專利名稱：一種預(yù)報(bào)三疣梭子蟹產(chǎn)卵期的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種預(yù)報(bào)三疣梭子蟹產(chǎn)卵期的方法，屬于海水養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
三疣梭子蟹(尸or,M"w^n'rt^^r"/a^y)是我國重要的海水經(jīng)濟(jì)蟹類，自20 世紀(jì)80年代以來，由于過度捕撈和近海海洋環(huán)境惡化等原因，我國三疣梭子 蟹的自然資源量正在急劇下降(薛俊增等，1997;謝忠明等，2002)，因此， 20世紀(jì)90年代以來三疣梭子蟹的人工育苗和池塘養(yǎng)殖在我國沿海迅速發(fā)展起 來(吳旭干等，2007)。然而在實(shí)際生產(chǎn)中，由于無法準(zhǔn)確預(yù)測其產(chǎn)卵時(shí)間 給育苗生產(chǎn)帶來了很大的困難，所以預(yù)測產(chǎn)卵期對于三疣梭子蟹人工育苗具 有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義，可以避免育苗生產(chǎn)中盲目性，及時(shí)準(zhǔn)備育苗設(shè)施和 幼體餌料等，這樣在一定程度上可以降低育苗風(fēng)險(xiǎn)和減輕育苗成本。
三疣梭子蟹屬于先交配后進(jìn)行卵巢發(fā)育的蟹類， 一旦卵巢發(fā)育成熟后在適 宜的溫度和光照條件下便可產(chǎn)卵，因此準(zhǔn)確了解親本的卵巢發(fā)育階段才可能預(yù) 測產(chǎn)卵時(shí)間。伹是，國內(nèi)外有關(guān)三疣梭子蟹產(chǎn)卵期預(yù)報(bào)的研究較少，僅日本的 Hamasaki et al (2004)對室內(nèi)養(yǎng)殖條件下溫度和光照對三疣梭子蟹卵巢發(fā)育和 產(chǎn)卵進(jìn)行了初步研究，發(fā)現(xiàn)水溫低于12°C，三疣梭子蟹卵巢發(fā)育緩慢或者停 止發(fā)育，水溫和光照周期分別超過12。C和12h，卵巢發(fā)育成熟的三疣梭子蟹雌 體才可能產(chǎn)卵。但是他們無法預(yù)測每個(gè)親本的產(chǎn)卵時(shí)間，僅發(fā)現(xiàn)日本海區(qū)三疣 梭子蟹的自然產(chǎn)卵高峰在4月中旬，人工條件下在11月或者12月份將野生蟹 放入水溫21±0.5°(:水槽中，這些親本的產(chǎn)卵高峰期可以提早到2月初。國內(nèi)， 有關(guān)三疣梭子蟹產(chǎn)卵的預(yù)報(bào)主要停留在經(jīng)驗(yàn)階段，通常依靠在一定光照條件下 觀察活體親本的卵巢是否充滿頭胸甲，如果卵巢充滿頭胸甲，則說明親本則可 能很快將產(chǎn)卵，但這種方法誤差很大(謝忠明等，2002)，其主要原因是這種方 法并不能準(zhǔn)確了解親本的卵巢發(fā)育狀態(tài)。此外，三疣梭子蟹的卵巢成熟分為生長成熟和生理成熟，生長成熟后三疣梭子蟹的卵巢即充滿頭胸甲，卵巢體積便 不再增長，但是從生長成熟的卵母細(xì)胞過渡到可受精的成熟卵(生理成熟)尚需
要一段時(shí)間(朱冬發(fā)等，2005)。顯然，憑借經(jīng)驗(yàn)觀察卵巢是否充滿頭胸甲，無 法判斷卵巢的生理成熟和生長成熟，故無法準(zhǔn)確預(yù)測其產(chǎn)卵時(shí)間。判斷卵巢的 生長成熟或生理成熟，較準(zhǔn)確的方法是活體解剖雌體親本，獲得卵巢，觀察卵 子是否游離于卵巢腔中，進(jìn)一步可通過組織切片確認(rèn)卵子的成熟狀態(tài)，但是這 樣必然需要處死昂貴的親本，也無法預(yù)測每個(gè)雌體親本的產(chǎn)卵時(shí)間，在實(shí)際生 產(chǎn)中沒有可行性。
由于三疣梭子蟹雌體交配后才可卵巢發(fā)育，卵巢發(fā)育成熟后在一定條件 下便可產(chǎn)卵，因此預(yù)報(bào)產(chǎn)卵期首先需要確定卵巢發(fā)育情況。通過處死親本取 得卵巢組織進(jìn)行研究，無法對活體親本的產(chǎn)卵期進(jìn)行預(yù)報(bào)。
