專利名稱：百子蓮的組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物的組織培養(yǎng)方法，尤其是涉及一種百子蓮的組織培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
百子蓮為石蒜科百子蓮屬植物，原產(chǎn)于秘魯和巴西一帶，現(xiàn)栽培較為廣泛。百子蓮 是多年生草本植物，鱗莖肥大，近球形，直徑5-7cm，外皮呈淡綠色或黃褐色。葉片兩側(cè)對生， 帶狀，先端漸尖，共6-8枚，葉片多于花后生出。頂端著花2-4朵，花朵碩大，花色紫色，是良 好的花鏡與庭院材料。做為國外引進(jìn)的新品種，百子蓮的引種數(shù)量較少，種球分株慢，種苗 供應(yīng)受限制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種可提高繁殖速 度和苗的整齊度的百子蓮的組織培養(yǎng)方法。本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)百子蓮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得在百子蓮開花時(shí)，摘取未開花的花苞，用自來水沖洗l_3h后于超凈工班工作 臺上，依次利用質(zhì)量濃度為60-75%的乙醇浸泡10-50s，體積濃度為0. 5_2%。的汞浸泡 10-30min,再用無菌水沖洗4_6次，利用無菌濾紙吸干花苞表面的水分后，將花苞接種于花 苞誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)球莖的分化和增殖花苞接種于花苞誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，1-3周后花苞開始膨大，出現(xiàn)白色突起，3-5周后 可見芽分生組織，再培養(yǎng)1-2個月，有小球莖生成，將小球莖切下移入球莖增殖培養(yǎng)基中進(jìn) 行增殖培養(yǎng)，球莖基部的愈傷組織較多，但球莖生長發(fā)育良好，無玻璃化等不良現(xiàn)象；(3)球莖壯苗培養(yǎng)將球莖增殖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出的球莖轉(zhuǎn)至壯苗培養(yǎng)基上生長，20-40天后可以長成 0. 2-0. 5cm 的球莖；(4)生根培養(yǎng)取0. 2-0. 5cm的球莖，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，10-20天后幼苗基部分化出 白色的根原基，30-35天后可以長至2-4cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為90-100% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)30-35天，根系長至0. 5-lcm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長健壯的無菌苗，于室 內(nèi)開瓶煉苗1-3天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室的苗床中馴化30-50天，即可 移栽室外上盆或地栽，給予肥水管理，最終的移栽成活率為90-100 %。所述的花苞誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括MS+6-BA1. 0-5. 0mg/L+NAA0. 1-0. 5mg/L。所述的花苞誘導(dǎo)培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L。
所述的球莖增殖培養(yǎng)基包括MS+6-BA0. 5-4. 0mg/L+NAA0. 1-0. 3mg/L。所述的球莖增殖培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。所述的壯苗培養(yǎng)基包括MS+6-BA0. 5-2. Omg/L+NAAO. 1-0. 3mg/L。所述的壯苗培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L。所述的生根培養(yǎng)基包括MS+NAA0. 1-0. 3mg/L。所述的生根培養(yǎng)基優(yōu)選MS+NAAO. lmg/L。所述的培養(yǎng)基還包括蔗糖20_40g/L、瓊脂粉4_8g/L，培養(yǎng)基pH5. 5-6. 0，培養(yǎng)溫度 24-26°C，光照 1500-25001x。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過組培技術(shù)，極大提高了百子蓮的繁殖速度和苗的整 齊度，可以實(shí)現(xiàn)育苗的工廠化大批量生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。實(shí)施例1(1)無菌材料的獲得在百子蓮開花時(shí)，摘取未開花的花苞，用自來水沖洗Ih后于超凈工班工作臺上， 依次利用質(zhì)量濃度為60%的乙醇浸泡10s，體積濃度為0. 5%。的汞浸泡lOmin，無菌水沖洗 4次，用無菌濾紙吸干表面水分后，將花苞接種于包括MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L的腋芽 誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)球莖的分化和增殖花苞接種于花苞誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，1周后花苞開始膨大，出現(xiàn)白色突起，3周后可 見芽分生組織，再培養(yǎng)1個月，有小球莖生成，將小球莖切下移入包括MS+6-BA0. 5mg/ L+NAAO. lmg/L的球莖增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，球莖基部的愈傷組織較多，但球莖生長 發(fā)育良好，無玻璃化等不良現(xiàn)象；(3)球莖壯苗培養(yǎng)將在球莖增殖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出的球莖轉(zhuǎn)至包括MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L的 壯苗培養(yǎng)基上生長，20天后可以長成0. 