huán)塑料標(biāo)簽(材料為復(fù)合PU膠)。同時 準(zhǔn)備瓢網(wǎng)、毛巾、裝有清水的盆子和充氣的氣石，并用濃度為75%的酒精對 吊牌槍、膠針、閉環(huán)塑料標(biāo)簽進(jìn)行消毒。
閉環(huán)塑料標(biāo)簽為圓柱狀，外徑5mm,內(nèi)徑3mm，高度為3mm，外側(cè)面帶 五位標(biāo)識碼(第一位為英文大寫字母，其余四位為阿拉伯?dāng)?shù)字(如 0001-9999 ))，見附圖1的B圖。
本標(biāo)記也可使用標(biāo)識牌(如圖1的A圖)材料為貝迪牌白色聚酯復(fù)合 紙，雙層覆膜，形狀為長2厘米，寬O. 8厘米，套針孔徑為3. 0毫米左 右。在白色聚酯復(fù)合紙上打印標(biāo)識碼第一個標(biāo)識碼為英文大寫字母，第2-5個為阿拉伯?dāng)?shù)字(如0001-9999 )。
2) 、羅非魚幼魚的選擇
取活體幼魚240條，規(guī)格為相差不大的一個羅非魚家系，體重在5克 左右，以消除初始規(guī)格相差太大造成的影響，其中120條準(zhǔn)備標(biāo)記。在培 育水池先暫養(yǎng)幾天， <吏試-瞼魚適應(yīng)標(biāo)記后生長環(huán)境。標(biāo)記前對水池中暫養(yǎng) 的魚停食兩天。
2、 魚的麻醉
為了減少和消除在標(biāo)記過程中魚體所受的脅迫以及由于脅迫致卩吏魚體 過于劇烈運(yùn)動造成的損傷，羅非魚必須在標(biāo)記前進(jìn)行麻醉。麻醉前，羅非 魚必須先放在池中先通氣1-2天，在此過程中魚苗不能進(jìn)食。魚的麻醉， 通常以麻醉液Tricaine methane sulphonate ( MS222 )或者Tricaine methane sulphate來麻醉羅非魚，麻醉液0. 33g/ L為最佳濃度。麻醉后， 當(dāng)魚苗開始翻身時，魚必須馬上移出麻醉液至充氣的新鮮淡水中。加長在 麻醉液中的浸泡時間可能對魚體會產(chǎn)生不可恢復(fù)性的損傷，通常魚苗在麻 醉后2-3min放入充氣的新鮮淡水中，便可很快的恢復(fù)其原來的靈活性。 將麻醉好將要做標(biāo)記的魚和不做標(biāo)記對比的魚各測其體重、體長，之后對
幼魚進(jìn)ff一示i己。
3、 苗體的標(biāo)記
在同一養(yǎng)殖環(huán)境下對魚類準(zhǔn)確的檢測，需要魚體本身具有一種特有的 識別。魚體識別標(biāo)記較多，包括附加物、插入物，或外部注射進(jìn)魚體(如 上述提到的PIT標(biāo)記芯片等)。本方法在羅非魚類育種技術(shù)中采用了背部穿 膠針帶標(biāo)記的標(biāo)記法，獨(dú)特地識別大數(shù)量檢測魚中的每一尾。
具體標(biāo)記程序是
1)、使魚苗保持游泳的姿勢，并且面向左側(cè)；
2 )、插入點(diǎn)被定位在魚體背部前端肌肉多的地方；
3) 、在用吊牌槍槍針插入魚體前，將百多邦(或紅霉素藥膏)涂^l未消 毒槍針，然后將閉環(huán)塑料標(biāo)記圈套到槍針上；
4) 、將吊牌槍槍針插入魚體，針要仔細(xì)地通過肌肉組織，不要碰到任 何骨頭或靜脈，見附圖2的B5) 、直接將膠針穿過魚體來固定標(biāo)記，見附圖2的C圖，用百多邦(或 紅霉素藥膏)涂_|未消毒穿針后的傷口處；
6 )、體外膠針應(yīng)該留有2 ~ 4cm長，以供魚體生長。根據(jù)被期望的最大生長(即依照收獲的年齡或重量確定)決定預(yù)留體外膠針的長度；
7)、調(diào)整閉環(huán)塑料標(biāo)簽使其位于一端，并且立刻將標(biāo)記的魚苗安置在
有充氣設(shè)備的淡水盆中，見附圖2的D8 )、將標(biāo)記完的魚放在濃度l(W的聚維酮碘溶液中進(jìn)行浸泡消毒。
在標(biāo)記后對標(biāo)記和未標(biāo)記各120條魚測量其體重、體長等生長指標(biāo)， 已標(biāo)記與未標(biāo)記魚放置到同一池中進(jìn)行培育，30天后統(tǒng)計標(biāo)記后的各項參 數(shù)，并測量所有魚生長性狀指標(biāo)。
在整個標(biāo)記魚與未標(biāo)記魚培育期間，標(biāo)記魚死亡4條，死亡率3. 33%, 標(biāo)記魚感染8條，感染率6. 67%,標(biāo)記物丟失的魚2條，丟失率1.67%。也 就說在標(biāo)記120條魚后，魚的成活率為96. 67%,未感染所占比例為93. 33%, 標(biāo)記的保持率為98.33%,有效識別率100%。標(biāo)記前后平均體重、平均體長 的變化情況見表1。未標(biāo)記魚前后變化情況見表2。
