專利名稱：與新化合物及其靶標(biāo)有關(guān)的組合物和方法
相關(guān)申請
本申請要求2007年3月9日提交的U.S.S.N.60/906,016的優(yōu)先權(quán)，通過參考將其內(nèi)容引入本文。
發(fā)明領(lǐng)域 本發(fā)明涉及新的化合物，發(fā)現(xiàn)它們的方法，和它們的治療用途。特別地，本發(fā)明提供苯二氮

類化合物，和結(jié)構(gòu)和功能相關(guān)的化合物，使用這些化合物作為治療劑治療很多與程序性細(xì)胞死亡過程的錯誤調(diào)節(jié)、自身免疫性、炎癥、過度增殖、血管異常等等有關(guān)的疾病的方法。

背景技術(shù)：
多細(xì)胞生物體對于細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行精確的控制。細(xì)胞增殖和細(xì)胞死亡之間的平衡實(shí)現(xiàn)了這種內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。通過壞死或通過細(xì)胞死亡的自殺形式，稱作細(xì)胞凋亡，幾乎每一種脊椎動物細(xì)胞類型都會發(fā)生細(xì)胞死亡。細(xì)胞凋亡是由各種細(xì)胞外和細(xì)胞內(nèi)信號引起的，這些信號引發(fā)了一種共同的遺傳性程序性死亡機(jī)制。
多細(xì)胞生物體使用細(xì)胞凋亡來指示損壞的或非必要的細(xì)胞自我破壞以使該生物體獲益。因此，控制細(xì)胞凋亡過程對于正常的發(fā)育是非常重要的，例如，手指和腳趾的胎型發(fā)育需要通過細(xì)胞凋亡可控地除去過量的粘連生物體，對于腦內(nèi)神經(jīng)突觸的形成也同樣如此。類似地，可控地細(xì)胞凋亡會在月經(jīng)初期引起子宮的內(nèi)層(子宮內(nèi)膜)的脫落。細(xì)胞凋亡不僅在組織成形和正常的細(xì)胞維持中發(fā)揮重要作用，而且它也是對威脅生物體健康的細(xì)胞和侵入物(例如病毒)的主要防御措施。
不出所料，很多疾病與細(xì)胞死亡的過程失調(diào)有關(guān)。實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ鸵呀?jīng)確定了細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)異常與各種腫瘤、自身免疫性和病毒疾病的致病性之間的因果關(guān)系。例如，在細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答中，效應(yīng)細(xì)胞(例如，細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞“CTLs”)通過誘導(dǎo)受感染細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞凋亡而破壞感染病毒的細(xì)胞。接著當(dāng)不再需要時(shí)，生物體依靠細(xì)胞凋亡過程破壞效應(yīng)細(xì)胞。一般是通過CTLs互相甚至自身誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡來防止自身免疫。該過程中的缺陷與很多自身免疫性疾病例如紅斑狼瘡和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎有關(guān)。
多細(xì)胞生物體也使用細(xì)胞凋亡來指示具有受損的核酸(例如，DNA)的細(xì)胞在變成癌性前自我破壞。一些致癌病毒通過改變受感染(變異)的細(xì)胞中斷正常的細(xì)胞凋亡過程來克服這種防護(hù)。例如，一些人乳頭瘤病毒(HPVs)通過產(chǎn)生蛋白質(zhì)(E6)抑制變異細(xì)胞的細(xì)胞凋亡性去除而引起宮頸瘤，其中蛋白質(zhì)(E6)使p53細(xì)胞凋亡促進(jìn)子滅活。類似地，EB病毒(EBV)是單核細(xì)胞增多癥和伯基特淋巴瘤的致病因子，它們改變受感染的細(xì)胞以產(chǎn)生阻止異常細(xì)胞的正常細(xì)胞凋亡性除去的蛋白質(zhì)，這樣就使癌細(xì)胞增殖并擴(kuò)散到整個生物體。
還有其他病毒會破壞性地操縱細(xì)胞的凋亡結(jié)構(gòu)，但不直接導(dǎo)致癌癥發(fā)生。例如，人們認(rèn)為，在被人免疫缺陷病毒(HIV)感染的受試者中免疫系統(tǒng)的破壞會通過被感染的CD4+T細(xì)胞(約1/100,000)而發(fā)展，指導(dǎo)未感染的姐妹細(xì)胞發(fā)生凋亡。
通過非病毒方式而發(fā)生的一些癌癥也會產(chǎn)生某些機(jī)制以避免細(xì)胞凋亡的破壞。例如，黑素瘤細(xì)胞通過抑制編碼Apaf-1的基因表達(dá)而避免凋亡。其他癌癥細(xì)胞，特別是肺和結(jié)腸癌細(xì)胞分泌高水平的可溶性誘餌分子，抑制了CTL-介導(dǎo)的異常細(xì)胞的清除的發(fā)生。細(xì)胞凋亡結(jié)構(gòu)的錯誤調(diào)節(jié)也與各種變性疾病和血管性疾病有關(guān)。
顯然，可控地調(diào)節(jié)凋亡過程和它的細(xì)胞機(jī)制對于多細(xì)胞生物體的存活是非常重要的。典型地，細(xì)胞中發(fā)生的生化改變指示了在有序過程中發(fā)生細(xì)胞凋亡。但是，如上所示，細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)缺陷會導(dǎo)致生物體中嚴(yán)重的有害作用。
已經(jīng)做了各種努力以控制和恢復(fù)異常細(xì)胞(例如，癌細(xì)胞)中凋亡機(jī)制的調(diào)節(jié)。例如，做了很多工作來發(fā)展細(xì)胞毒素劑以在異常細(xì)胞增殖前破壞它們。就此而論，細(xì)胞毒素劑已經(jīng)廣泛用于人和動物健康，代表了幾乎所有形式的癌癥和過度增殖性自身免疫性疾病例如紅斑狼瘡和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的第一線治療。
在臨床應(yīng)用中很多細(xì)胞毒素劑通過破壞DNA(例如，順-二氨基二chroplatanim(II)交聯(lián)DNA，相反博來霉素誘導(dǎo)鏈分裂)發(fā)揮其效應(yīng)。如果被細(xì)胞因子例如p53系統(tǒng)所識別，該核損壞的結(jié)果將引發(fā)凋亡級聯(lián)，導(dǎo)致被損壞細(xì)胞的死亡。
然而，現(xiàn)有的細(xì)胞毒素化療劑有嚴(yán)重的缺點(diǎn)。例如，很多已知的細(xì)胞毒素劑對于健康和患病細(xì)胞幾乎不顯示差異。缺乏特異性通常會導(dǎo)致嚴(yán)重的副作用，限制了效力和/或?qū)е略缙谒劳雎省４送猓L期施用很多現(xiàn)有的細(xì)胞毒素劑導(dǎo)致了抗性基因的表達(dá)(例如，bc1-2族或多藥耐藥(MDR)蛋白)，使得需要更多地給藥，否則有效性就會降低或變得無效。一些細(xì)胞毒素劑誘導(dǎo)突變成p53和相關(guān)蛋白。基于這些考慮，理想的細(xì)胞毒素藥物應(yīng)當(dāng)僅殺滅患病細(xì)胞并且不易發(fā)生化學(xué)耐受性。
選擇性地殺滅患病細(xì)胞或阻斷它們生長的一個策略是發(fā)展出選擇性地識別在患病細(xì)胞中表達(dá)的分子的藥物。因此，有效的細(xì)胞毒化療劑應(yīng)當(dāng)識別指示疾病的分子并誘導(dǎo)(例如，直接或間接)患病細(xì)胞的死亡。盡管已經(jīng)鑒定出了一些類型的癌細(xì)胞上的標(biāo)記，并用治療性抗體和小分子靶向，但是，大多數(shù)癌癥的診斷和治療性應(yīng)用的獨(dú)特特性都是未知的。此外，對于疾病例如狼瘡，還未鑒定出藥物發(fā)展的特異性分子靶點(diǎn)。
需要的是改善的組合物和方法，以在被疾病和病癥折磨的受試者中調(diào)節(jié)凋亡過程，其中所述疾病和病癥的特征在于這些過程的錯誤調(diào)節(jié)(例如，病毒感染、過度增殖性自身免疫性疾病、慢性炎性疾病和癌癥)。
發(fā)明簡述 本發(fā)明提供新的化合物，發(fā)現(xiàn)了其在治療人和動物的很多疾病和病癥中的應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)了其在探索、篩選化合物和診斷用途中的應(yīng)用。此外，本發(fā)明也提供了這些新化合物的應(yīng)用，以及已知化合物的應(yīng)用，它們引發(fā)了特定的生物反應(yīng)(例如，與特定的靶分子結(jié)合和/或?qū)е绿囟ǖ募?xì)胞事件的化合物)。在整個說明書中描述了這樣的化合物和應(yīng)用，代表了不同類型的組合物和應(yīng)用。
下文描述了某些優(yōu)選的組合物和應(yīng)用。本發(fā)明并不限于這些特定的組合物和應(yīng)用。本發(fā)明提供了很多如整個說明書所述的有用的化合物。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供下式所述的化合物
包括其鹽、酯和前藥；和 包括其R和S對映體形式和外消旋混合物； 其中 X是鹵素(例如，Br，Cl，F(xiàn))，烷基(例如，甲基、乙基、丙基(例如，異丙基)、丁基(例如，異丁基、仲丁基、叔丁基)、戊基、異戊基、新戊基、1-乙基丙基、3-甲基戊基、2，2-二甲基丁基、庚基、己基、辛基、3-乙基丁基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基)或者取代的烷基； R2是氫或者直鏈或支鏈烷基(例如，甲基、乙基、丙基(例如，異丙基)、丁基(例如，異丁基、仲丁基、叔丁基)、戊基、異戊基、新戊基、1-乙基丙基、3-甲基戊基、2，2-二甲基丁基、庚基，己基，辛基，3-乙基丁基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基)；和 R5是烷基(例如，甲基、乙基、丙基(例如，異丙基)、丁基(例如，異丁基、仲丁基、叔丁基)、戊基、異戊基、新戊基、1-乙基丙基、3-甲基戊基、2，2-二甲基丁基、庚基、己基、辛基、3-乙基丁基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基)或取代的烷基。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供下列化合物



在一些實(shí)施方案中，該化合物選自(Z)-1-(4-(3-(2-溴芐基)-7-氯-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基)-3-異丙基脲；(Z)-1-(4-(7-氯-2-氧代-3-(2-(三氟甲基)芐基)-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基)-3-異丙基脲；(Z)-1-(4-(7-氯-3-(2-氟芐基)-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基)-3-異丙基脲；(Z)-1-(4-(7-氯-3-(2-氯芐基)-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基)-3-異丙基脲； (Z)-1-(4-(7-氯-3-(2-氯芐基)-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基)-3-甲基脲；(Z)-1-(4-(7-氯-3-(2-氯芐基)-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基)-3-(2-(二甲基氨基)乙基)脲；(Z)-1-(4-(7-氯-3-(2-氯芐基)-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基)-3-(2，2，2-三氟乙基)脲；(Z)-1-(4-(7-氯-3-(2-氯芐基)-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基)-3-環(huán)丙基脲；(Z)-1-(4-(7-氯-3-(2-氯芐基)-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基)-3-(2-甲氧基乙基)脲；(Z)-1-(4-(7-氯-3-(2-氯芐基)-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基)-3-(2-乙氧基乙基)脲；(Z)-1-(4-(3-(2-溴芐基)-7-氯-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基)-3-甲基脲；(Z)-1-(4-(3-(2-溴芐基)-7-氯-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基)-3-(2-(二甲基氨基)乙基)脲；(Z)-1-(4-(3-(2-溴芐基)-7-氯-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基)-3-(2，2，2-三氟乙基)脲；(Z)-1-(4-(3-(2-溴芐基)-7-氯-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基)-3-環(huán)丙基脲；(Z)-1-(4-(3-(2-溴芐基)-7-氯-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基)-3-(2-甲氧基乙基)脲；(Z)-1-(4-(3-(2-溴芐基)-7-氯-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基)-3-(2-乙氧基乙基)脲；(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-3-(2-甲基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-3-(2-甲基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-3-(3-甲基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-3-(3-甲基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-3-(4-甲基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-3-(4-甲基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-7-氯-3-(2-乙基芐基)-5-(4-羥基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-7-氯-3-(2-乙基芐基)-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-7-氯-3-(3-乙基芐基)-5-(4-羥基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-7-氯-3-(3-乙基芐基)-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-7-氯-3-(4-乙基芐基)-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-7-氯-3-(4-乙基芐基)-5-(4-羥基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-3-(3-異丙基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-3-(3-異丙基芐基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-3-(4-異丙基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-3-(4-異丙基芐基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-3-(2-(三氟甲基)芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-3-(2-溴芐基)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-3-(2-溴芐基)-7-氯-1-甲基-5-(2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-3-(4-(三氟甲基)芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-3-(3-溴芐基)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-3-(4-溴芐基)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-7-氯-3-(3-氯芐基)-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-5-(4-羥基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-5-(2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；和(Z)-7-氯-5-(2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-3-(2-(三氟甲基)芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；(Z)-7-氯-1-甲基-5-(2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-3-(2-(三氟甲基)芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；和(Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-1-甲基-5-(2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮；及其藥學(xué)可接受的鹽。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供治療細(xì)胞的方法，包括a)提供i)靶細(xì)胞；和ii)至少一種本發(fā)明的示例性化合物(參見，例如，III部分-示例性化合物)。在一些實(shí)施方案中，該治療包括在靶細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞生長停止、在靶細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞死亡和在靶細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡中的一種或多種。在一些實(shí)施方案中，靶細(xì)胞是在患有，例如免疫性疾病(例如，自身免疫性疾病)、過度增殖性疾病、表皮增生性疾病、色素疾病、心血管疾病和/或病毒性疾病的受試者中。在一些實(shí)施方案中，靶細(xì)胞是體外細(xì)胞、體內(nèi)細(xì)胞或來自活體的細(xì)胞。在其他優(yōu)選的實(shí)施方案中，靶細(xì)胞是癌細(xì)胞。在其他優(yōu)選的實(shí)施方案中，靶細(xì)胞是B細(xì)胞、T細(xì)胞或粒細(xì)胞。
本發(fā)明還提供了治療免疫性疾病的方法，包括給受試者施用有效量的至少一種本發(fā)明的示例性化合物(參見，例如，III部分-示例性化合物)。在一些實(shí)施方案中，免疫性疾病包括但不限于，自身免疫溶血性疾病、自身免疫性肝炎、巴爾熱疾病或IgA腎病、乳糜瀉、慢性疲勞綜合征、克羅恩病、皮肌炎、纖維肌痛、移植物抗宿主病、格雷夫斯氏病、橋本甲狀腺炎、原發(fā)性血小板減少性紫癜、扁平苔蘚、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、牛皮癬、風(fēng)濕熱、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、硬皮病、Sjorgren綜合癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、1型糖尿病、潰瘍性腸炎、白癜風(fēng)和原發(fā)性血小板減少性血栓形成性紫癜。
本發(fā)明還提供治療癌癥和/或與癌癥相關(guān)的疾病的方法，包括給受試者施用有效量的至少一種本發(fā)明的示例性化合物(參見，例如，III部分-示例性化合物)。本發(fā)明并不限于特定類型的癌癥(例如，腫瘤、新生物、淋巴瘤或白血病)。在一些實(shí)施方案中，該組合物還包括抗癌劑。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種調(diào)節(jié)細(xì)胞死亡的方法，包括提供具有寡霉素敏感性參照蛋白和線粒體F1F0-ATP酶的F1亞單元的靶細(xì)胞；一種組合物，包括至少一種本發(fā)明的示例性化合物(參見，例如，III部分-示例性化合物)；和在一定條件下將細(xì)胞暴露于該組合物，以使該組合物與寡霉素敏感性參照蛋白結(jié)合，以在細(xì)胞中提高超氧化物水平或改變細(xì)胞ATP水平。在一些實(shí)施方案中，靶細(xì)胞是體外細(xì)胞、體內(nèi)細(xì)胞或來自活體的細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，靶細(xì)胞是癌細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，靶細(xì)胞包括B細(xì)胞、T細(xì)胞或粒細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，暴露步驟導(dǎo)致靶細(xì)胞的細(xì)胞死亡增加。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種包含藥物洗脫支架介質(zhì)的組合物；其中該藥物洗脫支架介質(zhì)包括一種藥物組合物，該藥物組合物包含至少一種本發(fā)明的示例性化合物(參見，例如，III部分-示例性化合物)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種治療血管的方法，包括將受試者的血管暴露于該組合物。在一些實(shí)施方案中，血管是封閉的血管和/或心血管。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種調(diào)節(jié)過度增殖的上皮細(xì)胞的方法，包括提供含有過度增殖的上皮細(xì)胞的樣品，和包含至少一種本發(fā)明的示例性化合物(參見，例如，III部分-示例性化合物)的一種組合物；和將該組合物用于該樣品。在一些實(shí)施方案中，該組合物用于該樣品減少了樣品中的Erk1/2激活。在一些實(shí)施方案中，該組合物用于該樣品抑制了樣品中的角化細(xì)胞的增殖。在一些實(shí)施方案中，該組合物還包含局部用皮質(zhì)類固醇(例如，曲安奈德0.1％乳膏和二丙酸倍他米松0.05％乳膏)。在一些實(shí)施方案中，該組合物還包含煤焦油2-10％。在一些實(shí)施方案中，該組合物還包含維生素D-3類似物(例如，卡泊三烯)。在一些實(shí)施方案中，該組合物還包含角質(zhì)層分離劑(例如，地蒽酚0.1-1％)。在一些實(shí)施方案中，該組合物還包含局部用類視色素(例如，維甲酸和他扎羅汀)。在一些實(shí)施方案中，該樣品是活的受試者。在一些實(shí)施方案中，活的受試者是患表皮增生的人。在一些實(shí)施方案中，活的受試者患有牛皮癬。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，包含至少一種本發(fā)明的示例性化合物(參見，例如，III部分-示例性化合物)和藥學(xué)可接受的稀釋劑或載體。在一些實(shí)施方案中，該藥物組合物還包括另一種治療劑。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的示例性化合物(參見，例如，III部分-示例性化合物)用于治療與F1F0-ATP水解酶有關(guān)的疾病。與F1F0-ATP水解酶有關(guān)的疾病的例子包括但不限于，心肌梗塞、心室肥大、冠狀動脈疾病、非Q-波MI、充血性心力衰竭、心律失常、不穩(wěn)定心絞痛、慢性穩(wěn)定型心絞痛、普林茲邁托心絞痛、高血壓、間歇性跛行、外周閉塞性動脈病、血栓栓子性中風(fēng)的血栓性或血栓栓子性癥狀、靜脈血栓形成、動脈血栓形成、腦血栓形成、肺動脈栓塞、腦動脈栓塞、血栓形成傾向、彌散性血管內(nèi)凝血、再狹窄、心房纖維顫動、心室增大、動脈粥樣硬化性血管病、粥樣硬化斑塊破裂、粥樣硬化斑塊形成、移植性動脈粥樣硬化、血管重構(gòu)性動脈粥樣硬化、癌癥、手術(shù)、炎癥、全身性感染、人造表面、介入性心臟學(xué)、固定、妊娠和胎兒損傷，以及糖尿病并發(fā)癥包括視網(wǎng)膜病、腎病和神經(jīng)病變。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種在患者中治療與線粒體F1F0-ATP水解酶有關(guān)的疾病的方法，包括給需要這樣治療的患者施用有效量的至少一種本發(fā)明的示例性化合物(參見，例如，III部分-示例性化合物)。在一些實(shí)施方案中，線粒體F1F0-ATP水解酶疾病包括但不限于，心肌梗塞、心室肥大、冠狀動脈疾病、非Q-波MI、充血性心力衰竭、心律失常、不穩(wěn)定心絞痛、慢性穩(wěn)定型心絞痛、普林茲邁托心絞痛、高血壓、間歇性跛行、外周閉塞性動脈病、血栓栓子性中風(fēng)的血栓性或血栓栓子性癥狀、靜脈血栓形成、動脈血栓形成、腦血栓形成、肺動脈栓塞、腦動脈栓塞、血栓形成傾向、彌散性血管內(nèi)凝血、再狹窄、心房纖維顫動、心室增大、動脈粥樣硬化性血管病、粥樣硬化斑塊破裂、粥樣硬化斑塊形成、移植性動脈粥樣硬化、血管重構(gòu)性動脈粥樣硬化、癌癥、手術(shù)、炎癥、全身性感染、人造表面、介入性心臟學(xué)、固定、妊娠和胎兒損傷，以及糖尿病并發(fā)癥包括視網(wǎng)膜病、腎病和神經(jīng)病變。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供治療提供治療疾病的方法，包括通過將受影響的細(xì)胞暴露于組合物來抑制受疾病影響的細(xì)胞中ATP合酶復(fù)合物的活性，其中所述組合物能與該ATP合酶復(fù)合物的寡霉素敏感性參照蛋白結(jié)合，其中該疾病包括細(xì)菌感染、病毒感染、真菌感染、寄生蟲感染、朊病毒疾病、與異常血管發(fā)生有關(guān)的疾病、與異常血壓調(diào)節(jié)有關(guān)的疾病和與異常HDL/LDL調(diào)節(jié)有關(guān)的疾病。在一些實(shí)施方案中，該ATP合酶復(fù)合物是線粒體F1F0-ATP酶復(fù)合物。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種鑒定治療組合物的方法，包括a)提供包含線粒體F1F0-ATP酶的樣品和分子模型軟件；b)用該分子模型軟件鑒定候選的F1F0-ATP酶抑制劑；c)將該抑制劑與樣品接觸；d)測定線粒體F1F0-ATP酶的kcat/Km；和e)選擇與大部分F1F0-ATP酶-底物復(fù)合物結(jié)合并且在與線粒體F1F0-ATP酶結(jié)合后不會改變線粒體F1F0-ATP酶的kcat/Km比率的組合物作為治療組合物。在一些實(shí)施方案中，該方法還包括步驟f)在動物中測定所選擇的組合物以鑒定其低毒性和治療免疫性疾病(例如，自身免疫性疾病)的能力。在一些實(shí)施方案中，該樣品還包含線粒體。在一些實(shí)施方案中，該F1F0-ATP酶是純酶。在一些實(shí)施方案中，該F1F0-ATP酶位于亞-線粒體顆粒。在一些實(shí)施方案中，通過測定作為ATP濃度和抑制劑濃度函數(shù)的ATP水解或合成的比例來測定kcat/Km比率。在其他優(yōu)選的實(shí)施方案中，由Km Vmax和酶濃度計(jì)算kcat/Km比率。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物可以用于治療疾病，包括給需要的受試者，例如人施用有效量的化合物，其通常是在包含本發(fā)明的化合物和藥學(xué)可接受的載體的藥物制劑中。該化合物應(yīng)當(dāng)施用以緩解疾病的至少一種癥狀。通過本發(fā)明的一種或多種化合物可以治療的示例性疾病包括但不限于，免疫性疾病、過度增殖性疾病和慢性炎性疾病。至于免疫性疾病，該化合物可以用于治療移植物抗宿主病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡。此外，該化合物可以用于減輕或消除移植過程后組織或器官的排斥反應(yīng)。至于過度增殖性疾病，本發(fā)明的化合物可以用于治療癌癥，其可以是惡性的或良性的?？梢灾委煹氖纠园┌Y包括，例如腺瘤、腺癌、癌、白血病、淋巴瘤、黑素瘤、骨髓瘤、肉瘤和畸胎瘤。此外，應(yīng)當(dāng)關(guān)注的是，本發(fā)明的化合物可以用于治療膀胱和腎臟系統(tǒng)、腦、乳腺、子宮頸、結(jié)腸、肺、卵巢、前列腺、直腸的癌癥。至于慢性炎性疾病，本發(fā)明的化合物可以用于治療哮喘、牛皮癬和炎性腸病。
定義 為了易于理解本發(fā)明，下面定義了很多的術(shù)語和短語。
本文使用的術(shù)語“取代的脂肪烷基”是指具有少于10個碳的鏈烷基，其中至少一個脂肪族氫原子已經(jīng)被鹵素、氨基、羥基、烷氧基、硝基、硫、酮、醛、酯、酰胺、低級脂肪烷基、取代的低級脂肪烷基，或環(huán)(芳基、取代的芳基、環(huán)烷基或取代的環(huán)烷基等等)取代。其例子包括但不限于，1-氯乙基等等。
本文使用的術(shù)語“取代的芳基”是指芳環(huán)或者由至少一個是芳環(huán)的不超過3個稠合環(huán)組成的稠合芳環(huán)，其中環(huán)碳上的至少一個氫原子已經(jīng)被鹵素、氨基、羥基、烷氧基、硝基、硫、酮、醛、酯、酰胺、低級脂肪烷基、取代的低級脂肪烷基，或環(huán)(芳基、取代的芳基、環(huán)烷基或取代的環(huán)烷基等等)取代。其例子包括但不限于，羥基苯基等等。
本文使用的術(shù)語“環(huán)脂肪烷基”是指具有不超過8個碳的環(huán)烷或由不超過3個稠合脂肪環(huán)組成的稠合環(huán)系統(tǒng)。其例子包括但不限于，十氫萘等等。
本文使用的術(shù)語“取代的環(huán)脂肪烷基”是指具有不超過10個碳的環(huán)烷或由不超過3個稠合環(huán)組成的稠合環(huán)系統(tǒng)，其中至少一個脂肪氫原子已經(jīng)被鹵素、硝基、硫、酮、氨基、羥基、烷氧基、醛、酯、酰胺、低級脂肪烷基、取代的低級脂肪烷基，或環(huán)(芳基、取代的芳基、環(huán)烷基或取代的環(huán)烷基等等)取代。其例子包括但不限于，1-氯十氫萘基、二環(huán)-庚烷、辛烷和壬烷(例如，冰片基)等等。
本文使用的術(shù)語“雜環(huán)”是指具有小于8個碳的環(huán)烷和/或芳環(huán)系統(tǒng)，或者不超過3個稠合環(huán)的稠合環(huán)系統(tǒng)，其中至少一個環(huán)碳原子被氧、氮或硫取代。其例子包括但不限于，嗎啉代等等。
本文使用的術(shù)語“取代的雜環(huán)”是指具有小于8個碳的環(huán)烷和/或芳環(huán)系統(tǒng)，或者不超過3個稠合環(huán)的稠合環(huán)系統(tǒng)，其中至少一個環(huán)碳原子被氧、氮或硫取代，并且其中至少一個脂肪氫原子已經(jīng)被鹵素、羥基、硫、硝基、氨基、酮、醛、酯、酰胺、低級脂肪烷基、取代的低級脂肪烷基，或環(huán)(芳基、取代的芳基、環(huán)烷基或取代的環(huán)烷基等等)取代。其例子包括但不限于2-氯吡喃基。
術(shù)語“烷基”是本領(lǐng)域認(rèn)可的，是指飽和的脂肪族基團(tuán)，包括直鏈烷基、支鏈烷基、環(huán)烷基(脂環(huán)族)、烷基取代的環(huán)烷基和環(huán)烷基取代的烷基。在一些實(shí)施方案中，直鏈或支鏈烷基在其骨架中具有約8或更少個碳原子(例如，對于直鏈?zhǔn)荂1-C8，對于支鏈?zhǔn)荂3-C8)，并且可替代地，具有約4或更少個。
術(shù)語“取代的烷基”是本領(lǐng)域認(rèn)可的，是指在烴骨架的一個或多個碳原子上具有取代氫原子的取代基的烷基部分。這些取代基可以包括，例如，烯基、炔基、鹵素、羥基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸根、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫羰基、烷氧基、磷酸根、膦酸根、膦基、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、?；被?包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨甲?；碗寤?、脒基、亞胺基、巰基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸根、硫酸根、烷基亞磺酰基、磺酸根、氨磺?；⒒前坊?、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環(huán)基、烷基芳基，或者芳香或雜芳香部分。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，取代的烷基是在烴骨架的一個或多個碳原子上具有取代氫原子的氟原子的烷基部分，例如，-CH2F、-CHF2、-CF3等等。
本文使用的術(shù)語化合物的“衍生物”是指化學(xué)修飾的化合物，其中化學(xué)修飾發(fā)生在化合物的官能團(tuán)或在芳香環(huán)上。
本文使用的術(shù)語“表皮增生”是指表皮組織的正常排列中，正常細(xì)胞的數(shù)目異常增多或增加。表皮增生是很多疾病，包括但不限于牛皮癬的特征。
本文使用的術(shù)語“角質(zhì)化細(xì)胞”是指表皮的角質(zhì)化層的皮膚細(xì)胞。
本文使用的術(shù)語“成纖維細(xì)胞”是指結(jié)締組織的中胚層產(chǎn)生的固有細(xì)胞，它們分泌纖維溶膠原、纖維結(jié)合素和膠原酶。
本文使用的術(shù)語“色素疾病”是指與皮膚色素(例如，黑色素)有關(guān)的疾病。色素疾病的例子包括但不限于，所有形式的白化病、黑斑病、皮膚損傷后的色素?fù)p失和白癜風(fēng)。
本文使用的術(shù)語“支架”或“藥物洗脫支架”是指當(dāng)置入與要治療的內(nèi)腔的壁的位點(diǎn)接觸時(shí)其也會在內(nèi)腔壁置入纖維蛋白并將其保留在內(nèi)腔壁的任何裝置。它特別可以包括經(jīng)皮遞送以治療冠狀動脈閉塞并封閉脾、頸動脈、髂骨和腘血管的切片或動脈瘤的裝置。支架也可以具有可能的聚合或金屬結(jié)構(gòu)元件，纖維蛋白應(yīng)用于其上，或者支架可以是纖維蛋白與聚合物混合在一起的復(fù)合物。例如，可變性的金屬絲支架，例如在U.S.4,886,062(通過參考引入本文)中披露的那種，可以如上所述用纖維蛋白以一層或多層包衣包被(即，通過使用纖維蛋白原溶液和纖維蛋白原-凝固蛋白的溶液在金屬骨架上使纖維蛋白聚合)或者具有附著的纖維蛋白預(yù)形成物例如纖維蛋白的環(huán)繞膜。然后可以將支架和纖維蛋白置于位于氣囊式導(dǎo)管的遠(yuǎn)末端的氣囊上，并通過常規(guī)的經(jīng)皮方法(例如，以血管成形術(shù)操作)地送到要治療的限定或封閉的位點(diǎn)上，然后通過給氣囊加壓它在這里膨脹，與身體內(nèi)腔接觸。然后可以撤出導(dǎo)管，將本發(fā)明的纖維蛋白支架保留在治療位點(diǎn)。因此，支架可以在治療位點(diǎn)給內(nèi)腔提供支持結(jié)構(gòu)，同時(shí)也在內(nèi)腔壁上提供了支持安全放置纖維蛋白的結(jié)構(gòu)。一般地，藥物洗脫支架可以使特定的藥物在支架的置入位點(diǎn)有效釋放。
本文使用的術(shù)語“導(dǎo)管”一般是指用于插入體腔或血管的管。
本文使用的術(shù)語“瓣”或“血管”是指哺乳動物的任何內(nèi)腔。例子包括但不限于，動脈、靜脈、毛細(xì)血管和生物內(nèi)腔。
本文使用的術(shù)語“再狹窄”是指變窄的任何瓣。例子包括但不限于，打開動脈的狹窄部分的作用力例如，動脈的氣囊膨脹、切除、經(jīng)皮腔內(nèi)板塊旋切或激光治療導(dǎo)致的動脈損傷后周圍或冠狀動脈的再封閉。
本文使用的“血管成形術(shù)”或“氣囊治療”或“氣囊血管成形術(shù)”或“經(jīng)皮穿刺冠狀動脈成形術(shù)”是指一種治療血管疾病的方法，包括使用氣囊導(dǎo)管來增大血管并由此改善血流。
本文使用的“心導(dǎo)管術(shù)”或“冠狀動脈造影照片”是指一種使用導(dǎo)管插入技術(shù)診斷冠狀動脈疾病的試驗(yàn)。這種技術(shù)可以包括，例如經(jīng)導(dǎo)管向冠狀動脈中注射對比染料，使變窄或阻塞的動脈顯像。
本文使用的術(shù)語“受試者”是指通過本發(fā)明的方法治療的生物體。這些生物體優(yōu)選包括但不限于，哺乳動物(例如，鼠類、猿猴類、馬類、牛類、豬類、犬類、貓科，等等)，最優(yōu)選包括人。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語“受試者”一般是指由于特征在于細(xì)胞凋亡過程失調(diào)的疾病而將要接受或者已經(jīng)接受治療(例如，施用本發(fā)明的化合物和任選一種或多種其他藥物)的受試者。
本文使用的術(shù)語“抗癌劑”或“常規(guī)抗癌劑”是指在癌癥治療中使用的任何化療化合物、放射療法或手術(shù)介入。
本文使用的術(shù)語“宿主細(xì)胞”是指任何的真核或原核細(xì)胞(例如，哺乳動物細(xì)胞、鳥類細(xì)胞、兩棲動物細(xì)胞、植物細(xì)胞、魚細(xì)胞和昆蟲細(xì)胞)，不論是位于體外還是體內(nèi)。
本文使用的術(shù)語“細(xì)胞培養(yǎng)”是指細(xì)胞的任何體外培養(yǎng)。該術(shù)語包括連續(xù)的細(xì)胞株(例如，具有永久表型)，原代細(xì)胞培養(yǎng)物、有限細(xì)胞株(例如，非轉(zhuǎn)換細(xì)胞)，和其他任何保留在體外的細(xì)胞群，包括卵母細(xì)胞和胚胎。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物和方法的“靶細(xì)胞”包括，涉及，但不限于，淋巴樣細(xì)胞或癌細(xì)胞。淋巴樣細(xì)胞包括B細(xì)胞、T細(xì)胞和粒細(xì)胞。粒細(xì)胞包括嗜酸性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，靶細(xì)胞是由受試者活組織檢查獲得的連續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞或未培養(yǎng)細(xì)胞。
癌細(xì)胞包括腫瘤細(xì)胞、贅生細(xì)胞、惡性細(xì)胞、轉(zhuǎn)移細(xì)胞和增生細(xì)胞。贅生細(xì)胞可以是良性的或惡性的。如果沒有侵襲或轉(zhuǎn)移，贅生細(xì)胞就是良性的。惡性細(xì)胞是能夠侵襲和/或轉(zhuǎn)移的。增生是細(xì)胞在組織或器官中的病理學(xué)蓄積，同時(shí)結(jié)構(gòu)或功能沒有顯著的改變。
在一個具體的實(shí)施方案中，靶細(xì)胞顯示病理學(xué)生長或增殖。本文使用的術(shù)語“病理學(xué)增殖或生長細(xì)胞”是指動物中局部的增殖細(xì)胞群，它們不通過正常生長的一般性限制來支配。
本文使用的術(shù)語“未激活的靶細(xì)胞”是指在Go期的細(xì)胞或還未使用刺激物的細(xì)胞。
本文使用的術(shù)語“激活的靶淋巴樣細(xì)胞”是指已經(jīng)用適當(dāng)?shù)拇碳の镱A(yù)處理導(dǎo)致信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)的淋巴樣細(xì)胞，或者可替代地，不處于Go期的淋巴樣細(xì)胞。激活的淋巴樣細(xì)胞可以增殖，發(fā)生激活誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡，或者產(chǎn)生一種或多種細(xì)胞毒素、細(xì)胞因子和具有其他相關(guān)的膜結(jié)合相關(guān)蛋白特征的細(xì)胞類型(例如，CD8+或CD4+)。它們也能識別和結(jié)合任意的靶細(xì)胞，靶細(xì)胞在自身表面上顯示特定的抗原，然后釋放其效應(yīng)分子。
本文使用的術(shù)語“激活的癌細(xì)胞”是指已經(jīng)用適當(dāng)?shù)拇碳の镱A(yù)處理導(dǎo)致信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的癌細(xì)胞。激活的癌細(xì)胞可以或可以不處于Go期。
激活劑是一種與靶細(xì)胞接觸導(dǎo)致信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)的刺激物。激活性刺激物的例子包括但不限于，小分子、放射能以及與細(xì)胞接合激活細(xì)胞表面受體的分子。激活性刺激物誘導(dǎo)的應(yīng)答，其特征在于細(xì)胞內(nèi)Ca2+、超氧化物或羥基的水平；酶例如激酶或磷酸酶的活性；或細(xì)胞的能態(tài)的改變。對于癌細(xì)胞，激活劑也包括轉(zhuǎn)化型腫瘤基因。
在一個方面，激活劑是與細(xì)胞表面激活受體結(jié)合的任意試劑。這些可以選自T細(xì)胞受體配體、B細(xì)胞激活因子(“BAFF”)、TNF、Fas配體(FasL)、CD40配體、增殖誘導(dǎo)性配體(“APRIL”)、細(xì)胞因子、趨化因子、激素、氨基酸(例如，谷氨酸)、甾類、B細(xì)胞受體配體、γ輻射、UV輻射、能增強(qiáng)細(xì)胞應(yīng)激的試劑或條件、或者特異性識別并與細(xì)胞表面激活受體結(jié)合的抗體(例如，anti-CD4、anti-CD8、anti-CD20、anti-TACI、anti-BCMA、anti-TNF受體、anti-CD40、anti-CD3、anti-CD28、anti-B220、anti-CD38、anti-CD19和anti-CD21)。BCMA是B細(xì)胞成熟抗原受體，TACI是跨膜激活子和CAML作用子(Gross，A.等人(2000)；Laabi，Y.等人(1992)和Madry，C.等人(1998))?？贵w包括單克隆的或多克隆的或其混合物。
T細(xì)胞配體的例子包括但不限于，與MHC分子結(jié)合的肽、肽MHC復(fù)合物、或識別T細(xì)胞受體組分的抗體。
B細(xì)胞配體的例子包括但不限于，結(jié)合或識別B細(xì)胞受體組分的分子或抗體。
與細(xì)胞表面激活受體結(jié)合的試劑的例子包括但不限于，所產(chǎn)生的對抗它們這些受體的天然配體或抗體(例如，anti-CD20)。RITUXIN(Genentech，Inc.，San Francisco，CA)是一種商業(yè)可購得的anti-CD 20嵌合單克隆抗體。
增強(qiáng)細(xì)胞應(yīng)激的試劑或條件的例子包括，加熱、輻射、氧化應(yīng)激或停用生長因子等等。生長因子的例子包括但不限于血清、IL-2、血小板衍生的生長因子(“PDGF”)等等。
本文使用的術(shù)語“有效量”是指足以產(chǎn)生有益的或所希望的結(jié)果的化合物(例如，本發(fā)明的化合物)的量。有效量可以以一次或多次施用、應(yīng)用或劑量來施用，并不意欲限于特定的制劑或給藥途徑。
本文使用的術(shù)語“細(xì)胞死亡過程的失調(diào)”是指細(xì)胞通過壞死或凋亡發(fā)生細(xì)胞死亡的能力(例如，傾向)的任何異常。細(xì)胞死亡失調(diào)與各種疾病有關(guān)，或由其誘導(dǎo)產(chǎn)生，這些疾病包括，例如免疫性疾病(例如，自身免疫性疾病)(例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、移植物抗宿主病、重癥肌無力、