2cm的球莖；(4)生根培養(yǎng)取0. 2cm的球莖，轉(zhuǎn)接入包括MS+NAAO. lmg/L的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，10天后幼 苗基部分化出白色的根原基，30天后可以長至2cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為90% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)30天，根系長至0. 5cm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長健壯的無菌苗，于室內(nèi)開 瓶煉苗1天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室的苗床中馴化30天，即可移栽室外 上盆或地栽，給予肥水管理，最終的移栽成活率為90%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖20g/L、瓊脂粉4g/L，pH= 5. 5，培養(yǎng)溫度24°C， 光照 15001x。實(shí)施例2(1)無菌材料的獲得在百子蓮開花時(shí)，摘取未開花的花苞，用自來水沖洗Ih后于超凈工班工作臺上，
4依次利用質(zhì)量濃度為75%的乙醇浸泡30s，體積濃度為1%。的汞浸泡15min，無菌水沖洗5 次，用無菌濾紙吸干表面水分后，將花苞接種于包括MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L的腋芽 誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)球莖的分化和增殖花苞接種于花苞誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，3周后花苞開始膨大，出現(xiàn)白色突起，4周后可 見芽分生組織，再培養(yǎng)1個半月，有小球莖生成，將小球莖切下移入包括MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L的球莖增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，球莖基部的愈傷組織較多，但球莖生長 發(fā)育良好，無玻璃化等不良現(xiàn)象；(3)球莖壯苗培養(yǎng)將在球莖增殖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出的球莖轉(zhuǎn)至包括MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L的 壯苗培養(yǎng)基上生長，30天后可以長成0. 5cm的球莖；(4)生根培養(yǎng)取0. 5cm的球莖，轉(zhuǎn)接入包括MS+NAAO. lmg/L的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，15天后幼 苗基部分化出白色的根原基，30天后可以長至4cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為100% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)30天，根系長至Icm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長健壯的無菌苗，于室內(nèi)開瓶 煉苗3天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室的苗床中馴化40天，即可移栽室外上 盆或地栽，給予肥水管理，最終的移栽成活率為100%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖30g/L、瓊脂粉6g/L，pH = 5. 8，培養(yǎng)溫度25°C， 光照 20001x。實(shí)施例3(1)無菌材料的獲得在百子蓮開花時(shí)，摘取未開花的花苞，用自來水沖洗3h后于超凈工班工作臺上， 依次利用質(zhì)量濃度為75%的乙醇浸泡50s，體積濃度為2%。的汞浸泡30min，無菌水沖洗6 次，用無菌濾紙吸干表面水分后，將花苞接種于包括MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L的腋芽 誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)球莖的分化和增殖花苞接種于花苞誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，3周后花苞開始膨大，出現(xiàn)白色突起，5周后可 見芽分生組織，再培養(yǎng)2個月，有小球莖生成，將小球莖切下移入包括MS+6-BA4. Omg/ L+NAAO. 3mg/L的球莖增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，球莖基部的愈傷組織較多，但球莖生長 發(fā)育良好，無玻璃化等不良現(xiàn)象；(3)球莖壯苗培養(yǎng)將在球莖增殖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出的球莖轉(zhuǎn)至包括MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的 壯苗培養(yǎng)基上生長，40天后可以長成0. 4cm的球莖；(4)生根培養(yǎng)取0. 4cm的球莖，轉(zhuǎn)接入包括MS+NAAO. 3mg/L的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，20天后幼 苗基部分化出白色的根原基，35天后可以長至3cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為95% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)35天，根系長至0. 8cm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長健壯的無菌苗，于室內(nèi)開瓶煉苗3天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂,栽于溫室的苗床中馴化50天，即可移栽室外 上盆或地栽，給予肥水管理，最終的移栽成活率為94%。 上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖40g/L、瓊脂粉8g/L，pH = 6. 0，培養(yǎng)溫度26°C， 光照 25001x。
