專(zhuān)利名稱(chēng)：一種核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木的組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木的快速繁殖技術(shù)，特別是一種核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木的組織培養(yǎng)方法，它適用于對(duì)核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木進(jìn)行快速繁殖。
背景技術(shù)：
核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林主要隸屬于薔薇科和鼠李科等，生產(chǎn)中多采用無(wú)性繁殖方法繁殖苗木。核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林主要的繁殖方法包括嫁接繁殖、扦插繁殖、根蘗繁殖和組織培養(yǎng)等。其中嫁接繁殖技術(shù)繁殖迅速、成活率高、技術(shù)易于掌握和推廣、結(jié)果早，在核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林良種苗木繁育方面的應(yīng)用最為普遍。而在繁殖嫁接苗時(shí)，不同砧木對(duì)栽培品種生長(zhǎng)和結(jié)果的影響較大，選擇適宜的砧木品種，可以有效地提高栽培品種的產(chǎn)量、質(zhì)量甚至抗性。
我國(guó)目前在核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林苗木生產(chǎn)中普遍使用的砧木為原產(chǎn)我國(guó)的山桃
(Pmnus davidiana)、 毛杉^(Rpersica)、 山杏(Ameniaca sibirica)、 山櫻杉^(Rserrulata)、毛櫻桃(P.tomentosa)等，這些砧木品種在生產(chǎn)應(yīng)用過(guò)程中不同程度的表現(xiàn)出抗性差，適生范圍相對(duì)較窄，與栽培品種親和力差，出現(xiàn)"大腳"現(xiàn)象或"小腳"現(xiàn)象、壽命短等缺陷。特別是這些砧木品種對(duì)流膠病和根癌病的抗性較弱，在我國(guó)，核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林特別是桃、李、杏的主要產(chǎn)區(qū)流膠病和根癌病發(fā)生普遍，在一些品種上發(fā)生十分嚴(yán)重，使果品產(chǎn)量低，品質(zhì)差，樹(shù)體逐步衰弱，甚至死亡。這嚴(yán)重制約著核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林產(chǎn)業(yè)健康、持續(xù)穩(wěn)定的發(fā)展。
世界各國(guó)對(duì)優(yōu)良核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木品種的選育都非常重視,尤其是美國(guó)等其它國(guó)家，優(yōu)良核果類(lèi)砧木品種培育的系統(tǒng)研究工作已經(jīng)開(kāi)展了50 80年，他們已經(jīng)培育出了大量?jī)?yōu)良砧木品種。 一些砧木品種如VIKEN、 NAPLEB、CRUT、 MAPARD等具有顯著的抗流膠病和根癌病特性，并且對(duì)栽培品種的生長(zhǎng)結(jié)果具有良好的促進(jìn)作用。
但是，由于繁殖材料的限制，目前這些優(yōu)良的核果類(lèi)砧木品種在我國(guó)還不能進(jìn)行大面積繁殖，嚴(yán)重影響了核果類(lèi)優(yōu)良砧木品種的繁殖，也嚴(yán)重阻礙了李、杏、杏李、杉〖、櫻桃等核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林的健康發(fā)展。因此，研究?jī)?yōu)良核果類(lèi)砧木的組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)，快速繁殖優(yōu)良核果類(lèi)砧木，對(duì)提高我國(guó)核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林品種的質(zhì)量和產(chǎn)量十分重要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木的快速繁殖，而研究出一種核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木的組織培養(yǎng)方法。該方法是采取核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木帶腋芽的莖段，通過(guò)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)出大量(數(shù)百倍于原材料的)叢生芽，然后通過(guò)生根培養(yǎng)基將這些叢生芽培養(yǎng)成完整植株。從而在大約半年時(shí)間內(nèi)生產(chǎn)出數(shù)百倍于原材料數(shù)量、生長(zhǎng)一致、完全保持原植株優(yōu)良性狀的核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木苗木，以滿(mǎn)足巿場(chǎng)需求。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的 一種核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木的組織培養(yǎng)方法材料是取核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木品種，其中，核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木的組織培養(yǎng)方法包括以下步驟第一步、采核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木新品種VIKEN、 NAPLEB、 CRUT、MAPARD帶腋芽的莖段作為外植體，用清水洗凈，放在超凈工作臺(tái)上，先用75%的酒精消毒6 8秒，無(wú)菌水沖洗三次，再用0.1%升汞消毒6 8分鐘，無(wú)菌水沖洗三次；第二步、將滅菌后的外植體剪成0.5 1.5cm的莖段，植入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為室溫25 28°C,光照強(qiáng)度2000 50001ux,光照時(shí)間每天12小時(shí)，20天后植入增殖培養(yǎng)基中，進(jìn)行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同上，培養(yǎng)時(shí)間為30天；第三步、生根培養(yǎng)，切取約2 3cm高的核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木健壯苗，植入生根培養(yǎng)基，進(jìn)行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同上，