鑒于此，發(fā)明人在多年進(jìn)行三疣梭子蟹人工繁殖研究的基礎(chǔ)上，通過反 復(fù)研究和驗(yàn)證，發(fā)明了一種簡便、易學(xué)的預(yù)報(bào)三疣梭子蟹產(chǎn)卵期的方法，在不 處死雌體親本的情況下進(jìn)行取樣，可以準(zhǔn)確預(yù)測三疣梭子蟹產(chǎn)卵期的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明就是為了解決上述問題，克服已有憑借經(jīng)驗(yàn)觀察卵巢是否充滿頭 胸甲的預(yù)報(bào)方法，無法判斷卵巢的生理成熟和生長成熟，故無法準(zhǔn)確預(yù)測其 產(chǎn)卵時(shí)間的問題，另外克服了已有預(yù)報(bào)方法通過處死親本取得卵巢組織進(jìn)行 研究，無法對活體親本的產(chǎn)卵期進(jìn)行預(yù)報(bào)的問題，提供一種預(yù)報(bào)三疣梭子蟹 產(chǎn)卵期的方法。本方法適用于三疣梭子蟹雌體。該發(fā)明適用于科研單位和生 產(chǎn)單位，也可適用于育苗農(nóng)戶使用。
本發(fā)明所需要解決的技術(shù)問題，可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn) 1. 一種預(yù)報(bào)三疣梭子蟹產(chǎn)卵期的方法，包括以下步驟，
(1) 在不解剖三疣梭子蟹雌體親本的條件下，采用取樣工具在三疣梭子 蟹雌體的甲殼上鉆取樣孔，進(jìn)行取樣，取少量卵巢組織，取樣后將取樣孔密 封；
(2) 檢查卵巢發(fā)育情況，取樣后可以通過肉眼觀察或利用顯微鏡對卵巢 發(fā)育情況進(jìn)行組織學(xué)研究；(3)根據(jù)步驟(2)的組織學(xué)觀察預(yù)測三疣梭子蟹的產(chǎn)卵期。 步驟(1)中取樣工具使用鉆頭和鑷子，所述鉆頭和鑷子在使用前必須經(jīng)
過嚴(yán)格消毒，防止病菌感染親本，鉆頭直徑為0.8-1.2毫米，鉆頭過大容易對
親本造成較大的傷害，從而降低親本成活率。
步驟(1)中所述取樣孔位于甲殼上的頭胸甲前緣，靠近眼睛后的部位，
從所述取樣孔進(jìn)行取樣，能夠取到卵巢樣品，且不會對心臟等其它組織造成
損傷，所述取樣孔的甲殼比較平整，取樣后容易密封取樣孔。
步驟(1)取樣孔密封為取樣后采用502膠和0.5毫米厚的塑料板密封甲 殼上的取樣孔，防止海水進(jìn)入或者病菌感染等導(dǎo)致親本死亡，然后過2-3分鐘 待502膠固化后將親本立即放入海水中，減少取樣過程對親本的不良影響。
取樣后5分鐘內(nèi)密封取樣孔。
步驟(2)所述檢査卵巢發(fā)育情況，進(jìn)一步包括采用固定液對卵巢組織固 定，進(jìn)行組織學(xué)觀察。
所述固定液為改良的Bouin氏液或者改良的3%福爾馬林溶液，否則固定 后的卵巢樣品在切片過程中卵母細(xì)胞容易破碎，造成卵黃脫落，影響組織學(xué) 觀察。
所述改良的Bouin氏液的配方為2.4毫升飽和苦味酸溶液、64.5毫升福爾 馬林、12.5毫升冰醋酸溶液和190毫升蒸餾水。
所述改良的3%福爾馬林溶液為3%福爾馬林溶解于標(biāo)準(zhǔn)人工海水中制備。
步驟(3)中所述組織學(xué)觀察的指標(biāo)為卵母細(xì)胞的形狀、卵徑、卵黃顆粒 的大小和均勻化程度等，然后根據(jù)指標(biāo)判斷三疣梭子蟹的卵巢發(fā)育情況，從 而預(yù)測雌體的產(chǎn)卵期。
用肉眼直接觀察卵巢樣品，親本的卵母細(xì)胞已經(jīng)游離于卵巢腔中，卵母 細(xì)胞呈圓形或者橢圓形，預(yù)測在日光照大于12h、水溫16—19"C、鹽度為24 一30ppt的條件下，大部分個(gè)體4天內(nèi)就會產(chǎn)卵。
所述親本的卵母細(xì)胞尚沒有游離于卵巢腔中，則在顯微鏡下測量卵徑和 觀察卵母細(xì)胞形狀，如果平均卵徑在350微米左右，且卵母細(xì)胞仍然互相擠壓呈多邊形，可以預(yù)測，在日光照大于12h、水溫16—19。C、鹽度為24—30ppt 的條件下，大部分個(gè)體7天后才可能會產(chǎn)卵。
