專利名稱：：采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于微生物技術及其設備領域，更具體涉及一種采用呼吸塑料袋制作大袋蘑恭栽培種。
背景技術：
：進行蘑菇(這里通常指雙孢蘑菇的白色種、奶色種以及棕色種，拉丁學名jgflr/c"s6&;;w附Langer)的人工栽培時，首先要制作好栽培種，才能保證將來栽培有好的收獲。我國是雙孢蘑菇生產大國，僅福建省雙孢蘑菇年產量就占世界的10%，全國原種需要量為200~260萬瓶，栽培種為1.0~1.5億瓶，產值在23億元。福建省的雙孢蘑菇選育種技術已達國際先進水平，育成雜交新菌株AS2796(閩4號)及其選育方法已獲專利公開(CN1125034)，在全國廣泛使用。目前蘑菇菌種制作工藝和設備卻大都停留在手工作坊狀態(tài)，生產工藝較落后，生產效率偏低，不少工序仍依賴手工(菌種菌齡上下不一，生長緩慢)，遠不能滿足栽培種的生產需求，而傳統(tǒng)的菌種采用玻璃瓶，其缺陷顯著易碎、自身重量大、運輸不便、使用也不方便等制約其發(fā)展前景。國內在使用塑料袋方面，仍未擺脫瓶頸的約束，而且沒有解決好塑料強度與呼吸性兩大難題，雖然降低了單位包裝成本，但成品率卻下降，同樣無法大規(guī)模應用。以上這些因素使選育出的優(yōu)質菌株無法更好的推廣，而各地分散生產的栽培種質量無保證，每年都有大量不合格菌種投入生產，減產幅度為10~15%，而且造成我國成為蘑菇出口大國的同時，而蘑燕菌種的出口幾乎為零。此外，常規(guī)的高壓滅菌鍋不能實現(xiàn)在培養(yǎng)基高壓滅菌后保證無菌條件下快速冷卻，從而不能保證菌種制作的質量。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的是提供一種采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種技術，包括制作方法，制作過程中用到的設備和該設備的使用方法，采用呼吸塑料袋并結合本發(fā)明特殊的制作步驟和設備，可大量迅速生產蘑菇大包裝栽培種，同時可降低制造成本，使操作達到自動化并節(jié)省人力的可靠的蘑菇菌種制作方法；在制作過程中實現(xiàn)高壓滅菌、無菌冷卻一體化，保證了菌種制作的質量，又節(jié)約了時間成本，操作簡便，易于機械化生產，節(jié)省勞動力；成品率高；具有顯著的經濟效率。本發(fā)明的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種的方法采用呼吸塑料袋作為正式培養(yǎng)的容器，經過母種的活化培養(yǎng)步驟、制備原種的預培養(yǎng)步驟以及將原種接種于大袋栽培種的正式培養(yǎng)步驟制作出大袋蘑菇栽培種。所述制作步驟為(1)母種的活化培養(yǎng)步驟由保存菌株進行活化培養(yǎng)獲得母種；(2)制備原種的預培養(yǎng)步驟將母種進行預培養(yǎng)獲得原種；(3)正式培養(yǎng)步驟將呼吸塑料袋裝車推入高壓滅菌鍋中，對小麥培養(yǎng)基進行高壓滅菌，高壓滅菌后，小麥培養(yǎng)基冷卻至常溫，然后將步驟(2)預培養(yǎng)獲得的原種接種于所述呼吸塑料袋中小麥培養(yǎng)基進行正式培養(yǎng)，培養(yǎng)過程培養(yǎng)室溫度保持2025'C;培養(yǎng)1316天待呼吸塑料袋長滿菌絲，正式培養(yǎng)完畢將裝有菌種的呼吸塑料袋移入3士rc冷庫保藏，大袋蘑菇栽培種制作完成。