專利名稱：一種含石斛小菇菌絲體液的鐵皮石斛組培苗的營養(yǎng)培養(yǎng)液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物組培培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及鐵皮石斛組培苗培養(yǎng)的營養(yǎng) 培養(yǎng)液。
背景技術(shù)：
鐵皮石斛(Dendrobium candidum Wall, ex Lindl.)是中華人民共和國藥 典一部所收載的藥用石斛之一，為名貴藥用植物。具有滋陰清熱、益胃生津、 清嗓明目，增強人體免疫力等功效。由于過度采挖和自然資源的嚴重破壞，1978 年被國家列為重點保護的瀕危中藥材。鐵皮石斛作為一種常用的中藥材，市場 需求量較大，如何解決需求與資源之間的矛盾？唯一的途徑就是人工栽培。國 內(nèi)外學(xué)者是也對鐵皮石斛的生長習(xí)性進行全面的摸索，自從組培技術(shù)應(yīng)用到鐵 皮石斛的人工栽培領(lǐng)域當中，雖獲成功，但是周期長、成活率、出苗率低導(dǎo)致 產(chǎn)量與規(guī)模仍不上去；很難滿足社會應(yīng)用需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明主要是描述一種含石斛小菇菌絲體液的鐵皮石斛組培苗的營養(yǎng)培養(yǎng) 液的配方，使用該配方進行培養(yǎng)與單純使用常規(guī)組培培養(yǎng)基相比，能夠明顯促 進鐵皮石斛的生長，提高鐵皮石斛組培苗生長速度，縮短組培苗出苗時間，顯 著提高組培苗的成活率、出苗率，從而達到提高鐵皮石斛產(chǎn)量的目的。
本發(fā)明所述的含石斛小菇菌絲體液的鐵皮石斛組培苗的營養(yǎng)培養(yǎng)液，其組分 體積百分比為MS基本培養(yǎng)基50~80%、椰子汁10 20%、生長調(diào)節(jié)劑2~10%、 石斛小菇菌絲體液5~25%。其中MS基本培養(yǎng)基為植物組織培養(yǎng)的常規(guī)用營養(yǎng)培養(yǎng)基，包括有無機鹽
營養(yǎng)成分、有機物營養(yǎng)成分，具體配制組分可為NH4N03 1600~1700mg、 KN03 1800~2000mg、 CaCl2 2H20 400~480mg、 MgS04 7H20 300~440mg、 KH2P03 1600~1800mg、 KI0.78~0.88mg、 H3B03 5.8 6.6mg、 MnS04 4H20 21.8 22.8mg、 ZnS04 '7H20 8.0~9.2mg、Na2MnO4 '2H20 0.2 0.3mg、 CuS04 ,0 0.02~0.03mg、 CoCl2 6H20 0.02 0.03mg、 FeS04 7H20 26.8 28.8mg、 Na2-EDTA 2H20 36.3 38.3mg、肌醇90 110mg、煙酸0.4 0.6mg、鹽酸吡眵醇0.4~0.6mg、鹽酸 硫胺素0.4~0.6mg、甘氨酸1.5~2.5mg、蔗糖30g，以上成分均用無菌水溶解， 最后定容至1000ml;
生長調(diào)節(jié)劑為常規(guī)植物組培試劑，對組培苗起著生長調(diào)節(jié)與促進作用，具體 配制組分可為2,4-二氯苯氧乙酸8~12mg、萘乙酸8 12mg、乙醇0.8 1.2ml、 6-芐基嘌呤8 10mg、 NaOH 3~5mg，以上成分均用無菌水溶解，最后定容至 100ml;
椰子汁是將鮮椰子打開取汁，提供組培苗生長所需營養(yǎng)物質(zhì)； 石斛小菇菌絲體液為將從野生鐵皮石斛根段分離培養(yǎng)出的石斛小燕在真菌 培養(yǎng)液進行繼續(xù)培養(yǎng)所形成的石斛小菇菌絲體液，因為石斛小薛與鐵皮石斛存 在著共生的關(guān)系，菌絲體液能很好地促進、保護鐵皮石斛組培苗的生長。根據(jù) 組培過程的不同。