所述親本的卵母細(xì)胞尚沒有游離于卵巢腔中，則在顯微鏡下測量卵徑和 觀察卵母細(xì)胞形狀，親本的卵母細(xì)胞尚為多邊形，平均卵徑小于300微米， 在日光照大于12h、水溫16—19。C、鹽度為24—30ppt的條件下，大部分個(gè)體 IO天后可能會產(chǎn)卵。
本方法的預(yù)報(bào)的產(chǎn)卵時(shí)間，必須滿足日光照大于12h、水溫16—19"C、 鹽度為24—30ppt的條件。
本發(fā)明的原理
要準(zhǔn)確預(yù)報(bào)三疣梭子蟹雌體親本的產(chǎn)卵期，關(guān)鍵是要確定親本的卵巢發(fā) 育階段，如果卵巢和卵母細(xì)胞已經(jīng)達(dá)到生理成熟，在適宜的光照、溫度和鹽 度條件下親本將很快產(chǎn)卵。科研中通常采用處死親本，打開甲殼，然后獲得卵 巢，然后觀察卵母細(xì)胞(卵子)是否游離于卵巢腔中，進(jìn)一步可通過組織切片確 認(rèn)卵子的成熟狀態(tài)，這種方法不但需要處死昂貴的親本，也無法預(yù)測每個(gè)雌 體親本的產(chǎn)卵時(shí)間，在實(shí)際生產(chǎn)中沒有可行性。
本發(fā)明根據(jù)多年的研究結(jié)果，參見圖1-圖10，通過在三疣梭子蟹甲殼鉆 孔取出少量卵巢組織用于活體觀察和組織學(xué)研究，然后迅速用小的塑料板(厚 度0.5毫米)和502膠封住小孔。這樣不僅可以準(zhǔn)確了解卵巢和卵母細(xì)胞發(fā)育 的情況，從而預(yù)報(bào)雌體的產(chǎn)卵時(shí)間，而且不需要解剖昂貴的雌體親本，故可以 節(jié)省大量成本。
具體結(jié)果是
(1) 如果親本的卵母細(xì)胞(卵子)已經(jīng)游離于卵巢腔中，組織學(xué)觀察表明卵 母細(xì)胞(卵子)已經(jīng)脫離濾泡腔，呈圓形或者橢圓形，可以預(yù)測在光照大于12h、 水溫16—19。C、鹽度為24—30ppt的條件下，大部分個(gè)體4天內(nèi)會產(chǎn)卵，預(yù)報(bào) 準(zhǔn)確率達(dá)80.95%(n=63)，但是如果親本生活在水溫低于15'C情況下，產(chǎn)卵時(shí) 間會大大推遲，如果親本一直生活在水溫低于12'C，沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)卵個(gè)體。
(2) 如果親本的卵母細(xì)胞(即，卵子)尚沒有游離于卵巢腔中，平均卵徑在 350微米左右，組織學(xué)顯示卵母細(xì)胞仍然互相擠壓呈多邊形，在日光照大于 12h、水溫16—19。C、鹽度為24—30ppt的條件下，大部分個(gè)體7天后才可能會產(chǎn)卵，預(yù)報(bào)準(zhǔn)確率達(dá)84.62%(n=52)，如果水溫低于15°C，產(chǎn)卵時(shí)間還要延 長。如果親本的卵母細(xì)胞尚為多邊形，平均卵徑小于300微米，且細(xì)胞內(nèi)的卵 黃物質(zhì)尚沒有均質(zhì)化，在日光照大于12h、水溫16—19'C、鹽度為24—30ppt 的條件下，大部分個(gè)體10天后才可能會產(chǎn)卵，預(yù)報(bào)準(zhǔn)確率達(dá)90.57%(n=53)。 由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明的有益效果
1、 預(yù)報(bào)準(zhǔn)確率提高到80%以上；
2、 對于科研單位而言，通過此法活體取得少量卵巢樣品，可進(jìn)一步從事 組織學(xué)、生化成分和分子生物學(xué)的深入研究，這不僅可以節(jié)約大量采樣費(fèi)用， 而且有利于實(shí)行動物福利，減少科研活動對活體三疣梭子蟹的殺死需求。
3、 方法簡單，對于絕大多數(shù)三疣梭子蟹育苗企業(yè)和育苗農(nóng)戶而言，僅需 要一把解剖鑷子和小型電鉆，在不殺死親本的條件，便可準(zhǔn)確預(yù)測活體三疣 梭子蟹的產(chǎn)卵時(shí)間。