本發(fā)明的顯著優(yōu)點為(1)使用呼吸塑料袋生產大袋蘑菇栽培種，并在接種過程中將原種和小麥培養(yǎng)基充分混合均勻，縮短了每個菌絲體之間的生長距離，并縮短了培養(yǎng)完成的時間，只需要1316天時間，一般只有傳統(tǒng)瓶裝菌種培養(yǎng)時間的三分之一到一半。蘑菇栽培種的生產多在夏秋溫度較高的期間進行，需要空調進行制冷調節(jié)，縮短培養(yǎng)時間意味著可以節(jié)約大量能源。(2)使用呼吸塑料袋生產大袋蘑菇栽培種，由于原種和小麥培養(yǎng)基混合均勻，袋內各處菌絲體的菌齡基本一致，都不超過16天，而傳統(tǒng)瓶裝菌種上下菌齡相差3035天，造成菌種剛走到底，瓶口附近菌絲體己經接近老化。(3)由于大袋蘑菇栽培種的制作要比傳統(tǒng)瓶裝栽培種要求更高的潔凈度環(huán)境下，按本發(fā)明要求進行制作，大袋蘑菇栽培種比傳統(tǒng)瓶裝栽培種染菌率較低，提高成品率46%。(4)由于大袋蘑菇栽培種菌齡短，質地疏松，又是塑料袋包裝，使用方便，開袋即用，使菌絲體受到最小的損傷，而傳統(tǒng)的瓶裝菌種菌齡長，質地較硬，叉是開口相對較小的瓶口，使用過程需要用器械摳扒，不僅費力費時，不利于蘑菇規(guī)?；耘?，而且菌絲體受到較大損傷，在播種到栽培料理需要更長的恢復時間，一定程度上影響產量。(5)由于大袋蘑菇栽培種使用呼吸塑料包裝，無論在生產、儲存和運輸過程，破損度很低，不足0.5%，而傳統(tǒng)的瓶裝栽培種使用易碎的玻璃瓶，每個過程度都存在破碎的隱患，玻璃瓶年損耗率在510%，也嚴重制約我國蘑菇栽培種的出口。(6)由于大袋蘑菇栽培種的包裝材料——塑料為一次性容器使用(當然可作為塑料米原料重新回收利用)，菌種采購后僅需支付運費作為菌種款的額外費用，而傳統(tǒng)的瓶裝栽培種的玻璃須反復使用，體積大，使用過程不僅要支付運費(由于重量幾乎是呼吸塑料袋菌種的2倍，需要多支付l倍的運費)，還要支付摳種、清洗和倉儲等費用。(7)大袋蘑菇栽培種由于生產周期短，節(jié)約了大量電能；由于操作簡便，易于機械化生產，節(jié)省了勞動力；成品率的提高等等因素使得每袋成本控制在1517元左右(而生產同樣重量的傳統(tǒng)瓶裝栽培種成本要超過25元)，而且運輸成本降低一半>采用該技術后可使我國蘑菇栽培種參與國際競爭(售價只有國際的1/4)(8)本發(fā)明采用的高壓滅菌鍋，在普通的臥式高壓滅菌鍋的鍋體上設置抽真空系統(tǒng)和空氣凈化系統(tǒng)，實現(xiàn)了在小麥培養(yǎng)基高壓滅菌處理后，在無菌的環(huán)境下進行快速冷卻，而且將滅菌與冷卻步驟整體化，操作方便快捷，節(jié)約時間，有效的保證了菌種的質量。、圖1是母種的活化培養(yǎng)步驟流程圖，其中IO表示從液氮保藏罐取出的安瓿管，裝有保存菌株；ll表示液氮保藏罐；12表示裝有PDA培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿；Sl表示母種在PDA培養(yǎng)基中的活化培養(yǎng)；14表示在培養(yǎng)皿中繼續(xù)進行母種的活化培養(yǎng)狀態(tài)；16表示母種在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)完畢；18表示活化培養(yǎng)的母種切片。圖2是原種的預培養(yǎng)步驟流程圖，其中18表示活化培養(yǎng)的母種切片，20為裝有原種培養(yǎng)基的容器，21為高壓滅菌鍋，S2是對裝入容器20的原種培養(yǎng)基進行滅菌的步驟，S3是對原種培養(yǎng)基進行滅菌后，使其冷卻至常溫的步驟，S4是在原種培養(yǎng)基中接種預先制得的母種的步驟，步驟S5是使接種了母種的原種培養(yǎng)基進行預培養(yǎng)的步驟。