本發(fā)明所述的營養(yǎng)液可依所述配比按常規(guī)方法配制，無特殊要求。其使用也 按常規(guī)方法進行。
在鐵皮石斛的組培各個過程中使用本發(fā)明所述的含石斛小菇菌絲體液的鐵 皮石斛組培苗的營養(yǎng)培養(yǎng)液，均可明顯促進組培苗生長，縮短組培苗出苗移栽 的時間，能顯著提高鐵皮石斛組培苗的成活率。用未加入石斛小菇菌絲體液的常規(guī)營養(yǎng)培養(yǎng)液進行鐵皮石斛組培的出苗移栽周期為8~10個月，成活率在 50~70%;而用本發(fā)明所述的含生長促進劑的鐵皮石斛組培苗的營養(yǎng)培養(yǎng)液進行
鐵皮石斛組培的出苗移栽周期為5 6個月，成活率在90 100%。
具體實施例方式
實施例1:
選取生長良好的鐵皮石斛萌發(fā)芽切取其莖段作為外植體，用水沖洗30min， 洗凈，接種于本發(fā)明所述的營養(yǎng)培養(yǎng)液中，其組成(按體積百分比)為MS基 本培養(yǎng)基80%、椰子汁10%、生長調(diào)節(jié)劑5%、石斛小燕菌絲體液5%的培養(yǎng)基
(每1LMS基本培養(yǎng)基各組分的重量為NH4N03 165mg、 KN03 1900mg、 CaCl2 '2H2O440mg、 MgS04 '7H2O370mg、 KH2P03 1700mg、 Kl 0,83mg、 H3B03 6.2mg、 MnS04 4H20 22.3mg、 ZnS04 7H20 8.6mg、 Na2Mn04 2H20 0.25mg、 CuS04 5H20 0.025mg、 CoCl2 6H20 0.025mg、 FeS04 7H20 27.8mg 、 Na2-EDTA 2H20 37.3mg、肌醇100mg、煙酸0.5mg、鹽酸吡哆醇0.5mg、鹽 酸硫胺素0.5mg、甘氨酸2mg、蔗糖30g，其余成分為無菌水；MS組培營養(yǎng)基 各母液可以從濟南昊天科技發(fā)展有限公司等購買，也可自行配制。生長調(diào)節(jié)劑 采用市售試劑，也可自行配制，按每100ml生長調(diào)節(jié)劑中各組分重量為2,4-二氯苯氧乙酸10mg、萘乙酸10mg、乙醇1.0ml、 6-芐基嘌呤9mg、 NaOH4mg、 其余成分為無菌水。取MS基本培養(yǎng)基800ml、生長調(diào)節(jié)劑50ml、椰子汁100ml 混合均勻，滅菌后備用；再加入石斛小菇菌絲體液50ml配制而成。)中進行誘 導(dǎo)培養(yǎng)成原球莖。
選取生長良好的鐵皮石斛萌發(fā)芽切取其莖段作為外植體，用水沖洗30min， 洗凈，接種于本發(fā)明所述的營養(yǎng)培養(yǎng)液中，其組成為MS基本培養(yǎng)基85%、椰子汁10%、生長促進劑5%的培養(yǎng)基(每1LMS基本培養(yǎng)基各組分的重量為
NH4N03 165mg、 KN03 1900mg、 CaCl2 2H20 440tng、 MgS04 7H20 370mg、 KH2P03 1700mg、 KI 0,83mg、 H3B03 6,2mg、 MnS04 '4H20 22.3mg、 ZnS04 *7恥 8.6mg、 Na2Mn04 '2H2O0.25mg、 CuS04 '5H20 0.025mg、 CoCl2 '6H20 0.025mg、 FeS04 7H20 27.8mg、 Na2-EDTA 2H20 37.3mg、肌醇100mg、煙酸0.5mg、 鹽酸吡哆醇0.5mg、鹽酸硫胺素0.5mg、甘氨酸2mg、蔗糖30g，其余成分為 無菌水。每100ml生長調(diào)節(jié)劑中各組分重量為2,4-二氯苯氧乙酸10mg、萘乙 酸10mg、乙醇L0ml、 6-芐基嘌呤9mg、 NaOH 4mg、其余成分為無菌水。取 MS基本培養(yǎng)基850ml、生長調(diào)節(jié)劑50ml、椰子汁100ml混合均勻，滅菌后備用。) 中進行誘導(dǎo)培養(yǎng)成原球莖。