權(quán)利要求
百子蓮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得在百子蓮開花時(shí)，摘取未開花的花苞，用自來水沖洗1-3h后于超凈工班工作臺上，依次利用質(zhì)量濃度為60-75％的乙醇浸泡10-50s，體積濃度為0.5-2‰的汞浸泡10-30min，再用無菌水沖洗4-6次，利用無菌濾紙吸干花苞表面的水分后，將花苞接種于花苞誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)球莖的分化和增殖花苞接種于花苞誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，1-3周后花苞開始膨大，出現(xiàn)白色突起，3-5周后可見芽分生組織，再培養(yǎng)1-2個月，有小球莖生成，將小球莖切下移入球莖增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，球莖基部的愈傷組織較多，但球莖生長發(fā)育良好，無玻璃化等不良現(xiàn)象；(3)球莖壯苗培養(yǎng)將球莖增殖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出的球莖轉(zhuǎn)至壯苗培養(yǎng)基上生長，20-40天后可以長成0.2-0.5cm的球莖；(4)生根培養(yǎng)取0.2-0.5cm的球莖，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，10-20天后幼苗基部分化出白色的根原基，30-35天后可以長至2-4cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為90-100％；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)30-35天，根系長至0.5-1cm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長健壯的無菌苗，于室內(nèi)開瓶煉苗1-3天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室的苗床中馴化30-50天，即可移栽室外上盆或地栽，給予肥水管理，最終的移栽成活率為90-100％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的百子蓮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的花苞誘導(dǎo)培養(yǎng) 基包括 MS+6-BA1. 0-5. 0mg/L+NAA0. 1-0. 5mg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的百子蓮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的花苞誘導(dǎo)培養(yǎng) 基優(yōu)選 MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的百子蓮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的球莖增殖培養(yǎng) 基包括 MS+6-BA0. 5-4. 0mg/L+NAA0. 1-0. 3mg/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的百子蓮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的球莖增殖培養(yǎng) 基優(yōu)選 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的百子蓮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的壯苗培養(yǎng)基包 括 MS+6-BA0. 5-2. 0mg/L+NAA0. 1-0. 3mg/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的百子蓮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的壯苗培養(yǎng)基優(yōu) 選 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的百子蓮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的生根培養(yǎng)基包 括 MS+NAA0. 1-0. 3mg/L。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的百子蓮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的生根培養(yǎng)基優(yōu) 選 MS+NAA0. lmg/L。
10.根據(jù)權(quán)利要求2或4或6或8所述的百子蓮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的 培養(yǎng)基還包括蔗糖20-40g/L、瓊脂粉4-8g/L，培養(yǎng)基pH5. 5-6. 0,培養(yǎng)溫度24-26°C，光照 1500-25001x。
全文摘要
本發(fā)明涉及百子蓮的組織培養(yǎng)方法，包括無菌材料的獲得，球莖的分化和增殖，球莖壯苗培養(yǎng)，生根培養(yǎng)，煉苗與移栽等步驟。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明大大提高了百子蓮的繁殖速度和苗的整齊度，可實(shí)現(xiàn)育苗的工廠化大批量生產(chǎn)。
文檔編號A01H4/00GK101869066SQ20091004997
公開日2010年10月27日 申請日期2009年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月24日
發(fā)明者沈勤, 陳建華, 黃建榮 申請人:上海上房園林植物研究所