綜合征等等)，慢性炎性疾病(例如，牛皮癬，哮喘和克羅恩病)，過度增殖性疾病(例如，腫瘤、B細(xì)胞淋巴瘤、T細(xì)胞淋巴瘤等等)，病毒感染(例如，皰疹、乳頭瘤、HIV)，和其他疾病例如骨關(guān)節(jié)炎和動脈粥樣硬化。
應(yīng)當(dāng)注意的是，當(dāng)失調(diào)是由病毒感染誘導(dǎo)的或與之有關(guān)時(shí)，病毒感染可以或可以不在失調(diào)發(fā)生時(shí)檢測到或觀測到。也就是說，病毒誘導(dǎo)的失調(diào)甚至可以在病毒感染的癥狀消失后才發(fā)生。
本文使用的“過度增殖性疾病”是指其中動物中局部的增殖細(xì)胞群不通過正常生長的一般性限制來支配的任何疾病。過度增殖性疾病的例子包括腫瘤、贅生物、淋巴瘤等等。如果贅生物沒有發(fā)生侵襲或轉(zhuǎn)移，就稱之為良性的，如果侵襲或轉(zhuǎn)移則是惡性的。轉(zhuǎn)移的細(xì)胞或組織是指細(xì)胞可以侵入并破壞鄰近的身體結(jié)構(gòu)。增生是細(xì)胞增殖的一種形態(tài)，它包括組織或器官中細(xì)胞數(shù)量的增加，同時(shí)結(jié)構(gòu)或功能沒有顯著改變。組織變形是可控的細(xì)胞生長的一種形式，其中一種類型的全分化細(xì)胞取代了另一種類型的分化細(xì)胞。組織變形可以發(fā)生在上皮或結(jié)締組織細(xì)胞中。典型的組織變形涉及某些無序的組織轉(zhuǎn)化上皮。過度增殖性疾病包括癌癥，例如骨髓瘤、膀胱癌和腎癌。
激活的淋巴樣細(xì)胞的病理學(xué)生長常會導(dǎo)致免疫性疾病(例如，自身免疫性疾病)或慢性炎性疾病。本文使用的術(shù)語“自身免疫性疾病”是指其中生物體產(chǎn)生識別生物體自身的分子、細(xì)胞或組織的抗體或免疫細(xì)胞的任何疾病。自身免疫性疾病的非限制性例子包括自身免疫溶血性疾病、自身免疫性肝炎、巴爾熱疾病或IgA腎病、乳糜瀉、慢性疲勞綜合征、克勞恩病、皮肌炎、纖維肌痛、格拉夫斯病、原發(fā)性血小板減少性血栓形成性紫癜、扁平苔蘚、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、牛皮癬、風(fēng)濕性發(fā)熱、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、硬皮病、Sjorgren綜合癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、1型糖尿病、潰瘍性腸炎、白癜風(fēng)等等。移植物抗宿主病可以是由對移植的組織、器官等等(例如，骨髓、實(shí)體器官、皮膚等等)的免疫反應(yīng)而導(dǎo)致的。
本文使用的術(shù)語“慢性炎性疾病”是指其中生物體的免疫細(xì)胞被激活的疾病。這種疾病的特征在于具有病理學(xué)后遺癥的持續(xù)炎性應(yīng)答。這種狀態(tài)的特征在于單核細(xì)胞的滲透、成纖維細(xì)胞和小血管的增殖、結(jié)締組織增加和組織破壞。慢性炎性疾病的例子包括但不限于，克羅恩病、牛皮癬、慢性阻塞性肺疾病、炎性腸病、多發(fā)性硬化和哮喘。免疫性疾病例如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡也可以是由慢性炎性狀態(tài)導(dǎo)致的。
本文使用的術(shù)語“聯(lián)合施用”是指給受試者施用至少兩種藥物(例如，本發(fā)明的化合物)或療法。在一些實(shí)施方案中，聯(lián)合施用兩種或多種藥物/療法是同時(shí)的。在其他實(shí)施方案中，第一藥物/療法是在第二藥物/療法前施用的。本領(lǐng)域技術(shù)人員了解，所使用的各種藥物/療法的制劑和/或給藥途徑可以不同。本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易即可確定聯(lián)合施用的適當(dāng)劑量。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)聯(lián)合施用藥物/療法時(shí)，各個藥物/療法是以低于單獨(dú)施用的適當(dāng)量施用的。因此，在降低已知可能的有害(例如，毒性)藥物的必要劑量的聯(lián)合施用藥物/療法的實(shí)施方案中，特別需要聯(lián)合施用。
本文使用的術(shù)語“毒性”是指與施用有毒藥物前的相同細(xì)胞或組織相比，對于細(xì)胞或組織的任何不利或有害效果。
本文使用的術(shù)語“藥物組合物”是指活性劑與惰性或活性的載體的組合，組成特別適合體內(nèi)或體外的診斷或治療用途的組合物。
本文使用的術(shù)語“藥學(xué)可接受的載體”是指任何的標(biāo)準(zhǔn)藥物載體，例如磷酸鹽緩沖鹽水溶液、水、乳劑(例如，油/水型或水/油型乳劑)，和各種類型的潤濕劑。該組合物也可以包括穩(wěn)定劑和防腐劑。載體、穩(wěn)定劑和佐劑的例子(參見例如，Martin，Remington′sPharmaceutical Sciences，15th Ed.，Mack Publ.Co.，Easton，PA[1975])。
本文使用的術(shù)語“藥學(xué)可接受的鹽”是指本發(fā)明的化合物的任何藥學(xué)可接受的鹽(例如，酸或堿)，當(dāng)施用于受試者時(shí)，它能夠提供本發(fā)明的化合物或其活性代謝產(chǎn)物或殘留物。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，本發(fā)明的化合物的“鹽”可以是由無機(jī)或有機(jī)酸和堿產(chǎn)生的。酸的例子包括但不限于，鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、延胡索酸、馬來酸、磷酸、羥乙酸、乳酸、水楊酸、琥珀酸、甲苯磺酸、酒石酸、乙酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、萘-2-磺酸、苯磺酸等等。其他酸，例如草酸，盡管本身并不是藥學(xué)可接受的，但是可以在獲得本發(fā)明的化合物和它們的藥學(xué)可接受的酸加成鹽中，在制備鹽時(shí)作為中間體。
堿的例子包括但不限于，堿金屬(例如，鈉)的氫氧化物、堿土金屬(例如，鎂)的氫氧化物、氨和式NW4+的化合物，其中W是C1-4烷基等等。
鹽的例子包括但不限于乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、重硫酸鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、延胡索酸鹽、氟庚酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、草酸鹽、巴莫酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、苯丙酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、十一酸鹽等等。鹽的其他例子包括本發(fā)明的化合物的陰離子與適當(dāng)?shù)年栯x子例如Na+、NH4+和NW4+(其中W是C1-4烷基)等等組成的化合物。
對于治療用途，所關(guān)注的本發(fā)明的化合物的鹽是藥學(xué)可接受的。但是，發(fā)現(xiàn)非藥學(xué)可接受的的酸和堿的鹽也可以用于藥學(xué)可接受的化合物的制備或純化。
本文所述的某些化合物可以以特定的幾何或立體異構(gòu)體的形式存在。本發(fā)明關(guān)注所有這些化合物，包括順式-和反式-異構(gòu)體、R-和S-對映體、非對映體、(D)-異構(gòu)體、(L)-異構(gòu)體、其外消旋混合物及其他混合物，都落在本發(fā)明的范圍內(nèi)。在取代基例如烷基中可以存在另外的不對稱碳原子。所有這些異構(gòu)體以及其混合物都意欲包括在本發(fā)明中。特別地，此處出現(xiàn)的一般化學(xué)結(jié)構(gòu)可以包含不對稱碳原子，和/或一般化學(xué)結(jié)構(gòu)上的取代基可以包含不對稱碳原子。一般化學(xué)結(jié)構(gòu)包括所有異構(gòu)形式的化合物，包括對映體、非對映體和外消旋混合物。
例如，如果需要本發(fā)明的化合物的特定對映體，可以通過不對稱合成，或者通過用手性助劑衍生來制備，其中分離所得到的非對映體混合物，分裂開輔助基團(tuán)以提供純凈的所需對映體。可替代地，當(dāng)該分子包含堿性官能團(tuán)，例如氨基或者酸性官能團(tuán)例如羧基時(shí)，可以用適當(dāng)?shù)墓鈱W(xué)活性的酸或堿來形成非對映體鹽，然后由本領(lǐng)域公知的分步結(jié)晶或光譜方法拆分所形成的非對映體，隨后回收純凈的對映體。
本文使用的術(shù)語“固相載體”或“固體載體”是以最廣義使用的，是指很多的載體，其是本領(lǐng)域技術(shù)人員可用和已知的。固相載體包括但不限于，硅膠、樹脂、衍生的塑料膜、玻璃珠、棉、塑料珠、氧化鋁凝膠等等。本文使用的“固體載體”也包括合成的抗原呈遞基質(zhì)、細(xì)胞、脂質(zhì)體等等。適當(dāng)?shù)墓滔噍d體可以基于所期望的最終應(yīng)用和對各種方案的適合性來選擇。例如，對于肽合成，固相載體可以是樹脂例如聚苯乙烯(例如，來自Bachem，Inc.，Peninsula Laboratories的PAM-樹脂)、POLYHIPE)樹脂(得自Aminotech，Canada)、聚酰胺樹脂(得自Peninsula Laboratories)、移植有聚乙二醇的聚乙烯樹脂(TENTAGEL，Rapp Polymere，Tubingen，Germany)或聚二甲基丙烯酰胺樹脂(得自Milligen/Biosearch，California)。
本文使用的術(shù)語“病原體”是指在宿主內(nèi)導(dǎo)致疾病狀態(tài)(例如，感染、癌癥等等)的生物制劑?！安≡w”包括但不限于，病毒、細(xì)菌、古細(xì)菌、真菌、原蟲、支原體、朊病毒和寄生蟲。
術(shù)語“細(xì)菌”和“菌”是指所有的原核生物，包括原核生物界中所有門的那些。它是指，該術(shù)語包括所有被認(rèn)為是細(xì)菌的微生物，包括支原體、衣原體、放線菌、鏈霉菌和立克次體。所有形式的細(xì)菌都包括在該定義內(nèi)，包括球菌、桿菌、螺旋菌、球狀體、原生質(zhì)體等等。該術(shù)語也包括革蘭氏陰性或革蘭氏陽性的原核生物?！案锾m氏陰性”和“革蘭氏陽性”是指用本領(lǐng)域公知的革蘭氏染色法時(shí)的染色模式。(參見例如，F(xiàn)inegold和Martin，Diagnostic Microbiology，6th Ed.，CV Mosby St.Louis，pp.13-15[1982])?！案锾m氏陽性菌”是在革蘭氏染色中保留所使用的主要染料的細(xì)菌，使得染色的細(xì)胞在顯微鏡下呈深藍(lán)色至紫色?！案锾m氏明性菌”在革蘭氏染色中不保留所使用的主要染料，但是通過復(fù)染劑染色。因此，革蘭氏陰性菌呈紅色。
本文使用的術(shù)語“微生物”是指任何種類或類型的微生物，包括但不限于，細(xì)菌、古細(xì)菌、真菌、原蟲、支原體和寄生蟲。本發(fā)明注意到，所包括的很多微生物對于受試者也是致病性的。
本文使用的術(shù)語“真菌”參照用于真核生物，例如霉菌和酵母，包括雙向型真菌。
本文使用的術(shù)語“病毒”是指微小的傳染物，但也有某些例外，其通過光學(xué)顯微鏡不能觀察到，沒有獨(dú)立的代謝，并且僅能在活的宿主細(xì)胞中復(fù)制。顆粒單體(即，病毒體)典型地是由核酸和蛋白質(zhì)外鞘或外殼組成；一些病毒體也具有含脂的膜。術(shù)語“病毒”包括所有類型的病毒，包括動物、植物、噬菌體和其他病毒。
本文使用的術(shù)語“樣品”是以其最廣義使用的。懷疑指示特征在于凋亡動能失調(diào)的疾病的樣品包括細(xì)胞、組織或液體、從細(xì)胞分離的同源染色體(例如，一系列的中期染色體)、染色體組的DNA(在溶液中或與固體載體結(jié)合例如用于Southern斑跡分析)、RNA(在溶液中或與固體載體結(jié)合例如用于Northern斑跡分析)、cDNA(在溶液中或與固體載體結(jié)合)等等。懷疑包含蛋白質(zhì)的樣品可以包括細(xì)胞、組織的一部分、包含一種或多種蛋白質(zhì)的提取物等等。
本文使用的術(shù)語“純化”或“以純化”是指從樣品中除去不希望有的組分。本文使用的術(shù)語“基本上純凈的”是指至少60％不是，優(yōu)選75％不是，最優(yōu)選90％或更多不是它們通常混合有的其他組分。
本文使用的術(shù)語“抗原結(jié)合蛋白”是指與特定抗原結(jié)合的蛋白。“抗原結(jié)合蛋白”包括但不限于，免疫球蛋白包括多克隆、單克隆、嵌合體、單鏈和人化抗體、Fab片段、F(ab′)2片段和Fab表達(dá)庫。使用本領(lǐng)域已知的各種方法來制備多克隆抗體。為制備抗體，可以通過用于所期望抗原表位對應(yīng)的肽注射來使各種宿主動物免疫，包括但不限于兔、小鼠、大鼠、羊、山羊等等。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，肽結(jié)合到致免疫載體(例如，白喉類毒素、牛血清白蛋白(BSA)或鑰孔戚血藍(lán)素[KLH])上。根據(jù)宿主的種類，使用各種佐劑來增強(qiáng)免疫應(yīng)答，包括但不限于，弗氏佐劑(完全和不完全)，礦物膠例如氫氧化鋁，表面活性物質(zhì)例如溶血卵磷脂、pluronic多元醇、聚陰離子、肽、油乳膠、鑰孔戚血藍(lán)素、二硝基酚和可能有用的人用佐劑例如BCG(結(jié)核菌苗)和短小棒狀桿菌。
為制備單克隆抗體，可以使用任何技術(shù)，它用于通過在培養(yǎng)基中連續(xù)的細(xì)胞株產(chǎn)生抗體分子(參見，例如，Harlow和Lane，AntibodiesA Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，ColdSpring Harbor，NY)。這些技術(shù)包括但不限于，最初由

和Milstein發(fā)展出來的細(xì)胞雜交技術(shù)(

和Milstein，Nature，256495-497[1975])，以及三元雜交技術(shù)、人B-細(xì)胞雜交技術(shù)(參見，例如，Kozbor等人，Immunol.Today，472[1983])，和產(chǎn)生人單克隆抗體的EBV-雜交技術(shù)(Cole等人，in Monoclonal Antibodies andCancer Therapy，Alan R.Liss，Inc.，pp.77-96[1985])。
根據(jù)本發(fā)明，所述用于制備單鏈抗體的技術(shù)(U.S.4,946,778；通過參考引入本文)可以適合制備所需的特定的單鏈抗體。本發(fā)明的另一個實(shí)施方案利用了本領(lǐng)域已知的技術(shù)來構(gòu)造Fab表達(dá)庫(Huse等人，Science，2461275-1281[1989])，以快速和容易地鑒定具有所需特異性的單克隆Fab片段。
本文使用的術(shù)語“非特異性結(jié)合”和“背景結(jié)合”當(dāng)用于抗體和蛋白質(zhì)或肽的相互作用時(shí)，是指不依賴于特定結(jié)構(gòu)的存在的相互作用(即，抗體一般性地與蛋白質(zhì)結(jié)合，而不是依靠特定結(jié)構(gòu)例如抗原表位)。
本文使用的術(shù)語“調(diào)節(jié)”是指化合物(例如，本發(fā)明的化合物)的活性影響(例如，促進(jìn)或延緩)細(xì)胞功能的一個方面，包括但不限于，細(xì)胞生長、增殖、凋亡等等。
術(shù)語“受試化合物”是指任何化學(xué)受試者、藥物、藥物等等，其可以用于治療或預(yù)防軀體功能的疾病、病、病癥或障礙，或者改變樣品的生理學(xué)或細(xì)胞狀態(tài)(例如細(xì)胞或組織中凋亡的失調(diào)水平)。受試化合物包括已知和可能的治療性化合物?？梢酝ㄟ^使用本發(fā)明的篩選方法來確定受試化合物是治療性的?！耙阎闹委熜曰衔铩笔侵冈谠撝委熁蝾A(yù)防中已顯示出是有效的(例如，通過動物實(shí)驗(yàn)或先前施用于人的實(shí)驗(yàn))的治療性化合物。在一些實(shí)施方案中，“受試化合物”是調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的藥物。
發(fā)明詳述 本發(fā)明提供新的化合物，發(fā)現(xiàn)它們的方法，以及它們治療、研究和診斷應(yīng)用。特別地，本發(fā)明提供苯二氮

