專利名稱：黑麥冬的組織培養(yǎng)方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種植物的組織培養(yǎng)方法，尤其是涉及黑麥冬的組織培養(yǎng)方法。
背景技術：
黑麥冬為百合科麥冬屬植物，原產(chǎn)于我國亞熱帶地區(qū)，生于山地、山谷的密林下潮 濕處。葉片呈線形，頂端呈鈍狀或逐漸變尖，葉緣粗糙，葉片呈紫黑色，具有較高的觀賞價 值。是一種良好的花鏡與地被材料。但是，作為新品種，黑麥冬引種數(shù)量較少，分株也較慢， 因此種苗供應受到一定的限制。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術存在的缺陷而提供一種可提高繁殖速 度和苗的整齊度，并提高性狀穩(wěn)定性的黑麥冬的組織培養(yǎng)方法。本發(fā)明的目的可以通過以下技術方案來實現(xiàn)黑麥冬的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得春季取萌發(fā)的幼嫩的芽，去除外面包裹的葉片后，用自來水沖洗l_3h后于超凈工 作臺上，依次利用質量濃度為70-75%的乙醇浸泡10-50s，體積濃度為0. 5_2%。的汞浸泡 10-30min，再用無菌水沖洗4-6次，利用無菌濾紙吸干芽表面的水分后，將芽切成0. 5-2cm 長的帶腋芽的節(jié)段，節(jié)段接種于芽誘導培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖節(jié)段接種于芽誘導培養(yǎng)基上2-4周后，腋芽部位開始膨大，出現(xiàn)綠色突起，4-6周 后可見芽分生組織，再培養(yǎng)1-3個月，小芽可以長到l-2cm，將小芽切下轉入芽的增殖培養(yǎng) 基中進行增殖培養(yǎng)，小芽基部的愈傷組織較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速且 無玻璃化等不良現(xiàn)象，在培養(yǎng)基中生長發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在芽的增殖培養(yǎng)基上，誘導出的叢生芽中每叢有2-3株能夠伸長，其余的處于矮 化狀態(tài)，將叢生芽分成小叢后，轉至壯苗培養(yǎng)基上生長，不定芽迅速伸長，30-45天后可以長 至 3-4cm ；(4)生根培養(yǎng)取3_4cm的不定芽小植株，轉接入生根培養(yǎng)基中誘導生根，25_40天后幼苗基部分 化出白色的根原基，40-60天后可以長至2-4cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為90-100% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)40-60天，根系長至2-4cm時，選擇根系發(fā)達、生長健壯的無菌苗，于室內 開瓶煉苗1-4天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室內的苗床中馴化20-40天，即可 移栽室外，給予肥水管理，最終的移栽成活率為90-100%。所述的芽誘導培養(yǎng)基包括MS+6-BA1. 0-5. 0mg/L+NAA0. 1-0. 5mg/L。
所述的芽誘導培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L。所述的芽的增殖培養(yǎng)基包括MS+6-BA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 1-0. 4mg/L。所述的芽的增殖培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA3. Omg/L+NAAO. 3mg/L。所述的壯苗培養(yǎng)基包括MS+6-BA1. 0-3. Omg/L+NAAO. 1-0. 5mg/L。
所述的壯苗培養(yǎng)基優(yōu)選 MS+6-BA3. Omg/L+NAAO. 3mg/L。所述的生根培養(yǎng)基包括MS+NAA0. 1-0. 3mg/L。所述的生根培養(yǎng)基優(yōu)選MS+NAAO. 3mg/L。所述的培養(yǎng)基還包括蔗糖20_40g/L、瓊脂粉4_8g/L，培養(yǎng)基pH5. 5-6. 0，培養(yǎng)溫度 24-26°C，光照 1500-25001x。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明通過組培技術，極大提高了黑麥冬的繁殖速度和苗的整 齊度，并提高了其性狀的穩(wěn)定性，可實現(xiàn)育苗的工廠化大批量生產(chǎn)。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。實施例1(1)無菌材料的獲得春季取萌發(fā)的幼嫩的芽，去除外面包裹的葉片后，用自來水沖洗Ih后于超凈工作 臺上，依次利用質量濃度為70%的乙醇浸泡10s，體積濃度為0. 5%。的汞浸泡lOmin，再用無 菌水沖洗4次，利用無菌濾紙吸干芽表面的水分后，將芽切成0. 5cm長的帶腋芽的節(jié)段，節(jié) 段接種于包括MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L的芽誘導培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖節(jié)段接種于芽誘導培養(yǎng)基上2周后，腋芽部位開始膨大，出現(xiàn)綠色突起，4周后 可見芽分生組織，再培養(yǎng)1個月，小芽可以長到1cm，將小芽切下轉入包括MS+6-BA1. Omg/ L+NAAO. lmg/L的芽的增殖培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)，小芽基部的愈傷組織較多，但不影響不 定芽的增殖，不定芽生長迅速且無玻璃化等不良現(xiàn)象，在培養(yǎng)基中生長發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在芽的增殖培養(yǎng)基上，誘導出的叢生芽中每叢有2株能夠伸長，其余的處于矮化 