圖1成體三疣梭子蟹卵巢的位置，紅線內(nèi)為成熟卵巢的位置，黃色區(qū)域 為可以鉆孔的區(qū)域。
圖2采用微型電鉆鉆孔的示意圖。圖中微型電鉆為施力特QT-35微型電 鉆實(shí)物圖，鉆頭直徑為l毫米。
圖3取樣用的鑷子，A不銹鋼鑷子(GOOI-TS-14，廣州通輝電子工具有限 公司)，B眼用鑷(六六53072，蘇州六六視覺科學(xué)股份有限公司)。
圖4取樣后封孔的三疣梭子蟹背(用502膠和綠色塑料板密封取樣孔，防 止海水進(jìn)入體腔和細(xì)菌感染)。
圖5近成熟或生長成熟的卵巢外觀，卵巢不膨大疏松，卵母細(xì)胞尚沒有 游離出來。
圖6為圖5所示的卵母細(xì)胞的放大圖，卵母細(xì)胞擠壓在一起的組織學(xué)照 片，卵母細(xì)胞尚沒有脫離濾泡腔。
圖7近成熟或者生長成熟的卵母細(xì)胞的組織學(xué)，卵母細(xì)胞因擠壓呈多邊形。圖8生理成熟(即將排卵)的卵巢外觀，卵巢膨大疏松。 圖9為圖8所示即將排卵的卵母細(xì)胞的放大圖。
圖IO生理成熟狀態(tài)的卵母細(xì)胞組織學(xué)，卵母細(xì)胞為圓形或者近圓形，卵 黃顆粒大小比較均勻。
具體實(shí)施例方式
為了使本發(fā)明的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、達(dá)成目的與功效易于明白了解， 下面結(jié)合具體圖示，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。
實(shí)施例1
如圖1-10所示。工具和試劑準(zhǔn)備微型電鉆(施力特QT-35,寧波高橋 施力特工具廠)參見圖2、不銹鋼鑷子(GOOI-TS-14，廣州通輝電子工具有限 公司)參見圖3、江南電光源顯微鏡(XS-212-201，南京江南永新光學(xué)有限公 司)、Cl型目測微尺(Cl型，上海越磁電子科技有限公司)、75%酒精(上海 凌峰化學(xué)試劑有限公司)、502膠(廣東愛必達(dá)膠粘劑有限公司)、干毛巾和棉 球。
活體取樣取出繁殖用的三疣梭子蟹雌體親本，用干毛巾擦干甲殼上的 水分，用酒精棉球?qū)磳@孔的部分，即頭胸甲前緣、靠近眼睛后的部位進(jìn) 行消毒。然后采用微型電鉆(直徑為1毫米的鉆頭，鉆頭事先需要用酒精消 毒)在甲殼上頭胸甲前緣、靠近眼睛后的部位鉆0.8-1.2mm取樣孔，lmm的 取樣孔為佳，參見圖2，然后用酒精消毒過的不銹鋼鑷子取出少量卵巢樣品以 觀察卵巢發(fā)育情況。取樣后迅速采用502膠和0.5毫米厚的塑料板密封甲殼上 取樣的小孔，參見圖4，防止海水進(jìn)入或者病菌感染等導(dǎo)致親本死亡。
樣品觀察用肉眼直接觀察卵巢樣品，如果親本的卵母細(xì)胞(卵子)已經(jīng)游 離于卵巢腔中，卵母細(xì)胞呈圓形或者橢圓形，可以預(yù)測在日光照大于12h、水 溫16—19X:、鹽度為24—30ppt的條件下，大部分個(gè)體4天內(nèi)就會產(chǎn)卵，參見 圖8-10;但是如果親本生活在水溫低于15。C情況下，產(chǎn)卵時(shí)間會大大推遲。 如果親本的卵母細(xì)胞(卵子)尚沒有游離于卵巢腔中，則在顯微鏡下測量卵徑和 觀察卵母細(xì)胞形狀，如果平均卵徑在350微米左右，且卵母細(xì)胞仍然互相擠壓呈多邊形，可以預(yù)測，在日光照大于12h、水溫16—19°C、鹽度為24—30ppt 的條件下，大部分個(gè)體7天后才可能會產(chǎn)卵，參見圖7;如果親本的卵母細(xì)胞 尚為多邊形，平均卵徑小于300微米，在日光照大于12h、水溫16—19"C、鹽 度為24—30ppt的條件下，大部分個(gè)體10天后才可能會產(chǎn)卵，參見圖5和圖6。
本實(shí)施例適用于育苗農(nóng)戶和一般的育苗企業(yè)。 實(shí)施例2