類化合物，以及使用苯二氮

類衍生物和相關(guān)化合物作為治療劑治療很多與程序性細(xì)胞死亡過程錯誤調(diào)節(jié)有關(guān)的疾病、自身免疫性疾病、炎性疾病和過度增殖性疾病的方法等等。
下面的部分中將會更詳細(xì)地描述本發(fā)明的示例性組合物和方法I.細(xì)胞死亡的調(diào)節(jié)劑；II.細(xì)胞生長和增殖的調(diào)節(jié)劑；III.示例性化合物；IV.藥物組合物、制劑、以及示例性給藥途徑和對劑量的考慮；V.藥物篩選；和VI.治療應(yīng)用。
除非另有說明，實(shí)施本發(fā)明可以使用有機(jī)化學(xué)、藥學(xué)、分子生物學(xué)(包括重組技術(shù))、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫學(xué)的常規(guī)技術(shù)，它們都是本領(lǐng)域的技術(shù)。在下列文獻(xiàn)中完整地解釋了這些技術(shù)，例如“Molecular cloninga laboratory manual”SecondEdition(Sambrook等人，1989)；“Oligonucleotide synthesis”(M.J.Gait，ed.，1984)；“Animal cell culture”(R.I.Freshney，ed.，1987)；the series “Methods in enzymology”(Academic Press，Inc.)；“Handbook of experimental immunology”(D.M.Weir&C.C.Blackwell，eds.)；“Gene transfer vectors for mammalian cells”(J.M.Miller&M.P.Calos，eds.，1987)；“Current protocols inmolecularbiology”(F.M.Ausubel等人，eds.，1987，和定期更新)；“PCRthe polymerase chain reaction”(Mullis等人，eds.，1994)；和“Current protocols in immunology”(J.E.Coligan等人，eds.，1991)，將它們每一篇都以整體通過參考引入本文。
I.細(xì)胞死亡的調(diào)節(jié)劑 可以通過檢測細(xì)胞數(shù)量的任何變化來測定化合物的效果?？梢匀绫疚暮捅绢I(lǐng)域所述來測定細(xì)胞死亡。在一些實(shí)施方案中，將細(xì)胞株保持在適當(dāng)?shù)募?xì)胞培養(yǎng)條件下(例如，氣體(CO2)，溫度和培養(yǎng)基)適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，以得到指數(shù)級的增殖，而且沒有密度依賴的限制。用標(biāo)準(zhǔn)方法例如錐蟲藍(lán)排除/血細(xì)胞計(jì)量術(shù)或MTT染色變化分析來測定細(xì)胞數(shù)量和/或存活。可替代地，可以分析細(xì)胞的與凋亡或壞死異常有關(guān)的基因表達(dá)或基因產(chǎn)物。
在一些實(shí)施方案中，關(guān)注的是，將細(xì)胞暴露于本發(fā)明以誘導(dǎo)凋亡。在一些實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明導(dǎo)致細(xì)胞ROS水平(例如，O2-)開始升高。在其他實(shí)施方案中，關(guān)注的是，將細(xì)胞暴露于本發(fā)明的化合物導(dǎo)致細(xì)胞O2-水平升高。在其他實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的化合物導(dǎo)致的細(xì)胞O2-水平升高是用氧化還原敏感性試劑可檢測的，該試劑(例如，二氫乙啶(DHE))與O2-特異性反應(yīng)。
在其他實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的化合物導(dǎo)致的細(xì)胞O2-水平升高在一段時(shí)間(例如，10分鐘)后減小。在其他實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的化合物導(dǎo)致的細(xì)胞O2-水平升高在一段時(shí)間后減小，在更后的時(shí)間(例如，10小時(shí))又升高。在其他實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的化合物導(dǎo)致的細(xì)胞O2-水平升高在1小時(shí)后減小，在4小時(shí)后又升高。在一些實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的化合物導(dǎo)致的細(xì)胞O2-水平先升高，然后細(xì)胞O2-水平降低，然后細(xì)胞O2-水平又一次升高時(shí)由于不同的細(xì)胞過程(例如，雙峰的細(xì)胞機(jī)制)。
在一些實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明導(dǎo)致細(xì)胞的線粒體Δψm斷裂。在一些實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明導(dǎo)致細(xì)胞的線粒體Δψm斷裂是用線粒體-選擇性電勢測定探針(例如，DiOC6)可檢測的。在其他實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明導(dǎo)致細(xì)胞的線粒體Δψm斷裂是在細(xì)胞O2-水平開始升高后發(fā)生的。
在一些實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明能使半胱天冬酶激活。在其他實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明導(dǎo)致細(xì)胞色素C從線粒體中釋放。在其他實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明改變細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞色素C水平。在其他實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明導(dǎo)致的細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞色素C水平改變是通過免疫印跡的細(xì)胞內(nèi)級分可檢測的。在一些實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明導(dǎo)致的細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞色素C水平降低是在一段時(shí)間(例如，10小時(shí))后可檢測的。在其他優(yōu)選的實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明導(dǎo)致的細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞色素C水平降低是在5小時(shí)后可檢測的。
在其他實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明導(dǎo)致線粒體PT孔開放。在一些實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明導(dǎo)致的細(xì)胞中細(xì)胞色素C釋放是與線粒體Δψm的斷裂一致的。在其他優(yōu)選的實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明導(dǎo)致在線粒體Δψm斷裂和細(xì)胞色素C釋放后，細(xì)胞O2-水平升高。在其他優(yōu)選的實(shí)施方案中，關(guān)注的是，細(xì)胞O2-水平升高是由本發(fā)明所產(chǎn)生的線粒體Δψm斷裂和細(xì)胞色素C釋放所導(dǎo)致的。
在其他實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明導(dǎo)致細(xì)胞的半胱天冬酶激活。在一些實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明導(dǎo)致的半胱天冬酶激活是用全-半胱天冬酶敏感性熒光底物(例如，F(xiàn)AM-VAD-fmk)可檢測的。在其他實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明導(dǎo)致的半胱天冬酶激活可用線粒體Δψm的斷裂來指示。在其他實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明導(dǎo)致出現(xiàn)亞二倍體DNA。在一些實(shí)施方案中，關(guān)注的是，半胱天冬酶激活稍微延遲了本發(fā)明導(dǎo)致的亞二倍體DNA的出現(xiàn)。
在一些實(shí)施方案中，關(guān)注的是，在線粒體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了本發(fā)明的分子靶點(diǎn)。在其他實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的分子靶點(diǎn)涉及線粒體ATP酶。細(xì)胞ROS的主要來源包括氧化還原酶和線粒體呼吸鏈(下文作MRC)。在一些實(shí)施方案中，關(guān)注的是，細(xì)胞色素C氧化酶(MRC的復(fù)合物IV)抑制劑(例如，NaN3)阻止了在細(xì)胞ROS水平中本發(fā)明依賴性的升高。在其他優(yōu)選的實(shí)施方案中，關(guān)注的是，MRC復(fù)合物III抑制劑(例如，F(xiàn)K506)的泛醇-細(xì)胞色素C還原酶組分阻止了在ROS水平中本發(fā)明依賴性的升高。
在一些實(shí)施方案中，關(guān)注的是，細(xì)胞ROS水平的升高是由本發(fā)明的化合物與線粒體內(nèi)的靶點(diǎn)結(jié)合而導(dǎo)致的。在一些實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的化合物氧化2′，7′-二氯二氫熒光素(下文作DCF)二乙酸鹽為DCF。DCF是氧化還原活躍的物質(zhì)，能夠產(chǎn)生ROS。在其他實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明導(dǎo)致的DCF產(chǎn)生速率在延遲一段時(shí)間后增加。
抗霉素A通過抑制泛醇-細(xì)胞色素C還原酶而產(chǎn)生O2-。在一些實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明以與抗霉素A相同的方式提高ROS產(chǎn)生的速率。在其他實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明在支持狀態(tài)3呼吸的好氧條件下以與抗菌素A相同的方式提高ROS產(chǎn)生的速率。在其他實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的化合物不能直接作用于MPT孔。在其他實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的化合物不能在亞細(xì)胞S15部分(例如，胞質(zhì)溶膠；微粒體)中產(chǎn)生大量的ROS cytosol；microsomes)。在其他實(shí)施方案中，關(guān)注的是，如果線粒體不在狀態(tài)4呼吸下，本發(fā)明的化合物不刺激ROS。
MRC復(fù)合物I-III是線粒體內(nèi)ROS的主要來源。在一些實(shí)施方案中，關(guān)注的是，依賴本發(fā)明導(dǎo)致的細(xì)胞ROS水平升高的主要來源是這些復(fù)合物抑制線粒體F1F0-ATP酶的結(jié)果。確實(shí)，在其他實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明抑制牛亞-線粒體顆粒(下文作SMPs)的線粒體ATP酶。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的化合物與線粒體F1F0-ATP酶的OSCP組分結(jié)合。
寡霉素是大環(huán)內(nèi)酯類天然產(chǎn)物，其與線粒體F1F0-ATP酶結(jié)合，誘導(dǎo)狀態(tài)3向4轉(zhuǎn)變，結(jié)果，產(chǎn)生了ROS(例如，O2-)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與線粒體F1F0-ATP酶的OSCP組分結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與OSCP和線粒體F1F0-ATP酶的F1亞單元之間的接點(diǎn)結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物結(jié)合F1亞單元。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的篩選分析允許檢測OSCP、F1或OSCP/F1接點(diǎn)的結(jié)合伴侶。OSCP是一種真正的熒光蛋白。在一些實(shí)施方案中，將本發(fā)明的受試化合物的溶液滴定到過表達(dá)OSCP的大腸桿菌樣品中導(dǎo)致原有的OSCP熒光消失。在其他實(shí)施方案中，熒光或放射性受試化合物可以用于直接的結(jié)合分析。在其他實(shí)施方案中，可以進(jìn)行競爭性結(jié)合實(shí)驗(yàn)。在該類型的分析中，分析受試化合物與Bz-423競爭結(jié)合例如OSCP的能力。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物通過調(diào)節(jié)OSCP基因(例如，改變OSCP基因的表達(dá))導(dǎo)致細(xì)胞的ROS水平升高減小并減少細(xì)胞凋亡。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明的功能在于改變ATP酶的分子運(yùn)動。
II.細(xì)胞增殖和細(xì)胞生長的調(diào)節(jié)劑 在一些實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的化合物和方法導(dǎo)致細(xì)胞增殖減少。在其他實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的化合物和方法導(dǎo)致細(xì)胞增殖和凋亡減輕。
III.示例性化合物 下文提供了本發(fā)明的示例性化合物。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供下式所述的化合物
包括其鹽、酯和前藥；和 包括其R和S對映體形式和外消旋混合物； 其中 X是鹵素(例如，Br、Cl、F)、烷基(例如，甲基、乙基、丙基(例如，異丙基)、丁基(例如，異丁基、仲丁基、叔丁基)、戊基、異戊基、新戊基、1-乙基丙基、3-甲基戊基、2，2-二甲基丁基、庚基、己基、辛基、3-乙基丁基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基)或取代的烷基； R2是氫或直鏈或支鏈烷基(例如，甲基、乙基、丙基(例如，異丙基)、丁基(例如，異丁基、仲丁基、叔丁基)、戊基、異戊基、新戊基、1-乙基丙基、3-甲基戊基、2，2-二甲基丁基、庚基、己基、辛基、3-乙基丁基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基)；和 R5是烷基(例如，甲基、乙基、丙基(例如，異丙基)，丁基(例如，異丁基、仲丁基、叔丁基)，戊基、異戊基、新戊基、1-乙基丙基、3-甲基戊基、2，2-二甲基丁基、庚基、己基、辛基、3-乙基丁基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基)或取代的烷基。
在一些實(shí)施方案中，R5是被一個或多個鹵素、烷氧基、-NH2，-N(H)(C1-C4烷基)或-N(C1-C4烷基)2取代的烷基。在一些實(shí)施方案中，R5是-(CH2)nN(R6)2、-(CH2)nCF3或-(CH2)nO(R6)2，其中n是1，2，3或4。
在一些實(shí)施方案中，該化合物如下表所述。
表1.
表2.
表3.
更具體地，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供下列化合物




此外，眾所周知，由于在雜環(huán)的C3位引入了手性，很多苯二氮雜

存在旋光異構(gòu)體。在文獻(xiàn)中，有時(shí)候?qū)⑿猱悩?gòu)體描述為L-或D-異構(gòu)體?？商娲?，該異構(gòu)體也稱作R-和S-對映體。為了簡便，這些異構(gòu)體稱作對映結(jié)構(gòu)體或?qū)τ丑w。本文所述的苯二氮

類化合物(及相關(guān)化合物)包括它們的對映體形式以及外消旋混合物。因此，本文使用術(shù)語“苯二氮雜

或其對映體”或類似術(shù)語是指所述或所指的苯二氮

類(和/或相關(guān)化合物)，包括其所有對映結(jié)構(gòu)體以及它們的外消旋混合物。
任意一種或多種該化合物可以用于治療各種與如所述的細(xì)胞死亡有關(guān)的失調(diào)性疾病。此外，任意一種或多種這些化合物可以用于抑制ATP水解，而不影響細(xì)胞合成或細(xì)胞存活。此外，任意一種或多種這些化合物可以在藥物組合物中與藥學(xué)可接受的載體或稀釋劑一起，與至少一種其他治療劑(例如，鉀通道開放劑、鈣通道阻滯劑、鈉氫交換抑制劑、抗心律失常藥、動脈粥樣硬化劑、抗凝血劑、抗血栓形成劑、促血栓溶解劑、纖維蛋白原拮抗劑、利尿劑、抗高血壓藥、ATP酶抑制劑、醛固酮受體拮抗劑、磷酸二酯酶抑制劑、抗糖尿病藥、抗消炎藥、抗氧化劑、血管發(fā)生調(diào)節(jié)劑、抗骨質(zhì)疏松劑、激素替代藥物、激素受體調(diào)節(jié)劑、口服避孕藥、抗肥胖劑、抗抑郁藥、抗焦慮藥、抗精神病藥、抗增殖劑、抗腫瘤藥物、抗?jié)兣c胃食管反流病藥、生長激素藥/或生長激素促分泌藥、擬甲狀腺藥、抗感染藥、抗病毒藥、抗菌劑、抗真菌劑、降膽固醇/降脂劑和血脂治療藥、及模擬缺血預(yù)處理和/或心肌頓抑的藥物、抗動脈粥樣硬化劑、抗凝血劑、抗血栓劑、抗高血壓藥、抗糖尿病藥物、和選自ACE抑制劑、AT-1受體拮抗劑、ET受體拮抗劑、ET/AII受體雙重拮抗劑和血管肽酶抑制劑的抗高血壓藥，以及選自GPIIb/IIIa阻斷劑、P2Y1和P2Y12拮抗劑、血栓素受體拮抗劑的抗血小板劑及阿司匹林)聯(lián)合使用。此外，任意一種或多種這些化合物可以用于治療患者與線粒體F1F0-ATP水解酶有關(guān)的疾病(例如，心肌梗塞、心室肥大、冠狀動脈疾病、非Q波MI、充血性心力衰竭、心律失常、不穩(wěn)定型心絞痛、慢性穩(wěn)定型心絞痛、普林茲邁托心絞痛、高血壓、間歇性跛行、外周閉塞性動脈病、血栓栓子性中風(fēng)的血栓性或血栓栓子性癥狀、靜脈血栓形成、動脈血栓形成、腦血栓形成、肺動脈栓塞、腦動脈栓塞、血栓形成傾向、彌散性血管內(nèi)凝血、再狹窄、心房纖維顫動、心室增大、動脈粥樣硬化性血管病、粥樣硬化斑塊破裂、粥樣硬化斑塊形成、移植性動脈粥樣硬化、血管重構(gòu)性動脈粥樣硬化、癌癥、手術(shù)、炎癥、全身性感染、人造表面、介入性心臟學(xué)、固定、藥物、妊娠和胎兒損傷，以及糖尿病并發(fā)癥包括視網(wǎng)膜病、腎病和神經(jīng)病變)。上述化合物還可用于藥物篩選試驗(yàn)和其他診斷和研究方法。
在一些實(shí)施方案中，一種或多種示例性化合物可以與選自的下列藥物的治療劑聯(lián)合使用鉀通道開放劑、鈣通道阻滯劑、鈉氫交換抑制劑、抗心律失常藥(例如，索他洛爾、多非利特、胺碘酮、阿米利特、伊布利特、維拉帕米)、抗動脈粥樣硬化劑、抗凝血劑、抗血栓形成劑、促血栓溶解劑、纖維蛋白原拮抗劑、利尿劑、抗高血壓藥(例如卡托普利、賴諾普利、佐芬普利、雷米普利、福辛普利、依那普利、ceranopril、西拉普利、地拉普利、噴托普利、喹那普利、奧馬曲拉、gemopatrilat、氯沙坦、依貝沙坦、纈沙坦、sitaxsentan、阿曲生坦)、ATP酶抑制劑、醛固酮受體拮抗劑、磷酸二酯酶抑制劑、抗糖尿病藥物、抗炎劑、抗氧化劑、血管發(fā)生調(diào)節(jié)劑、抗骨質(zhì)疏松劑、激素替代藥、激素受體調(diào)節(jié)劑、口服避孕藥、抗肥胖劑、抗抑郁藥、抗焦慮藥、抗精神病藥、抗增殖劑、抗腫瘤藥、抗?jié)兣c胃食管反流病藥、生長激素劑和/或生長激素促分泌藥、擬甲狀腺藥、抗感染藥、抗病毒藥、抗菌劑、抗真菌劑、降膽固醇/降脂劑和血脂治療藥、及模擬缺血預(yù)處理和/或心肌頓抑的藥物、抗動脈粥樣硬化劑、抗凝血劑、抗血栓劑、抗高血壓藥、抗糖尿病藥物、和選自ACE抑制劑、AT-1受體拮抗劑、ET受體拮抗劑、ET/AII受體雙重拮抗劑和血管肽酶抑制劑的抗高血壓藥，以及抗血小板劑(血小板抑制劑)包括GPIIb/IIIa阻斷劑、P2Y1和P2Y12拮抗劑、血栓素受體拮抗劑、阿昔單抗、依替巴肽、替羅非班、氯吡格雷、toclopidine、CS 747、伊非曲班及阿司匹林。在某些情況下，治療劑是普羅帕酮、普萘洛爾、索他洛爾、多非利特、胺碘酮、阿米利特、伊布利特、維拉帕米、卡托普利、賴諾普利、佐芬普利、雷米普利、福辛普利、依那普利、eranopril、西拉普利、地拉普利、噴托普利、喹那普利、奧馬曲拉、gemopatrilat、氯沙坦、依貝沙坦、纈沙坦、sitaxsentan、阿曲生坦、維拉帕米、硝苯地平、地爾硫、氨氯地平及咪拉地爾、洋地黃、烏巴因、氯噻嗪、氫氯噻嗪、氟甲噻嗪、氫氟噻嗪、芐氟噻嗪、甲基氯噻嗪、三氯噻嗪、泊利噻嗪、甲氯噻嗪、依他尼酸替尼酸、氯噻酮、呋塞米、musolimine、布美他尼、triamtrenene、阿米洛利、螺內(nèi)酯、aplirinone、潘生丁、西洛他唑、西地那非、伊非曲班、吡考他胺、酮色林、氯吡格雷、吡考他胺、羅蘇伐他汀、atavastatin、visastatin、消膽胺、CP-529414、依諾肝素、依諾肝素dalteparinnadolol、卡維地洛、沙丁胺醇、特布他林、福莫特羅、沙美特羅、比托特羅、吡布特羅、非諾特羅、異丙托溴銨、二甲雙胍、阿卡波糖、瑞格列奈、glimpepiride、格列本脲、格列本脲、格列吡嗪、格華止、曲格列酮、吡格列酮、GLP-1、奈法唑酮、舍曲林、地西泮、勞拉西泮、丁螺環(huán)酮、鹽酸羥羥萘酸、阿卡波糖、內(nèi)皮抑素、普羅布考、BO-653、維生素A、維生素E、AGI-1067、阿侖膦酸鹽、雷洛昔芬、奧利司他、環(huán)孢素A、紫杉醇、FK506、阿霉素、法莫替丁、雷尼替丁、奧美拉唑、雌激素、雌二醇、潘生丁、西洛他唑、西地那非、酮色林、紫杉酚、順鉑、紫杉醇、阿霉素、埃博霉素、卡鉑、色甘酸鈉、奈多羅米、茶堿、齊留通、扎魯司特、孟魯司特、普侖司特、倍氯米松、曲安西龍、布地奈德、氟替卡松、氟尼縮松、潑尼松；地塞米松、依那西普、阿司匹林、消炎痛、普伐他汀、辛伐他汀、阿托伐他汀、氟伐他汀、西立伐他、AZ4522、伊伐他汀、羅蘇伐他汀、atavastatin、visastatin、阿昔單抗、依替巴肽、替羅非班、氯吡格雷、噻氯匹定、CS747、伊非曲班、阿司匹林；卡立泊來德、鏈激酶、瑞替普酶、活化酶、拉諾替普酶、尿激酶、prourokinse、替奈普酶、拉諾替普酶、阿尼普酶、依米那酶、來匹盧定、阿加曲班、XR-330、T686、抗α-2-纖溶酶抗體、或doesdipyridanmol。
在下面的合成路線中將會說明制備本文所述的苯二氮

類化合物的方法。下面給出合成路線是出于解釋本發(fā)明的目的，而不是限制本發(fā)明的范圍或精神。
使用合成路線1和2所述的合成途徑來構(gòu)建苯二氮

核。這些途徑的原料5-氯靛紅酸酐(A)是商業(yè)可購得的。合成路線1所述的合成途徑是從在酰胺的氮原子上插入保護(hù)基(例如，對甲氧基芐基(PMB))開始的，或者可替代地，在苯二氮

類最終產(chǎn)物的該位置上將氮原子烷基化以插入所需的取代基。將A烷基化以得到中間體B可以通過用無機(jī)堿例如碳酸鈉或氫化鈉，和烷基或芐基鹵化物處理A來實(shí)現(xiàn)。大量的烷基鹵化物和芐基鹵化物都是本領(lǐng)域已知的，我們認(rèn)為它們可以用于該合成途徑。
合成路線1所述的第二個步驟包括將靛紅酸酐B與氨基酸例如甘氨酸在有機(jī)溶劑例如乙酸或N，N-二甲基甲酰胺中混合，加熱該混合物至約60-130℃范圍的溫度下約12-36小時(shí)?？商娲兀梢砸詢刹椒▉磉M(jìn)行該縮合反應(yīng)。第一步包括將氨基酸例如苯丙胺衍生物與靛紅酸酐B在含或不含水的溶劑例如吡啶或乙腈中混合約12-18小時(shí)，溫度范圍為約20-100℃，然后真空除去溶劑。第二步包括加入有機(jī)溶劑，例如乙酸或N，N-二甲基甲酰胺，加熱該混合物至溫度范圍為約80-130℃約12-24小時(shí)。
合成路線1.
合成路線2的合成途徑描述了一種構(gòu)建苯二氮

核并插入C3-官能團(tuán)的一步法。該反應(yīng)包括將氨基酸例如甘氨酸與靛紅酸酐例如A在有機(jī)溶劑例如乙酸或N，N-二甲基甲酰胺中混合，加熱該混合物至溫度范圍為約60-130℃約12-36小時(shí)?？商娲?，可以以兩步法來進(jìn)行該縮合反應(yīng)。第一步包括將氨基酸例如苯丙胺衍生物與靛紅酸酐在含或不含水，包含三乙胺的溶劑例如吡啶或乙腈中混合約12-18小時(shí)，溫度范圍為約20-100℃，然后真空除去溶劑。第二步包括加入有機(jī)溶劑，例如乙酸或N，N-二甲基甲酰胺，加熱該混合物至溫度范圍為約80-130℃約12-24小時(shí)以提供中間體H。需要注意的是，可以通過弱堿中間體H與對甲氧基芐基氯反應(yīng)在N1-位插入保護(hù)基。
合成路線2.
如合成路線3所示，該合成的下一步包括插入C3和/或C5官能團(tuán)。用氯化劑例如在用N，N-二甲基苯胺緩沖的甲苯中的磷酰氯處理化合物C，得到酰亞胺氯D。該反應(yīng)一般是在較高溫度(例如90℃)下進(jìn)行數(shù)小時(shí)(例如，4-18小時(shí))。其他氯化劑是本領(lǐng)域已知的，我們認(rèn)為其可以用于該合成途徑。
可以由化合物D，使用合成路線3所示的兩種合成策略中的一種來制備化合物G。在第一個途徑中，用強(qiáng)堿例如，叔丁氧鉀處理化合物D，然后用芐基鹵化物處理，得到中間體F。用Suzuki交聯(lián)條件，在適當(dāng)?shù)拟Z催化劑存在下使用硼酸或硼酸酯偶合伴侶可以將酰亞胺氯F轉(zhuǎn)變?yōu)榛衔颎。在Suzuki交聯(lián)條件中使用的很多含硼試劑是本領(lǐng)域已知的，我們認(rèn)為其可以用于該合成途徑。但是，可以在標(biāo)準(zhǔn)條件下由必要的芳基鹵化物(例如碘化物或溴化物)來制備無法商業(yè)購得的含硼試劑，例如，在包含催化量的鈀催化劑的熱1，4-二噁烷中用聯(lián)(頻那醇)二硼處理。
在第二個途徑中，在Suzuki交聯(lián)條件下，將化合物D與硼酸或硼酸酯偶合伴侶混合，形成中間體E。該方案使用在側(cè)鏈上不包含酸性質(zhì)子的芳基硼酸酯是特別好的。接著，在C3位上將中間體E烷基化，得到C3-芳烷基。通過在較低溫度例如，-78℃至-20℃下用強(qiáng)堿例如，叔丁氧鉀處理中間體E，接著加入芐基鹵化物來進(jìn)行烷基化步驟。很多的芐基鹵化物是本領(lǐng)域已知的，我們認(rèn)為其可以用于該合成途徑。但是，可以通過有機(jī)合成領(lǐng)域的技術(shù)人員熟悉的數(shù)種途徑之一來制備不可商業(yè)購得的芐基鹵化物例如，還原商業(yè)可購得的羧酸(例如，使用氫化鋰鋁還原)、形成適當(dāng)?shù)姆枷憔徍蜔o，然后以一步或兩步來還原和轉(zhuǎn)化所得到的醇得到鹵化物，例如經(jīng)磺酸酯。
合成路線3.
通過修飾與化合物G的C3-芳烷基相連的官能團(tuán)，可以將通過上述方法制備的化合物的寬度進(jìn)一步擴(kuò)展。例如，如合成路線4所示，關(guān)注的是，可以在鐵催化劑存在下，使用烷基格氏試劑將與芳烷基相連的鹵素原子轉(zhuǎn)變?yōu)橥榛?。進(jìn)行該類型反應(yīng)的方法是本領(lǐng)域已知的。
合成路線4.
在其中化合物G包含一個或多個保護(hù)基的情況下，可以用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)脫保護(hù)方法除去保護(hù)基。參見，例如，Greene，T.W.；Wuts，P.G.M.Protective Groups in Organic Synthesis，2nded.；WileyNew York，1991。例如，使用AlCl3或硝酸鈰銨(CAN)來進(jìn)行N1-位的氮保護(hù)基例如對甲氧基芐基(PMB)的除去。類似地，使用BBr3、EtSH或AlCl3產(chǎn)生酚來進(jìn)行Ar1基中苯酚醚的去甲基化或去芐基化。代表性的脫保護(hù)方法如合成路線5所示。
合成路線5.
Ar1基中具有芳基脲的化合物可以通過合成路線6和7所示的途徑來制備。這兩個合成路線的合成都是使用可以如上制備的化合物D開始的。在合成路線6中，酰亞胺氯D是通過在較低溫度例如，-78℃至-20℃下用強(qiáng)堿例如，叔丁氧鉀處理，接著加入芐基鹵化物來處理的。然后在Suzuki交聯(lián)條件下用芳基硼酸酯或硼酸處理中間體F，得到中間體J。在其中R基是保護(hù)基的情況下(例如，當(dāng)制備N1-H化合物時(shí))，除去保護(hù)基，這些得到化合物K。最后，除去boc保護(hù)基，通過與三光氣和烷基胺反應(yīng)將對氨基苯基轉(zhuǎn)變?yōu)閷﹄灞交?。同時(shí)，如合成路線6所示，可以將脲基插入到Suzuki交聯(lián)反應(yīng)所使用的芳基硼酸酯或硼酸上，這是由酰亞胺氯F得到最終產(chǎn)物L(fēng)的更為直接的途徑。這些方法為在后續(xù)反應(yīng)中轉(zhuǎn)變R5基提供了便利。
合成路線6.
在作為制備中間體J的可替代策略的合成路線7中，在Suzuki交聯(lián)條件下用芳基硼酸酯或硼酸處理酰亞胺氯D，得到中間體I。然后，在較低溫度例如，-78℃至-20℃下用強(qiáng)堿例如，叔丁氧鉀處理中間體I，接著加入芐基鹵化物，得到化合物J。
合成路線7.
很多芐基鹵化物是本領(lǐng)域已知的，我們認(rèn)為其可以用于該合成途徑。但是，可以通過有機(jī)合成領(lǐng)域的技術(shù)人員熟悉的數(shù)種途徑之一來制備不可商業(yè)購得的芐基鹵化物例如，還原商業(yè)可購得的羧酸(例如，使用氫化鋰鋁還原)、形成適當(dāng)?shù)姆枷慊衔?，然后以一步或兩步來還原和轉(zhuǎn)化所得到的醇得到鹵化物，例如經(jīng)磺酸酯。類似地，在Suzuki交聯(lián)條件中使用的很多含硼試劑是本領(lǐng)域已知的，我們認(rèn)為其可以用于該合成途徑。但是，可以在標(biāo)準(zhǔn)條件下由必要的芳基鹵化物(例如碘化物或溴化物)來制備無法商業(yè)購得的含硼試劑，例如，在包含催化量的鈀催化劑的熱1，4-二噁烷中用聯(lián)(頻那醇)二硼處理。
如合成路線8所示，可以用鈀偶合條件來制備具有C5-苯并[d]咪唑基的苯二氮雜

