專利名稱：：提高喜樹堿含量的喜樹栽培方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及藥用植物的栽培方法，具體是喜樹的栽培方法。
背景技術(shù)：
：喜樹(C柳/fc^/ecaacw/w./^aDecne)為珙桐禾斗(Nyssaceae)喜樹屬(CamptothecaDecne.)植物，廣泛分布于亞洲，在我國分布尤其多，是我國南方特有樹種。1999年8月經(jīng)國務(wù)院批準(zhǔn)列為第一批國家重點(diǎn)保護(hù)野生植物(II級(jí))。喜樹是單萜吲哚生物堿喜樹堿的主要天然來源。目前國際市場每年喜樹堿需求3000kg，而可供貨僅1000kg。喜樹堿作為一種拓?fù)洚悩?gòu)酶(Topoisor-merase)的抑制劑具有抗癌活性，經(jīng)臨床試驗(yàn)證明，喜樹堿對(duì)30余種腫瘤均有明顯療效，且毒副作用小，具有極高的臨床應(yīng)用價(jià)值。而且由喜樹堿為原料可制備系列的衍生物，如羥基喜樹堿、拓?fù)涮婵?、伊立替康?-AC(9-氨基喜樹堿)和9-NC(9-硝基喜樹堿)等，均是"拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑"是一類極有前景的抗癌新藥，目前生產(chǎn)的喜樹堿均是由喜樹的枝葉或果實(shí)中提取，但在喜樹中喜樹堿的含量甚微，L6pez-Meyer等(L6pez-MeyerM，NesslerCL，McKnightTD(1994)SitesofaccumulationoftheantitumoralkaloidcamptothecininCa/c/^ot力ecaacw加V7at3.Plantamedica60:558-560.)，Liu等(LiuZ，CarpenterSB,BourgeoisWJ，etal.(1998)VariationsinthesecondarymetabolitecamptothecininrelationtotissueageandseasoninC柳/tot力ecaacw肌'/7a^a.TreePhysiol18:265-270.)對(duì)喜樹幼苗中各部位喜樹堿含量進(jìn)行了分析，并發(fā)現(xiàn)喜樹嫩葉中的含量最高，約為0.017%至0.4%之間；但眾多文獻(xiàn)表明，各地自然生長喜樹的嫩葉中喜樹堿的含量也僅為0.1%左右(張玉紅，袓元?jiǎng)?不同產(chǎn)地和生長季節(jié)喜樹葉中喜樹堿含量測定.植物學(xué)通報(bào).2003，20(5):572-575)。為滿足目前和未來潛在的醫(yī)療用藥需求，提高喜樹中的的喜樹堿含量，己成為世界各國科學(xué)家的關(guān)注的焦點(diǎn)。為此，發(fā)明者對(duì)如何提高喜樹中整體水平的喜樹堿含量進(jìn)行了大量的研究工作。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種提高喜樹堿含量的喜樹栽培方法。為達(dá)到本發(fā)明的目的所采用的技術(shù)方案是在常規(guī)方法栽培喜樹的同時(shí)，在喜樹栽培種植過程中增加在根部施一號(hào)促進(jìn)劑和二號(hào)促進(jìn)劑，所說的一號(hào)促進(jìn)劑是含有(以重量百分計(jì))氮515%和磷210%和鉀510%和鈣21G%和鎂0.12%和硫0.13%和鐵0.12%和硼0.052%和錳0.12%和鋅0.12%和銅0.1％和鉬0.12%的顆粒促進(jìn)劑。