圖3表示正式培養(yǎng)步驟流程圖，其中30為裝有小麥培養(yǎng)基的呼吸塑料袋，32為呼吸塑料袋上的呼吸膜，22為裝有預培養(yǎng)完成的原種的容器，步驟S6是對裝入呼吸塑料袋30的小麥培養(yǎng)基進行裝入殺菌車滅菌的步驟，步驟S7是使滅菌后的呼吸塑料袋30冷卻至室溫的步驟，步驟S8為冷卻后，將預培養(yǎng)步驟制得的原種接種到呼吸塑料袋30的小麥培養(yǎng)基中的步驟，步驟S9為接種原種的小麥培養(yǎng)基進行正式培養(yǎng)的步驟，S10為正式培養(yǎng)結束的大袋栽培種裝箱后移入冷庫保藏步驟，Sll為制作結束。圖4為旋轉蒸煮鍋構造示意圖，其中，34為旋轉蒸煮鍋鍋體，36為進料口，38為溫度計，40為壓力表，42為進汽閥門，44為出汽噴頭，46為出料口。圖5為本發(fā)明的高壓滅菌鍋構造示意圖，其中，48為高壓滅菌鍋體，49為產蒸汽鍋爐，50為空氣過濾器，51為空壓機處閥門，52為空壓機，54為蒸汽進氣閥門，56為空氣過濾器處閥門，60為排氣孔處閥門，62為排氣孔，64為鍋體的壓力表，66為鍋體上的溫度計，68為真空泵，69為安全閥，70為真空泵處閥門，72為裝入呼吸袋的殺菌車。圖6是本發(fā)明的制作過程流程圖。具體實施例方式所述制作步驟為(1)母種的活化培養(yǎng)步驟菌株保存于液氮保藏罐中的安瓿管中，將安瓿管中的菌株接種于PDA培養(yǎng)基上進行培養(yǎng);PDA培養(yǎng)基為常用的真菌培養(yǎng)基(200g馬鈴薯切片加入1000mL水煮沸20分鐘，過濾后加入20g葡萄糖和1518g瓊脂加熱溶解，再次過濾最終體積為1000mL，后經12rC/0.lMPa進行20分鐘高壓滅菌而成)；培養(yǎng)溫度為2224";當菌絲長滿培養(yǎng)基時，培養(yǎng)完畢，將活化培養(yǎng)完的母種切成1215mm的小塊切片，備制備原種的預培養(yǎng)步驟使用。(2)制備原種的預培養(yǎng)步驟所述制備原種的預培養(yǎng)步驟中采用的原種培養(yǎng)基為，均按照質量份數(shù)21份的新鮮棉籽殼、8份牛糞、0.03份石膏、0.07份石灰加70份水發(fā)酵14~16天后，曬干后，3436份發(fā)酵棉籽殼加入12份蛭石、12份膨脹珍珠巖、1份CAC03和1份石灰加60份水混合均勻即成為原種培養(yǎng)基；將裝有原種培養(yǎng)基的容器在高壓滅菌鍋內進行高壓滅菌.在126'C/0.15MPa進行80120分鐘的滅菌處理，滅菌后，使其冷卻至常溫，將母種切片投入預培養(yǎng)容器進行接種；預培養(yǎng)溫度為2224°C，預培養(yǎng)1822天；所述預培養(yǎng)容器采用1000mL的帶過濾呼吸蓋的塑料廣口瓶，并按照1000mL的預培養(yǎng)容器中裝入900mL的原種培養(yǎng)基，每個預培養(yǎng)容器中接種13個切片。(3)正式培養(yǎng)步驟培養(yǎng)'a)所述小麥培養(yǎng)基調質的整個過程在旋轉蒸煮鍋中進行，往旋轉蒸煮鍋加入占旋轉蒸煮鍋容積40%的小麥培養(yǎng)基，其中按照質量份小麥8291份，膨脹珍珠巖510份，輕質碳酸鈣24份和石膏24份；關閉進料口，讓旋轉蒸煮鍋旋轉五分鐘，讓各種材料混合均勻后，再通過進料口注入占旋轉蒸煮鍋容積20%的水；最后再關閉進料口，打開進汽閥門，通入高壓蒸汽，對旋轉蒸煮鍋內小麥培養(yǎng)基進行蒸煮，蒸煮溫度IIO°C，壓力0.08MPa,維持1520分鐘，蒸煮結束的小麥培養(yǎng)基倒出進行攤晾冷卻，冷