生根時(shí)間為40天；第四步、待核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木苗生根長(zhǎng)至5 8cm時(shí)，洗凈 根部附著的培養(yǎng)基，移至無(wú)污染的紅壤土或/和黃壤土中，用塑料薄膜覆蓋保 濕，保持75% 85%空氣濕度，45天后移至大田，遮蔭一周即可。
本發(fā)明可以是這樣實(shí)現(xiàn)的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS + 2.0mg 6-BA+0.5mgNAA，再加入瓊脂6.0g/L ,蔗糖30g/L, PH值為5.8，裝瓶后高 壓滅菌15 20分鐘。
本發(fā)明還可以是這樣實(shí)現(xiàn)的增殖培養(yǎng)基為MS+ (1.0-2.5 mg) 6-BA+ (0.45 0.80mg) NAA，再加入瓊脂6.0g/L ，蔗糖30g/L， PH值為5.8，裝瓶 后高壓滅菌15 20分鐘。
本發(fā)明還可以是這樣實(shí)現(xiàn)的生根培養(yǎng)基為MS+(0.8~1.2)mgIBA，再 加入瓊脂6.0g/L,蔗糖30g/L， PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘。
本發(fā)明的積極效果是
1、 通過(guò)本發(fā)明的實(shí)施，可以100%保持原植株基因型及其所有的優(yōu)良特性。
2、 .本發(fā)明可在短時(shí)間內(nèi)(6 7個(gè)月)實(shí)現(xiàn)工廠化育苗，大批量生產(chǎn)整 齊一致的核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木苗木，大幅度提高繁殖系數(shù)。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。 實(shí)施例1
一種核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木的組織培養(yǎng)方法，材料是取核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木品 種VIKEN帶腋芽的莖段，第一步、采核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木帶腋芽的莖段作為外 植體，用清水洗凈，放在超凈工作臺(tái)上，先用75%的酒精消毒6 8秒，無(wú)菌 水沖洗三次，再用0.1%升汞消毒6 8分鐘，無(wú)菌水沖洗三次；第二步、將滅菌后的外植體剪成lcm長(zhǎng)的莖段，植入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，芽誘導(dǎo)培 養(yǎng)基為MS + 2.0mg6-BA+0.5mgNAA，再加入瓊脂6.0g/L,蔗糖30g/L， PH 值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘；培養(yǎng)條件為室溫25 28°C,光照強(qiáng) 度2000 50001ux,光照時(shí)間每天12小時(shí)，20天后植入增殖培養(yǎng)基中，進(jìn)行 增殖培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)基為MS+1.0 mg 6-BA+0.45mg NAA，再加入瓊脂6.0g/L : 蔗糖30g/L， PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘；培養(yǎng)條件同上，培 養(yǎng)時(shí)間為30天；第三步、生根培養(yǎng)，切取約2~3cm高的核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木 健壯苗，植入生根培養(yǎng)基，進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為MS+0.8mglBA， 再加入瓊脂6.0g/L,蔗糖30g/L, PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘， 培養(yǎng)條件同上，生根時(shí)間為40天；第四步、待核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木苗生根長(zhǎng)至 5~8cm時(shí)，洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移至無(wú)污染的紅黃壤土中，用塑料薄膜 覆蓋保濕，保持75% 85%空氣濕度，45天后移至大田，遮蔭一周即可。 實(shí)施例2