氮、磷、鉀、轉(zhuǎn)、鎂、硫、鐵、硼、錳、鋅、銅、鉬是以在產(chǎn)品中的元素量計(jì)算的，在產(chǎn)品的制備顆粒劑時(shí)可用其它含這些元素的化合物作原料并添加白土、山泥土、膨潤土、防結(jié)塊劑等組成顆粒劑肥料。.所說的二號(hào)促進(jìn)劑是含有(以重量百分計(jì))重金屬鹽2540%和稀土1530%和有機(jī)酸812%的顆粒促進(jìn)劑，重金屬鹽是指硫酸銅或硫酸鋅，重金屬鹽也可以用其他的金屬鹽如鐵鹽、銀鹽、鎘鹽等代替，稀土是指含氯化鑭和氯化鈰的氯化稀土，也可以用混合碳酸稀土、硝酸鈰，醋酸鈰有機(jī)酸是指丙二酸或蘋果酸，也可以用馬來酸等其他有機(jī)酸代替，其它可添加白土、山泥土、膨潤土、防結(jié)塊劑等制成顆粒劑肥料。對(duì)于不同的喜樹生長情況栽培方法可以不同，對(duì)于己開始結(jié)果的成年喜樹，優(yōu)選的栽培方法是在采收果實(shí)前的2-3個(gè)月，以樹冠冠幅直徑為依據(jù)，每米冠幅施一號(hào)促進(jìn)劑100-200g，同時(shí)施二號(hào)促進(jìn)劑5-10g;然后在采收樹葉或果實(shí)前半個(gè)月，每米冠幅施二號(hào)促進(jìn)劑10-20g。對(duì)于尚未開始結(jié)果的幼年喜樹，優(yōu)選的栽培方法是在采收枝葉前12個(gè)月，，以樹冠冠幅直徑為依據(jù)，每米冠幅施一號(hào)促進(jìn)劑50100g，同時(shí)施二號(hào)促進(jìn)劑510g;然后在采收枝葉前半個(gè)月，每米冠幅施二號(hào)促進(jìn)劑1020g。對(duì)于矮密栽培的幼樹喜樹，優(yōu)選的栽培方法是當(dāng)幼苗50公分以上時(shí)，每株喜樹施一號(hào)促進(jìn)劑1020g，和二號(hào)促進(jìn)劑13g，2個(gè)月后，每株喜樹施二號(hào)促進(jìn)劑24g，施用二號(hào)促進(jìn)劑后兩周，采收離地面20公分以上部分的喜樹枝葉,采收后馬上給每株喜樹施一號(hào)促進(jìn)劑1020g和二號(hào)促進(jìn)劑13g，2個(gè)月后，每株喜樹施二號(hào)促進(jìn)劑24g，施用二號(hào)促進(jìn)劑后一至兩周，又可采收喜樹枝葉。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明實(shí)施方便簡單，不需任何器械或設(shè)施輔助；按目前市價(jià)，配制IOO公斤一號(hào)促進(jìn)劑原料成本約120-150元，配制100公斤二號(hào)促進(jìn)劑原料成本400-450元，成本低廉；能快速大幅度提高喜樹的果實(shí)或枝葉的生物量和喜樹堿含量，從而大幅度提高喜樹堿的產(chǎn)量，效率高；可以促進(jìn)喜樹資源的充分利用，保護(hù)喜樹資源，生態(tài)環(huán)境經(jīng)濟(jì)效益顯著。下面用實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明的技術(shù)方案，但并不僅限于實(shí)施例。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1一號(hào)促進(jìn)劑的制備(制備100kg的一號(hào)促進(jìn)劑)采用以下原料制備1.