卻至室溫；b)小麥培養(yǎng)基的裝袋、滅菌將小麥培養(yǎng)基裝入呼吸塑料袋，所述呼吸塑料袋長寬厚規(guī)格為630mmX360mmX80um,帶有2個35mmX35mm呼吸膜，裝入6Kg的小麥培養(yǎng)基或495X320mmX60um，帶有1個35mmX35mm呼吸膜，裝入3Kg的小麥培養(yǎng)基；并將呼吸塑料袋裝入殺菌車采用高壓滅菌鍋在126tV0.15MPa下進行滅菌處理，高壓滅菌時將為120150分鐘；并在高壓滅菌鍋中冷卻至室溫；c)小麥培養(yǎng)基接種在潔凈度為10000級的緩沖間、潔凈度為IOOO級的接種室里，放入潔凈度為IOO級超凈工作臺進行接種操作；接種量為每個呼吸塑料袋(6Kg)接入180230mL的原種或者每個呼吸塑料袋(3Kg)接入90120mL的原種，接種后，用封口機將呼吸塑料袋封口，并進行翻袋混合，翻袋次數(shù)1015次；在培養(yǎng)溫度為2023'C下培養(yǎng)1316天后，待呼吸塑料袋長滿菌絲正式培養(yǎng)完畢，將裝有菌種的呼吸塑料袋移入3土rc冷庫保藏，大袋蘑燕栽培種制作完成。以上小麥培養(yǎng)基的滅菌采用的高壓滅菌鍋，是在常規(guī)的臥式高壓滅菌鍋上進行改進，即在臥式高壓滅菌鍋的鍋體設置抽真空系統(tǒng)和空氣凈化系統(tǒng)所述鍋體上設置的抽真空系統(tǒng)包括真空泵，所述真空泵通過閥門由三通管道一端連接鍋體，該三通管道的另一端設置一閥門作為排氣孔；所述空氣凈化系統(tǒng)包括空壓機，所述空壓機通過一閥門由管道連接一空氣過濾器；所述空氣過濾器通過一閥門由管道連接鍋體，該閥門與鍋體間的管道上設置有一安全閥。結合附圖5說明高壓滅菌鍋的使用方法為將小麥培養(yǎng)基在所述高壓滅菌鍋體48中按照常規(guī)高壓滅菌操作進行滅菌處理，滅菌結束后，關閉蒸汽進氣閥門54，停止通入蒸汽，立即啟動真空泵68，同時打開真空泵處閥門70，通過真空泵68直接排出濕熱空氣，當鍋體的壓力表64上的示數(shù)降到0.05MPa，立即關閉真空泵68和真空泵處閥門70，同時啟動空壓機52，打開空壓機處閥門51和空氣過濾器處閥門56，通過空氣過濾器50向高壓鍋鍋體48內吹入潔凈空氣，防止雜菌進入鍋體，進而進入呼吸塑料袋中，再緩緩打開排氣孔處閥門60，通過排氣孔62直接排出濕熱空氣，保持鍋體48的壓力表64為正壓；冷卻至室溫，通過鍋體48上的溫度計66觀察溫度。優(yōu)異效果對比數(shù)據(jù)表l中，對傳統(tǒng)使用的瓶裝栽培種和用上述方法制作的大袋蘑菇栽培種進行比較<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>*注每個呼吸塑料袋可裝麥粒菌種6Kg或3Kg,相當于750mL玻璃瓶麥粒菌種15瓶或8瓶表l中以容量為6Kg呼吸塑料袋為例，對瓶裝生產蘑菇栽培種和使用呼吸塑料袋制作大袋蘑薛栽培種，具備較大差異的部分進行了總結。以下結合實施例并參考附圖，充分說明本發(fā)明，但是本發(fā)明不僅僅限制于此。實施例在蘑菇的大袋栽培種制作中，分為三步進行，首先是由保存菌株進行活化培養(yǎng)獲得母種，稱為活化培養(yǎng)步驟S1，其次將母種進行擴繁培養(yǎng)獲得原種，稱之為預培養(yǎng)步驟S5，最后將預培養(yǎng)獲得的原種接入裝有小麥培養(yǎng)基(濕重6Kg)的呼吸塑料袋30中，在所述小麥培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)栽培種，稱為正式培養(yǎng)步驟S9，上述呼吸塑料袋30裝入小麥培養(yǎng)基后，均要在高壓滅菌鍋中作高壓滅菌，然后使小麥培養(yǎng)基和呼吸塑料袋30冷卻至室溫，再把預培養(yǎng)后獲得原種接入至上述塑料參考附圖對本實施例進行詳細說明。