化合物。在其中R基是保護(hù)基的情況下，可以用脫保護(hù)劑處理化合物M。例如，當(dāng)R是PMB時(shí)，可以用AlCl3處理化合物M，得到相應(yīng)的酰胺。
合成路線8.
IV.藥物組合物、制劑、和示例性給藥途徑和對劑量的考慮 下面提供各種所關(guān)注的藥物和藥物組合物的示例性的實(shí)施方案。
A.制備藥物 關(guān)注的是，本發(fā)明的化合物用于制備治療各種與細(xì)胞死亡失調(diào)、異常細(xì)胞生長和增生有關(guān)的疾病的藥物。
此外，關(guān)注的是，該化合物也用于制備治療其他疾病的藥物，其中該化合物的有效性是已知的或是可預(yù)測的。這些疾病包括但不限于，神經(jīng)性疾病(例如，癲癇)或神經(jīng)肌肉障礙。制備本發(fā)明的化合物的藥物的方法和技術(shù)是本領(lǐng)域公知的。下面描述示例性的藥物制劑和遞送途徑。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將會意識到，可以通過使用標(biāo)準(zhǔn)藥物制備方法來制備本文所述的任意一種或多種化合物，包括很多特定的實(shí)施方案。這些藥物可以通過藥學(xué)領(lǐng)域公知的遞送方法來遞送給受試者。
B.示例性的藥物組合物和制劑 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，該組合物單獨(dú)施用，而在一些其他的實(shí)施方案中，該組合物優(yōu)選存在于藥物組合物中，該藥物組合物包含至少一種如上定義的活性成分/劑，和固體載體，或者可替代地，與一種或多種藥學(xué)可接受的載體和任選的其他治療劑。各種載體在一定意義上必須是“可接受的”它與制劑的其他成分相容并且對于受試者無害。
所關(guān)注的制劑包括適合口服、直腸、鼻腔、局部(包括經(jīng)皮、口腔和舌下)、陰道、胃腸外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈和真皮內(nèi))和肺部施用的那些。在一些實(shí)施方案中，制劑便利地以單位劑型存在，并且通過藥學(xué)領(lǐng)域的任何已知方法來制備。這些方法包括將活性成分與構(gòu)成一種或多種助劑的載體結(jié)合的步驟。一般地，制備該制劑，包括均勻和直接地將活性成分與液體載體或精細(xì)分開的固體載體或兩者結(jié)合(例如，混合)，然后如果必要將產(chǎn)品塑型。
適合口服的本發(fā)明的制劑可以作為分離的單位存在，例如膠囊、扁膠囊或片劑，其中每個優(yōu)選包含預(yù)定量的活性成分；作為粉末或顆粒；作為在水性或非水性液體中的溶液或混懸液；作為水包油型液體乳劑或油包水型液體乳劑。在其他實(shí)施方案中，活性成分是作為大丸劑、藥糖劑或糊劑等等存在。
在一些實(shí)施方案中，片劑包含至少一種活性成分和任選的一種或多種助劑/載體，通過壓縮或模壓各成分來制備。在一些實(shí)施方案中，制備壓制片，包括在適當(dāng)?shù)臋C(jī)器中壓制自由流動形式例如粉末或顆粒狀的活性成分，任選與粘合劑(例如聚維酮、明膠、羥丙基甲基纖維素)、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(例如，乙醇淀粉鈉、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉)、表面活性劑或分散劑混合。制備模壓片，包括在適當(dāng)及其中模壓用惰性液體稀釋劑潤濕的粉末狀的化合物(例如活性成分)。片劑可以任選包衣或刻痕，可以配制以緩釋或控釋活性成分，使用，例如不同份數(shù)的羥丙基甲基纖維素以得到期望的釋放形式。片劑可以任選具有腸包衣，以在胃以外的消化道部分釋放。
適合在口腔中局部施用的制劑包括錠劑，其包含在芳香基質(zhì)，通常是蔗糖和阿拉伯膠或西黃蓍膠中的活性物質(zhì)；軟錠劑，其包含在惰性基質(zhì)，例如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠中的活性物質(zhì)；以及漱口劑，包含在適當(dāng)液體載體中的活性成分。
根據(jù)本發(fā)明局部施用的藥物組合物任選配制成軟膏、乳膏、混懸液、洗劑、粉末、溶液、糊劑、凝膠、噴霧劑、氣霧劑或油。在可替代的實(shí)施方案中，局部用制劑包括貼劑或敷料，例如用活性成分和任選的一種或多種賦形劑或稀釋劑浸透的繃帶或粘膏。在一些實(shí)施方案中，該局部用制劑包含增強(qiáng)活性成分通過皮膚或其他受影響區(qū)域吸收或滲透的化合物。這些皮膚滲透增強(qiáng)劑的例子包括二甲亞砜(DMSO)及相關(guān)類似物。
如果需要，乳膏基質(zhì)的水相包括，例如至少約30％w/w的多元醇，即，具有2個或更多個羥基的醇例如丙二醇、丁-1，3-二醇、甘露醇、山梨醇、甘油和聚乙二醇及其混合物。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的油相乳劑是以已知方式由已知成分構(gòu)成的。該相典型地包含單一的乳化劑(也稱作利瀉劑)，在一些實(shí)施方案中也期望該相還包含至少一種乳化劑和脂肪或油或脂肪和油的混合物。
優(yōu)選地，包括親水性乳化劑和親油性乳化劑以作為穩(wěn)定劑。在一些實(shí)施方案中，優(yōu)選包含油和脂肪。含或不含一種或多種穩(wěn)定劑的一種或多種乳化劑構(gòu)成所謂的乳化蠟，該蠟與油和/或脂肪構(gòu)成所謂的乳化膏基質(zhì)，形成了乳膏制劑的油分散相。
適合用于本發(fā)明的制劑的利瀉劑和乳劑穩(wěn)定劑包括吐溫60、司盤80、鯨脂醇、肉豆蔻醇、硬脂酸甘油酯和十二烷基硫酸鈉。
該制劑的適當(dāng)?shù)挠秃椭镜倪x擇是基于實(shí)現(xiàn)所期望的性質(zhì)(例如，化妝用的性質(zhì))，因?yàn)榛钚猿煞衷诖蠖鄶?shù)可能用于藥物乳劑的油中的溶解性是非常低的。因此，乳膏優(yōu)選應(yīng)當(dāng)是非油膩的、未著色的和可洗的產(chǎn)品，具有適當(dāng)?shù)恼承砸员苊鈴墓芑蚱渌萜髦行孤?。可以使用直鏈或支鏈、單或二元烷基酯例如二異己二酸酯、硬脂酸異鯨蠟酯、椰子脂肪酸的丙二醇二酯、肉豆蔻酸異丙酯、油酸癸酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸丁酯、棕櫚酸2-乙基己酯或稱作Crodamol CAP的支鏈酯的混合物，后三種是優(yōu)選的酯。根據(jù)所期望的性質(zhì)，這些可以單獨(dú)或組合使用。可替代地，可以使用高熔點(diǎn)的脂例如白軟石蠟和/或液狀石蠟或其他礦物油。
適合在眼部局部施用的制劑包括滴眼劑，其中活性成分溶于或懸浮于適當(dāng)?shù)妮d體，特別是該活性劑的水性溶劑中。
直腸施用的制劑可以作為栓劑存在，其具有適當(dāng)?shù)幕|(zhì)，包括例如可可脂或水楊酸酯。
適合陰道施用的制劑可以作為陰道栓劑、乳膏、凝膠劑、糊劑、泡沫或噴霧劑存在，除了活性劑外，還包含本領(lǐng)域已知的適當(dāng)?shù)妮d體。
適合鼻內(nèi)施用的其中載體是固體的制劑包括粗粉，其粒徑范圍是約20至約500微米，以鼻嗅的方式施用，即，從靠近鼻子的粉末容器中通過鼻道迅速吸入(例如，用力)。用于施用的其中載體是液體的其他適當(dāng)制劑包括但不限于，鼻噴霧劑、滴劑或通過噴霧器的噴霧劑、包含藥物的水性或油性溶液。
適合胃腸外施用的知己包含水性和非水性的等張無菌注射溶液，其包含抗氧化劑、緩沖劑、制菌劑和使制劑與預(yù)期的受者的血液等張的溶質(zhì)；以及水性和非水性的無菌混懸液，其可以包含懸浮劑和增稠劑，以及計(jì)劃使化合物靶向于血液組分或者一個或多個器官的脂質(zhì)體或其他微粒系統(tǒng)。在一些實(shí)施方案中，制劑存在于/配制于單位劑量或多劑量的密封容器中，例如安瓿和玻璃瓶中，可以貯存在冷凍-干燥(凍干)條件下，僅需要在使用前立即加入無菌液體載體，例如注射用水?？梢杂缮鲜龇N類的無菌粉末、顆粒和片劑來制備立即可用的注射溶液和混懸液。
優(yōu)選的單位劑量制劑是包含如上所述的每日劑量或單位，每日亞劑量或適當(dāng)部分的藥物的那些。
應(yīng)當(dāng)理解的是，除了上文特別提及的成分外，本發(fā)明的制劑可以包括本領(lǐng)域常規(guī)用于所討論種類的制劑的其他試劑，例如，適合口服的試劑可以包括其他試劑，例如增甜劑、增稠劑和調(diào)味劑。同時(shí)可以預(yù)期的是，本發(fā)明的藥物、組合物和方法可以與其他適當(dāng)?shù)慕M合物和療法聯(lián)合。任選的其他制劑包括食物添加劑(適當(dāng)?shù)脑鎏饎?、調(diào)味劑、著色劑等等)、植物營養(yǎng)物(例如，亞麻種子油)、礦物質(zhì)(例如，Ca、Fe、K等等)、維生素和其他可接受的組合物(例如，共軛亞油酸)、增充劑和穩(wěn)定劑等等。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物以未溶解形式提供的，或者是在非水性溶液(例如，乙醇)中?？梢赃@樣產(chǎn)生化合物以通過產(chǎn)生特定的晶體多晶形物與制劑相容。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供給受試者施用所述化合物的說明。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供使用包含在試劑盒中的組合物治療特征在于細(xì)胞或組織中凋亡過程失調(diào)的疾病的說明(例如，提供劑量、給藥途徑、主治醫(yī)生將患者的特定特征與治療行動過程相聯(lián)系的決策樹)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供使用包含在試劑盒中的組合物治療免疫性疾病(例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、移植物抗宿主病、重癥肌無力、

