專利名稱：羅斯?；鹦腔ǖ慕M織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物的組織培養(yǎng)方法，尤其是涉及羅斯?；鹦腔ǖ慕M織培養(yǎng)方 法。
背景技術(shù)：
羅斯福火星花為鳶尾科雄黃蘭植物，原產(chǎn)于非洲南部，為多年生草本，有球莖和匍 匐莖，球莖扁圓，外有褐色纖維質(zhì)膜。地上莖高約50cm，常有分枝，葉呈線狀劍形，花為橙紅 色，呈漏斗狀，多片花束排列，呈復(fù)圓錐花序，從蔥綠的葉叢中抽出，高低錯落，疏密有致，花 被筒細(xì)而略彎曲，裂片開展?；鹦腔ǖ幕臼侵傧?，花開不絕，是布置花境、花壇的好材料。 但作為國外引進(jìn)的新品種，羅斯?；鹦腔ㄒN數(shù)量較少，分株慢，種苗供應(yīng)受限制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種可提高繁殖速 度和苗的整齊度的羅斯?；鹦腔ǖ慕M織培養(yǎng)方法。本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)羅斯?；鹦腔ǖ慕M織培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得在春季挖取羅斯?；鹦腔ù笄蚯o旁的小球莖，除去外面包裹的莖片，用自來水沖 洗l_3h，再于超凈工作臺上，依次利用質(zhì)量濃度為70-75%的乙醇浸泡10-50s，體積濃度為 0. 5-2%。的汞浸泡10-30min，再用無菌水沖洗4_6次，利用無菌濾紙吸干小球莖表面的水分 后，將小球莖切成0. 5-2cm的帶腋芽的節(jié)段，節(jié)段接種于小球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖節(jié)段接種于小球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上1-3周后，其基部開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起， 3-4周后節(jié)段上可以看見芽分生組織，再培養(yǎng)1-2個月，有0. 1-0. 3cm大小的小球莖長出，將 小球莖切下移入球莖增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，球莖基部的愈傷組織較多，但小球莖仍 增殖較快，生長發(fā)育良好；(3)小球莖壯苗培養(yǎng)在小球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基里誘導(dǎo)出的小球莖呈叢狀分布，每叢有4-6個球，將小球莖 再分成小叢，每叢有1-3個芽，然后將分成小叢的小球莖轉(zhuǎn)至壯苗培養(yǎng)基上，小球莖迅速膨 大，20-30天后可以長到0. 3-0. 5cm ；(4)生根培養(yǎng)取0. 3-0. 5cm的小球莖，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，8_15天后小球莖幼苗 的基部分化出白色的根原基，25-35天后可以長至2-4cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為 90-100% ；(5)煉苗與移栽在生根培養(yǎng)30-35天，根系長至2-3cm時，選擇根系發(fā)達(dá)、生長健壯的無菌幼苗，于室內(nèi)開瓶煉苗1-3天，然后將苗取出，洗凈其根部的瓊脂，栽于溫室的苗床中馴化25-40天， 即可移栽室外，并給予肥水管理。所述的小球蓮誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括MS+6-BA0. 1-5. 0mg/L+NAA0. 1-0. 5mg/L。所述的小球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L。所述的球莖增殖培養(yǎng)基包括MS+6-BA0. 5-5. Omg/L。所述的球莖增殖培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA3. Omg/L。所述的壯苗培養(yǎng)基包括MS+6-BA1. 0-3. Omg/L。所述的壯苗培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA2. Omg/L。所述的生根培養(yǎng)基包括MS+NAA0. 05-0. 2mg/L。所述的生根培養(yǎng)基優(yōu)選MS+NAAO. lmg/L。所述的培養(yǎng)基還包括蔗糖20_40g/L、瓊脂粉4_8g/L，培養(yǎng)基pH5. 5-6. 0，培養(yǎng)溫度 24-26°C，光照 1500-25001x。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過組織培養(yǎng)技術(shù)，極大提高了羅斯?；鹦腔ǖ姆敝乘?度和苗的整齊度，可以實現(xiàn)育苗的工廠化大批量生產(chǎn)。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。實施例1(1)無菌材料的獲得在春季挖取羅斯福火星花大球莖旁的小球莖，去除外面包裹的莖片后，用自來水 沖洗Ih后于超凈工作臺上，依次利用質(zhì)量濃度為70%的乙醇浸泡10s，體積濃度為0. 5% 的汞浸泡lOmin，再用無菌水沖洗4次，利用無菌濾紙吸干小球莖表面的水分后，將球莖切 成0. 5cm的帶腋芽的節(jié)段，再接種于包括MS+6-BA0. lmg/L+NAAO. lmg/L的小球莖誘導(dǎo)培養(yǎng) 基上；(2)芽的分化和增殖接種于小球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，1周后節(jié)段的基部開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起， 3周后可見芽分生組織，再培養(yǎng)1個月，有0. Icm的小球莖長出，將小球莖切下移入包括 MS+6-BA0. 5mg/L的球莖增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，球莖基部的愈傷組織較多，但小球莖 仍增殖較快，生長發(fā)育良好；(3)球莖壯苗培養(yǎng)在小球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基里誘導(dǎo)出的小球莖中，每叢有4個球，將小球莖再分成小叢， 每叢有1個芽，然后將分成小叢的小球莖轉(zhuǎn)至包括MS+6-BA1. Omg/L的壯苗培養(yǎng)基上，小球 莖迅速膨大，25天后可以長到0. 3cm ；(4)生根培養(yǎng)取0. 3cm的小球莖，轉(zhuǎn)接入包括MS+NAAO. 05mg/L的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，8天后 幼苗基部分化出白色的根原基，25天后可以長至2cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為90% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)30天，根系長至2cm時，選擇根系發(fā)達(dá)、生長健壯的無菌苗，于室內(nèi)開瓶 煉苗1天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室的苗床中馴化25天，即可移栽室外，并