使用本發(fā)明所述含石斛小菇菌絲體液的營養(yǎng)培養(yǎng)液進行組培的誘導(dǎo)培養(yǎng)時 間為20天；而使用不含石斛小菇菌絲體液的常規(guī)組培營養(yǎng)液進行組培的誘導(dǎo) 時間為30天。
實施例2:
選取經(jīng)過用本發(fā)明所述營養(yǎng)培養(yǎng)液進行了誘導(dǎo)培養(yǎng)、擴繁增殖、壯苗后有
4~8條根、6 10片葉的鐵皮石斛組培苗，用15 20攝氏度的清水洗凈，然后將 鐵皮石斛栽種于浮于該發(fā)明所述的營養(yǎng)培養(yǎng)液的泡沫上，此營養(yǎng)培養(yǎng)液組成為 MS基本培養(yǎng)基50y。、椰子汁20%、生長調(diào)節(jié)劑5%、石斛小菇菌絲體液25%的 培養(yǎng)基(每1LMS基本培養(yǎng)基各組分的重量為NH4N03 165mg、 KN03 1900mg、 CaCl2 '2H20 440mg、 MgS04 '7H20 370mg、 KH2P03 1700mg、 KI 0.83mg、 H3B03 6.2mg、 MnS04 4H20 22.3mg、 ZnS04 7H20 8.6mg、 Na2Mn04 2H20 0.25mg、 CuS04 5H20 0.025mg、 CoCl2 6H20 0.025mg 、 FeS04 7H20 27.8mg 、 Na2-EDTA 2H20 37.3mg、肌醇100mg、煙酸0.5mg、鹽酸吡眵醇0.5mg、鹽酸硫胺素0.5mg、甘氨酸2mg、蔗糖30g，其余成分為無菌水。每100ml生長 促進劑中各組分重量為2,4-二氯苯氧乙酸10mg、萘乙酸10mg、乙醇l.Oml、 6-芐基嘌呤9mg、 NaOH4mg、其余成分為無菌水。取MS基本培養(yǎng)基500ml、 生長調(diào)節(jié)劑50ml、椰子汁200ml混合均勻，滅菌后備用；再加入石斛小竊菌絲 體液250ml配制而成。)，進行馴化培養(yǎng)。
選取經(jīng)過用常規(guī)組培營養(yǎng)培養(yǎng)液進行了誘導(dǎo)培養(yǎng)、擴繁增殖、壯苗后有4 8 條根、6~10片葉的鐵皮石斛組培苗，用15 20攝氏度的清水洗凈，然后將鐵皮 石斛栽種于浮于常規(guī)組培的營養(yǎng)培養(yǎng)液的泡沫上，此營養(yǎng)培養(yǎng)液組成為MS基 本培養(yǎng)基70%、椰子汁20%、生長調(diào)節(jié)劑10%的培養(yǎng)基(每1LMS基本培養(yǎng)基 各組分的重量為NH4N03 165mg、 KN03 1900mg、 CaCl2 2H20 440mg、 MgS04 *7H20 370mg、 KH2P03 1700mg、 KI 0.83mg、 H3B03 6.2mg、 MnS04 '4H20 22.3mg、 ZnS04 '7H20 8.6mg、 Na2Mn04 '2H2O0.25mg、 CuS04 '5^0 0.025mg、 CoCl2 6H20 0.025mg、 FeS04 7H20 27.8mg、 Na2-EDTA 2H20 37.3mg、肌醇 100mg、煙酸0.5mg、鹽酸吡哆醇0.5mg、鹽酸硫胺素0.5mg、甘氨酸2mg、 蔗糖30g，其余成分為無菌水。每100ml生長促進劑中各組分重量為2，4-二氯 苯氧乙酸10mg、萘乙酸10mg、乙醇1.0ml、 6-節(jié)基嘌呤9mg、 NaOH 4mg、其 余成分為無菌水。取MS基本培養(yǎng)基750ml、生長調(diào)節(jié)劑50ml、椰子汁200ml 混合均勻，滅菌后備用)，進行馴化培養(yǎng)。