綜合征等等)、慢性炎性疾病(例如，牛皮癬、哮喘和克羅恩病)，過度增殖性疾病(例如，腫瘤、B細(xì)胞淋巴瘤、T細(xì)胞淋巴瘤等等)、病毒感染(例如，皰疹病毒、乳頭瘤病毒、HIV)和其他疾病例如骨關(guān)節(jié)炎和動脈粥樣硬化等等的說明。
C.示例性給藥途徑和對劑量的考慮 各種遞送系統(tǒng)都是已知的，可以用于施用本發(fā)明的治療劑(例如，上述III部分所述的示例性化合物)。例如，包封在脂質(zhì)體、微粒、微囊、載體介導(dǎo)的細(xì)胞攝粒作用等等。遞送的方法包括但不限于，動脈內(nèi)、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、鼻內(nèi)和口腔途徑。在特定的實(shí)施方案中，期望在需要治療的區(qū)域局部施用本發(fā)明的藥物組合物；這可以通過，例如但不限于，手術(shù)期間的局部注入、注射或通過導(dǎo)管。
關(guān)注的是，所鑒定的藥物可以施用于易患或者有發(fā)生靶細(xì)胞病理學(xué)生長和相關(guān)疾病危險(xiǎn)的受試者或個人。當(dāng)將該藥物施用于受試者例如小鼠、大鼠或人類患者時(shí)，可以將該藥物加入到藥學(xué)可接受的載體中，全身或局部施用于該受試者。為確定可以有利地治療的患者，可以從患者身上取組織樣本，分析細(xì)胞對于該藥物的敏感性。
治療量是根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定的，隨著要治療的病理、要治療的受試者以及藥物的效力和毒性而各異。當(dāng)遞送給動物時(shí)，該方法用于進(jìn)一步確認(rèn)該藥物的效力。動物模型的一個例子是MLR/MpJ-lpr/lpr(“MLR-lpr”)(可購自Jackson Laboratories，BarHarbor，Maine)。MLR-lpr小鼠發(fā)生系統(tǒng)性自身免疫性疾病?？商娲?，可以通過誘導(dǎo)腫瘤生長來發(fā)展出其他動物模型，例如，通過給裸小鼠靜脈接種本文所述的約105至約109的增殖性癌或靶細(xì)胞。當(dāng)確定出現(xiàn)腫瘤時(shí)，將本文所述的化合物施用，例如通過靜脈注射于腫瘤周圍。使用venier測徑器每周2次在平面進(jìn)行腫瘤測定以確定腫瘤大小的減小。如果適當(dāng)也可以使用其他動物模型。用于上述疾病和病癥的這些動物模型是本領(lǐng)域公知的。
在一些實(shí)施方案中，在整個治療過程中，連續(xù)或間隔地一劑量體內(nèi)施用是有效的。確定施用的最有效手段和劑量的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，根據(jù)用于治療的組合物、治療目的、要治療的靶分子和要治療的受試者而各異。通過主治醫(yī)生選擇的劑量水平和模式來進(jìn)行單次或多次施用。
本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易即可確定適當(dāng)?shù)慕o藥制劑和施用該藥物的方法。優(yōu)選地，該化合物的施用量是約0.01mg/kg至約200mg/kg，更優(yōu)選約0.1mg/kg至約100mg/kg，甚至更優(yōu)選約0.5mg/kg至約50mg/kg。當(dāng)本文所述的化合物與其他藥物(例如，作為致敏劑)聯(lián)合施用時(shí)，有效量可以低于單獨(dú)使用該藥物時(shí)的量。
該藥物組合物可以口服、鼻內(nèi)施用、胃腸外施用或通過吸入療法施用，可以采取片劑、錠劑、顆粒、膠囊、丸劑、安瓿、栓劑或氣霧劑的形式。它們也可以采取活性成分在水性或非水性稀釋劑中的混懸液、溶液和乳劑、顆?；蚍勰┑男问?。除了本發(fā)明的藥物外，該藥物組合物也可以包含其他藥學(xué)活性化合物或數(shù)種本發(fā)明的化合物。
更特別地，本發(fā)明的藥物在本文中也稱作活性成分，可以通過任何適當(dāng)?shù)耐緩绞┯?，包括但不限于，口服、直腸、鼻、局部(包括但不限于，經(jīng)皮、氣霧劑、口腔和舌下)、陰道、胃腸外(包括但不限于皮下、肌內(nèi)、靜脈和真皮內(nèi))和肺部。同時(shí)應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到，優(yōu)選的途徑根據(jù)受者的情況和年齡，以及要治療的疾病而各異。
理想地，應(yīng)當(dāng)施用藥物以在疾病位點(diǎn)實(shí)現(xiàn)活性化合物的峰濃度。這可以通過例如靜脈注射任選在鹽水中的該藥物或口服，例如作為包含該活性成分的片劑、膠囊或糖漿來實(shí)現(xiàn)。
可以通過連續(xù)輸注以在疾病組織內(nèi)提供治療量的活性成分來維持所期望的藥物的血液水平。可以考慮使用操作組合來提供治療性的組合，與單獨(dú)施用各個治療性化合物或藥物時(shí)的所需量相比，其需要的各抗病毒劑組分的總劑量較低，因此減少了不良反應(yīng)。
D.示例性的聯(lián)合施用途徑和對劑量的考慮 本發(fā)明也包括涉及聯(lián)合施用本文所述的化合物和一種或多種其他活性劑的方法。確實(shí)，本發(fā)明一個進(jìn)一步的方面提供通過聯(lián)合施用本發(fā)明的化合物增強(qiáng)現(xiàn)有技術(shù)的療法的方法和/或藥物組合物。在聯(lián)合施用的方法中，可以同時(shí)或連續(xù)施用這些藥物。在一個實(shí)施方案中，在施用其他活性劑前施用本文所述的化合物。藥物制劑和施用的方式可以是任意的上述那些。此外，可以使用不同的方式或不同的制劑來分別施用兩種或更多種聯(lián)合施用的化學(xué)藥物、生物制劑或放射。
要聯(lián)合施用的一種或多種藥物取決于要治療的疾病的類型。例如，當(dāng)要治療的疾病是癌癥時(shí)，其他藥物可以是化療劑或放射。當(dāng)要治療的疾病是免疫性疾病時(shí)，其他藥物可以是免疫抑制劑或抗炎劑。當(dāng)要治療的疾病是慢性炎性疾病時(shí)，其他藥物可以是抗炎劑。聯(lián)合施用的其他藥物，例如抗癌劑、免疫抑制劑、抗炎劑是任何本領(lǐng)域公知的藥物，包括但不限于當(dāng)前在臨床上使用的那些。確定放射治療的適當(dāng)類型和劑量也在本領(lǐng)域的技術(shù)范圍內(nèi)或者可以相對減輕來確定。
治療各種與細(xì)胞凋亡異常有關(guān)的疾病一般會受到下面兩種主要因素的限制(1)產(chǎn)生藥物耐受性和(2)已知治療劑的毒性。在一些癌癥中，例如，已經(jīng)顯示出對于化學(xué)藥物和放射療法的耐受與對細(xì)胞凋亡的抑制有關(guān)。一些治療劑具有有害的副作用，包括非特異性淋巴細(xì)胞毒性、腎和骨髓毒性。
本文所述的方法解決了這些問題。關(guān)注的是，需要增加給藥以實(shí)現(xiàn)治療益處的藥物耐受性是通過聯(lián)合施用本文所述的化合物和已知藥物來實(shí)現(xiàn)的。關(guān)注的是，本文所述的化合物使靶細(xì)胞對已知藥物致敏(反之亦然)，因此，只需要較少的這些藥物就能實(shí)現(xiàn)治療益處。
關(guān)注的是，要求保護(hù)的化合物的致敏功能克服了與已知療法的毒性效果相關(guān)的問題。在其中已知藥物有毒性的情況中，在所有情況下都需要限制施用劑量，特別是在藥物耐受性已經(jīng)提高了必要的給藥量的情況下。關(guān)注的是，當(dāng)所要保護(hù)的化合物與已知藥物聯(lián)合施用時(shí)，它們降低了所需的劑量，接著見底了有害效果。此外，由于所關(guān)注的要保護(hù)的化合物在大劑量時(shí)有效而且無毒性，因此與已知的有毒性療法相比，聯(lián)合施用相應(yīng)的更多種這些化合物能實(shí)現(xiàn)期望的效果，同時(shí)減小毒性效果。
V.藥物篩選 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，篩選本發(fā)明的化合物和其他可能有用的化合物與線粒體ATP合酶復(fù)合物的寡霉素敏感性參照蛋白(OSCP)部分的親和力。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過測定它們與重組OSCP蛋白的親和力來選擇在本發(fā)明的方法中使用的化合物。很多測定藥物和其他小分子與受體親和力的適當(dāng)篩選方法是本領(lǐng)域已知的。在一些實(shí)施方案中，親和力篩選是在體外系統(tǒng)中構(gòu)建的。在其他實(shí)施方案中，這些篩選是在體內(nèi)或取自活體的系統(tǒng)中構(gòu)建的。盡管在一些實(shí)施方案中，將施用本發(fā)明的化合物后ATP的細(xì)胞內(nèi)水平定量提供了該方法效力的標(biāo)志，但本發(fā)明不需要細(xì)胞內(nèi)ATP或pH水平的定量。
其他實(shí)施方案涉及測定細(xì)胞和/或組織中的超氧化物水平(例如，細(xì)胞內(nèi))以測定本發(fā)明特別關(guān)注的方法和化合物的有效性。在該方面，本領(lǐng)域技術(shù)人員將會意識到并且能夠提供很多用于測定細(xì)胞和/或組織中的超氧化物水平的測定和方法。
在一些實(shí)施方案中，關(guān)注基于結(jié)構(gòu)的病毒篩選方法來預(yù)測本發(fā)明的化合物與OSCP的親和力。在一些實(shí)施方案中，由分子模擬軟件(例如，MacroModel)來預(yù)測化合物結(jié)構(gòu)。
可以使用任何適當(dāng)?shù)姆治鰜頊y定本發(fā)明的示例性化合物與OSCP的結(jié)合或親和力的比例。例子包括但不限于，使用示例性的化合物競爭性結(jié)合、表面電漿子共振(SPR)和放射-免疫沉淀分析(Lowman等人，J.Biol.Chem.26610982[1991])。表面電漿子共振技術(shù)設(shè)計(jì)用傳導(dǎo)性金屬例如金、銀、鉻或鋁的薄膜包被的表面，其中可以以特定的角度(稱作表面電漿子共振角)在金屬玻璃界面上通過一束入射光來誘導(dǎo)電磁波(稱作表面電漿子)。改變在捕獲的大分子結(jié)合后在溶液和金屬表面之間的界面區(qū)的屈光指數(shù)會導(dǎo)致可直接測定的SPR角的變化，或者導(dǎo)致從金屬表面之外入射的光量改變。這些改變可能與SPR裝置表面結(jié)合的分子的質(zhì)量和其他光學(xué)特性直接相關(guān)。已經(jīng)公開了基于這些原理的數(shù)種生物傳感器(參見例如，WO 90/05305)。還有幾種商業(yè)可購得的SPR生物傳感器(例如，BiaCore，Uppsala，Sweden)。
在一些實(shí)施方案中，在細(xì)胞培養(yǎng)或體內(nèi)(例如，非人的哺乳動物或人)篩選化合物調(diào)節(jié)線粒體ATP合酶活性的能力?？梢允褂萌魏芜m當(dāng)?shù)臏y定，包括但不限于，細(xì)胞增殖分析(可購自例如，Promega，Madison，WI和Stratagene，La Jolla，CA)和基于細(xì)胞的二聚作用分析。(參見例如，F(xiàn)uh等人，Science，2561677[1992]；Colosi等人，J.Biol.Chem.，26812617[1993])。發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的應(yīng)用的其他分析方式包括但不限于，測定細(xì)胞ATP水平和細(xì)胞超氧化物水平的分析。
本發(fā)明也提供改變和衍生本發(fā)明的組合物增強(qiáng)所期望的性質(zhì)(例如，親和力、活性等等)或減小不希望的性質(zhì)(例如，非特異性反應(yīng)、毒性等等)的方法。化學(xué)衍生的原理是公知的。在一些實(shí)施方案中，使用反復(fù)設(shè)計(jì)和化學(xué)合成的途徑由母體化合物產(chǎn)生衍生的子化合物庫。在其他實(shí)施方案中，在通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)證實(shí)結(jié)果前，使用合理的設(shè)計(jì)方法來預(yù)測并制作配體-受體相互作用的模型。
VI.治療應(yīng)用 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供調(diào)節(jié)細(xì)胞死亡的方法(例如，治療應(yīng)用)a)提供i.具有線粒體的靶細(xì)胞；和ii.組合物(例如，上述III部分所述的示例性化合物)；和b)在一定條件下將靶細(xì)胞暴露于該組合物以使這種暴露導(dǎo)致細(xì)胞死亡。在一些實(shí)施方案中，該組合物與線粒體結(jié)合以提高靶細(xì)胞中超氧化物的水平或改變細(xì)胞的ATP水平。本發(fā)明的方法并不限于特定的靶細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，靶細(xì)胞選自體外細(xì)胞、體內(nèi)細(xì)胞、取自活體的細(xì)胞、癌細(xì)胞，B細(xì)胞、T細(xì)胞和粒細(xì)胞。本發(fā)明并不限于特定的治療應(yīng)用。在下節(jié)中將描述本發(fā)明的治療應(yīng)用的非限制性例子。
A.一般性治療應(yīng)用 在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的組合物通過在受影響的細(xì)胞或組織中調(diào)節(jié)(例如，抑制或促進(jìn))線粒體ATP合酶(稱作線粒體F1F0-ATP酶)復(fù)合物的活性，為患很多疾病(例如，特征在于細(xì)胞或組織中壞死和/或凋亡過程失調(diào)的疾病、特征在于細(xì)胞生長和/或增殖異常的疾病)中的任意一種或多種的患者提供了治療性益處。在其他優(yōu)選的實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的組合物用于治療免疫性/慢性炎性疾病(例如，牛皮癬)。在其他實(shí)施方案中關(guān)注的是，本發(fā)明的組合物用于與狹窄療法結(jié)合治療發(fā)生損害(例如，閉塞)的血管。
在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的組合物通過與多亞單元的蛋白質(zhì)復(fù)合物的特定亞單元結(jié)合抑制線粒體ATP合酶復(fù)合物的活性。盡管本發(fā)明并不限于任何特定的機(jī)制和對所施用藥物活性的任何理解，在一些實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的組合物結(jié)合線粒體ATP合酶復(fù)合物的寡霉素敏感性參照蛋白(OSCP)部分，結(jié)合OSCP/F1結(jié)合點(diǎn)或結(jié)合F1亞單元。此外，還關(guān)注的是，當(dāng)本發(fā)明的組合物與OSCP結(jié)合時(shí)，開始時(shí)的效果是完全抑制了線粒體ATP合酶復(fù)合物，結(jié)合的后續(xù)影響是改變了ATP或pH水平和反應(yīng)性氧(例如，O2-)的產(chǎn)生。在其他優(yōu)選的實(shí)施方案中，盡管本發(fā)明并不限于任何特定的機(jī)制和對所施用藥物活性的任何理解，關(guān)注的是，產(chǎn)生自由基最終導(dǎo)致細(xì)胞被殺滅。在其他實(shí)施方案中，盡管本發(fā)明并不限于任何特定的機(jī)制和對所施用藥物活性的任何理解，關(guān)注的是，使用本發(fā)明的組合物和方法抑制線粒體ATP合酶復(fù)合物為細(xì)胞增殖提供了治療上有用的抑制作用。
因此，關(guān)注的是，本發(fā)明實(shí)施的優(yōu)選方法通過提供本發(fā)明的化合物為患者提供了治療性益處，其中所述化合物通過與線粒體ATP合酶復(fù)合物的寡霉素敏感性參照蛋白(OSCP)部分結(jié)合在受影響的細(xì)胞或組織中調(diào)節(jié)(例如，抑制或促進(jìn))線粒體ATP合酶復(fù)合物的活性。重要的是，OSCP、OSCP/F1接點(diǎn)或F1亞單元本身沒有生物活性。
因此，從廣義上來講，關(guān)注的是，本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案涉及下列發(fā)現(xiàn)很多特征在于細(xì)胞或組織中壞死和/或凋亡過程失調(diào)的疾病、特征在于細(xì)胞生長和/或增殖異常的疾病等等可以通過調(diào)節(jié)線粒體ATP合酶復(fù)合物的活性來治療，包括但不限于，通過與其寡霉素敏感性參照蛋白(OSCP)組分結(jié)合。但是，本發(fā)明并不限于實(shí)施本文明確所述的組合物和方法。的確，本領(lǐng)域技術(shù)人員將會意識到，本文沒有特別描述的很多其他化合物也適合用于調(diào)節(jié)線粒體ATP合酶復(fù)合物的活性的本文所述的方法。
因此，本發(fā)明特別關(guān)注的是，任意數(shù)量的現(xiàn)有技術(shù)已知的或?qū)戆l(fā)現(xiàn)的適當(dāng)化合物可以任選用于本發(fā)明的方法。例如，這些化合物包括但不限于，寡霉素、奧薩霉素、cytovaricin、apoptolidin、bafilomyxcin、白藜蘆醇、piceatannol和二環(huán)己基碳二亞胺(DCCD)等等可以用于本發(fā)明的方法。但是本發(fā)明并不意欲限于上述特定的方法或化合物。在一個實(shí)施方案中，可能用于本發(fā)明的方法的化合物選自在科學(xué)文獻(xiàn)中所述的適當(dāng)?shù)哪切?參見例如，K.B.Wallace和A.A.Starkov，Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.，40353-388[2000]；A.R.Solomon等人，Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.，97(26)14766-14771[2000]；和L.Galluzzi，N.Larochette，N.Zamzami和G.Kroemer，Oncogene 254812-4830[2006])。
在一些實(shí)施方案中，通過對National Cancer Institute’s(NCI-60)的癌細(xì)胞株的效力來篩選可能用于本發(fā)明的方法的化合物(參見例如，A.Monks等人，J.Natl.Cancer Inst.，83757-766[1991]；和K.D.Paull等人，J.Natl.Cancer Inst.，811088-1092[1989])。其他適當(dāng)?shù)暮Y選方法(例如，自身免疫性疾病模型等等)在本領(lǐng)域的技術(shù)范圍內(nèi)。
在其他優(yōu)選的實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的組合物用于治療藥物敏感性和/或藥物耐受性結(jié)核分枝桿菌。
在其他優(yōu)選的實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的組合物用于治療血管發(fā)生。
在其他優(yōu)選的實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的組合物用于治療心血管疾病。
在其他優(yōu)選的實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的組合物用于與狹窄療法結(jié)合治療發(fā)生損害(例如，閉塞)的血管。在其他實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的組合物用于與狹窄療法結(jié)合治療發(fā)生損害的心血管。
血管狹窄是一種當(dāng)血管(例如主動脈瓣)變得狹窄時(shí)發(fā)生的疾病。例如，主動脈瓣狹窄是當(dāng)心臟較低的左室(左心室)與稱作主動脈的主要血管之間的瓣變得狹窄時(shí)發(fā)生的一種心臟疾病。這種變窄(例如，狹窄)使得血液的空間太小而無法流向全身。正常時(shí)，左心室將富氧血液通過主動脈泵到全身，血液分流到遍布全身的動脈系統(tǒng)中。當(dāng)心臟泵血時(shí)，主動脈瓣的3個唇或小葉打開一條通道以使血液從心室流進(jìn)動脈。在心搏之間，唇閉合形成緊閉的密封以使血液不會通過動脈反向泄露。如果主動脈瓣受損，它就會變窄(狹窄)，減少了流向身體器官包括心臟本身的血流。一旦癥狀發(fā)展，主動脈瓣狹窄的人長期前景不容樂觀。發(fā)生心力衰竭癥狀的未治療主動脈瓣狹窄的人預(yù)期壽命只有3年或更短。
存在一些類型的治療方法來治療受損害的瓣(例如，氣囊膨脹、切除、經(jīng)皮腔內(nèi)斑塊旋切或激光治療)。受損害的心臟瓣膜的一種類型的治療方法是血管成形術(shù)。血管成形術(shù)包括將頂端為氣囊的管或?qū)Ч懿迦氲姜M窄或阻塞的動脈中，嘗試打開它。通過氣囊加壓和放氣數(shù)次，醫(yī)生一般能夠?qū)用}變寬。
血管成形術(shù)或瓣擴(kuò)大法的一個共同限制是再狹窄。再狹窄是打開動脈狹窄部分的努力例如，通過動脈的氣囊膨脹、切除、經(jīng)皮腔內(nèi)斑塊旋切或激光治療導(dǎo)致的動脈損傷后，外周或冠狀動脈的再閉合。對于這些血管成形術(shù)，根據(jù)定界、血管位置、損傷長度和很多其他形態(tài)學(xué)和臨床變量，再狹窄的發(fā)生率是約20-50％。據(jù)信，再狹窄是對血管成形術(shù)導(dǎo)致的動脈壁損傷的天然愈合反應(yīng)。該愈合反應(yīng)是從損傷位點(diǎn)的血栓形成機(jī)制開始的。愈合過程的復(fù)雜步驟的最終結(jié)果可能是內(nèi)膜增生、中層平滑肌細(xì)胞不受控制地遷移和增殖，還聯(lián)合有它們細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生，直至動脈再度狹窄或閉合。
在預(yù)防再狹窄的努力中，將金屬血管支架植入到了冠狀或周圍血管中。該支架典型地是通過導(dǎo)管插入到血管腔中，使之膨脹以與動脈壁的病變部分接觸，因此提供了對該腔的機(jī)械支持。但是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在這些支架的位置仍然會發(fā)生再狹窄。同時(shí)，支架本身會導(dǎo)致不希望有的局部血栓形成。為了解決血栓形成的問題，接受支架的人也接受抗凝血和抗血小板藥的廣泛性系統(tǒng)治療。
為解決再狹窄的問題，人們已經(jīng)提出用內(nèi)皮細(xì)胞置入的支架(Dichek，D.A.等人；Circulation 1989；801347-1353)。在那個實(shí)驗(yàn)中，羊內(nèi)皮細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生了細(xì)菌β-半乳糖苷酶或人組織性纖維蛋白溶酶原激活劑的逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移，將該羊內(nèi)皮細(xì)胞植入到不銹鋼支架上并生長，直至覆蓋該支架。因此，細(xì)胞能被遞送到血管壁上，在此處它們可以提供治療性蛋白質(zhì)。也已經(jīng)提出了通過支架為血管壁提供治療物質(zhì)的其他方法(參見，例如，國際專利申請WO91/12779和WO 90/13332；分別以整體通過參考引入本文)。在這些申請中，提出了可以將抗血小板劑、抗凝血劑、抗微生物劑、抗炎劑、抗代謝劑和其他藥物提供到支架上以減小再狹窄的發(fā)生率。此外，也使用了其他血管反應(yīng)劑例如氧化亞氮釋放劑。
再狹窄的其他原因是所治療組織的過度增殖。在一些實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的抗增殖性質(zhì)抑制了再狹窄。藥物洗脫型支架是本領(lǐng)域公知的(參見，例如，U.S.專利5,697,967；U.S.專利5,599,352；和U.S.專利5,591,227；分別通過參考引入本文)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物是從治療受損害(例如，閉合)的血管的藥物洗脫型支架中洗脫出來的。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物是從治療受損害的心血管的藥物洗脫型支架中洗脫出來的。
制備藥物組合物和制劑領(lǐng)域的技術(shù)人員將會意識到，當(dāng)選擇任選的化合物用于本文所述的方法時(shí)，適當(dāng)性的考慮包括但不限于，該特定化合物的毒性、安全性、效力、可用性和成本。
在一些實(shí)施方案中，該藥物組合物包含本發(fā)明的化合物和例如治療劑(例如動脈粥樣硬化劑、抗凝血劑、抗血栓形成劑、抗高血壓藥、鉀通道開放劑、鈣通道阻滯劑、鈉氫交換抑制劑、抗心律失常藥、促血栓溶解劑、纖維蛋白原拮抗劑、利尿劑、ATP酶抑制劑、醛固酮受體拮抗劑、磷酸二酯酶抑制劑、抗炎劑、抗氧化劑、血管發(fā)生調(diào)節(jié)劑、抗骨質(zhì)疏松劑、激素替代藥、激素受體調(diào)節(jié)劑、口服避孕藥、抗肥胖劑、抗抑郁藥、抗焦慮藥、抗精神病藥、抗增殖劑、抗腫瘤藥物、抗?jié)兣c胃食管反流病的藥物、生長激素藥/或生長激素促分泌藥、擬甲狀腺藥、抗感染藥、抗病毒藥、抗菌劑、抗真菌劑、降膽固醇/降脂劑和血脂治療藥、及模擬缺血預(yù)處理和/或心肌頓抑的藥物和抗糖尿病藥)。抗高血壓劑包括但不限于，ACE抑制劑、AT-1受體拮抗劑、ET受體拮抗劑、ET/AII受體雙重拮抗劑和血管肽酶抑制劑或者選自GPIIb/IIIa阻斷劑、P2Y1和P2Y12拮抗劑、血栓素受體拮抗劑的抗血小板劑及阿司匹林。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物用于在患者中治療與線粒體F1F0-ATP水解酶有關(guān)的疾病(例如，心肌梗塞、心室肥大、冠狀動脈疾病、非Q波MI、充血性心力衰竭、心律失常、不穩(wěn)定型心絞痛、慢性穩(wěn)定型心絞痛、普林茲邁托心絞痛、高血壓、間歇性跛行、外周閉塞性動脈病、血栓栓子性中風(fēng)的血栓性或血栓栓子性癥狀、靜脈血栓形成、動脈血栓形成、腦血栓形成、肺動脈栓塞、腦動脈栓塞、血栓形成傾向、彌散性血管內(nèi)凝血、再狹窄、心房纖維顫動、心室增大、動脈粥樣硬化性血管病、粥樣硬化斑塊破裂、粥樣硬化斑塊形成、移植性動脈粥樣硬化、血管重構(gòu)性動脈粥樣硬化、癌癥、手術(shù)、炎癥、全身性感染、人造表面、介入性心臟學(xué)、固定、藥物、妊娠和胎兒損傷，以及糖尿病并發(fā)癥包括視網(wǎng)膜病、腎病和神經(jīng)病變)。
B.免疫性疾病、自身免疫性疾病和慢性炎性疾病的治療應(yīng)用 免疫性疾病和慢性炎性疾病通常是由細(xì)胞增殖調(diào)節(jié)和/或細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)功能失調(diào)導(dǎo)致的。線粒體在細(xì)胞凋亡的控制和實(shí)行中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用。線粒體滲透轉(zhuǎn)移孔(MPTP)是一種橫跨線粒體內(nèi)外的膜，在前凋亡顆粒的調(diào)節(jié)中發(fā)揮功能。MPTP的暫時(shí)性開放導(dǎo)致細(xì)胞色素C和凋亡誘導(dǎo)因子從線粒體膜間隙釋放，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。
寡霉素敏感性參照蛋白(OSCP)是F1F0線粒體ATP合酶/ATP酶的一個亞單元，在橫跨線粒體膜中的酶的F0區(qū)的質(zhì)子梯度的偶合中發(fā)揮功能。在一些實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的化合物結(jié)合OSCP、OSCP/F1接點(diǎn)或F1亞單元，提高超氧化物的和細(xì)胞色素C水平，增加細(xì)胞凋亡并抑制細(xì)胞增殖。腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)位分子(ANT)是一種30kDa的蛋白質(zhì)，其橫跨線粒體內(nèi)膜，位于線粒體滲透轉(zhuǎn)移孔(MPTP)的中心。硫醇氧化或烷基化劑是MPTP的有力激活劑，通過改變ANT基質(zhì)側(cè)的三種未配對半胱氨酸中的一種或多種來發(fā)揮作用。4-(N-(S-谷胱亞硫酰乙?；?氨基)苯基氧化胂抑制ANT。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種治療免疫性疾病(例如，移植物抗宿主病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎或系統(tǒng)性紅斑狼瘡)、過度增殖性疾病(例如，癌癥)或慢性炎性疾病(例如，哮喘或牛皮癬)的方法。在一些實(shí)施方案中，癌癥是骨髓瘤、膀胱癌或腎癌。
C.表皮增生的治療 表皮增生(例如，角質(zhì)化細(xì)胞過度增生)導(dǎo)致與增厚的表皮脫落有關(guān)表皮顯著增厚，是疾病牛皮癬的一個特征(參見，例如，Krueger GC等人，(1984)J.Am.Acad.Dermatol.11937-947；Fry L.(1988)，Brit.J.Dermatol.119445-461；分別以整體通過參考引入本文)，也會在生理學(xué)條件下發(fā)生(例如，在傷口愈合期間)。
用全反式視黃酸(RA)或其前體，全反式視黃醇(ROL)對皮膚進(jìn)行局部治療也會導(dǎo)致表皮增生(參見，例如，Varani J等人，(2001)J.Invest.Dermatol，1171335-1341；以整體通過參考引入本文)。盡管可能的病因是不同的，但所有這些過度增生具有共同的增殖的角質(zhì)化細(xì)胞中表皮生長因子的激活的特點(diǎn)(參見，例如，Varani J等人，(2001)J.Invest.Dermatol 1171335-1341；Baker BS等人，(1992)Brit.J.Dermatol.126105-110；Gottlieb AB等人，(1988)J.Exp.Med.167670-675；Elder JT等人，(1989)Science 243811-814；Piepkorn M等人，(1998)J Invest Dermatol 111715-721；PiepkornM等人，(2003)Arch Dermatol Res 2727；Cook PW等人，(1992)Cancer Res 523224-3227；分別以整體通過參考引入本文)。正常的表皮生長不會出現(xiàn)與畸形生長同樣的對EGF受體功能的依賴(參見，例如，Varani J等人，(2001)J.Invest.Dermatol 1171335-1341；Varani J等人，(1998)Pathobiology 66253-259；分別以整體通過參考引入本文)。此外，完整皮膚的表皮功能也不依賴于EGF受體的功能(參見，例如，Varani J等人，(2001)J.Invest.Dermatol 1171335-1341；以整體通過參考引入本文)。
EGF受體在調(diào)節(jié)畸形表皮生長中的重要作用使得EGF受體酪氨酸激酶成為抗增殖劑的靶點(diǎn)。此外，與給受體下游有關(guān)的各系列信號分子成為了阻斷角質(zhì)化細(xì)胞生長的其他靶點(diǎn)。促分裂原活化蛋白激酶級聯(lián)是由EGF受體激活的(參見，例如，Marques，S.A.等人，(2002)JPharmacol Exp Ther 300，1026-1035；以整體通過參考引入本文)。在過度增殖的表皮，而不是正常的表皮中，在基部或上基部的角質(zhì)化細(xì)胞中激活了細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2(Erk 1/2)，促發(fā)了表皮過度增殖(參見，例如，Haase，I.等人，(2001)J Clin Invest 108，527-536；Takahashi，H.等人，(2002)J Dermatol Sci 30，94-99；分別以整體通過參考引入本文)。在培養(yǎng)模型中，通過EGF受體調(diào)節(jié)角質(zhì)化細(xì)胞生長導(dǎo)致MAPK活性增強(qiáng)。在角質(zhì)化細(xì)胞中，生長因子刺激的MAPK活性也依賴于integrin的結(jié)合，與integrins結(jié)合的細(xì)胞外基質(zhì)分子能夠獨(dú)立地激活MAPKs并增加角質(zhì)化細(xì)胞的增殖(參見，例如，Haase，I.等人，(2001)J Clin Invest 108，527-536；以整體通過參考引入本文)。其他皮膚細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞的增殖較少依賴于Erk 1/2活性，這使得抑制Erk可以特征性地用于評價(jià)前導(dǎo)化合物對表皮增生的可用性。
在一些實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的化合物用于治療表皮增生。
在一些實(shí)施方案中，關(guān)注的是，本發(fā)明的化合物用于治療牛皮癬。牛皮癬是常見和慢性的表皮增生。斑塊狀牛皮癬是最常見類型的牛皮癬，其特征是被銀色鱗屑覆蓋的紅色皮膚以及炎癥。通常會在臂、腿、軀干或頭皮上發(fā)現(xiàn)這些斑塊，但是也可以在皮膚的任何部分發(fā)現(xiàn)。最典型的區(qū)域是膝蓋和肘。牛皮癬是不傳染的，并且可以遺傳。環(huán)境因素，例如吸煙、陽光照射、酒精中毒和HIV感染會影響牛皮癬發(fā)生的頻率和疾病持續(xù)的時(shí)間。
牛皮癬的治療包括局部用類固醇、煤焦油、角質(zhì)層分離劑、維生素D-3類似物和局部用類視黃醇。局部用類固醇是用于減少斑塊形成的藥物。局部用類固醇具有抗炎效果，可以導(dǎo)致深入和不同的代謝活性。此外，局部用類固醇要改變身體對不同刺激物的免疫應(yīng)答。局部用類固醇的例子包括但不限于，曲安奈德(Artistocort，Kenalog)0.1％乳膏和二丙酸倍他米松(Diprolene，Diprosone)乳膏。煤焦油是一種便宜的治療藥，在洗發(fā)液或洗劑中用作非處方藥，用于所涉及的廣泛區(qū)域。煤焦油特別是可用于有毛發(fā)的區(qū)域。煤焦油的例子是煤焦油2-10％(DHS Tar，Doctar，Theraplex T)-止癢劑。角質(zhì)層分離劑用于去除斑塊，平滑皮膚和治療過度角化。角質(zhì)層分離劑的一個例子是地蒽酚0.1-1％(Drithocreme，Anthra-Derm)。維生素D-3類似物用于具有對老年治療耐受的損害或在面部或皮膚變薄而出現(xiàn)化妝品問題的暴露區(qū)域的損害的患者。維生素D-3類似物的一個例子是卡泊三烯(Dovonex)。局部用類視黃醇是減少濾泡上皮細(xì)胞粘附和刺激有絲分裂活性，導(dǎo)致濾泡上皮細(xì)胞循環(huán)增加的藥物。局部用類視黃醇的例子包括但不限于，維甲酸(Retin-A，Avita)和他扎羅汀(Tazorac)。
在美國，約有1-2％的人或550萬人患有斑塊狀牛皮癬。高達(dá)30％的患斑塊狀牛皮癬的人也患牛皮癬性關(guān)節(jié)炎?；寂Ｆぐ_性關(guān)節(jié)炎的受試者關(guān)節(jié)發(fā)炎，還具有其他關(guān)節(jié)炎癥狀。有時(shí)，患斑塊狀牛皮癬會發(fā)展成更為嚴(yán)重的疾病，例如膿皰性牛皮癬或紅皮性牛皮癬。在膿皰性牛皮癬中，皮膚上的紅色區(qū)域包含有膿的水皰。在紅皮性牛皮癬中典型地是區(qū)域廣泛的紅色和結(jié)垢皮膚，會癢和疼痛。本發(fā)明可以用于治療其他類型的牛皮癬，包括但不限于滴狀牛皮癬、指甲牛皮癬、皮褶牛皮癬和頭皮牛皮癬。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物用于治療色素沉著性疾病(例如，白化病、黑斑病和白癜風(fēng))。本發(fā)明并不限于治療色素沉著性疾病的特定機(jī)制。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物通過靶向于F1F0-ATP酶來治療色素沉著性疾病。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物通過調(diào)節(jié)酪氨酸激酶來治療色素沉著性疾病。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物通過靶向抑制來治療色素沉著性疾病。
D.狹窄治療 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物用于與狹窄療法結(jié)合治療發(fā)生損害(例如，閉塞)的血管。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物用于與狹窄療法結(jié)合治療發(fā)生損害的心血管。
血管狹窄是一種當(dāng)血管(例如主動脈瓣)變得狹窄時(shí)發(fā)生的疾病。例如，主動脈瓣狹窄是當(dāng)心臟較低的左室(左心室)與稱作主動脈的主要血管之間的瓣變得狹窄時(shí)發(fā)生的一種心臟疾病。這種變窄(例如，狹窄)使得血液的空間太小而無法流向全身。正常時(shí)，左心室將富氧血液通過主動脈泵到全身，血液分流到遍布全身的動脈系統(tǒng)中。當(dāng)心臟泵血時(shí)，主動脈瓣的3個唇或小葉打開一條通道以使血液從心室流進(jìn)動脈。在心搏之間，唇閉合形成緊閉的密封以使血液不會通過動脈反向泄露。如果主動脈瓣受損，它就會變窄(狹窄)，減少了流向身體器官包括心臟本身的血流。一旦癥狀發(fā)展，主動脈瓣狹窄的人長期前景不容樂觀。發(fā)生心力衰竭癥狀的未治療主動脈瓣狹窄的人預(yù)期壽命只有3年或更短。
存在一些類型的治療方法來治療受損害的瓣(例如，氣囊膨脹、切除、經(jīng)皮腔內(nèi)斑塊旋切或激光治療)。受損害的心臟瓣膜的一種類型的治療方法是血管成形術(shù)。血管成形術(shù)包括將頂端為氣囊的管或?qū)Ч懿迦氲姜M窄或阻塞的動脈中，嘗試打開它。通過氣囊加壓和放氣數(shù)次，醫(yī)生一般能夠?qū)用}變寬。
血管成形術(shù)或瓣擴(kuò)大法的一個共同限制是再狹窄。再狹窄是打開動脈狹窄部分的努力例如，通過動脈的氣囊膨脹、切除、經(jīng)皮腔內(nèi)斑塊旋切或激光治療導(dǎo)致的動脈損傷后，外周或冠狀動脈的再閉合。對于這些血管成形術(shù)，根據(jù)定界、血管位置、損傷長度和很多其他形態(tài)學(xué)和臨床變量，再狹窄的發(fā)生率是約20-50％。據(jù)信，再狹窄是對血管成形術(shù)導(dǎo)致的動脈壁損傷的天然愈合反應(yīng)。該愈合反應(yīng)是從損傷位點(diǎn)的血栓形成機(jī)制開始的。愈合過程的復(fù)雜步驟的最終結(jié)果可能是內(nèi)膜增生、中層平滑肌細(xì)胞不受控制地遷移和增殖，還聯(lián)合有它們細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生，直至動脈再度狹窄或閉合。
在預(yù)防再狹窄的努力中，將金屬血管支架植入到了冠狀或周圍血管中。該支架典型地是通過導(dǎo)管插入到血管腔中，使之膨脹以與動脈壁的病變部分接觸，因此提供了對該腔的機(jī)械支持。但是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在這些支架的位置仍然會發(fā)生再狹窄。同時(shí)，支架本身會導(dǎo)致不希望有的局部血栓形成。為了解決血栓形成的問題，接受支架的人也接受抗凝血和抗血小板藥的廣泛性系統(tǒng)治療。
為解決再狹窄的問題，人們已經(jīng)提出用內(nèi)皮細(xì)胞置入的支架(Dichek，D.A.等人；Seeding of Intravascular Stents WithGenetically Engineered Endothelial Cells；Circulation 1989；801347-1353)。在那個實(shí)驗(yàn)中，羊內(nèi)皮細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生了細(xì)菌β-半乳糖苷酶或人組織性纖維蛋白溶酶原激活劑的逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移，將該羊內(nèi)皮細(xì)胞植入到不銹鋼支架上并生長，直至覆蓋該支架。因此，細(xì)胞能被遞送到血管壁上，在此處它們可以提供治療性蛋白質(zhì)。在國際專利申請WO 91/12779“Intraluminal Drug ElutingProsthesis”和WO 90/13332“Stent With Sustained Drug Delivery”中也已經(jīng)提出了通過支架為血管壁提供治療物質(zhì)的其他方法。在這些申請中，提出了可以將抗血小板劑、抗凝血劑、抗微生物劑、抗炎劑、抗代謝劑和其他藥物提供到支架上以減小再狹窄的發(fā)生率。此外，也使用了其他血管反應(yīng)劑例如氧化亞氮釋放劑。
再狹窄的其他原因是所治療組織的過度增殖。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗增殖性質(zhì)抑制了再狹窄。藥物洗脫型支架是本領(lǐng)域公知的(參見，例如，U.S.專利5,697,967；U.S.專利5,599,352；和U.S.專利5,591,227；分別通過參考引入本文)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物是從治療受損害(例如，閉合)的血管的藥物洗脫型支架中洗脫出來的。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物是從治療受損害的心血管的藥物洗脫型支架中洗脫出來的。
E.細(xì)菌感染的治療 在一些實(shí)施方案中，該苯二氮

類化合物及相關(guān)化合物(參見，例如，III部分-示例性化合物)用于治療患細(xì)菌感染的受試者。在一些實(shí)施方案中，一種以上的本發(fā)明的化合物用于治療患細(xì)菌感染的受試者。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物通過與ATP合酶復(fù)合物(例如，線粒體ATP合酶復(fù)合物)的寡霉素敏感性參照蛋白(OSCP)部分/F1結(jié)合在受影響的細(xì)胞或組織中調(diào)節(jié)(例如，抑制或促進(jìn))該ATP合酶復(fù)合物(例如，線粒體ATP合酶復(fù)合物或生物體中沒有線粒體的同系物)的活性，來治療細(xì)菌感染。本發(fā)明并不限于特定類型的細(xì)菌感染。細(xì)菌感染的例子包括但不限于，炭疽、細(xì)菌性腦膜炎、布氏桿菌病、彎曲桿菌病、貓抓病、霍亂、白喉、流行性斑疹傷寒、淋病、膿皰病、軍團(tuán)病、麻風(fēng)病(漢森氏病)、鉤端螺旋體病、李氏桿菌病、萊姆病、類鼻疽病、MRSA感染、奴卡氏菌病、百日咳(Whooping Cough)、鼠疫、肺炎球菌肺炎、鸚鵡熱、Q熱、落基山斑點(diǎn)熱(RMSF)、沙門氏菌病、猩紅熱、桿菌性痢疾、梅毒、破傷風(fēng)、沙眼、結(jié)核病、傷寒、斑疹傷寒病和尿路感染。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與至少一種目的在于治療細(xì)菌感染的其他藥物聯(lián)合施用。目的在于治療細(xì)菌感染的其他藥物的例子包括但不限于，頭孢菌素類、大環(huán)內(nèi)酯類、青霉素類、喹諾酮類、磺胺類及相關(guān)化合物、和四環(huán)素。
F.病毒感染的治療 在一些實(shí)施方案中，該苯二氮

類化合物及相關(guān)化合物(參見，例如，III部分-示例性化合物)用于治療患病毒感染的受試者。在一些實(shí)施方案中，一種以上的本發(fā)明的化合物用于治療患病毒感染的受試者。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物通過與ATP合酶復(fù)合物(例如，線粒體ATP合酶復(fù)合物)的寡霉素敏感性參照蛋白(OSCP)部分/F1結(jié)合在受影響的細(xì)胞或組織中調(diào)節(jié)(例如，抑制或促進(jìn))該ATP合酶復(fù)合物(例如，線粒體ATP合酶復(fù)合物或生物體中沒有線粒體的同系物)的活性，來治療病毒感染。本發(fā)明并不限于特定類型的病毒感染。病毒感染的例子包括但不限于，AIDS、與AIDS有關(guān)的綜合征、水痘(Varicella)、普通感冒、巨細(xì)胞病毒感染、科羅拉多蜱熱、登革熱、埃博拉出血熱、流行性腮腺炎、手，足和口病、肝炎、單純皰疹、帶狀皰疹、HPV病毒流行性感冒(Flu)、拉沙熱、麻疹、馬爾堡出血熱、傳染性單核細(xì)胞增多癥、流行性腮腺炎、脊髓灰質(zhì)炎、漸進(jìn)多病灶leukencephalo pathy、狂犬病、麻疹、SARS、天花(Variola)、病毒性腦炎、病毒性腸胃炎、病毒性腦膜炎、病毒性肺炎、西尼羅河病毒病和黃熱病。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與至少一種目的在于治療病毒感染的其他藥物聯(lián)合施用。目的在于治療病毒感染的其他藥物的例子包括但不限于，更昔洛韋、干擾素-α-2b、阿昔洛韋、泛昔洛韋和伐昔洛韋。
G.真菌感染的治療 在一些實(shí)施方案中，該苯二氮

類化合物及相關(guān)化合物(參見，例如，III部分-示例性化合物)用于治療患真菌感染的受試者。在一些實(shí)施方案中，一種以上的本發(fā)明的化合物用于治療患真菌感染的受試者。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物通過與ATP合酶復(fù)合物(例如，線粒體ATP合酶復(fù)合物)的寡霉素敏感性參照蛋白(OSCP)部分/F1結(jié)合在受影響的細(xì)胞或組織中調(diào)節(jié)(例如，抑制或促進(jìn))該ATP合酶復(fù)合物(例如，線粒體ATP合酶復(fù)合物或生物體中沒有線粒體的同系物)的活性，來治療真菌感染。本發(fā)明并不限于特定類型的真菌感染。真菌感染的例子包括但不限于，曲菌病、芽生菌病、念珠菌病、球孢子菌病、隱球菌病、組織胞漿菌病、足癬。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與至少一種目的在于治療真菌感染的其他藥物聯(lián)合施用。目的在于治療真菌感染的其他藥物的例子包括但不限于，倍他米松、布替萘芬、環(huán)吡酮、氯碘羥喹、氫化可的松、克霉唑、益康唑、氟胞嘧啶、灰黃霉素、鹵丙炔氧苯、伊曲康唑、酮康唑、咪康唑、萘替芬、制霉菌素、曲安西龍、奧昔康唑、sulcanazole、特比萘芬、特康唑、托萘酯和伏立康唑。
H.寄生蟲感染的治療 在一些實(shí)施方案中，該苯二氮

類化合物及相關(guān)化合物(參見，例如，III部分-示例性化合物)用于治療患寄生蟲感染的患者。在一些實(shí)施方案中，一種以上的本發(fā)明的化合物是用于治療患寄生蟲感染的患者。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物通過與ATP合酶復(fù)合物(例如，線粒體ATP合酶復(fù)合物)的寡霉素敏感性參照蛋白(OSCP)部分/F1結(jié)合在受影響的細(xì)胞或組織中調(diào)節(jié)(例如，抑制或促進(jìn))該ATP合酶復(fù)合物(例如，線粒體ATP合酶復(fù)合物或生物體中沒有線粒體的同系物)的活性，來治療寄生蟲感染。本發(fā)明并不限于特定類型的寄生蟲感染。寄生蟲感染的例子包括但不限于，非洲錐蟲病、阿米巴病、蛔蟲病、巴貝西蟲病、南美錐蟲病、肝吸蟲病、隱孢子蟲病、囊蟲病、裂頭絳蟲病、龍線蟲病、包蟲病、蟯蟲病、片吸蟲病、姜片蟲病、絲蟲病、自由活動的阿米巴感染、賈第蟲病、顎口線蟲病、膜殼絳蟲病、等孢子球蟲病、黑熱病、利什曼病、瘧疾、后殖吸蟲病、蠅蛆病、盤尾絲蟲病、虱病、蟯蟲感染、疥瘡、血吸蟲病、絳蟲病、弓蛔蟲病、弓形體病、旋毛蟲病、毛線蟲病、鞭蟲病和錐蟲病。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與至少一種目的在于治療寄生蟲感染的其他藥物聯(lián)合施用。目的在于治療寄生蟲感染的其他藥物的例子包括但不限于，驅(qū)蟲藥(例如，阿苯達(dá)唑(Albenza)、甲苯咪唑(Vermox)、氯硝柳胺(Niclocide)、奧沙尼喹(Vansil)、吡喹酮(Biltricide)、噻嘧啶(Antiminth)、羥萘酸噻嘧啶(Antiminth)、噻菌靈(Mintezol)、硫雙二氯酚、伊維菌素、檸檬酸和枸櫞酸乙胺嗪。
I.朊病毒感染性疾病的治療 在一些實(shí)施方案中，該苯二氮