表1標(biāo)記魚標(biāo)記前后生長指標(biāo)變化情況
平均體重(g)平均體長(cm)
標(biāo)記前 5. 3363. 532
才示^己后 12.4206. 103
增加量 7. 0842. 571
表2未標(biāo)記魚前后生長指標(biāo)變化情況
平均體重(g)平均體長(cm)
標(biāo)記前 5. 3863. 579
標(biāo)記后 12.4746. 172
增加量 7. 0882. 593
從上述兩表可看出，標(biāo)記魚與未標(biāo)記魚在平均體重、平均體長等生長 性狀的變化幾乎無差別，從而通過對標(biāo)記與不標(biāo)記魚的生長對比發(fā)現(xiàn)，標(biāo) 記對羅非魚的生長無影響。
權(quán)利要求
1、一種羅非魚選擇育種個體標(biāo)記方法，包括1)、標(biāo)記前的準(zhǔn)備，2)、魚的麻醉，3)、魚體的標(biāo)記；其特征在于1)、標(biāo)記前的準(zhǔn)備選取“工”字型膠針、吊牌槍和魚類識別標(biāo)記，同時準(zhǔn)備瓢網(wǎng)、毛巾、盆和氣石，并用濃度為75％的酒精對吊牌槍、膠針、閉環(huán)塑料標(biāo)簽進(jìn)行消毒；2)、魚的麻醉羅非魚為活體幼魚，體重在3-5克；麻醉前，羅非魚必須先池養(yǎng)1-2天，魚苗不能進(jìn)食；麻醉劑為Tricaine methanesulphonate，也可用Tricaine methane sulphate；麻醉劑的濃度為0.33g/L，麻醉時間2-3min；麻醉后放入新鮮淡水中；3)、魚體的標(biāo)記標(biāo)記時要保持魚游泳的姿勢，面向左側(cè)；在用吊牌槍槍針插入魚體前，插入點(diǎn)定位在魚體背部前端，用百多邦或紅霉素藥膏涂抹槍針；然后將標(biāo)識牌或閉環(huán)塑料標(biāo)簽套入到槍針上；將吊牌槍槍針插入魚體，針要仔細(xì)地穿透肌肉組織，不要碰到任何骨頭或靜脈；直接用槍推射膠針穿過魚體來固定標(biāo)記，體外膠針留有2～4cm長，然后用百多邦或紅霉素藥膏涂抹到穿針后的傷口處；調(diào)整標(biāo)記使其位于一端，將標(biāo)記完的魚放在10％的聚維酮碘溶液中進(jìn)行浸泡消毒。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種羅非魚選擇育種個體標(biāo)記方法，其特征 在于所述的標(biāo)記，標(biāo)記為標(biāo)識牌或閉環(huán)塑料標(biāo)簽標(biāo)識牌材料為貝迪牌白色聚酯復(fù)合紙，雙層覆膜，形狀為長2厘米， 寬0. 8厘米，套針孔徑為3. 0毫米左右；在白色聚酯復(fù)合紙上打印標(biāo)識碼 第一個標(biāo)識碼為英文大寫字母，第2-5個為阿拉伯?dāng)?shù)字；閉環(huán)塑料標(biāo)簽，材料為復(fù)合PU膠形狀為外徑5mm，內(nèi)徑3mm,內(nèi)外 徑中間厚度l醒，高度為3薩；帶五位標(biāo)識碼第一位為英文大寫字母，其 余四位為阿4立伯凄t字。
全文摘要
一種羅非魚選擇育種個體標(biāo)記方法，首先選取合適的膠針、吊牌槍和閉環(huán)塑料標(biāo)簽等；其次以濃度為0.33g/L的Tricaine methane sulphonate來麻醉羅非魚；然后對魚體進(jìn)行標(biāo)記。標(biāo)記時要保持魚游泳的姿勢，面向左側(cè)；插入點(diǎn)定位在魚體背部前端；將閉環(huán)塑料標(biāo)簽套入到槍針上；直接將膠針穿過魚體來固定標(biāo)記，體外膠針應(yīng)該留有2～4cm長；最后將標(biāo)記魚放在10％聚維酮碘溶液中進(jìn)行浸泡消毒。本發(fā)明操作簡單，成本低，自動化高，對魚體的損傷程度較小，標(biāo)記的保留率90％以上，有效識別率90％以上，不會影響羅非魚的正?；顒樱軌驖M足大規(guī)模羅非魚的選育育種標(biāo)記的需要。
文檔編號A01K61/00GK101433188SQ200810238410
公開日2009年5月20日 申請日期2008年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月10日
發(fā)明者杰 孔, 張?zhí)鞎r, 張慶文, 生 欒, 王偉繼, 坤 羅 申請人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所