尿素C0(NH2)2(市售肥料，含N46%)2.過磷酸鈣Ca(H2P04)2和CaS(X.2H20(市售肥料，含P16%，含Ca18%)3.氯化鉀KC1(市售肥料，含K60%)4.硫酸鎂MgS047H20(農(nóng)用級(jí)，含Mg8.8%，含S13%)5.硫酸鋅ZnS047H20(農(nóng)用級(jí)，含Zn21%，含S11%6.硫酸銅CuS045H20(農(nóng)用級(jí)，含Cu25%，含S22%)7.硫酸亞鐵FeS047H20(農(nóng)用級(jí)，含F(xiàn)e18%,含S12%)8.硼酸H3B(U農(nóng)用級(jí)，含B18%)9.硫酸錳MnS04H20(工業(yè)級(jí)，含Mn32%，含S18%)10.鉬酸銨(NH4)2Mo04(農(nóng)用級(jí)，含Mo48%)11.膨潤土(農(nóng)用級(jí)，含Si023.2X，ALA11.4%,Fe2030.29%，Na200.31%，CaO2.67%,MgO1.05%,K202.58%)，膨潤土具有良好的吸附性、粘結(jié)性，便于成球造粒，同時(shí)使肥效緩慢釋放、減少流失以及起改良土壤的作用。12.復(fù)合肥防結(jié)塊劑(含滑石粉、吸水性纖維素、硬脂酸鈉等)，具有防止物料結(jié)塊的作用。配方l:稱取尿素25kg，過磷酸鈣35kg,氯化鉀IOkg，硫酸鎂4kg，硫酸鋅3kg，硫酸銅1.5kg，硫酸亞鐵1.5kg，硼酸0.5kg,硫酸錳0.5kg，鉬酸銨0.5kg,膨潤土18kg，防結(jié)塊劑0.5kg。將稱好的物料通過常規(guī)方法粉碎、混合、造粒、干燥、冷卻和篩分方法制成顆粒一號(hào)促進(jìn)劑。100kg產(chǎn)品中折算元素含量有N11.5%、P5.6%、K6.4%、Ca6.8%、Mg0.51%、S1.6%、Fe0.30%、B0.09%、Mn0.16%、Zn0.63%、Cu0.37%、Mo0.24%。配方2:稱取尿素35kg，過磷酸鈣25kg，氯化鉀13kg,硫酸鎂6kg，硫酸鋅4kg，硫酸銅2.5kg，硫酸亞鐵2kg，硼酸1kg，硫酸錳1kg，鉬酸銨1kg，膨潤土9kg，市售復(fù)合肥防結(jié)塊劑0.5kg。將稱好的物料通過常規(guī)方法粉碎、混合、造粒、干燥、冷卻和篩分方法制成顆粒一號(hào)促進(jìn)劑。100kg產(chǎn)品中折算元素含量有N16.1%、P4%、K8%、Ca4.7%、Mg0.62%、S2.3%、Fe0.38%、B0.18%、Mn0.32%、Zn0.84%、Cu0.63%、Mo0.48%。配方3:稱取尿素15kg,過磷酸鈣40kg，氯化鉀15kg，硫酸鎂3kg，硫酸鋅3kg，硫酸銅3kg，硫酸亞鐵2kg，硼酸1.5kg，硫酸錳1.5kg，鉬酸銨1.5kg，膨潤土15kg，市售復(fù)合肥防結(jié)塊劑0.5kg。將稱好的物料通過常規(guī)方法粉碎、混合、造粒、千燥、冷卻和篩分方法制成顆粒促進(jìn)劑。100kg產(chǎn)品中折算成元素含量為N6.9%、P6.4%、K9.4%、Ca7.6%、Mg0.42%、S2.1%、Fe0.55%、B0.27%、Mn0.48%、Zn0.63.、Cu0.75%、Mo0.72%二號(hào)促進(jìn)劑的制備(制備100kg二號(hào)促進(jìn)劑)采用以下原料1.硫酸銅或硫酸鋅(農(nóng)用級(jí)，含量大于或等于98%)2.氯化稀土(工業(yè)級(jí)，含Ce27%，La17%,Ca1.5%，Mg1.5%,Ba0.3%;Fe0.007%)3.