狀態(tài)，將叢生芽分成小叢后，轉至包括MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L的壯苗培養(yǎng)基上生長， 不定芽迅速伸長，30天后可以長至3cm ；(4)生根培養(yǎng)取3cm的不定芽小植株，轉接入包括MS+NAAO. lmg/L的生根培養(yǎng)基中誘導生根，25 天后幼苗基部分化出白色的根原基，40天后可以長至2cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為 90% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)40天，根系長至2cm時，選擇根系發(fā)達、生長健壯的無菌苗，于室內開瓶 煉苗1天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室內的苗床中馴化20天，即可移栽室外， 給予肥水管理，最終的移栽成活率為90%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖20g/L、瓊脂粉4g/L，pH= 5. 5，培養(yǎng)溫度24°C， 光照 15001x。
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實施例2(1)無菌材料的獲得春季取萌發(fā)的幼嫩的芽，去除外面包裹的葉片后，用自來水沖洗2h后于超凈工作 臺上，依次利用質量濃度為75%的乙醇浸泡30s，體積濃度為1%。的汞浸泡15min，再用無菌 水沖洗5次，利用無菌濾紙吸干芽表面的水分后，將芽切成Icm長的帶腋芽的節(jié)段，節(jié)段接 種于包括MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L的芽誘導培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖節(jié)段接種于芽誘導培養(yǎng)基上3周后，腋芽部位開始膨大，出現(xiàn)綠色突起，5周后 可見芽分生組織，再培養(yǎng)2個月，小芽可以長到2cm，將小芽切下轉入包括MS+6-BA3. Omg/ L+NAAO. 3mg/L的芽的增殖培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)，小芽基部的愈傷組織較多，但不影響不 定芽的增殖，不定芽生長迅速且無玻璃化等不良現(xiàn)象，在培養(yǎng)基中生長發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在芽的增殖培養(yǎng)基上，誘導出的叢生芽中每叢有3株能夠伸長，其余的處于矮化 狀態(tài)，將叢生芽分成小叢后，轉至包括MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L的壯苗培養(yǎng)基上生長， 不定芽迅速伸長，40天后可以長至4cm ；(4)生根培養(yǎng)取4cm的不定芽小植株，轉接入包括MS+NAAO. 3mg/L的生根培養(yǎng)基中誘導生根，30 天后幼苗基部分化出白色的根原基，50天后可以長至4cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為 100% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)50天，根系長至4cm時，選擇根系發(fā)達、生長健壯的無菌苗，于室內開瓶 煉苗3天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室內的苗床中馴化30天，即可移栽室外， 給予肥水管理，最終的移栽成活率為100%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖30g/L、瓊脂粉6g/L，pH = 5. 8，培養(yǎng)溫度25°C， 光照 20001x。實施例3(1)無菌材料的獲得取萌發(fā)的幼嫩的芽，去除外面包裹的葉片后，用自來水沖洗3h后于超凈工作臺 上，依次利用質量濃度為75%的乙醇浸泡50s，體積濃度為1%。的汞浸泡30min，再用無菌水 沖洗6次，利用無菌濾紙吸干芽表面的水分后，將芽切成2cm長的帶腋芽的節(jié)段，節(jié)段接種 于包括MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L的芽誘導培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖節(jié)段接種于芽誘導培養(yǎng)基上4周后，腋芽部位開始膨大，出現(xiàn)綠色突起，6周后可 見芽分生組織，再培養(yǎng)4個月，小芽可以長到1. 6cm,將小芽切下轉入包括MS+6-BA3. Omg/ L+NAAO. 4mg/L的芽的增殖培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)，小芽基部的愈傷組織較多，但不影響不 定芽的增殖，不定芽生長迅速且無玻璃化等不良現(xiàn)象，在培養(yǎng)基中生長發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在芽的增殖培養(yǎng)基上，誘導出的叢生芽中每叢有3株能夠伸長，其余的處于矮化 狀態(tài)，將叢生芽分成小叢后，轉至包括MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 5mg/L的壯苗培養(yǎng)基上生長，不定芽迅速伸長，45天后可以長至3. 5cm ；(4)生根培養(yǎng)取3. Scm的不定芽小植株，轉接入包括MS+NAAO. 3mg/L的生根培養(yǎng)基中誘導生根， 45天后幼苗基部分化出白色的根原基，60天后可以長至3cm，根系粗壯，須根眾多，生根率 為 93% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)60天，根系長至3cm時，選擇根系發(fā)達、生長健壯的無菌苗，于室內開瓶 煉苗4天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室內的苗床中馴化40天，即可移栽室外， 給予肥水管理，最終的移栽成活率為95%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖40g/L、瓊脂粉8g/L，pH = 6. 0，培養(yǎng)溫度26°C， 光照 25001x。