使用本發(fā)明所述含石斛小菇菌絲體液馴化培養(yǎng)時間為30天；馴化培養(yǎng)后， 鐵皮石斛組培苗即可移栽到仿野生的大棚中，移栽成活率為95%。而使用常規(guī) 組培營養(yǎng)液馴化培養(yǎng)時間為60天；馴化培養(yǎng)后，鐵皮石斛組培苗移栽到仿野 生的大棚中，移栽成活率僅為65%。
權(quán)利要求
1、一種含石斛小菇菌絲體液的鐵皮石斛組培苗的營養(yǎng)培養(yǎng)液，其特征在于其組分體積百分比為MS基本培養(yǎng)基50～80％、椰子汁10～20％、生長調(diào)節(jié)劑2～10％、石斛小菇菌絲體液5～25％。
2、 按照權(quán)力要求1所述的含石斛小菇菌絲體液的鐵皮石斛組培苗的營養(yǎng) 培養(yǎng)液，其特征在于所述MS基本培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)基含有以下組分的重量 NH4N03 1600 1700mg、 KN03 1800 2000mg、 CaCl2 2H20 400 480mg 、 MgS04 7H20 300 440mg、 KH2P03 1600~1800mg、 KI 0.78~0.88mg、 H3B03 5.8 6.6mg、MnS04 ,0 21.8 22.8mg、 ZnS04 .7H20 8.0 9.2mg、Na2MnO4 '2恥 0.2 0.3mg、 CuS04 '5H20 0.02~0.03mg、 CoCl2 '6H20 0.02 0.03mg、 FeS04 ,20 26.8 28.8mg、 Na2-EDTA '2H20 36.3 38.3mg、肌醇90 110mg、煙酸0.4 0.6mg、 鹽酸吡哆醇0.4~0.6mg、鹽酸硫胺素0.4~0.6mg、甘氨酸1.5~2.5mg、蔗糖30g， 其余成分為無菌水。
3、按照權(quán)力要求1所述的含石斛小菇菌絲體液的鐵皮石斛組培苗的營養(yǎng)培 養(yǎng)液，其特征在于所述的生長調(diào)節(jié)劑為每100ml中含有以下組分的量為2,4-二氯苯氧乙酸8 12mg、萘乙酸8 12mg、乙醇0.8 1.2ml、 6-節(jié)基嘌呤8 10mg、 NaOH3 5mg、其余成分為無菌水。
4、按照權(quán)力要求1所述的含石斛小菇菌絲體液的鐵皮石斛組培苗的營養(yǎng)培 養(yǎng)液，其特征在于所述的石斛小菇菌絲體液為將從野生鐵皮石斛根段分離培 養(yǎng)出的石斛小菇在真菌培養(yǎng)液進行繼續(xù)培養(yǎng)所形成的石斛小薛菌絲體液。
全文摘要
本發(fā)明公開一種含石斛小菇菌絲體液的鐵皮石斛組培苗的營養(yǎng)培養(yǎng)液，其特征在于其組分體積百分比為MS基本培養(yǎng)基50～80％、椰子汁10～20％、生長調(diào)節(jié)劑2～10％、石斛小菇菌絲體液5～25％。在鐵皮石斛的組培各個過程中使用本發(fā)明所述的含石斛小菇菌絲體液的鐵皮石斛組培苗的營養(yǎng)培養(yǎng)液，均可明顯促進組培苗生長，縮短組培苗出苗移栽的時間，能顯著提高鐵皮石斛組培苗的成活率。用未加入石斛小菇菌絲體液的常規(guī)營養(yǎng)培養(yǎng)液進行鐵皮石斛組培的出苗移栽周期為8～10個月，成活率在50～70％；而用本發(fā)明所述的含生長促進劑的鐵皮石斛組培苗的營養(yǎng)培養(yǎng)液進行鐵皮石斛組培的出苗移栽周期為5～6個月，成活率在90～100％。
文檔編號A01H4/00GK101548645SQ20091004340
公開日2009年10月7日 申請日期2009年5月14日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月14日
發(fā)明者劉贊輝, 張?zhí)K鋒, 梁經(jīng)軍, 趙興兵 申請人:湖南龍石山鐵皮石斛基地有限公司