如圖1-10所示。工具和試劑準(zhǔn)備微型電鉆(施力特QT-35，寧波高橋 施力特工具廠)，參見圖2、不銹鋼鑷子(GOOI-TS-14，廣州通輝電子工具有 限公司)或者眼用鑷(六六53072，蘇州六六視覺科學(xué)股份有限公司)參見圖3、 電光源解剖鏡(Leica Zoom國2000， Meyer Instruments, Inc， Houston, TX 77084)、 電光源顯微鏡(江南XS-212-201,南京江南永新光學(xué)有限公司)、Cl型目測 微尺(Cl型，上海越磁電子科技有限公司)、75%酒精(上海凌峰化學(xué)試劑 有限公司)、502膠(廣東愛必達(dá)膠粘劑有限公司)、組織切片機(jī)(Leica RM 2016， Leica Microsystems Inc., Bannockburn， IL， USA)、改良的Bouin氏固定液(2.4 毫升飽和苦味酸溶液、64.5毫升福爾馬林、12.5毫升冰醋酸溶液和190毫升 蒸餾水)或者3%的福爾馬林溶液(3%福爾馬林溶解于標(biāo)準(zhǔn)人工海水中)、干 毛巾和棉球。
活體取樣取出繁殖用的三疣梭子蟹雌體親本，用干毛巾擦干甲殼上的 水分，用酒精棉球?qū)磳@孔的部分，即頭胸甲前緣、靠近眼睛后的部位進(jìn) 行消毒。然后采用微型電鉆(直徑為1毫米的鉆頭)在甲殼上頭胸甲前緣、 靠近眼睛后的部位進(jìn)行鉆0.8-1.2111111取樣孔，lmm的取樣孔為佳，參見圖2, 然后用酒精消毒過的不銹鋼鑷子進(jìn)行取出少量卵巢樣品以觀察卵巢發(fā)育情況 和固定后用于組織學(xué)研究。取樣后迅速采用502膠和0.5毫米厚的塑料板密封 甲殼上取樣的小孔，參見圖4，防止海水進(jìn)入或者病菌感染等導(dǎo)致親本死亡。
樣品觀察在解剖鏡下直接觀察卵巢樣品，如果親本的卵母細(xì)胞(卵子) 已經(jīng)游離于卵巢腔中，卵母細(xì)胞呈圓形或者橢圓形，可以預(yù)測在光照大于12h、 水溫16—19。C、鹽度為24—30ppt的條件下，大部分個(gè)體4天內(nèi)就會產(chǎn)卵， 參見圖8-10;但是如果親本生活在水溫低于15X:的條件下，產(chǎn)卵時(shí)間會大大推遲。如果親本的卵母細(xì)胞(卵子)尚沒有游離于卵巢腔中，則通過常規(guī)石蠟切
片后觀察卵母細(xì)胞的組織學(xué)，在顯微鏡下測量卵徑，如果平均卵徑在350微 米左右，卵母細(xì)胞仍然互相擠壓呈多邊形，卵母細(xì)胞內(nèi)卵黃顆粒大小均勻且 充滿整個(gè)卵母細(xì)胞，可以預(yù)測，在日光照大于12h、水溫16 — 19'C、鹽度為 24—30ppt的條件下，大部分個(gè)體7天后才可能會產(chǎn)卵，參見圖7;如果親本 的卵母細(xì)胞尚為多邊形，平均卵徑小于300微米，且卵母細(xì)胞內(nèi)的卵黃顆粒 大小不均勻，可以預(yù)測在日光照大于12h、水溫16—19'C、鹽度為24—30ppt 的條件下，大部分個(gè)體10天后才可能會產(chǎn)卵，參見圖5和圖6。 本實(shí)施例適用于科研單位及具備條件的三疣梭子蟹育苗企業(yè)。 以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行 業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說明 書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下本 發(fā)明還會有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍 內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書及其等同物界定。
權(quán)利要求