丙二酸或蘋果酸(工業(yè)級(jí)，含量大于或等于99.5%)4.膨潤土(同一號(hào)促進(jìn)劑)5.防結(jié)塊劑(同一號(hào)促進(jìn)劑)配方1:稱取硫酸銅40kg，氯化稀土15kg，丙二酸10kg，膨潤土34kg,防結(jié)塊劑lkg。將稱好的物料通過常規(guī)方法粉碎、混合、造粒、干燥、冷卻和篩分方法制成顆粒促進(jìn)劑。配方2:稱取硫酸鋅30kg，氯化稀土25kg，蘋果酸12kg，膨潤土32kg，防結(jié)塊劑1kg。將稱好的物料通過常規(guī)方法粉碎、混合、造粒、干燥、冷卻和篩分方法制成顆粒促進(jìn)劑。配方3:稱取硫酸鋅25kg，氯化稀土30kg，丙二酸8kg，膨潤土36kg，防結(jié)塊劑1kg。將稱好的物料通過常規(guī)方法粉碎、混合、造粒、干燥、冷卻和篩分方法制成顆粒促進(jìn)劑。實(shí)施例2已開始結(jié)果的成年喜樹栽培喜樹大樹栽種于廣州市天河區(qū)龍洞廣東省中藥研究所中藥標(biāo)本園，1985年移植，胸徑達(dá)30厘米，高度約12米，樹冠直徑約8米，生長發(fā)育良好，枝葉茂盛。2007年8月1日，離采收果實(shí)前的3個(gè)月，選定6棵樹齡相同長勢(shì)一致的大樹，隨機(jī)分為兩組(處理組和對(duì)照組)。處理組以樹冠冠幅直徑為依據(jù)，每米冠幅施配方1的一號(hào)促進(jìn)劑100g，同時(shí)施配方1的二號(hào)促進(jìn)劑10g;然后在采收果實(shí)和枝葉前半個(gè)月(2007年10月15日)，每米冠幅施配方1二號(hào)促進(jìn)劑20g。對(duì)照組于同期按以上標(biāo)準(zhǔn)分別施農(nóng)業(yè)生產(chǎn)用肥的主要品種挪威復(fù)合肥(N、P205、1(20各16%)200g和20g。平時(shí)如果不下雨，每天淋水一次。于2007年11月1日，6棵樹分別采收所有果實(shí)。陰干，粉碎后測定喜樹堿的含量。提取和測定方法參照閻秀峰，等報(bào)道的方法，文獻(xiàn)"閻秀峰，王洋，子濤，張玉紅，殷麗君.喜樹葉中喜樹堿含量的高效液相色譜分析分析測試學(xué)報(bào)，2002，21(2):15-18"。具體的檢測方法如下。喜樹堿的提取精確稱取0.4克干燥材料，倒入50毫升錐形瓶中，加25毫升75%的乙醇。稱重后，置于超聲儀中，50-C提取IO分鐘。當(dāng)冷至室溫后，以75%乙醇補(bǔ)回液體蒸發(fā)的量。該提取液0.45微米過濾膜和10ul用于喜樹堿的高效液相色譜法(HPLC)測定。高效液相色譜分析采用高效液相色譜儀(Waters公司，美國)，包括高壓泵(Waters2695),控制器和一個(gè)光電二極管陣列檢測器(Waters2996)。色譜條件為色譜柱應(yīng)用C-18柱(5pm，4.6X250毫米)，洗脫流動(dòng)相乙腈水(30:70)，流速為lml/min，檢測波長為254nm。保留時(shí)間為11.8min。采用峰面積進(jìn)行定量。喜樹堿標(biāo)準(zhǔn)品購自中國藥品生物制品檢定所。樣品三次重復(fù)取平均值。(以下實(shí)施例采用相同檢測方法)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>結(jié)論可使果實(shí)采收量增加20%以上，果實(shí)平均喜樹堿含量增加50%以上。