一種核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木的組織培養(yǎng)方法，材料是核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木品種 NAPLEB帶腋芽的莖段，第一步、采核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木帶腋芽的莖段作為外 植體，用清水洗凈，放在超凈工作臺(tái)上，先用75%的酒精消毒6 8秒，無(wú)菌 水沖洗三次，再用0.1%升汞消毒6 8分鐘，無(wú)菌水沖洗三次；第二步、將滅 菌后的外植體剪成0.8cm長(zhǎng)的莖段，植入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，芽誘導(dǎo) 培養(yǎng)基為':MS+2.0mg6-BA+0.5mgNAA，再加入瓊脂6.0g/L,蔗糖30g/L， PH 值為5.S，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘，培養(yǎng)條件為室溫25 28°C,光照強(qiáng) 度2000 50001ux ，光照時(shí)間每天12小時(shí)，20天后植入增殖培養(yǎng)基中，進(jìn)行 增殖培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)基為MS + 2.5 mg 6-BA+0.80mg NAA,再加入瓊脂6.0g/L , 蔗糖30g/L， PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘，培養(yǎng)條件同上，培 養(yǎng)時(shí)間為30天；第三步、生根培養(yǎng)，切取約2 3cm高的核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木健壯苗，植入生根培養(yǎng)基，進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為MS+1.2mgIBA， 再加入瓊脂6.0g/L,蔗糖30g/L， PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘， 培養(yǎng)條件同上，生根時(shí)間為40天；第四步、待核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木苗生根長(zhǎng)至 5 8cm時(shí)，洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移至無(wú)污染的紅壤土中，用塑料薄膜覆 蓋保濕，保持75% 85%空氣濕度，45天后移至大田，遮蔭一周即可。 實(shí)施例3
一種核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木的組織培養(yǎng)方法，材料是取核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木品 種CRUT帶腋芽的莖段，第一步、采核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木帶腋芽的莖段作為外 植體，用清水洗凈，放在超凈工作臺(tái)上，先用75%的酒精消毒6 8秒，無(wú)菌 水沖洗三次，再用0.1%升汞消毒6 8分鐘，無(wú)菌水沖洗三次；第二步、將滅 菌后的外植體剪成1.5cm長(zhǎng)的莖段，植入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，芽誘導(dǎo) 培養(yǎng)基為MS + 2.0mg6-BA+0.5mgNAA，再加入瓊脂6.0g/L，蔗糖30g/L， PH 值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘；培養(yǎng)條件為室溫25 28°C，光照 強(qiáng)度2000 50001ux,光照時(shí)間每天12小時(shí)，20天后植入增殖培養(yǎng)基中，進(jìn) 行增殖培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)基為MS + 2.0 mg 6-BA+0.5 mg NAA，再加入瓊脂 6.0g/L，蔗糖30g/L, PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘，培養(yǎng)條件同 上，培養(yǎng)時(shí)間為30天；第三步、生根培養(yǎng)，切取約2 3cm高的核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林 砧木健壯苗，植入生根培養(yǎng)基，進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為MS+1.0 mg IBA， 再加入瓊脂6.0g/L，蔗糖30g/L， PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘， 培養(yǎng)條件同上，生根時(shí)間為40天；第四步、待核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木苗生根長(zhǎng)至 5~8cm時(shí)，洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移至無(wú)污染的紅黃壤土中，用塑料薄膜 覆蓋保濕，保持75% 85%空氣濕度，45天后移至大田，遮蔭一周即可。
實(shí)施例4
一種核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木的組織培養(yǎng)方法，材料是取核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木品種MAPARD帶腋芽的莖段，第一步、采核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木帶腋芽的莖段作為 外植體，用清水洗凈，放在超凈工作臺(tái)上，先用75%的酒精消毒6 8秒，無(wú) 菌水沖洗三次，再用0.1%升汞消毒6 8分鐘，無(wú)菌水沖洗三次；第二步、將 滅菌后的外植體剪成1.2cm長(zhǎng)的莖段，植入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，芽誘 導(dǎo)培養(yǎng)基為MS + 2.0mg6-BA+0.5mgNAA，再加入瓊脂6.0g/L ,蔗糖30g/L， PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘，培養(yǎng)條件為室溫25 28°C,光 照強(qiáng)度2000 50001ux,光照時(shí)間每天12小時(shí)，20天后植入增殖培養(yǎng)基中， 進(jìn)行增殖培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)基為MS+1.5mg6-BA+0.5mgNAA，再加入瓊脂 6.0g/L,蔗糖30g/L， PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘，培養(yǎng)條件同 