1. 一種預(yù)報(bào)三疣梭子蟹產(chǎn)卵期的方法，包括以下步驟，(1)在不解剖三疣梭子蟹雌體親本的條件下，采用取樣工具在三疣梭子蟹雌體的甲殼上鉆取樣孔，進(jìn)行取樣，取少量卵巢組織，取樣后將取樣孔密封；(2)檢查卵巢發(fā)育情況，取樣后可以通過肉眼或顯微鏡對卵巢發(fā)育情況進(jìn)行觀察；(3)根據(jù)步驟(2)的組織學(xué)觀察的指標(biāo)預(yù)測三疣梭子蟹的產(chǎn)卵期。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(1)中取樣工具使用 鉆頭和鑷子，所述鉆頭和鑷子在使用前必須經(jīng)過嚴(yán)格消毒，防止病菌感染親 本，鉆頭直徑為0.8-1.2毫米。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(1)中所述取樣孔位 于甲殼上的頭胸甲前緣，靠近眼睛后的部位，所述取樣孔的甲殼比較平整， 取樣后容易密封取樣孔。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(1)取樣孔密封為取 樣后采用502膠和0.5毫米厚的塑料板密封甲殼上的取樣孔，然后過2-3分鐘 待502膠固化后將親本立即放入海水中。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(2)所述檢査卵巢發(fā) 育情況，進(jìn)一步檢查包括采用固定液對卵巢組織固定，進(jìn)行組織學(xué)觀察。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述固定液為改良的Bouin 氏液或者改良的3%福爾馬林溶液。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(3)中所述組織學(xué)觀 察的指標(biāo)為卵母細(xì)胞的形狀、卵徑、卵黃顆粒的大小和均勻化程度，然后根 據(jù)指標(biāo)判斷三疣梭子蟹的卵巢發(fā)育情況，從而預(yù)測雌體的產(chǎn)卵期。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于用肉眼直接觀察卵巢樣品， 親本的卵母細(xì)胞已經(jīng)游離于卵巢腔中，卵母細(xì)胞呈圓形或者橢圓形，預(yù)測在 日光照大于12h、水溫16—19°C、鹽度為24—30ppt的條件下，大部分個(gè)體4 天內(nèi)就會產(chǎn)卵。
9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于親本的卵母細(xì)胞尚沒有游 離于卵巢腔中，則在顯微鏡下測量卵徑和觀察卵母細(xì)胞形狀，如果平均卵徑在350微米左右，且卵母細(xì)胞仍然互相擠壓呈多邊形，可以預(yù)測，在日光照 大于12h、水溫16—19。C、鹽度為24—30ppt的條件下，大部分個(gè)體7天后才 可能會產(chǎn)卵。
10. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于親本的卵母細(xì)胞尚沒有游 離于卵巢腔中，則在顯微鏡下測量卵徑和觀察卵母細(xì)胞形狀，親本的卵母細(xì) 胞尚為多邊形，平均卵徑小于300微米，在日光照大于12h、水溫16—19。C、 鹽度為24—30ppt的條件下，大部分個(gè)體10天后可能會產(chǎn)卵。
全文摘要
一種預(yù)報(bào)三疣梭子蟹產(chǎn)卵期的方法，本發(fā)明在不處死親本的條件下，通過鉆孔取樣少量卵巢組織，結(jié)合肉眼檢查和組織學(xué)觀察，可以預(yù)報(bào)三疣梭子蟹雌體的大致產(chǎn)卵期。本方法的關(guān)鍵為在頭胸甲前緣、靠近眼睛后的部位鉆孔獲取卵巢組織、密封取樣孔和采用改良的組織固定液固定卵巢。本方法適合于科研和生產(chǎn)單位使用，在活體條件下了解親本的卵巢發(fā)育情況，從而預(yù)報(bào)產(chǎn)卵期。預(yù)報(bào)三疣梭子蟹雌體產(chǎn)卵期有利于人工育苗中準(zhǔn)備育苗設(shè)施和餌料，對于其人工育苗具有重要的意義。
文檔編號A01K61/00GK101543191SQ20091004984
公開日2009年9月30日 申請日期2009年4月23日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月23日
發(fā)明者劉智俊, 吳旭干, 成永旭, 李光霞, 楊筱珍 申請人:上海海洋大學(xué)