實(shí)施例3尚未開始結(jié)果的幼齡喜樹的栽培喜樹幼樹種源采自廣州市天河區(qū)龍洞廣東省中藥研究所中藥標(biāo)本園，栽種于廣東省中藥標(biāo)本園科研教學(xué)區(qū)，2005年定植，胸徑達(dá)4厘米，高度約5米，樹冠直徑約4米，生長發(fā)育良好，枝葉茂盛。2008年4月1日，離采收果實(shí)前的2個(gè)月，選定6棵樹齡相同長勢(shì)一致的幼樹，隨機(jī)分為兩組(處理組和對(duì)照組)。處理組以樹冠冠幅直徑為依據(jù)，每米冠幅施配方2的一號(hào)促進(jìn)劑50g，同時(shí)施配方2的二號(hào)促進(jìn)劑10g;然后在采收枝葉前半個(gè)月(2008年5月15日)，每米冠幅施二號(hào)促進(jìn)劑20g。對(duì)照組于同期按以上標(biāo)準(zhǔn)分別施農(nóng)業(yè)生產(chǎn)用肥的主要品種挪威復(fù)合肥(N、P205、K20各169050g和20g。平時(shí)如果不下雨，每天淋水一次。于2008年6月1日，采收當(dāng)年新長的枝葉，陰干，粉碎，測定喜樹堿含量(三次重復(fù)，取平均值)。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>結(jié)論可使枝葉采收量增加20%以上，枝葉平均喜樹堿含量增加50%以上。實(shí)施例4矮密幼齡喜樹的栽培矮密栽培的喜樹的種源采自廣州市天河區(qū)龍洞廣東省中藥研究所中藥標(biāo)本園，栽種于廣東省中藥研究所標(biāo)本園種植試驗(yàn)區(qū)。2008年1月采用撒播的方式播種育苗，播種量為每平方20g,用薄膜搭起小拱棚保溫保濕，待種子發(fā)芽后，將小拱棚的兩端打開，并每天澆水一次促進(jìn)生長。幼苗移植前，將種植地提前翻耕，作成寬120厘米、高15厘米的畦6塊，長度隨地塊而定。當(dāng)幼苗長到15厘米左右時(shí)，按80X80厘米的規(guī)格種植，定植后淋足定根水，之后每天淋水一次，定期清除雜草，以保證生長良好。處理組隨機(jī)選取3畦處理，分兩次施用不同的促進(jìn)劑當(dāng)幼苗50公分以上時(shí)，每株喜樹施配方3的一號(hào)促進(jìn)劑10g和配方3的二號(hào)促進(jìn)劑lg，2個(gè)月后，每株施配方3二號(hào)促進(jìn)劑2g，施用二號(hào)促進(jìn)劑后一至兩周地上留20公分采收地上部。采收后馬上施配方3—號(hào)促進(jìn)劑10g，配方3二號(hào)促進(jìn)劑lg，2個(gè)月后，每株施配方3的二號(hào)促進(jìn)劑2g,周而復(fù)始，可以周年施用和采收。其它3畦作為對(duì)照，當(dāng)幼苗50公分以上時(shí)，每株喜樹施農(nóng)業(yè)生產(chǎn)用肥的主要品種挪威復(fù)合肥(N、P205、K20各16%)10g，其它田間管理和采收方法、采收時(shí)間相同。采收后每株馬上施挪威復(fù)合肥10g。采收的枝葉，陰干，粉碎，測定喜樹堿含量(三次重復(fù)取平均值)。<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>結(jié)論可使單株枝葉采收量增加30%以上，枝葉平均喜樹堿含量增加100%以上。