上，培養(yǎng)時(shí)間為30天；第三步、生根培養(yǎng)，切取約2 3cm高的核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林 砧木健壯苗，植入生根培養(yǎng)基，進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為MS+0.9 mg IBA， 再加入瓊脂6.0g/L,蔗糖30g/L, PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘， 培養(yǎng)條件同上，生根時(shí)間為40天；第四步、待核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木苗生根長(zhǎng)至 5~8cm時(shí)，洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移至無(wú)污染的紅黃壤土中，用塑料薄膜 覆蓋保濕，保持75% 85%空氣濕度，45天后移至大田，遮蔭一周即可。
權(quán)利要求
1、一種核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木的組織培養(yǎng)方法，采核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木新品種VIKEN、NAPLEB、CRUT、MAPARD，其特征在于核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木的組織培養(yǎng)方法包括以下步驟第一步、采核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木新品種帶腋芽的莖段作為外植體，用清水洗凈，放在超凈工作臺(tái)上，先用75％的酒精消毒6～8秒，無(wú)菌水沖洗三次，再用0.1％升汞消毒6～8分鐘，無(wú)菌水沖洗三次；第二步、將滅菌后的外植體剪成0.5～1.5cm的莖段，植入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為室溫25℃～28℃，光照強(qiáng)度2000～5000lux，光照時(shí)間每天12小時(shí)，20天后植入增殖培養(yǎng)基中，進(jìn)行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同上，培養(yǎng)時(shí)間為30天；第三步、生根培養(yǎng)，切取約2～3cm高的核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木健壯苗，植入生根培養(yǎng)基，進(jìn)行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同上，生根時(shí)間為40天；第四步、待核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木苗生根長(zhǎng)至5～8cm時(shí)，洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移至無(wú)污染的紅壤土或/和黃壤土中，用塑料薄膜覆蓋保濕，保持75％～85％空氣濕度，45天后移至大田，遮蔭一周即可。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木的組織培養(yǎng)方法，其特征在于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+2.0mg 6-BA+0.5mgNAA，再加入瓊脂6.0g/L ，蔗糖30g/L，PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木的組織培養(yǎng)方法，其特征在于增殖培養(yǎng)基為MS+ (1.0^2.5 mg) 6-BA+ (0.45~0.80mg) NAA，再加入瓊脂6.0g/L,蔗糖30g/L， PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木的組織培養(yǎng)方法，其特征在于生根培養(yǎng)基為MS+(0.8 L2)mglBA，再加入瓊脂6.0g/L,蔗糖30g/L， PH值為5.8，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘。
全文摘要
本發(fā)明提供一種核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木的組織培養(yǎng)方法，該方法是采取核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木新品種VIKEN、NAPLEB、CRUT、MAPARD帶腋芽的莖段作為外植體，經(jīng)滅菌，無(wú)菌水清洗，再將滅菌后的外植體剪成0.5～1.5cm的莖段，通過(guò)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)出大量叢生芽，然后通過(guò)生根培養(yǎng)基將這些叢生芽培養(yǎng)成完整植株。從而在約半年時(shí)間內(nèi)生產(chǎn)出數(shù)百倍于原材料數(shù)量、生長(zhǎng)一致、完全保持原植株優(yōu)良性狀的核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木苗木，以滿(mǎn)足市場(chǎng)需求。通過(guò)本發(fā)明的實(shí)施，可以100％保持原植株基因型及其所有的優(yōu)良特性。本發(fā)明可在6～7個(gè)月內(nèi)實(shí)現(xiàn)工廠化育苗，大批量生產(chǎn)整齊一致的核果類(lèi)經(jīng)濟(jì)林砧木苗木，大幅度提高繁殖系數(shù)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101558741SQ20091006510
公開(kāi)日2009年10月21日 申請(qǐng)日期2009年6月3日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月3日
發(fā)明者烏云塔娜, 傅建敏, 朱景樂(lè), 李福海, 李芳東, 杜蘭英, 杜紅巖, 楊紹彬, 段經(jīng)華, 許殿鋒, 鄧建軍, 琳 黃 申請(qǐng)人:國(guó)家林業(yè)局泡桐研究開(kāi)發(fā)中心