5給予肥水管理。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖20g/L、瓊脂粉4g/L，pH= 5. 5，培養(yǎng)溫度24°C， 光照 15001x。實施例2(1)無菌材料的獲得在春季挖取羅斯福火星花大球莖旁的小球莖，去除外面包裹的莖片后，用自來水 沖洗2h后于超凈工作臺上，依次利用質(zhì)量濃度為75%的乙醇浸泡30s，體積濃度為1%。的汞 浸泡15min，再用無菌水沖洗5次，利用無菌濾紙吸干小球莖表面的水分后，將球莖切成Icm 的帶腋芽的節(jié)段，再接種于包括MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L的小球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖接種于小球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，2周后節(jié)段的基部開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起， 3周后可見芽分生組織，再培養(yǎng)1個月，有0. 3cm的小球莖長出，將小球莖切下移入包括 MS+6-BA3mg/L的球莖增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，球莖基部的愈傷組織較多，但小球莖仍 增殖較快，生長發(fā)育良好；(3)球莖壯苗培養(yǎng)在小球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基里誘導(dǎo)出的小球莖中，每叢有6個球，將小球莖再分成小叢， 每叢有3個芽，然后將分成小叢的小球莖轉(zhuǎn)至包括MS+6-BA2. Omg/L的壯苗培養(yǎng)基上，小球 莖迅速膨大，20天后可以長到0. 5cm ；(4)生根培養(yǎng)取0. 5cm的小球莖，轉(zhuǎn)接入包括MS+NAAO. lmg/L的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，10天 后幼苗基部分化出白色的根原基，30天后可以長至3cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為 100% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)30天，根系長至3cm時，選擇根系發(fā)達(dá)、生長健壯的無菌苗，于室內(nèi)開瓶 煉苗3天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室的苗床中馴化30天，即可移栽室外，并 給予肥水管理。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖30g/L、瓊脂粉6g/L，pH = 5. 8，培養(yǎng)溫度25°C， 光照 20001x。實施例3(1)無菌材料的獲得在春季挖取羅斯?；鹦腔ù笄蚯o旁的小球莖，去除外面包裹的莖片后，用自來水 沖洗3h后于超凈工作臺上，依次利用質(zhì)量濃度為75%的乙醇浸泡50s，體積濃度為2%。的汞 浸泡30min，再用無菌水沖洗6次，利用無菌濾紙吸干小球莖表面的水分后，將球莖切成2cm 的帶腋芽的節(jié)段，再接種于包括MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L的小球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖接種于小球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，3周后節(jié)段的基部開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起， 4周后可見芽分生組織，再培養(yǎng)2個月，有0. 2cm的小球莖長出，將小球莖切下移入包括 MS+6-BA3mg/L的球莖增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，球莖基部的愈傷組織較多，但小球莖仍 增殖較快，生長發(fā)育良好；
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(3)球莖壯苗培養(yǎng)在小球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基里誘導(dǎo)出的小球莖中，每叢有5個球，將小球莖再分成小叢， 每叢有2個芽，然后將分成小叢的小球莖轉(zhuǎn)至包括MS+6-BA3. Omg/L的壯苗培養(yǎng)基上，小球 莖迅速膨大，30天后可以長到0. 4cm ；(4)生根培養(yǎng)取0. 4cm的小球莖，轉(zhuǎn)接入包括MS+NAAO. 2mg/L的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，15天后 幼苗基部分化出白色的根原基，35天后可以長至4cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為96% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)35天，根系長至3cm時，選擇根系發(fā)達(dá)、生長健壯的無菌苗，于室內(nèi)開瓶 煉苗3天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室的苗床中馴化40天，即可移栽室外，并 給予肥水管理。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖40g/L、瓊脂粉8g/L，pH = 6. 0，培養(yǎng)溫度26°C， 光照 25001x。