類化合物及相關(guān)化合物(參見，例如，III部分-示例性化合物)用于治療患朊病毒感染性疾病的患者。在一些實(shí)施方案中，一種以上的本發(fā)明的化合物用于治療患朊病毒感染性疾病的患者。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物通過與ATP合酶復(fù)合物(例如，線粒體ATP合酶復(fù)合物)的寡霉素敏感性參照蛋白(OSCP)部分/F1結(jié)合在受影響的細(xì)胞或組織中調(diào)節(jié)(例如，抑制或促進(jìn))該ATP合酶復(fù)合物(例如，線粒體ATP合酶復(fù)合物或生物體中沒有線粒體的同系物)的活性，來治療朊病毒感染性疾病。本發(fā)明并不限于特定類型的朊病毒感染性疾病。朊病毒感染性疾病的例子包括但不限于，傳染性海綿狀腦病、牛海綿狀腦病、克雅氏病和庫魯病。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與至少一種目的在于治療朊病毒感染性疾病的其他藥物聯(lián)合施用。目的在于治療朊病毒感染性疾病的其他藥物的例子包括但不限于，剛果紅和它的類似物、蒽環(huán)類抗生素、兩性霉素B和它的類似物、硫酸多陰離子、和四吡咯。
J.與血管發(fā)生異常有關(guān)的疾病的治療 在一些實(shí)施方案中，該苯二氮

類化合物及相關(guān)化合物(參見，例如，III部分-示例性化合物)用于治療患與血管發(fā)生異常有關(guān)的疾病的受試者。在一些實(shí)施方案中，一種以上的本發(fā)明的化合物通過與ATP合酶復(fù)合物(例如，線粒體ATP合酶復(fù)合物)的寡霉素敏感性參照蛋白(OSCP)部分/F1結(jié)合在受血管發(fā)生異常影響的細(xì)胞或組織中調(diào)節(jié)(例如，抑制或促進(jìn))該ATP合酶復(fù)合物(例如，線粒體ATP合酶復(fù)合物)的活性，來治療與血管發(fā)生異常有關(guān)的疾病。本發(fā)明并不限于特定類型的與血管發(fā)生異常有關(guān)的疾病。與血管發(fā)生異常有關(guān)的疾病的例子包括但不限于，癌癥(例如，與實(shí)體瘤有關(guān)的癌癥)、牛皮癬、糖尿病性視網(wǎng)膜病、黃斑變性、動脈粥樣硬化和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。
治療與血管發(fā)生異常有關(guān)的疾病的其他藥物的例子包括但不限于，alteparin、ABT-510、CNGRC肽TNFα結(jié)合肽(NGR-TNF)、考不他汀A4磷酸鹽、乙酸二甲基氧雜蒽酮、來那度胺、LY317615、PPI-2458、大豆異黃酮(染料木素；大豆蛋白分離物)、枸櫞酸他莫昔芬、沙利度胺、ADH-1、AG-013736、AMG-706、抗VEGF抗體、AZD2171、Bay 43-9006、GW786034、CHIR-265、PI-88、PTK787/ZK 222584、RAD001、蘇拉明、SU11248、XL184、ZD6474、ATN-161、EMD 121974和塞來昔布。治療與血管發(fā)生異常有關(guān)的疾病的其他藥物包括抗癌藥物(例如阿西維辛；阿柔比星；鹽酸阿考達(dá)唑；阿克羅寧；阿多來新；阿霉素；阿地白介素；阿利維A酸；別嘌呤醇鈉；六甲蜜胺；安波霉素；醋酸阿美蒽醌；氨魯米特；胺苯吖啶；阿那曲唑；番荔枝內(nèi)酯；氨曲霉素；Asimicin；天冬酰胺酶；曲林菌素；阿扎胞苷；阿扎替派；阿佐霉素；Azetepa；巴馬司他；苯佐替派；貝沙羅汀；比卡魯胺；鹽酸比生群；二甲磺酸雙奈法德；比折來新；硫酸博萊霉素；布喹那鈉；溴匹立明；Bullatacin；白消安；卡麥角林；放線菌素C；卡普睪酮；卡醋胺；卡貝替姆；卡鉑；卡氮芥；鹽酸卡柔比星；卡折來新；西地芬戈；塞來昔布；苯丁酸氮芥；西羅霉素；順鉑；克拉屈濱；甲磺酸克立那托；環(huán)磷酰胺；阿糖胞苷；達(dá)卡巴嗪；DACA(N-[2-(二甲基-氨基)乙基]吖啶-4-羧酰胺)；更生霉素；鹽酸柔紅霉素；柔紅霉素；地西他濱；地尼白介素；右奧馬鉑；地扎胍寧；甲磺酸地扎胍寧；地吖醌；紫杉醇；阿霉素；鹽酸阿霉素；屈洛昔芬；檸檬酸屈洛昔芬；丙酸屈他雄酮；達(dá)佐霉素；依達(dá)曲沙；鹽酸依氟鳥氨酸；依沙蘆星；恩洛鉑；恩普氨酯；依匹哌啶；鹽酸表阿霉素；厄布洛唑；鹽酸依索比星；雌莫司?。淮颇就×姿徕c；依他硝唑；乙碘油I 131；足葉乙甙；依托泊磷酸鹽；氯苯乙嘧胺；鹽酸法倔唑；法扎拉濱；芬維A胺；氟脲嘧啶脫氧核苷；磷酸氟達(dá)拉濱；氟脲嘧啶；5-FdUMP；氟西他濱；磷喹酮；福司曲星鈉；FK-317；FK-973；FR-66979；FR-900482；吉西他濱；鹽酸Geimcitabine；吉姆單抗；Gold Au 198；醋酸戈舍瑞林；胍那決爾；羥基脲；鹽酸去甲氧柔紅霉素；環(huán)磷酰胺；伊莫福新；干擾素α--2a；干擾素α-2b；干擾素α-n1；干擾素α-n3；干擾素β-1a；干擾素γ-1b；異丙鉑；鹽酸伊立替康；醋酸蘭瑞肽；來曲唑；醋酸亮丙瑞林；鹽酸利阿唑；洛美曲索鈉；洛莫司??；鹽酸洛索蒽醌；馬索羅酚；美坦生；氮芥鹽酸；醋酸甲地孕酮；甲烯雌醋酸；美法侖；美諾立爾；巰基嘌呤；甲氨蝶呤；甲氨蝶呤鈉；甲氧沙林；氯苯氨啶；美妥替哌；米丁度胺；Mitocarcin；絲裂紅素；米托潔林；米托馬星；絲裂霉素；絲裂霉素C；米托司培；米托坦；鹽酸米托蒽醌；霉酚酸；諾考達(dá)唑；諾拉霉素；奧普瑞白介素；奧馬鉑；奧昔舒侖；紫杉醇；帕米膦酸二鈉；培門冬酶；培利霉素；溴新斯的明；硫酸培洛霉素；培磷酰胺；哌泊溴烷；哌泊舒凡；鹽酸吡羅蒽醌；普卡霉素；普洛美坦；卟吩姆鈉；泊非霉素；潑尼莫司?。畸}酸甲基芐肼；嘌呤霉素；鹽酸嘌呤霉素；Pyrazofurin；利波腺苷；利妥昔單抗；羅谷亞胺；Rolliniastatin；沙芬戈；鹽酸沙芬戈；釤/Lexidronam；司莫司汀；辛曲秦；Sparfosate鈉；司帕霉素；鹽酸螺旋鍺；螺莫司??；螺鉑；Squamocin；Squamotacin；鏈黑霉素；鏈脲霉素；氯化鍶Sr 89；磺氯苯脲；他利霉素；紫杉烷類；紫杉烷；Tecogalan鈉；替加氟；鹽酸替洛蒽醌；替莫泊芬；替尼泊甙；替羅昔??；睪內(nèi)酯；替羅昔??；鳥嘌呤；塞替派；Thymitaq；噻唑呋林；替拉扎明；雷替曲塞；TOP-53；鹽酸拓?fù)涮婵?；枸櫞酸托瑞米芬；赫賽汀；醋酸曲托龍；磷酸曲西立濱；曲美沙特；糖醛酸曲美沙特；曲普瑞林；鹽酸妥布氯唑；烏拉莫司??；烏瑞替派；戊柔比星；伐普肽；維替泊芬；長春堿；硫酸長春堿；長春新堿；硫酸長春新堿；長春地辛；硫酸長春地辛；硫酸長春匹定；硫酸長春甘酯；硫酸長春羅新；酒石酸長春瑞濱；硫酸長春羅定；硫酸長春利定；伏氯唑；折尼鉑；凈司他??；鹽酸佐柔比星；2-氯脫氧腺苷；2′--脫氧間型霉素；9-氨基喜樹堿；雷替曲塞；N-炔丙基-5，8-dideazafolic acid；2-氯-2′-樹膠醛醣-氟-2′-脫氧腺苷；2-氯-2′-脫氧腺苷；茴香霉素；曲古菌素A；hPRL-G129R；CEP-751；hPRL-G129R；CEP-751；芥子氣；氮芥(mechlorethamine)；環(huán)磷酰胺；美法侖；苯丁酸氮芥；異環(huán)磷酰胺；白消安；N-甲基-N-亞硝基(MNU)；N，N′-二(2-氯乙基)-N-亞硝基亞硝基脲(BCNU)；N-(2-氯乙基)-N′-環(huán)己基-N-亞硝(CCNU)；N-(2-氯乙基)-N的′-(反式-4-甲基氮-亞硝基脲(MeCCNU)；N-(2-氯乙基)-N的′-(二乙基)乙基磷酸鹽-N-亞硝基脲(福莫司汀)；鏈脲霉素；達(dá)卡巴嗪(DTIC)；米托唑胺；替莫唑；噻替哌；絲裂霉素C；AZQ；阿多來新；順鉑；卡鉑；奧馬鉑；奧沙利鉑；C1-973；DWA 2114R；JM216；JM335；雙(鉑)；雷替曲塞；阿扎胞苷；阿糖胞苷；吉西他濱；6-巰基嘌呤；6-鳥嘌呤；次黃嘌呤；替尼泊苷；9-氨基喜樹堿；拓?fù)涮婵?；CPT-11；阿霉素；柔紅霉素；阿霉素；依達(dá)比星；米托蒽醌；洛索蒽醌；更生霉素(放線菌素D)；安吖啶；吡唑啉吖啶；全反式視黃醇；14-羥基-反式視黃醇；全反式維甲酸；N-(4-羥基苯基)視黃酰胺；13-順維甲酸；3-甲基TTNEB；9-順視黃酸；氟達(dá)拉濱(2-F-ara-AMP)和2-氯脫氧腺苷(2-Cda)。其他抗癌劑包括但不限于，抗增殖劑(例如異硫脲酸吡曲克辛)；抗前列腺肥大劑(例如，西托糖苷)；良性前列腺增生癥治療劑(例如鹽酸坦索羅辛)；前列腺生長抑制劑藥物(例如，噴托孟)；以及放射性物質(zhì)纖維蛋白原1 125；脫氧葡糖F18；氟多F18；胰島素I125；胰島素I131；碘芐胍I123；膽影鈉I131；碘安替比林I131；碘化膽固醇I131；碘馬尿酸鈉I123；碘馬尿酸鈉I125；碘馬尿酸鈉I131；碘奧酮I125；碘奧酮I131；鹽酸碘非他胺I123；Iomethin I125；Iomethin I131；碘酞鈉I125；碘酞鈉I131碘酪氨酸I131；碘塞羅寧I125；碘塞羅寧I131；Merisoprol AcetateHg197；Merisoprol Acetate Hg 203；Merisoprol Hg197；硒蛋氨酸Se75；锝Tc99m三硫化二銻；锝Tc99m比西酯；锝Tc99m地索苯寧；锝Tc99m Etidronate；锝Tc99m依沙美肟；锝Tc99mFurifosmin；锝Tc99m Gluceptate；锝Tc99m利多苯寧；锝Tc99m甲溴菲寧；锝Tc99m亞甲基二磷酸；锝Tc99m亞甲基二磷酸二鈉；锝Tc99m巰替肽；锝Tc99m羥亞甲基二膦酸鹽；锝Tc99m三胺五乙酸；锝Tc99m三胺五乙酸鈣三鈉；锝Tc99m Sestamibi；锝Tc99m二巰丁二酸；锝Tc99m二巰丁二酸；锝Tc99m膠體硫；锝Tc99mTeboroxime；锝Tc99m替曲膦；锝Tc99m Tiatide；甲狀腺素I125；甲狀腺素I131；碘芐聚乙烯吡咯烷酮I131；三油精I(xiàn)125；三油精I(xiàn)131。
其他抗癌劑包括但不限于抗癌增強(qiáng)劑三環(huán)抗抑郁藥(例如丙咪嗪；地昔帕明；amitryptyline；氯米帕明；三甲丙咪嗪、多慮平、去甲替林、普羅替林、阿莫沙平和馬普替林)；非三環(huán)類抗抑郁藥物(例如舍曲林、曲唑酮與西酞普蘭)；鈣++拮抗劑(例如，維拉帕米、硝苯地平、尼群地平和卡羅維林)；鈣調(diào)素抑制劑(例如普尼拉明、三氟拉嗪與氯丙咪嗪)；兩性霉素B；曲帕拉醇類似物(例如他莫昔芬)；抗心律失常藥物(例如奎尼丁)；抗高血壓藥物(例如利血平)；硫醇depleters(例如，丁硫氨酸和亞砜)和多藥耐藥緩解劑如CremaphorEL。其他抗癌劑選自annonaceous acetogenins；asimicin；rolliniastatin；guanacone，squamocin，bullatacin；squamotacin；紫杉烷；紫杉醇；吉西他濱；甲氨蝶呤FR-900482；FK-973；FR-66979；FK-317；5-FU；FUDR；FdUMP；羥基脲；多西紫杉醇；discodermolide；埃博霉素；長春新堿；長春堿；長春瑞濱；metapac；依立替康、SN-38；10-OH依立替康；拓?fù)涮婵?；依托泊苷；阿霉素；多柔比星；flavopiridol；順鉑；碳鉑；博萊霉素；絲裂霉素C；普卡霉素；卡培他濱、阿糖胞苷；2-C1-2′脫氧腺苷；氟達(dá)拉濱-PO4、米托蒽醌；米托唑胺、噴司他丁和雷替曲塞。一類特別優(yōu)選的抗癌藥物是紫杉烷類(例如，紫杉醇和多西紫杉醇)。另一類重要的抗癌劑是annonaceousacetogenin。
K.血壓調(diào)節(jié) 在一些實(shí)施方案中，該苯二氮

類化合物及相關(guān)化合物(參見，例如，III部分-示例性化合物)是用于調(diào)節(jié)受試者的血壓。在一些實(shí)施方案中，一種以上的本發(fā)明的化合物用語治療調(diào)節(jié)受試者的血壓(例如，維持受試者的血壓在所期望的范圍)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物通過與ATP合酶復(fù)合物(例如，線粒體ATP合酶復(fù)合物)的寡霉素敏感性參照蛋白(OSCP)部分/F1結(jié)合在受影響的細(xì)胞或組織中調(diào)節(jié)(例如，抑制或促進(jìn))該ATP合酶復(fù)合物(例如，線粒體ATP合酶復(fù)合物)的活性，來調(diào)節(jié)血壓。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與至少一種其他目的在于調(diào)節(jié)受試者的血壓的藥物聯(lián)合施用。其他目的在于調(diào)節(jié)受試者的血壓的藥物的例子包括但不限于，噻嗪類及有關(guān)利尿藥(例如，氫氯噻嗪、氯噻酮)、α/β-腎上腺素能阻斷劑(例如卡維地洛)、β-腎上腺素阻斷劑(例如，比索洛爾、阿替洛爾、美托洛爾)、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(例如卡托普利、福辛普利、苯那普利、喹那普利、雷米普利)、血管緊張素II受體拮抗劑(例如氯沙坦、纈沙坦、坎地沙坦、依貝沙坦、依普沙坦、和奧美)、鈣通道阻滯劑-非二氫吡啶類(例如地爾硫和維拉帕米)、鈣通道阻滯劑-二氫吡啶(例如，氨氯地平、硝苯地平、非洛地平)、血管擴(kuò)張劑-外周(例如肼苯噠嗪)、醛固酮拮抗劑(例如螺內(nèi)酯)。
L.HDL/LDL調(diào)節(jié) 在一些實(shí)施方案中，該苯二氮

類化合物及相關(guān)化合物(參見，例如，III部分-示例性化合物)用于調(diào)節(jié)受試者的HDL/LDL水平。在一些實(shí)施方案中，一種以上的本發(fā)明的化合物是用于治療調(diào)節(jié)受試者的HDL/LDL水平(例如，降低受試者的LDL水平，升高受試者的HDL水平)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物通過與ATP合酶復(fù)合物(例如，線粒體ATP合酶復(fù)合物)的寡霉素敏感性參照蛋白(OSCP)部分/F1結(jié)合在受影響的細(xì)胞或組織中調(diào)節(jié)(例如，抑制或促進(jìn))該ATP合酶復(fù)合物(例如，線粒體ATP合酶復(fù)合物)的活性，來調(diào)節(jié)HDL/LDL水平。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與至少一種其他目的在于調(diào)節(jié)受試者的HDL/LDL水平的藥物聯(lián)合施用。出于調(diào)節(jié)受試者的HDL/LDL水平的其他藥物的例子包括但不限于，降血脂藥(例如，煙酸、煙酸、吉非羅齊、非諾貝特)和HMG-CoA還原酶(例如，阿托伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、洛伐他汀、氟伐他汀，和還原酶抑制劑羅伐他汀)。
實(shí)施例 現(xiàn)在只是一般性地描述了本發(fā)明，參考下列實(shí)施例，本發(fā)明將變得更容易理解，但其所包括的內(nèi)容僅是出于解釋本發(fā)明的某些方面和實(shí)施方案的目的，而不是意欲限制本發(fā)明。
實(shí)施例1. 合成苯二氮

類核的代表性的一般方法。
I部分
6-氯-1-甲基-1H-苯并[d][1，3]噁嗪-2，4-二酮(化合物B，其中R＝CH3)。在配有機(jī)械攪拌、附加漏斗、熱電偶和N2進(jìn)氣口的3L的3頸RBF中，將NaH(30.4g)懸浮于無水THF(400mL)中。在室溫下攪拌的同時(shí)，在45分鐘內(nèi)以分份方式加入5-氯靛紅酸酐的THF(400mL)混懸液。將反應(yīng)混合物攪拌50分鐘(反應(yīng)溫度從18上升至28℃)。然后在15分鐘內(nèi)加入CH3I(285g，125mL)。然后將該混合物在42℃下攪拌16小時(shí)。由于TLC顯示一些未反應(yīng)的原料仍然保留在反應(yīng)混合物中，再加入30mL的CH3I，將反應(yīng)混合物在42℃下再攪拌3小時(shí)。冷卻反應(yīng)混合物(RT)并通過緩慢(40分鐘)加入AcOH(55mL)使反應(yīng)停止。濃縮反應(yīng)混合物，得到275g的粘稠糖漿狀產(chǎn)物，其無需任何其他純化即可使用。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.35(s，3H)，7.54(d，1H)，7.85(d，1H)，7.90(s，1H)。

6-氯-1-甲基-1H-苯并[d][1，3]噁嗪-2，4-二酮(化合物B，其中R＝CH3)。將6-氯-1H苯并[d][1，3]噁嗪-2，4-二酮(22.88g，116mmol)溶于二甲基甲酰胺(150mL)，并加入碳酸鈉(14.73g，139mmol)。然后滴加甲基碘(10.86mL，174mmol)。反應(yīng)在室溫下攪拌過夜。然后加入水(150mL)，將混合物攪拌1小時(shí)。過濾收集固體。將該不純的固體在甲基-叔丁基醚中聲處理幾分鐘，然后過濾收集，得到呈白色固體的產(chǎn)物(19.38g，79％)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.45(s，3H)，7.47(d，1H)，7.89(dd，1H)，7.94(d，1H)。

6-氯-1-(4-甲氧基芐基)-1H-苯并[d][1，3]噁嗪-2，4-二酮(化合物B，其中R＝PMB)。在配有機(jī)械攪拌、熱電偶和N2進(jìn)氣口的3L，3-頸RBF中，將90g(0.455mol)的5-氯靛紅酸酐懸浮于無水THF(0.9L)中。在N2下，加入4-甲氧基芐基氯(75g，0.48mol)，然后加入碘化四丁基銨(84g，0.23mol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌5分鐘，然后在20分鐘內(nèi)，分份加入20g(0.5mol)的NaH(由于放熱，反應(yīng)溫度升高至29℃，因此將反應(yīng)混合物置于水浴中保持溫度低于30℃)。將反應(yīng)攪拌16小時(shí)(RT)。次日，HPLC顯示尚有26％未反應(yīng)的5-氯靛紅酸酐。再加入NaH(1g)，將反應(yīng)混合物加熱至32℃，再攪拌5小時(shí)。NMR顯示，所有原料均已消耗完。通過緩慢加入10g的冰醋酸停止反應(yīng)，然后攪拌30分鐘。通過硅藻土過濾反應(yīng)混合物，用THF洗滌濾餅。濃縮濾液得到280g的粗產(chǎn)物(黃褐色固體)，其無需進(jìn)一步純化即可使用。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.8(s，3H)，5.25(s，2H)，6.8(d，2H)，7.2(m，3H)，7.75(d，1H)，7.9(d，1H)。
部分II
7-氯-1-甲基-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2，5-二酮(化合物C，其中R＝Me)。在配有機(jī)械攪拌、冷凝器和N2進(jìn)氣口的2L RBF中，將甘氨酸(38g，0.506mol)加入到粗6-氯-1-甲基-1H-苯并[d][1，3]噁嗪-2，4-二酮(107g，0.506mol)中，然后加入AcOH(500mL)。將反應(yīng)燒瓶在130℃油浴中加熱7小時(shí)。加熱(50-60℃)抽吸下蒸發(fā)溶劑。向該粘稠糖漿狀粗產(chǎn)物中加入1L的EtOAc，然后慢慢加入NaHCO3(飽和)水溶液以調(diào)節(jié)pH至～7。然后加入10mL的2M NaOH調(diào)節(jié)pH至～9-10。該混合物得到了固體，還有有機(jī)和水層。過濾固體，得到含一些雜質(zhì)的產(chǎn)物。固體在400mL DCM和200mL NaHCO3中分配，攪拌該漿體20分鐘，然后過濾除去不溶的雜質(zhì)。分離DCM層，并用3％NaHCO3洗滌，然后用鹽水(200mL)洗滌。干燥DCM層(MgSO4)，過濾并濃縮，得到50g的粗產(chǎn)物。濃縮EtOAc層，得到67g的含一些雜質(zhì)的固體產(chǎn)物。用EtOAc(2x400mL)萃取水層。用Na2SO4干燥合并的有機(jī)物，過濾并濃縮，得到另外6.7g的粗產(chǎn)物。得到總共123.4g的產(chǎn)物，其中50g是非常干凈的。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.2(s，3H)，3.5(m，1H)，3.8(m，1H)，7.35(d，1H)，7.6(m，2H)，8.8(t，1H)。

7-氯-1-(4-甲氧基芐基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2，5-二酮(化合物C，其中R＝PMB)。在配有機(jī)械攪拌、冷凝器和N2進(jìn)氣口的2L RBF中，將甘氨酸(34g，0.45mol)加入到6-氯-1-(4-甲氧基芐基)-1H-苯并[d][1，3]噁嗪-2，4-二酮(280g)中，然后加入AcOH(500mL)。將反應(yīng)燒瓶在130℃油浴中加熱8小時(shí)。在50-60℃下，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上除去溶劑。向該粘稠糖漿狀粗產(chǎn)物中加入庚烷(1L)和H2O(1L)，然后加入NaHCO3(以調(diào)節(jié)pH至～8-9。該混合物得到了固體，還有有機(jī)和水層。倒出有機(jī)和水層，用500mL的5％NaHCO3溶液攪拌固體。倒出NaHCO3層，將粘稠的固體懸浮于懸浮于700mL EtOAc和300mL的二氯甲烷(DCM)中。攪拌該混合物20分鐘，過濾，用1L的DCM洗滌濾餅。濃縮濾液，讓殘留物通過330g硅膠塞，使用25/75至75/25EtOAC/庚烷(共8L)。合并干凈的各部分，得到58g的粗產(chǎn)物。由腳步純凈的部分得到另外13g的～70％粗產(chǎn)物。兩個步驟的收率是47％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.45(m，1H)，3.6(s，3H)，3.8(m，1H)，4.8(d，1H)，5.3(d，1H)，6.8(d，2H)，7.1(d，2H)，7.7-7.5(m，3H)，8.9(t，1H)。
實(shí)施例2. 同時(shí)合成苯二氮

核和插入C3官能團(tuán)的代表性的一般方法。

7-氯-3-(2-氯芐基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2，5-二酮。將鹽酸2-氨基-3-(2-氯苯基)丙酸(3.0g，12.7mmol)懸浮于乙腈(50mL)和水(5mL)中，加入三乙胺(3.57mL，25.4mmol)導(dǎo)致形成沉淀和攪拌無效。加入水(10mL)直至所有固體溶解。分份加入5-氯靛紅酸酐(2.51g，12.7mmol)，在加入下一份前等待至各個部分溶解。連續(xù)的各份需要越來越長的時(shí)間，最后一份時(shí)需要長達(dá)15分鐘。在加入最后一份時(shí)，將該混懸液聲處理數(shù)分鐘，然后在環(huán)境溫度下攪拌過夜。真空濃縮該清澈溶液，然后用丙酮共沸2次。將殘留物再溶于乙酸(30mL)，并加熱至130℃6小時(shí)。真空濃縮混合物成油，用乙酸乙酯(150mL)稀釋，用水(3x50mL)，然后用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮成棕色固體。將該固體再懸浮于乙酸乙酯(20mL)和己烷(10mL)，然后在環(huán)境溫度下攪拌30分鐘。過濾，得到7-氯-3-(2-氯芐基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2，5-二酮(2.4g，56％)。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.97(m，1H)，3.23(m，1H)，4.00(m，1H)，7.12(d，1H，J＝8.79Hz)，7.27(m，2H)，7.40(m，2H)，7.58(dd，1H，J 1＝8.79Hz，J 2＝2.64Hz)，7.67(d，1H，J＝2.64Hz)，8.73(d，1H，J＝6.15Hz)，10.59(s，1H)；ESI m/z 335.0，337.0。

7-氯-3-(2-氯芐基)-1-(4-甲氧基芐基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2，5-二酮。將7-氯-3-(2-氯芐基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2，5-二酮(0.8g，2.39mmol)，粉末狀的碳酸鉀(0.495g，3.58mmol)和4-甲氧基芐基氯(0.39mL，2.86mmol)懸浮于N，N-二甲基甲酰胺(20mL)中，并在環(huán)境溫度下攪拌過夜。將該溶液傾倒入水(100mL)和乙酸乙酯(150mL)中。分離各層，用水(2x100mL)，然后用鹽水洗滌有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，倒出并在硅膠存在下濃縮。通過柱色譜，用0-50％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫來純化產(chǎn)物，得到7-氯-3-(2-氯芐基)-1-(4-甲氧基芐基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2，5-二酮(0.65g，60％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.06(m，1H)，3.30(m，2H)，3.66(s，3H)，4.13(m，1H)，4.82(d，1H)，5.34(d，1H)，6.76(d，2H，J＝8.79Hz)，6.96(d，2H，J＝8.79Hz)，7.21-29(m，2H)，7.36-45(m，2H)，7.54-7.61(m，3H)，8.97(d，1H，J＝5.86Hz)；ESI m/z 455.1。
實(shí)施例3. 合成(E)-5，7-二氯-苯二氮雜