權(quán)利要求1、一種提高喜樹堿含量的喜樹栽培方法，其特征在于在常規(guī)喜樹栽培種植過程中增加在根部施一號(hào)促進(jìn)劑和二號(hào)促進(jìn)劑的步驟，所說的一號(hào)促進(jìn)劑是以重量百分計(jì)含有氮5～15％和磷2～10％和鉀5～10％和鈣2～10％和鎂0.1～2％和硫0.1～3％和鐵0.1～2％和硼0.05～2％和錳0.1～2％和鋅0.1～2％和銅0.1～2％和鉬0.1-2％的顆粒劑；所說的二號(hào)促進(jìn)劑是以重量百分計(jì)含有重金屬鹽25～40％，稀土15～30％，有機(jī)酸8～12％的顆粒劑，重金屬鹽是指硫酸銅或硫酸鋅，稀土是指含氯化鑭和氯化鈰的氯化稀土，有機(jī)酸是指丙二酸或蘋果酸。2、根據(jù)權(quán)利要求1所說的提高喜樹堿含量的喜樹栽培方法，其特征在于對(duì)于己開始結(jié)果的成年喜樹，在采收果實(shí)前的23個(gè)月，以樹冠冠幅直徑為依據(jù)，每米冠幅施一號(hào)促進(jìn)劑100200g，同時(shí)施二號(hào)促進(jìn)劑510g;然后在采收果實(shí)前半個(gè)月，每米冠幅施二號(hào)促進(jìn)劑1020g。3、根據(jù)權(quán)利要求1所說的提高喜樹堿含量的喜樹栽培方法，其特征在于對(duì)于喜樹尚未開始結(jié)果的幼年喜樹，在采收枝葉前12個(gè)月，以樹冠冠幅直徑為依據(jù)，每米冠幅施一號(hào)促進(jìn)劑50100g，同時(shí)施二號(hào)促進(jìn)劑510g;然后在采收枝葉前半個(gè)月，每米冠幅施二號(hào)促進(jìn)劑1020g。4、根據(jù)權(quán)利要求1所說的提高喜樹堿含量的喜樹栽培方法，其特征在于對(duì)于矮密栽培的幼樹喜樹，當(dāng)幼苗長到50公分以上時(shí)，每株喜樹施一號(hào)促進(jìn)劑1020g，和二號(hào)促進(jìn)劑l3g，23個(gè)月后，每株喜樹施二號(hào)促進(jìn)劑24g，施用二號(hào)促進(jìn)劑后一至兩周，采收離地面2030公分以上部分的喜樹枝葉，采收后馬上給每株喜樹施一號(hào)促進(jìn)劑1020g和二號(hào)促進(jìn)劑l3g，23個(gè)月后，每株喜樹施二號(hào)促進(jìn)劑24g，施用二號(hào)促進(jìn)劑后一至兩周，又可采收喜樹枝葉。全文摘要提高喜樹堿含量的喜樹栽培方法，涉及藥用植物的栽培方法。其技術(shù)方案是在常規(guī)喜樹栽培種植過程中增加在根部施一號(hào)促進(jìn)劑和二號(hào)促進(jìn)劑的步驟，一號(hào)促進(jìn)劑是含有氮、磷、鉀、鈣、鎂、硫、鐵、硼、錳、鋅、銅、鉬的顆粒促進(jìn)劑；二號(hào)促進(jìn)劑是含有重金屬鹽、稀土和有機(jī)酸的顆粒促進(jìn)劑。本發(fā)明實(shí)施方便簡單，不需任何器械或設(shè)施輔助；成本低廉；能快速大幅度提高喜樹的果實(shí)或枝葉的生物量和喜樹堿含量，從而大幅度提高喜樹堿的產(chǎn)量，效率高；可以促進(jìn)喜樹資源的充分利用，保護(hù)喜樹資源，生態(tài)環(huán)境經(jīng)濟(jì)效益顯著。文檔編號(hào)C05G3/00GK101548618SQ20091003936公開日2009年10月7日申請(qǐng)日期2009年5月11日優(yōu)先權(quán)日2009年5月11日發(fā)明者張現(xiàn)濤,曾慶錢,楊得坡,楊燕軍,王玉生,莫小路,林蔣,蔡岳文,黃珊珊申請(qǐng)人:廣東省中藥研究所