權(quán)利要求
羅斯?；鹦腔ǖ慕M織培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得在春季挖取羅斯?；鹦腔ù笄蚯o旁的小球莖，除去外面包裹的莖片，用自來水沖洗1-3h，再于超凈工作臺上，依次利用質(zhì)量濃度為70-75％的乙醇浸泡10-50s，體積濃度為0.5-2‰的汞浸泡10-30min，再用無菌水沖洗4-6次，利用無菌濾紙吸干小球莖表面的水分后，將小球莖切成0.5-2cm的帶腋芽的節(jié)段，節(jié)段接種于小球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖節(jié)段接種于小球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上1-3周后，其基部開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，3-4周后節(jié)段上可以看見芽分生組織，再培養(yǎng)1-2個月，有0.1-0.3cm大小的小球莖長出，將小球莖切下移入球莖增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，球莖基部的愈傷組織較多，但小球莖仍增殖較快，生長發(fā)育良好；(3)小球莖壯苗培養(yǎng)在小球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基里誘導(dǎo)出的小球莖呈叢狀分布，每叢有4-6個球，將小球莖再分成小叢，每叢有1-3個芽，然后將分成小叢的小球莖轉(zhuǎn)至壯苗培養(yǎng)基上，小球莖迅速膨大，20-30天后可以長到0.3-0.5cm；(4)生根培養(yǎng)取0.3-0.5cm的小球莖，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，8-15天后小球莖幼苗的基部分化出白色的根原基，25-35天后可以長至2-4cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為90-100％；(5)煉苗與移栽在生根培養(yǎng)30-35天，根系長至2-3cm時，選擇根系發(fā)達(dá)、生長健壯的無菌幼苗，于室內(nèi)開瓶煉苗1-3天，然后將苗取出，洗凈其根部的瓊脂，栽于溫室的苗床中馴化25-40天，即可移栽室外，并給予肥水管理。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羅斯?；鹦腔ǖ慕M織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的小球莖 誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括 MS+6-BA0. 1-5. 0mg/L+NAA0. 1-0. 5mg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的羅斯?；鹦腔ǖ慕M織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的小球莖 誘導(dǎo)培養(yǎng)基優(yōu)選 MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羅斯?；鹦腔ǖ慕M織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的球莖增 殖培養(yǎng)基包括 MS+6-BA0. 5-5. Omg/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的羅斯?；鹦腔ǖ慕M織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的球莖增 殖培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA3. 0mg/Lο
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羅斯?；鹦腔ǖ慕M織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的壯苗培 養(yǎng)基包括 MS+6-BA1. 0-3. 0mg/Lο
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的羅斯?；鹦腔ǖ慕M織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的壯苗培 養(yǎng)基優(yōu)選 MS+6-BA2. 0mg/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羅斯?；鹦腔ǖ慕M織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的生根培 養(yǎng)基包括 MS+NAA0. 05-0. 2mg/L。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的羅斯?；鹦腔ǖ慕M織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的生根培 養(yǎng)基優(yōu)選 MS+NAA0. lmg/Lo
10.根據(jù)權(quán)利要求2或4或6或8所述的羅斯福火星花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于， 所述的培養(yǎng)基還包括蔗糖20-40g/L、瓊脂粉4-8g/L，培養(yǎng)基pH5. 5-6. 0,培養(yǎng)溫度24-26°C， 光照 1500-25001x。
全文摘要
本發(fā)明涉及羅斯?；鹦腔ǖ慕M織培養(yǎng)方法，包括無菌材料的獲得，芽的分化和增殖，小球莖壯苗培養(yǎng)，生根培養(yǎng)，煉苗與移栽等步驟。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明大大提高了羅斯福火星花的繁殖速度和苗的整齊度，可實現(xiàn)育苗的工廠化大批量生產(chǎn)。
文檔編號A01H4/00GK101869069SQ20091004997
公開日2010年10月27日 申請日期2009年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月24日
發(fā)明者沈勤, 陳建華, 黃建榮 申請人:上海上房園林植物研究所