權利要求
黑麥冬的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得春季取萌發(fā)的幼嫩的芽，去除外面包裹的葉片后，用自來水沖洗1-3h后于超凈工作臺上，依次利用質量濃度為70-75％的乙醇浸泡10-50s，體積濃度為0.5-2‰的汞浸泡10-30min，再用無菌水沖洗4-6次，利用無菌濾紙吸干芽表面的水分后，將芽切成0.5-2cm長的帶腋芽的節(jié)段，節(jié)段接種于芽誘導培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖節(jié)段接種于芽誘導培養(yǎng)基上2-4周后，腋芽部位開始膨大，出現(xiàn)綠色突起，4-6周后可見芽分生組織，再培養(yǎng)1-3個月，小芽可以長到1-2cm，將小芽切下轉入芽的增殖培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)，小芽基部的愈傷組織較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速且無玻璃化等不良現(xiàn)象，在培養(yǎng)基中生長發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在芽的增殖培養(yǎng)基上，誘導出的叢生芽中每叢有2-3株能夠伸長，其余的處于矮化狀態(tài)，將叢生芽分成小叢后，轉至壯苗培養(yǎng)基上生長，不定芽迅速伸長，30-45天后可以長至3-4cm；(4)生根培養(yǎng)取3-4cm的不定芽小植株，轉接入生根培養(yǎng)基中誘導生根，25-40天后幼苗基部分化出白色的根原基，40-60天后可以長至2-4cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為90-100％；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)40-60天，根系長至2-4cm時，選擇根系發(fā)達、生長健壯的無菌苗，于室內開瓶煉苗1-4天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室內的苗床中馴化20-40天，即可移栽室外，給予肥水管理，最終的移栽成活率為90-100％。
2.根據(jù)權利要求1所述的黑麥冬的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的芽誘導培養(yǎng)基 包括 MS+6-BA1. 0-5. 0mg/L+NAA0. 1-0. 5mg/L。
3.根據(jù)權利要求2所述的黑麥冬的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的芽誘導培養(yǎng)基 優(yōu)選 MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L。
4.根據(jù)權利要求1所述的黑麥冬的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的芽的增殖培養(yǎng) 基包括 MS+6-BA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 1-0. 4mg/L。
5.根據(jù)權利要求4所述的黑麥冬的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的芽的增殖培養(yǎng) 基優(yōu)選 MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L。
6.根據(jù)權利要求1所述的黑麥冬的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的壯苗培養(yǎng)基包 括 MS+6-BA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 1-0. 5mg/L。
7.根據(jù)權利要求6所述的黑麥冬的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的壯苗培養(yǎng)基優(yōu) 選 MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L。
8.根據(jù)權利要求1所述的黑麥冬的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的生根培養(yǎng)基包 括 MS+NAA0. 1-0. 3mg/L。
9.根據(jù)權利要求8所述的黑麥冬的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的生根培養(yǎng)基優(yōu) 選 MS+NAA0. 3mg/L。
10.根據(jù)權利要求2或4或6或8所述的黑麥冬的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的培養(yǎng)基還包括蔗糖20-40g/L、瓊脂粉4-8g/L，培養(yǎng)基pH5. 5-6. 0,培養(yǎng)溫度24-26°C，光照 1500-25001x。
全文摘要
本發(fā)明涉及黑麥冬的組織培養(yǎng)方法，包括無菌材料的獲得，芽的分化和增殖，不定芽壯苗培養(yǎng)，生根培養(yǎng)，煉苗與移栽等步驟。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明大大提高了黑麥冬的繁殖速度和苗的整齊度，并提高了其性狀的穩(wěn)定性，可實現(xiàn)育苗的工廠化大批量生產(chǎn)。
文檔編號A01H4/00GK101869061SQ200910049969
公開日2010年10月27日 申請日期2009年4月24日 優(yōu)先權日2009年4月24日
發(fā)明者沈勤, 陳建華, 黃建榮 申請人:上海上房園林植物研究所