-2(3H)-酮中間體的代表性的一般方法。

(E)-5，7-二氯-3-(2-氯芐基)-1-(4-甲氧基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。在氮?dú)獯髿庀?，?-氯-3-(2-氯芐基)-1-(4-甲氧基芐基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2，5-二酮(0.65g，1.43mmol)懸浮于無水甲苯(10mL)中。加入N，N-二甲基苯胺(0.36mL，2.9mmol)，然后加入氯氧化磷(0.20mL，2.1mmol)，混合物在90℃下加熱4小時(shí)。在冷卻至室溫后，用40mL的乙酸乙酯∶己烷(1∶2)稀釋該混合物，用冰水(10mL)、冰冷的1M鹽酸(2x10mL)和鹽水洗滌，然后用硫酸鈉干燥，倒出并真空濃縮。將殘留物再溶解于少量的乙酸乙酯，然后傾倒至硅石塞上。用100mL的乙酸乙酯∶己烷(1∶2)洗脫產(chǎn)物，得到(E)-5，7-二氯-3-(2-氯芐基)-1-(4-甲氧基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(680mg，100％)，其無需進(jìn)一步純化即可使用。

(E)-5，7-二氯-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(化合物D，其中R＝Me)。在配有機(jī)械攪拌、冷凝器和N2進(jìn)氣口的1L 2頸RBF中，將7-氯-1-甲基-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2，5-二酮(42.5g，0.189mol)懸浮到400mL的甲苯中。向其中加入N，N-二甲基苯胺(45.5g.0.375mol)，然后加入POCl3(29g，0.189mol)，將反應(yīng)混合物攪拌3分鐘(RT)。反應(yīng)燒瓶置于90℃油浴中，將反應(yīng)混合物攪拌/加熱7小時(shí)，然后在RT下9小時(shí)。通過加入500mL的冰水并攪拌15分鐘來使反應(yīng)停止。分離有機(jī)層，用冷0.5M HCl(300mL)，冷水(300mL)，然后用冷飽和NaHCO3(300mL)快速洗滌。干燥有機(jī)層(MgSO4)，過濾并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮，得到40g的黃色固體。收率87.5％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.25(s，3H)，3.8-3.9(s，1H，br)，4.3-4.4(s，1H，br)，7.4(d，1H)，7.7-7.8(m，2H)。

(E)-5，7-二氯-1-(4-甲氧基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。在配有磁力攪拌棒、冷凝器和N2進(jìn)氣口的1L 3頸RBF中，將7-氯-1-(4-甲氧基芐基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2，5-二酮(45g，0.136mol)懸浮于400mL的甲苯中。向其中加入N，N-二甲基苯胺(33g，0.272mol)，然后加入POCl3(23g)。將反應(yīng)攪拌3分鐘(RT)。反應(yīng)燒瓶置于90℃油浴中，將反應(yīng)混合物加熱5小時(shí)，然后冷卻。通過加入450mL的冰水并攪拌15分鐘來使反應(yīng)停止。分離有機(jī)層，并用冷水(2x250mL)和鹽水(300mL)快速洗滌。然后用MgSO4干燥有機(jī)層，過濾并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮，得到57g的黑色粗產(chǎn)物。粗產(chǎn)物用于下一步驟而無須進(jìn)一步純化。收率87.5％. 實(shí)施例4. 在(E)-5，7-二氯-苯二氮雜

-2(3H)-酮中間體上插入C3-取代基的代表性的一般方法
(E)-3-(2-溴芐基)-5，7-二氯-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。在氮?dú)獯髿庀聦?E)-5，7-二氯-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(400mg，1.65mmol)溶于無水四氫呋喃(5mL)中，冷卻至-78℃，然后滴加1M叔丁基鉀的四氫呋喃(1.7mL，1.7mmol)溶液。將反應(yīng)混合物攪拌10分鐘，然后滴加2-溴芐基溴(411mg，1.65mmol)的四氫呋喃(2mL)溶液。將該混合物在-78℃下攪拌20分鐘，然后移去冷卻浴，加熱該混合物至室溫，并在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。加入哌嗪(283mg，3.29mmol)以除去過量的2-溴芐基溴，在環(huán)境溫度下將該混合物攪拌30分鐘，用乙酸乙酯稀釋，并用1M冰鹽酸(2x40mL)洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)層，倒出并真空濃縮成約20mL的紅色液體。在硅膠的短盒上純化產(chǎn)物，用100mL的乙酸乙酯∶己烷(1∶2)洗脫，得到(E)-3-(2-溴芐基)-5，7-二氯-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(0.44g，65％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.40(s，3H)3.75(m，2H)，4.15(m，1H)，7.05-7.55(m，7H)。
實(shí)施例5. 由(E)-5，7-二氯-苯二氮雜

-2(3H)-酮中間體合成C5-芳基脲化合物的代表性的一般方法。
方法A 部分IC-5芳基取代基的插入
(Z)-叔丁基-4-(7-氯-1-(4-甲氧基芐基)-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基氨基甲酸酯。用(4-叔丁氧基羰基氨基苯基)硼酸(3.72g，18.84mmol)，Pd(PPh3)4(0.362g，0.314mmol)，2N Na2CO3(23.5mL)水溶液和DME(2.5mL)處理酰亞胺氯(5.5g，15.7mmol)，用氮?dú)獬龤獠⒃?0℃下加熱3小時(shí)。冷卻反應(yīng)混合物，用EtOAc(200mL)稀釋并傾倒入水(200mL)中。分離各層，用EtOAc(100mL)萃取水層。用鹽水(200mL)洗滌合并的萃取液，用MgSO4干燥，并蒸發(fā)至干燥。通過快速柱色譜(用20％EtOAc的己烷溶液洗脫)純化粗物質(zhì)，得到呈灰白色固體的(Z)-叔丁基4-(7-氯-1-(4-甲氧基芐基)-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基氨基甲酸酯(3.4g，42.8％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.55(s，9H)，3.73(s，3H)，3.83(d，1H)，4.63(d，1H)，4.86(d，1H)，5.59(d，1H)，6.63(d，2H)，6.66(d，2H)，6.93(d，2H)，7.17(s，1H)，7.28(s，2H)，7.32-7.41(m，6H)。MS m/z 507.3[M+1] 部分IIC3-取代基的插入。

(Z)-叔丁基7-氯-3-(2-氯芐基)-1-(4-甲氧基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基氨基甲酸酯。在-78℃和氮?dú)獯髿庀孪?Z)-叔丁基4-(7-氯-1-(4-甲氧基芐基)-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基氨基甲酸酯(2g，3.95mmol)的溶液中加入叔丁氧鉀(1M，在THF中，7.9mL，7.9mmol)的溶液。在加入完成后，將反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌半小時(shí)，并在-78℃下，在15分鐘內(nèi)滴加2-氯芐基溴(0.570mL，4.34mmol)的THF(10mL)溶液。將反應(yīng)混合物在-78℃下再攪拌2小時(shí)，然后將溫度升高至室溫。在N2大氣和室溫下，將反應(yīng)混合物保持過夜。用水(50mL)使反應(yīng)混合物停止反應(yīng)，并用EtOAc(3x50mL)萃取。用鹽水(100mL)洗滌合并的萃取液，干燥(MgSO4)并真空干燥。通過快速柱色譜(用20％EtOAc的己烷溶液洗脫)純化粗物質(zhì)，得到呈淡黃色固體的(Z)-叔丁基7-氯-3-(2-氯芐基)-1-(4-甲氧基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基氨基甲酸酯(0.78g，31.3％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.49(s，9H)，3.32(s，3H)，3.55(d，2H)，3.59(s，3H)3.90(t，1H)，4.78(d，1H)，5.47(d，1H)，6.64(d，2H)，6.82(d，2H)，7.06(d，2H)，7.10(s，1H)，7.21-7.30(m，3H)，7.32-7.62(m，3H)，7.64(d，1H)，7.75(d，1H)，9.61(s，1H)。MS m/z 631.36[M+1]。
部分III對甲氧基芐基的去除
(Z)-叔丁基4-(3-(2-溴芐基)-7-氯-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基氨基甲酸酯。在-15℃下，向(Z)-叔丁基7-氯-3-(2-溴芐基)-1-(4-甲氧基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基氨基甲酸酯(7.07g，10.47mmol)的CH3CN/H2O(250/83mL)混合物溶液中分份加入硝酸鈰(IV)銨(45.9g，83.76mmol)。反應(yīng)混合物在-15℃下攪拌1小時(shí)，將溫度升高至室溫，混合物在室溫下保持2小時(shí)。然后用水(200ml)和EtOAc(200mL)稀釋反應(yīng)混合物。分離有機(jī)層并用EtOAc(2x200mL)萃取水層。用鹽水(100mL)洗滌合并的萃取液，干燥(MgSO4)并真空干燥。通過快速柱色譜(用40％EtOAc的己烷溶液洗脫)純化粗物質(zhì)，得到呈灰白色固體的(Z)-叔丁基4-(3-(2-溴芐基)-7-氯-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基氨基甲酸酯(3.3g，56.8％)。MS m/z 555.25[M+1]。
部分IVBoc保護(hù)基的去除
(Z)-5-(4-氨基苯基)-3-(2-溴芐基)-7-氯-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。在0℃下向(Z)-叔丁基4-(3-(2-溴芐基)-7-氯-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-5-基)苯基氨基甲酸酯(3.3g，5.94mmol)的二氯甲烷(45mL)溶液中滴加三氟乙酸(15mL)。在完成加入后，將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌1小時(shí)，然后將溫度升高至室溫，并保持在室溫下4小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃，并用10％NaOH的水溶液處理，直至達(dá)到pH＞10。分離這兩層。用水層萃取二氯甲烷(2x50mL)。用鹽水(100mL)洗滌合并的萃取液，干燥(MgSO4)并真空蒸發(fā)。通過快速柱色譜(用40％EtOAc的己烷溶液洗脫)純化粗物質(zhì)，得到呈淡黃色固體的(Z)-5-(4-氨基苯基)-3-(2-溴芐基)-7-氯-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(2.35g，87％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.45(d，2H)，3.71(t，1H)，5.62(s，2H)，6.53(d，2H)，7.10-7.17(m，3H)，7.22-7.25(m，2H)，7.33(t，1H)，7.46-7.61(m，3H)，10.64(s，1H)。MS，m/z 455.19[M+1]。
部分V從C5-氨基芳基中間體插入脲
向三光氣(0.023mg，0.078mmol)的1，2-二氯乙烷(1mL)的溶液加入(Z)-5-(4-氨基苯基)-3-(2-溴芐基)-7-氯-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(0.08g，0.195mmol)，二異丙基乙胺(0.051mL，0.2925mmol)的二氯乙胺(1mL)溶液。在室溫下將反應(yīng)混合物在封口的7mL玻璃瓶中攪拌10分鐘，然后用胺(R5NH2，0.468mmol)，二異丙基乙胺(0.051mL，0.2925mmol)的1，2-二氯乙烷(1mL)溶液處理。然后將反應(yīng)混合物在60℃下加熱12小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干燥，通過自動高效液相色譜法純化各個樣品。
方法B 部分I
(E)-3-(2-溴芐基)-5，7-二氯-1-(4-甲氧基芐基)-1H-苯并[b]氮雜

-2(3H)-酮。在-78℃和N2大氣下，向(E)-5，7-二氯-1-(4-甲氧基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(0.45g，1.28mmol)的無水THF(20mL)溶液中加入叔丁氧鉀(1M，在THF中，1.54mL，1.54mmol)溶液。在完成加入后，將反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌半小時(shí)，并在15分鐘內(nèi)在-78℃下滴加2-溴芐基溴(0.386mL，1.54mmol)的THF(5mL)溶液。將反應(yīng)混合物在-78℃下再攪拌2小時(shí)，然后將溫度升高至室溫。在N2大氣下，將反應(yīng)混合物保持在室溫下過夜。用飽和NH4Cl(50mL)使反應(yīng)混合物停止反應(yīng)，并用EtOAc(3x50mL)萃取。用鹽水(100mL)洗滌合并的萃取液，干燥(MgSO4)并真空干燥。通過快速柱色譜(用20％EtOAc的己烷溶液洗脫)純化粗物質(zhì)，得到呈淡白色固體的(E)-3-(2-溴芐基)-5，7-二氯-1-(4-甲氧基芐基)-1H-苯并[b]氮雜

-2(3H)-酮(0.49g，74％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.65(s，3H)，4.06-4.10(m，2H)，4.86(d，1H)，5.39(d，1H)，4.79(d，2H)，6.92(d，2H)，7.12-7.39(m，3H)，7.54-7.56(m，1H)，7.67-7.82(m，3H)。MS m/z 519.20[M+1]。
部分II 關(guān)注的是，如下所述，使用鈀偶合反應(yīng)可以將脲芳基硼酸酯與5，7-二氯-苯并[b]氮雜

-2(3H)-酮偶合。

使用下述方法可以制備各種的脲芳基硼酸酯。

合成脲的一般性方法。在氮?dú)庀拢诟稍餆恐袑⑷鈿?0.3倍當(dāng)量)溶于無水二氯甲烷(20％v/v)。將氨基硼酸酯(1倍當(dāng)量)溶于二氯甲烷(20％v/v)，向其中加入二異丙基乙胺(1倍當(dāng)量)。在1小時(shí)的時(shí)間里向該攪拌的三光氣溶液中滴加該混合物。再攪拌5分鐘后，整份加入伯胺(1倍當(dāng)量，R5NH2)，然后立即加入二異丙基乙胺(1倍當(dāng)量)。然后將該混合物攪拌過夜。加入水(20％v/v)并將該混合物攪拌5分鐘。除去水層，并再加入水。純化各產(chǎn)物包括在水中沉淀或萃取到有機(jī)溶劑中。在一些情況中，通過色譜進(jìn)一步純化也是必要的。典型地，收率是70-80％。
實(shí)施例6. 由(E)-5，7-二氯-苯二氮雜

-2(3H)-酮中間體合成C5-烷氧基芳基化合物的代表性的一般方法。

(Z)-7-氯-5-(4-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。在配有磁力攪拌棒、冷凝器、熱電偶和N2進(jìn)氣口的1L 3-頸RBF中，將粗(E)-5，7-二氯-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(30g，0.124mol)溶于300mL的DME。向其中加入Na2CO3(21g，0.2mol)的200mL H2O溶液，然后加入4-甲氧基苯基硼酸酯(22g，0.145mol)和Pd(PPh3)4(1.2g ，8.3mmol)。在N2下，將反應(yīng)混合物在85℃油浴中加熱2小時(shí)，然后冷卻至室溫。向其中加入200mL的EtOAc并將該混合物攪拌5分鐘。分離有機(jī)層并用H2O(200mL)和鹽水(200mL)洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)層然后濃縮至干燥，得到53g的粗產(chǎn)物。使用210g的硅膠和EtOAc/庚烷(12∶88至30∶70至50∶50至70∶30；共8L流動相)進(jìn)行硅膠色譜法。合并包含粗產(chǎn)物的部分并濃縮至干燥，得到42.7g的粗產(chǎn)物(定量)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.38(s，3H)，3.73(d，1H)，3.85(s，3H)，4.75(d，1H)，6.9(m，2H)，7.31(m，2H)，7.48-7.58(m，3H)。

(Z)-7-氯-1-(4-甲氧基芐基)-5-(4-甲氧基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。在配有磁力攪拌棒、冷凝器、熱電偶和N2進(jìn)氣口的1L 3頸RBF中，將粗(E)-5，7-二氯-1-(4-甲氧基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(54g)溶于360mL的DME.向其中加入Na2CO3(23g，0.15mol，在250mL的H2O中)溶液，然后加入4-甲氧基苯基硼酸(22.7g，0.15mol)和Pd(PPh3)4(1.4g，1.2mmol)。將反應(yīng)混合物在85℃油浴中加熱2小時(shí)，然后冷卻(RT)。向其中加入200mL的EtOAc并將該混合物攪拌5分鐘。分離有機(jī)層，用200mL H2O，然后用鹽水洗滌。濃縮有機(jī)層至干燥，得到68g的粗產(chǎn)物。使用550g的硅膠和25/75至60/40EtOAc/庚烷進(jìn)行柱色譜法。合并包含粗產(chǎn)物的部分，得到21g的粗產(chǎn)物，包含少量雜質(zhì)的其他部分(通過TLC)得到另外的20g產(chǎn)物，盡管較為不純。但是這兩部分的NMR是相同的。共獲得41g的產(chǎn)物。兩個步驟的收率是72％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ3.7(s，3H)，3.80(d，1H)，3.85(s，3H)，4.57(d，1H)，4.85(d，1H)，5.57(d，1H)，6.63(d，2H)，6.85-6.95(m，4H)，7.16(d，1H)，7.3-7.44(m，4H)。
實(shí)施例7. 在C5-芳基-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮上插入C3-取代基的代表性的一般方法
(Z)-7-氯-5-(4-甲氧基苯基)-1-甲基-3-(2-甲基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。向攪拌和冷卻(干冰/丙酮浴)下的(Z)-7-氯-5-(4-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(0.50g，1.59mmol)的THF(8mL)溶液中緩慢加入1MKOtBu(2.4mL，2.4mmol，1.5倍當(dāng)量)。在干冰/丙酮浴上將所得到的深紅色混合物攪拌～10分鐘，然后緩慢加入2-甲基芐基溴(0.46g，2.5mmol，1.5倍當(dāng)量)的THF(2mL)溶液。在-78℃下再攪拌～35分鐘后，用水使反應(yīng)混合物停止反應(yīng)，并用EtOAc稀釋。干燥有機(jī)層(Na2SO4)，過濾并蒸發(fā)(旋轉(zhuǎn)，然后高真空)。使用20-40％EtOAc/庚烷，在硅膠上進(jìn)行色譜得到0.56g(收率的84％)的標(biāo)題產(chǎn)物[注意當(dāng)使用芐基氯作為烷化劑時(shí)，在低溫下加入碘化四丁基銨和該烷化劑]。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ2.38(s，3H)，3.41(s，3H)，3.5-3.65(m，2H)，3.74(dd，1H)，3.84(s，3H)，6.89(dt，2H)，7.05-7.15(m，3H)，7.25-7.35(m，3H)，7.45-7.5(m，3H)。

(Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-5-(4-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。在氮?dú)庀拢瑢?Z)-7-氯-5-(4-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(0.2g，0.635mmol)溶于干燥THF(5mL)并冷卻至-78℃?？焖贁嚢柘?，分兩份加入呈固體的叔丁氧鉀(86mg，0.762mmol)。該混合物立即變色并迅速轉(zhuǎn)變?yōu)樯罴t色。5分鐘后，通過注射器滴加2-氯芐基溴(107μL，0.836mmol)。在氮?dú)夂?78℃下，將該混合物攪拌1小時(shí)。它變?yōu)榈稚?。TLC(1∶1己烷∶乙酸乙酯)證明，沒有原料剩余，主要是極性較小的產(chǎn)物以及或多或少的極性產(chǎn)物和i一些殘留的2-氯芐基溴。通過加入～2mL 1∶1甲醇∶水并冷卻使反應(yīng)停止。形成了黃色沉淀。移去冷浴，將混合物加熱至室溫。加入水和乙酸乙酯。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌一次，然后用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)溶劑。在10g硅膠上進(jìn)行色譜，用30-50％梯度的乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，得到呈黃色油狀的(Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-5-(4-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(232mg，0.528mmol，83％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.37(s，3H)，3.6-3.75(m，2H)，3.79-3.86(m，1H)，3.81(s，3H)，6.85(d，J＝9Hz，2H)，7.1-7.6(m，9H)；ESIm/z 439.6[M+H+]。

(Z)-3-(3-溴芐基)-1-(4-甲氧基芐基)-7-氯-5-(4-甲氧基苯基)-1H-苯并[e][1，4]-二氮雜

-2(3H)-酮。向攪拌和冷卻(干冰/丙酮浴)下的(Z)-7-氯-1-(4-甲氧基芐基)-5-(4-甲氧基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(6.00g，14.2mmol)的THF(80mL)溶液中緩慢加入1M KOtBu(21mL，21mmol，1.5倍當(dāng)量)。在干冰/丙酮浴上將所得到的深紅色混合物攪拌～10分鐘，然后緩慢加入3-溴芐基溴(5.10g，21.4mmol，1.5倍當(dāng)量)的THF(15mL)溶液。在-78℃下再攪拌～45分鐘后，用飽和鹽水使反應(yīng)混合物停止反應(yīng)，并用EtOAc稀釋。干燥有機(jī)層(Na2SO4)，過濾并蒸發(fā)(旋轉(zhuǎn)，然后高真空)。使用10-30％EtOAc/庚烷，在硅膠上進(jìn)行色譜得到7.08g(收率的84％)的標(biāo)題產(chǎn)物[注意當(dāng)使用芐基氯作為烷化劑時(shí)，在低溫下加入碘化四丁基銨和該烷化劑]。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.57(d，2H)，3.70(s，3H)，3.73(t，1H)，3.83(s，3H)，4.59(d，1H)，5.62(d，1H)，6.61(d，2H)，6.8-6.9(m，4H)，7.2-7.45(m，8H)，7.63(fine d，1H)。

(Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-1-(4-甲氧基芐基)-5-(4-甲氧基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。在氮?dú)庀拢瑢?Z)-7-氯-1-(4-甲氧基芐基)-5-(4-甲氧基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(0.344g，0.817mmol)溶于干燥THF(8mL)并冷卻至-78℃。整份加入叔丁氧鉀(0.119g，1.063mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌5分鐘，變?yōu)樯罴t色。5分鐘后，通過注射器滴加2-氯芐基溴(0.128mL，0.981mmol)。在-78℃下，將該混合物攪拌1.5小時(shí)。然后移去冷浴。1小時(shí)后，用甲醇使反應(yīng)停止，并用乙酸乙酯稀釋。以水洗滌有機(jī)層(2×)然后用鹽水洗滌并干燥(MgSO4)。用25-30％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，得到(Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-1-(4-甲氧基芐基)-5-(4-甲氧基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(128mg，29％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.6-3.8(m，2H)3.7(s，3H)，3.8(s，3H)，3.9-4.0(m，1H)，4.55(d，1H)，5.7(d，1H)，6.6(d，2H)，6.8-6.9(m，4H)，7.1-7.4(m，8H)，7.6(dd，1H)；ESI m/z。
基于上述方法制備下列化合物。
(Z)-7-氯-5-(4-甲氧基苯基)-3-(3-溴芐基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.40(s，3H)，3.45-3.55(m，2H)，3.67(dd，1H)，3.86(s，3H)，6.91(d，2H)，7.14(t，1H)，7.25-7.3(m，3H)，7.33(ddd，1H)，7.45-7.55(m，4H)。
(Z)-7-氯-5-(4-甲氧基苯基)-3-(3-甲基芐基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.31(s，3H)，3.38(s，3H)，3.5-3.6(m，2H)，3.68(dd，1H)，3.82(s，3H)，6.88(d，2H)，6.99(m，1H)，7.1-7.2(m，3H)，7.2-7.3(m，3H+CHCl3)，7.4-7.53(m，3H)。
(Z)-7-氯-3-(3-異丙基芐基)-5-(4-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.24/1.25(2重峰，6H)，2.88(7重峰，1H)，3.38(s，3H)，3.5-3.6(m，2H)，3.69(t，1H)，3.84(s，3H)，6.89(d，2H)，7.07(dt，1H)，7.13(dt，1H)，7.15-7.3(m，4H；包括CHCl3單峰)，7.47(dd，1H)，7.52(d，2H)。
(Z)-3-(4-異丙基芐基)-7-氯-5-(4-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.23(d，6H)，2.84(7重峰，1H)，3.39(s，3H)，3.51(m，2H)，3.69(dd，1H)，3.85(s，1H)，6.89(m，2H)，7.12(m，2H)，7.26(m，4H)，7.44-7.54(m，3H)。
(Z)-3-(4-異丙基芐基)-7-氯-1-(4-甲氧基芐基)-5-(4-羥基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.15(d，6H)，2.85(7重峰，1H)，3.25-3.45(m，3H)，3.65(s，3H)，3.75-3.85(m，4H)，4.80(d，1H)，5.45(d，1H)，6.60(m，2H)，6.85(m，2H)，6.95(m，2H)，7.0-7.3(m，6H)，7.63(dd，1H)，7.74(d，1H)。
實(shí)施例8. 由C3-鹵代芳烷基化合物合成C3-烷基芳烷基化合物的代表性的一般方法
(Z)-7-氯-3-(3-乙基芐基)-5-(4-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。向攪拌和冷卻(干冰/丙酮浴)下的(Z)-3-(3-溴芐基)-7-氯-5-(4-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(1.21g，2.5mmol)和PdCl2(dppf)
的干燥THF(10mL)溶液中加入1M Et2Zn(9.3mL，10mmol，4倍當(dāng)量)。在加熱至室溫后，將反應(yīng)混合物在50℃下攪拌直至HPLC證明反應(yīng)完全。在水處理后，色譜法得到0.95g(收率的88％)的標(biāo)題產(chǎn)物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.22(t，3H)，2.62(q，2H)，3.55(d，2H)，3.70(t，1H)，3.84(s，3H)，6.89(d，2H)，7.03(m，1H)，7.1-7.3(m，5H)，7.4-7.55(m，3H)。
基于上述方法制備下列化合物 (Z)-7-氯-3-(3-乙基芐基)-1-(4-甲氧基芐基)-5-(4-甲氧基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.23(t，3H)，2.63(q，2H)，3.55-3.65(m，2H)，3.68(s，3H)，3.80(dd，1H)，3.83(s，3H)，4.59(d，1H)，5.63(d，1H)，6.61(d，2H)，6.85(d，2H)，6.88(d，2H)，7.04(dt，1H)，7.10(fine d，1H)，7.13-7.26(m，5H)，7.30(d，1H)，7.37(dd，1H)。
實(shí)施例9。
酰胺氮原子脫保護(hù)的代表性的一般方法。
方法A
(Z)-3-(3-乙基芐基)-7-氯-5-(4-甲氧基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。向PMB-保護(hù)的苯二氮雜

酮(1g)的MeCN(17mL)和H2O(3mL)溶液中加入硝酸鈰(IV)銨(CAN)(7g)。攪拌反應(yīng)混合物，直至TLC顯示反應(yīng)完全，然后用水、EtOAc和庚烷稀釋。干燥有機(jī)層(Na2SO4)，過濾并蒸發(fā)成粗固體。使用量逐漸增加的DCM/EtOAc(1∶1)的庚烷(至25∶25∶50DCM/EtOAc/庚烷)溶液進(jìn)行色譜，得到0.55g(收率的57％)的標(biāo)題產(chǎn)物。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.19(t，3H)，2.57(q，2H)，3.2-3.4(m，2H)，3.7-3.8(m，4H；在3.79處包含Ome單峰)，7.0-7.1(m，3H)，7.1-7.35(m，5H)，7.39(d，2H)，7.71(dd，1H)，10.9(br s，1H)。
基于上述方法制備下列化合物 (Z)-3-(4-異丙基芐基)-7-氯-5-(4-甲氧基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.15(d，6H)，2.85(7重峰，1H)，3.25-3.38(m，2H)，3.8(br s，4H)，6.95-7.50(m，10H)，7.73(dd，1H)，10.9(s，1H)。
方法B
(Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-5-(4-甲氧基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。在氮?dú)庀聦?Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-5-(4-甲氧基苯基)-1-(4-甲氧基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(128mg，0.235mmol)溶于苯甲醚(1mL)，整份加入AlCl3(125mg，0.939mmol)。將所得到的橙色溶液加熱至85℃2小時(shí)。在將該混合物冷卻至室溫后，加入冰和乙酸乙酯，將該混合物攪拌30分鐘。各層分段，用水，然后用鹽水洗滌。用乙酸乙酯回提合并的水層，干燥合并的有機(jī)層(MgSO4)，過濾并蒸發(fā)。殘留物在硅膠上進(jìn)行色譜，用5％，然后30％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，得到呈白色固體的(Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-5-(4-甲氧基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(99mg，99％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.60-3.77(m，2H)，3.84(s，3H)，3.84-3.86(m，1H)，6.88(dd，J＝7，2Hz，2H)，7.08(d，J＝9Hz，1H)，7.15-7.33(m，3H)，7.38(dd，J＝7，2Hz，2H)，7.45(dd，J ＝9，2Hz，1H)，7.60(dd，J＝8，2Hz，1H)，8.59(s，1H)；ESI m/z 425.1. 實(shí)施例10. 除去甲氧基保護(hù)基的代表性的一般方法。
方法A
(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-3-(2-甲基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。向(Z)-7-氯-5-(4-甲氧基苯基)-3-(2-甲基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮前體(0.6g，1.4mmol)的CH2Br2(20mL)溶液中加入EtSH(7mL)，然后加入AlBr3(1.7g，6.3mmol，4.5倍當(dāng)量)。將所得到的混合物攪拌過夜，然后用冰(20g)處理，1小時(shí)后過濾。用50％DCM/庚烷研磨所得到的固體，然后真空干燥，得到呈淡黃色固體的445mg(收率的80％)的(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-3-(2-甲基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.31(s，3H)，3.25-3.45(m，2H)，3.73(dd，1H)，6.80(d，2H)，7.02-7.18(m，3H)，7.2-7.3(m，5H)，7.64(dd，1H)，10.0(br s，1H)，10.7(br s，1H)。MS，m/z 391.7[M+1]。
基于上述方法制備下列化合物 (Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-3-(2-甲基芐基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.32(s，3H)，3.3-3.5(m，5H；在3.36處包含NMe的單峰)，3.90(t，1H)，6.87(d，2H)，7.05-7.15(m，3H)，7.20(m，1H)，7.29(fined，1H)，7.35(d，2H)，7.65(d，1H)，7.78(dd，1H)，9-11(br s，1H)。MS，m/z 405.3[M+1]。
(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-3-(3-甲基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.28(s，3H)，3.2-3.4(m，2H；包含水的信號)，3.63(t，1H)，6.79(d，2H)，7.00(d，1H)，7.05-7.15(m，3H)，7.20(m，1H)，7.29(fine d，1H)，7.31(d，2H)，7.62(dd，1H)，9.95(s，1H)，10.61(s，1H)。MS，m/z 391.7[M+1]。
(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-3-(3-甲基芐基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.25(s，3H)，3.25-3.45(m，5H；在3.35處包含NMe的單峰)，3.83(t，1H)，6.87(d，2H)，6.99(d，1H)，7.05-7.2(m，3H)，7.28(fine d，1H)，7.38(d，2H)，7.63(d，1H)，7.77(dd，1H)，10.2(br s，1H)。MS，m/z 405.3[M+1]。
(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-3-(4-甲基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.23(s，3H)，3.2-3.4(m，3H)，3.80(m，1H)，6.86(d，2H)，7.09(d，2H)，7.23(d，2H)，7.25-7.35(m，4H)，7.71(dd，1H)，10.3(br s，1H)，10.9(br s，1H)。MS，m/z 391.8[M+1]。
(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-3-(4-甲基芐基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.24(s，3H)，3.25-3.4(m，5H；在3.34處包含NMe的單峰)，3.82(t，1H)，6.87(d，2H)，7.07(d，2H)，7.19(d，2H)，7.28(fine d，1H)，7.37(d，2H)，7.63(d，1H)，7.76(dd，1H)，9.5-11(br s，1H)。MS，m/z 405.3[M+1]。
(Z)-7-氯-3-(2-乙基芐基)-5-(4-羥基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.14(t，3H)，2.72(q，2H)，3.30-3.40(m，2H)，3.66(m，1H)，6.77(m，2H)，7.08-7.26(m，8H)，7.60(d，1H)，9.93(s，1H)，10.66(s，1H)。MS，m/z 405.6[M+1]。
(Z)-7-氯-3-(2-乙基芐基)-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，δ1.11(t，3H)，2.69(q，2H)，3.34(m，2H)，3.74(m，1H)，6.78(m，2H)，7.08-7.32(m，7H)，7.58(d，1H)，7.67(dd，1H)，9.98(s，1H)。MS，m/z 419.3[M+1]。
(Z)-3-(3-乙基芐基)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.16(t，3H)，2.57(q，2H)，3.2-3.35(m，包含芐基質(zhì)子和H2O的信號)，3.60(t，1H)，6.79(d，2H)，7.02(dt，1H)，7.07-7.31(m，7H)，7.61(dd，1H)，9.94(s，1H)，10.62(s，1H)。MS，m/z 405.2[M+1]。
(Z)-3-(3-乙基芐基)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.17(t，3H)，2.57(q，2H)，3.3-3.4(m，包含芐基質(zhì)子和NMe的信號，5H)，3.81(t，1H)，6.86(d，2H)，7.02(dt，1H)，7.08-7.20(m，3H)，7.27(fine d，1H)，7.38(d，2H)，7.63(d，1H)，7.73(dd，1H)，9.5-11(br s)。MS，m/z 419.2[M+1]。
(Z)-3-(4-乙基芐基)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.14(t，3H)，2.58(q，2H)，3.36-3.41(m，5H)，3.95(m，1H)，6.90(m，2H)，7.10-7.42(m，7H)，7.66(d，1H)，7.83(dd，1H)，～10.0(brs，1H)。MS，m/z 419.3[M+1]。
(Z)-3-(4-乙基芐基)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.14(t，3H)，2.55(q，2H)，3.21-3.68(m，2H)，3.60(m，1H)，6.79(m，2H)，7.07-7.29(m，8H)，7.60(dd，1H)，9.94(s，1H)，10.61(s，1H)。MS，m/z 405.3[M+1]。
(Z)-3-(3-異丙基芐基)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.18和1.21(two d，6H)，2.84(heptet，1H)，3.3-3.4(m，5H；在3.34處包含NMe的單峰)，3.82(t，1H)，6.85(d，2H)，7.0-7.3(m，5H)，7.38(d，2H)，7.64(d，1H)，7.77(dd，1H)，9-11(br s，1H)。MS，m/z 433.2[M+1]。
(Z)-3-(4-異丙基芐基)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.15(d，6H)，2.82(7重峰，1H)，3.24-3.38(m，2H)，3.63(m，1H)，6.79(m，2H)，7.10-7.30(m，8H)，7.59(dd，1H)，9.45(s，1H)，10.61(s，1H)。MS，m/z 419.3[M+1]。
(Z)-3-(4-異丙基芐基)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.15(d，6H)，2.84(7重峰，1H)，3.26-3.41(m，5H)，3.77(m，1H)，6.84(m，2H)，7.10-7.40(m，7H)，7.63(d，1H)，7.73(dd，1H)，10.2(brs，1H)。MS，m/z 433.3[M+1]。
方法B
(Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。在氮?dú)庀拢瑢?Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-5-(4-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(230mg，0.524mmol)溶于二氯甲烷(5mL)并冷卻至-78℃。滴加三溴化硼(54μl 0.576mmol)?；旌衔镒兂壬?。將其保持在-78℃下2小時(shí)，然后加熱至室溫。6小時(shí)后TLC表明已無反應(yīng)。再加入相等量的三溴化硼。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。小心地加入水(2mL)，然后加入鹽水(2mL)。用二氯甲烷將水層萃取2次。用硫酸鎂干燥合并的有機(jī)層，并蒸發(fā)溶劑。殘留物在硅膠上進(jìn)行色譜，用30-50％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，得到呈黃色固體的(Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.4(s，3H)，3.6-3.8(m，2H)，3.8-3.9(m，1H)，6.8(d，2H)，7.1-7.6(m，9H)；ESI m/z測定值425.0828[M+H+]，計(jì)算值425.0824。

(Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-5-(4-羥基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。在氮?dú)庀聦?Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-5-(4-甲氧基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(74mg，0.174mmol)溶于二氯乙胺(1mL)，在室溫下滴加BBr3(1M，在二氯甲烷中，0.348mL，0.348mmol)(顏色立即從無色變?yōu)槌壬?。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌約5小時(shí)。再加入2倍當(dāng)量的BBr3的二氯甲烷溶液(0.348mL，0.348mmol)，將混合物再攪拌約18小時(shí)。小心地用甲醇(放熱)使反應(yīng)停止，然后用二氯甲烷稀釋，并用水洗滌2次，然后用鹽水洗滌1次(最后一次洗滌膠化，這樣所加入的一些甲醇就分層)。干燥有機(jī)層(MgSO4)。用20-40％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫進(jìn)行色譜，得到原料和呈黃色固體的(Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-5-(4-羥基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(40mg，56％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.59-3.89(m，3H)，6.30(br s，1H)，6.71(d，J＝8Hz，2H)，7.09-7.32(m，4H)，7.44(dd，J＝9，2Hz，1H)，7.58(d，J＝7Hz，1H)，9.13(s，1H)；ESI m/z 411.0。
實(shí)施例11. 經(jīng)溴-4-(烷氧基芳烷氧基)芳基和5-氯苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮的鈀偶合合成C5-羥基苯基取代的苯二氮雜

的的代表性的一般方法。
部分I
1-溴-4-(4-甲氧基芐氧基)苯。將4-溴苯酚(25.00g，145mmol)，對甲氧基芐基氯(24.89g，159mmol)，碘化鉀(2.17g，14.45mmol)和碳酸鉀(39.9g，289mmol)在丙酮(600mL)中加熱至回流18小時(shí)。然后將粗反應(yīng)混合物冷卻至室溫，通過燒結(jié)玻璃漏斗過濾。真空濃縮濾液，在乙醇中將白色固體重結(jié)晶，得到呈白色固體的產(chǎn)物(33.44g，79％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ3.80(s，3H)，4.95(s，2H)，6.85(d，2H)，6.92(d，2H)，7.32-7.40(m，4H)。
部分II
2-(4-(4-甲氧基芐氧基)苯基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊環(huán)。1-溴-4-(4-甲氧基芐氧基)苯(10.00g，34.1mmol)溶于二噁烷(250mL)，并加入聯(lián)(頻那醇)二硼烷(11.26g，44.3mmol)，和醋酸鉀(10.04g，102mmol)。將該混合物置于真空，直至起泡，然后引入氮?dú)?。將該除氣過程重復(fù)兩次，然后加入四(三苯基膦)鈀(0)(512mg，0.44mmol)，然后將該反應(yīng)加熱至90℃3小時(shí)。然后將該粗反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后用乙酸乙酯稀釋，用水，然后用鹽水洗滌該有機(jī)溶液，然后用硫酸鈉干燥，并濃縮。通過硅膠塞過濾該粗殘留物，用6∶4乙酸乙酯∶己烷洗脫。然后濃縮濾液，并用異丙醇(30mL)洗滌，過濾收集產(chǎn)物，得到呈暗黃色固體的產(chǎn)物(9.85g，85％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.34(s，12H)，3.81(s，3H)，5.02(s，2H)，6.91(d，2H)，6.96(d，2H)，7.36(d，2H)，7.74(d，2H)。
部分III
(Z)-7-氯-5-(4-(4-甲氧基芐氧基)苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。將(E)-5，7-二氯-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(5.00g，20.57mmol)，氫氧化銫(6.91g，41.1mmol)，和2-(4-(4-甲氧基芐氧基)苯基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊環(huán)(9.10g，26.7mmol)溶于二噁烷/水(100mL/30mL)，將該混合物置于真空，然后引入氮?dú)狻⒃摮龤膺^程重復(fù)兩次，然后加入四(三苯基膦)鈀(0)(475mg，0.41mmol)。然后將該反應(yīng)加熱至90℃18小時(shí)，然后冷卻至室溫，然后用乙酸乙酯稀釋該粗混合物，用水，然后用鹽水洗滌該有機(jī)溶液，然后用硫酸鈉干燥，并濃縮。通過硅膠塞過濾該粗產(chǎn)物，用6∶4乙酸乙酯∶己烷洗脫。濃縮濾液，然后用甲基-叔丁基醚洗滌。過濾收集產(chǎn)物，為淡黃色固體(5.13g，59％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ3.36(s，3H)，3.73(d，1H)，3.81(s，3H)，4.77(d，1H)，5.03(s，2H)，6.91(d，2H)，6.98(d，2H)，7.27(d，1H)，7.32(d，1H)，7.36(d，2H)，7.49(dd，1H)，7.55(d，2H)。

(Z)-7-氯-5-(4-(4-甲氧基芐氧基)苯基)-1-甲基-3-(4-(三氟甲基)芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。在氮?dú)獯髿庀聦?Z)-7-氯-5-(4-(4-甲氧基芐氧基)苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(75mg，0.18mmol)溶于四氫呋喃(4mL)，將該溶液冷卻至-78℃。滴加1M叔丁氧鉀的四氫呋喃(267μl，0.267mmol)溶液，將該溶液攪拌10分鐘。然后滴加4-(三氟甲基)芐基溴(64mg，0.267mmol，在1mL四氫呋喃中的溶液)，然后移去冷卻浴。將該反應(yīng)在室溫下攪拌2小時(shí)，然后用水使反應(yīng)停止，混合物在水和乙酸乙酯之間分配。將水的部分再萃取到乙酸乙酯中，用硫酸鈉干燥合并的有機(jī)萃取液，然后濃縮，通過色譜純化(梯度；9∶1己烷∶乙酸乙酯至6∶4己烷∶乙酸乙酯，然后相等)，得到呈澄清殘留物的產(chǎn)物(50mg，49％)。

(Z)-3-(3-溴芐基)-7-氯-5-(4-(4-甲氧基芐氧基)苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。根據(jù)上述方法，由3-溴芐基溴得到呈無色固體的(Z)-3-(3-溴芐基)-7-氯-5-(4-(4-甲氧基芐氧基)苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(47mg，45％)。

(Z)-3-(4-溴芐基)-7-氯-5-(4-(4-甲氧基芐氧基)苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。根據(jù)上述方法，由4-溴芐基溴得到呈無色固體的(Z)-3-(4-溴芐基)-7-氯-5-(4-(4-甲氧基芐氧基)苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(22mg，21％)。

(Z)-7-氯-3-(3-氯芐基)-5-(4-(4-甲氧基芐氧基)苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。根據(jù)上述方法，由3-氯芐基溴得到呈無色固體的(Z)-7-氯-3-(3-氯芐基)-5-(4-(4-甲氧基芐氧基)苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(24mg，25％)。
部分IV
(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-3-(4-(三氟甲基)芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。將(Z)-7-氯-5-(4-(4-甲氧基芐氧基)苯基)-1-甲基-3-(4-(三氟甲基)芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(50mg，0.086mmol)溶于4N HCl的二噁烷(3mL)溶液并攪拌3小時(shí)。然后濃縮該溶液，在5mL的二乙醚中聲處理。過濾收集產(chǎn)物，為嫩黃色固體(24.2mg，61％)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.30(s，3H)，3.32-3.43(m，3H)，6.80(d，2H)，7.22(d，1H)，7.30-7.40(m，2H)，7.50-7.78(m，6H)；ESI m/z測定值459.1078[M+H+]，計(jì)算值459.1087。
基于上述方法制備下列化合物
(Z)-3-(3-溴芐基)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。獲得呈黃色固體的產(chǎn)物(28.2mg，75％)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.30-3.35(m，5H)，3.82(t，1H)，4.30-4.80(bs，5H)，6.82(d，2H)，7.18-7.26(m，2H)，7.30-7.39(m，4H)，7.55-7.63(m，2H)，7.72(dd，1H)；ESI m/z測定值469.0314[M+H+]，計(jì)算值469.0318。

(Z)-3-(4-溴芐基)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。獲得呈黃色固體的產(chǎn)物(7mg，40％)。1HNMR(300MHz，DMSO-D6)δ3.27-3.38(m，5H)，6.80(d，2H)，7.21-7.36(m，5H)，7.42(d，2H)，7.58(d，1H)，7.70(dd，1H)；ESIm/z測定值469.0318[M+H+]，計(jì)算值469.0318.
(Z)-7-氯-3-(3-氯芐基)-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。獲得呈黃色固體的產(chǎn)物(4.5mg，24％)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.30-3.40(m，5H)，4.70(q，2H)，4.85(s，1H)，6.82(d，2H)，7.10-7.22(m，2H)，7.29-7.50(m，5H)，7.60(d，1H)，7.70-7.80(m，2H)。ESI m/z測定值425.1062[M+H+]，計(jì)算值425.0824。
實(shí)施例12. 合成苯并咪唑酮的代表性的一般方法。
部分I
(Z)-3-(2-溴芐基)-7-氯-1-甲基-5-(2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。將(E)-3-(2-溴芐基)-5，7-二氯-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(150mg，0.364mmol)，5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊環(huán)-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮(95mg，0.364mmol)和氯化鋰(46mg，1.09mmol)加入到1，4-二噁烷(3mL)中。隨著試劑的加入，氮?dú)馄鹋葸M(jìn)入該溶液。加入四(三苯基膦)鈀(0)(42mg，0.036mmol)，然后加入一水合氫氧化銫(183mg，1.09mmol)和水(1mL)。在氮?dú)馄鹋?分鐘后，在氮?dú)獯髿庀聦⒎磻?yīng)混合物加熱至100℃。在加熱1小時(shí)后，將反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度，用乙酸乙酯(25mL)稀釋，用水(2x20mL)，然后用鹽水(20mL)洗滌，用硫酸鈉干燥，然后倒出，在硅石存在下濃縮。將干燥的與硅石結(jié)合的殘留物干燥負(fù)載于硅膠柱上，并用梯度60-100％乙酸乙酯的己烷溶液，然后用梯度為0-25％甲醇的乙酸乙酯溶液洗脫，得到(Z)-3-(2-溴芐基)-7-氯-1-甲基-5-(2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(35mg，19％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.32(s，3H)3.49(m，2H)，3.82(t，1H)，6.89-7.17(m，3H)，7.28-7.71(m，7H)，10.70(s，1H)，10.87(s，1H)；ESI m/z測定值509.0359[M+H]+，計(jì)算值509.0380。

(Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-1-(4-甲氧基芐基)-5-(2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。將(E)-5，7-二氯-3-(2-氯芐基)-1-(4-甲氧基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(0.68g，1.44mmol)，2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并咪唑-5-硼酸頻那醇酯(0.37g，1.44mmol)和氯化鋰(0.183g，4.31mmol)加入到1，4-二噁烷(12mL)中。隨著試劑的加入，氮?dú)馄鹋葸M(jìn)入該溶液。加入四(三苯基膦)鈀(0)(166mg，0.144mmol)，然后加入一水合氫氧化銫(723mg，4.31mmol)和水(1mL)。在氮?dú)馄鹋?分鐘后，在氮?dú)獯髿庀聦⒎磻?yīng)混合物加熱至100℃。在加熱2小時(shí)后，將反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度，用乙酸乙酯(50mL)稀釋，用水(2x40mL)，然后用鹽水(40mL)洗滌，用硫酸鈉干燥，然后倒出，在硅石存在下濃縮。將干燥的與硅膠結(jié)合的殘留物干燥負(fù)載于硅膠柱上，并用梯度0-100％乙酸乙酯的己烷溶液，洗脫，得到(Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-1-(4-甲氧基芐基)-5-(2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮產(chǎn)物與2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并咪唑-5-硼酸頻那醇酯2∶1的混合物(200mg，24％)。ESI m/z571.1，573.1. 部分II
(Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-5-(2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮。在氮?dú)獯髿庀聦?Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-1-(4-甲氧基芐基)-5-(2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(200mg，0.35mmol)溶于無水苯甲醚(4mL)，加入氯化鋁(280mg，2.1mmol)，將該混合物加熱至85℃1小時(shí)。將該溶液冷卻至環(huán)境溫度，倒到冰上，用乙酸乙酯和水沖洗燒瓶。將該混合物攪拌10分鐘。分離各層，并用水層萃取乙酸乙酯。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，倒出并在硅膠存在下濃縮。殘留物在硅膠上進(jìn)行色譜法，用70-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，并轉(zhuǎn)變?yōu)樘荻?-10％甲醇的乙酸乙酯溶液洗脫，得到(Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-5-(2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜

-2(3H)-酮(70mg，44％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.46(d，2H)3.76(t，1H)，6.90(m，2H)，7.01(s，1H)7.21-7.64(m，7H)，10.70(s，1H)，10.74(s，1H)，10.85(s，1H)；ESI m/z測定值451.0736[M+H+]，計(jì)算值451.0729。
實(shí)施例13. 測定表4所列的化合物對于拉莫斯(Ramos)細(xì)胞中F1F0-ATP酶的活性和毒性。如K.M.Johnson等人，Chemistry&Biology 2005，12，485-496所述測定對ATP合成和F1F0-ATP酶導(dǎo)致的水解的抑制。如K.M.Johnson等人，Chemistry&Biology 2005，12，485-496所述或者如Invitrogen(Carlsbad，CA)提供和所述(U.S.5,501,959)，使用熒光檢測的alamarBlueTM分析來測定拉莫斯細(xì)胞中的細(xì)胞毒性。
表4.






+++對應(yīng)于＜5μM，++對應(yīng)于5-10μM，+對應(yīng)于＞10μM，NA是指無數(shù)據(jù)可用。
通過參考引入 本文所涉及的各個專利文獻(xiàn)和科技文章的全部內(nèi)容都出于所有目的通過參考引入。
等價(jià) 本發(fā)明可以以其他具體的方式實(shí)施而不脫離其精神或本質(zhì)特征。因此，從各個方面認(rèn)為上述實(shí)施方案是說明性的而不是限制本文所述的本發(fā)明。因此，本發(fā)明的范圍如附屬的權(quán)利要求而不是如上述說明所示，在權(quán)利要求等價(jià)的含義和范圍內(nèi)的所有改變都意欲包括其中。
權(quán)利要求
1.下式所述的化合物
包括其鹽、酯和前藥；和
包括其R和S對映體形式和外消旋混合物；
其中X選自鹵素、烷基和取代的烷基；和
其中R2選自氫和直鏈或支鏈烷基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物描述為
3.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物描述為
4.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物描述為
5.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物描述為
6.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物描述為
7.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物是
8.下式所述的化合物
包括其鹽、酯和前藥；和
包括其R和S對映體形式和外消旋混合物；
其中X選自鹵素、烷基和取代的烷基；
其中R2選自氫和直鏈或支鏈烷基；和
其中R5是烷基或取代的烷基。
9.權(quán)利要求8的化合物，其中R5是被一個或多個鹵素、烷氧基、-NH2、-N(H)(C1-C4烷基)或-N(C1-C4烷基)2取代的烷基。
10.權(quán)利要求8的化合物，其中所述化合物描述為
11.權(quán)利要求8的化合物，其中所述化合物描述為
12.權(quán)利要求8的化合物，其中所述化合物描述為
13.權(quán)利要求8的化合物，其中所述化合物描述為
14.權(quán)利要求8的化合物，其中所述化合物描述為
15.權(quán)利要求8的化合物，其中所述化合物描述為
16.權(quán)利要求8的化合物，其中所述化合物描述為
17.權(quán)利要求8的化合物，其中所述化合物描述為
18.權(quán)利要求8的化合物，其中所述化合物描述為
19.權(quán)利要求8的化合物，其中所述化合物描述為
20.權(quán)利要求8的化合物，其中所述化合物是
21.下式所述的化合物
包括其鹽、酯和前藥；和
包括其R和S對映體形式和外消旋混合物；
其中X選自鹵素、烷基和取代的烷基；和
其中R2選自氫和直鏈或支鏈烷基。
22.權(quán)利要求21的化合物，其中所述化合物描述為
23.權(quán)利要求21的化合物，其中所述化合物描述為
24.權(quán)利要求21的化合物，其中所述化合物描述為
25.權(quán)利要求21的化合物，其中所述化合物描述為
26.權(quán)利要求21的化合物，其中所述化合物描述為
27.權(quán)利要求21的化合物，其中所述化合物描述為
28.權(quán)利要求21的化合物，其中所述化合物描述為
29.權(quán)利要求21的化合物，其中所述化合物描述為
30.權(quán)利要求21的化合物，其中所述化合物是
31.化合物，選自下組
(Z)-1-(4-(3-(2-溴芐基)-7-氯-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-5-基)苯基)-3-異丙基脲；
(Z)-1-(4-(7-氯-2-氧代-3-(2-(三氟甲基)芐基)-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-5-基)苯基)-3-異丙基脲；
(Z)-1-(4-(7-氯-3-(2-氟芐基)-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-5-基)苯基)-3-異丙基脲；
(Z)-1-(4-(7-氯-3-(2-氯芐基)-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-5-基)苯基)-3-異丙基脲；
(Z)-1-(4-(7-氯-3-(2-氯芐基)-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-5-基)苯基)-3-甲基脲；
(Z)-1-(4-(7-氯-3-(2-氯芐基)-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-5-基)苯基)-3-(2-(二甲基氨基)乙基)脲；
(Z)-1-(4-(7-氯-3-(2-氯芐基)-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-5-基)苯基)-3-(2，2，2-三氟乙基)脲；
(Z)-1-(4-(7-氯-3-(2-氯芐基)-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-5-基)苯基)-3-環(huán)丙基脲；
(Z)-1-(4-(7-氯-3-(2-氯芐基)-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-5-基)苯基)-3-(2-甲氧基乙基)脲；
(Z)-1-(4-(7-氯-3-(2-氯芐基)-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-5-基)苯基)-3-(2-乙氧基乙基)脲；
(Z)-1-(4-(3-(2-溴芐基)-7-氯-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-5-基)苯基)-3-甲基脲；
(Z)-1-(4-(3-(2-溴芐基)-7-氯-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-5-基)苯基)-3-(2-(二甲基氨基)乙基)脲；
(Z)-1-(4-(3-(2-溴芐基)-7-氯-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-5-基)苯基)-3-(2，2，2-三氟乙基)脲；
(Z)-1-(4-(3-(2-溴芐基)-7-氯-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-5-基)苯基)-3-環(huán)丙基脲；
(Z)-1-(4-(3-(2-溴芐基)-7-氯-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-5-基)苯基)-3-(2-甲氧基乙基)脲；
(Z)-1-(4-(3-(2-溴芐基)-7-氯-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-5-基)苯基)-3-(2-乙氧基乙基)脲；
(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-3-(2-甲基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-3-(2-甲基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-3-(3-甲基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-3-(3-甲基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-3-(4-甲基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-3-(4-甲基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-3-(2-乙基芐基)-5-(4-羥基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-3-(2-乙基芐基)-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-3-(3-乙基芐基)-5-(4-羥基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-3-(3-乙基芐基)-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-3-(4-乙基芐基)-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-3-(4-乙基芐基)-5-(4-羥基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-3-(3-異丙基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-3-(3-異丙基芐基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-3-(4-異丙基芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-3-(4-異丙基芐基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-3-(2-(三氟甲基)芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-3-(2-溴芐基)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-3-(2-溴芐基)-7-氯-1-甲基-5-(2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-3-(4-(三氟甲基)芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-3-(3-溴芐基)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-3-(4-溴芐基)-7-氯-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-3-(3-氯芐基)-5-(4-羥基苯基)-1-甲基-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-5-(4-羥基苯基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-5-(2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-5-(2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-3-(2-(三氟甲基)芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；
(Z)-7-氯-1-甲基-5-(2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-3-(2-(三氟甲基)芐基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；和
(Z)-7-氯-3-(2-氯芐基)-1-甲基-5-(2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-1H-苯并[e][1，4]二氮雜
-2(3H)-酮；及其藥學(xué)可接受的鹽。
32.一種藥物組合物，包含權(quán)利要求1-31任一項(xiàng)的化合物和藥學(xué)可接受的載體。
33.一種治療疾病的方法，包括給需要的受試者施用有效量的權(quán)利要求32的藥物組合物。
34.權(quán)利要求33的方法，其中所述疾病是免疫性疾病。
35.權(quán)利要求34的方法，其中所述免疫性疾病是移植物抗宿主病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化、克羅恩病、乳糜瀉、或原發(fā)性血小板減少性血栓形成性紫癜。
36.權(quán)利要求33的方法，其中所述疾病是過度增殖性疾病。
37.權(quán)利要求36的方法，其中所述過度增殖性疾病是癌癥。
38.權(quán)利要求37的方法，其中所述癌癥是腫瘤、贅生物、淋巴瘤或白血病。
39.權(quán)利要求33的方法，其中所述疾病是慢性炎性疾病。
40.權(quán)利要求39的方法，其中所述慢性炎性疾病是哮喘或炎性腸病。
41.權(quán)利要求33的方法，其中所述疾病是牛皮癬。
42.權(quán)利要求34的方法，還包括施用其他藥物治療所述免疫性疾病。
43.權(quán)利要求36的方法，還包括施用其他藥物治療所述過度增殖性疾病.
44.權(quán)利要求39的方法，還包括施用其他藥物治療所述慢性炎性疾病。
45.權(quán)利要求41的方法，還包括施用其他藥物治療所述牛皮癬。
46.權(quán)利要求33-45任一項(xiàng)的方法，其中受試者是人。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的化合物，發(fā)現(xiàn)它們的方法，和它們的治療用途。特別地，本發(fā)明提供苯二氮類化合物，結(jié)構(gòu)和功能相關(guān)的化合物，使用這些化合物作為治療劑治療很多與程序性細(xì)胞死亡過程的錯誤調(diào)節(jié)、自身免疫性、炎癥、過度增殖、血管異常等等有關(guān)的疾病的方法。
文檔編號A01N43/62GK101662940SQ200880012931
公開日2010年3月3日 申請日期2008年3月7日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月9日
發(fā)明者G·D·格里克 申請人:密執(zhí)安州立大學(xué)董事會