本發(fā)明的蘑菇大袋栽培種制作方法的特征是，包括母種的活化培養(yǎng)步驟，制備原種的預培養(yǎng)步驟，以及將原種接入大袋栽培種的正式培養(yǎng)步驟。以下，依次對母種的活化培養(yǎng)步驟、制備原種的預培養(yǎng)步驟和接種大袋栽培種的正式培養(yǎng)步驟進行說明。母種的活化培養(yǎng)步驟原種的預培養(yǎng)步驟大袋栽培種的正式培養(yǎng)步驟圖1-3是用于蘑菇菌種的母種活化培養(yǎng)步驟、原種的預培養(yǎng)步驟和大袋栽培種的正式培養(yǎng)步驟的說明圖。圖1表示母種的活化培養(yǎng)步驟。該圖中，IO表示從液氮保藏罐取出的安瓿管，裝有保存菌株。首先將安瓿10中的菌株接種于PDA培養(yǎng)基12。PDA培養(yǎng)基12的為常用的真菌培養(yǎng)基(200g馬鈴薯切片加入1000mL水煮沸20分鐘，過濾后加入20g葡萄糖和1518g瓊脂加熱溶解，再次過濾最終體積為1000mL，后經12rC/0.1MPa進行20分鐘高壓滅菌而成)。步驟S1為PDA培養(yǎng)基12中的母種的活化培養(yǎng)步驟。本實施狀態(tài)中制作的是雙孢蘑燕菌種。步驟Sl的活化培養(yǎng)步驟中的培養(yǎng)溫度為2224'C。14表示在PDA培養(yǎng)基12種繼續(xù)進行母種的活化培養(yǎng)狀態(tài)。繼續(xù)進行培養(yǎng)后，蘑菇菌絲長滿PDA培養(yǎng)基。16表示在PDA培養(yǎng)基12上培養(yǎng)完畢。切片18表示活化培養(yǎng)的母種切片狀態(tài)。預培養(yǎng)時使用切成1215mm的小塊的多個切片18。圖2表示原種的預培養(yǎng)步驟。預培養(yǎng)是指在較大的容器內制備原種的預培養(yǎng)步驟。20為培養(yǎng)原種的容器。本實施狀態(tài)中，裝有原種培養(yǎng)基的容器20是1000mL的帶過濾呼吸蓋的塑料廣口瓶。采用的原種培養(yǎng)基為，均按照質量份數(shù)21份的新鮮棉籽殼、8份牛糞、0.03份石膏、0.07份石灰加70份水發(fā)酵14~16天后，曬干后，3436份發(fā)酵棉籽殼加入l2份蛭石、12份膨脹珍珠巖、1份CAC03和1份石灰加60份水混合均勻即成為原種培養(yǎng)基。步驟S2是對裝入容器20的原種培養(yǎng)基進行滅菌的步驟。本實施狀態(tài)中，高壓滅菌鍋用作高壓滅菌，在126。C/0.15MPa進行80120分鐘的滅菌處理。步驟S3是對原種培養(yǎng)基進行滅菌后，使其冷卻至常溫的步驟。步驟S4是在原種培養(yǎng)基中接種預先用PDA培養(yǎng)基12制得的母種的步驟。將前述培養(yǎng)后的PDA培養(yǎng)基12的13個母種切片18投入容器20種進行接種。步驟S5是使接種了母種的原種培養(yǎng)基進行培養(yǎng)的步驟。本實施狀態(tài)中培養(yǎng)溫度為2224'C，培養(yǎng)1822天，該步驟稱為預培養(yǎng)步驟。誦忖預培養(yǎng)完成原種的預培養(yǎng)后，講入TF式培養(yǎng)n圖3表示正式培養(yǎng)步驟。正式培養(yǎng)中，使用裝有小麥培養(yǎng)基的呼吸塑料袋30，將預培養(yǎng)中獲得的原種接種于小麥培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。呼吸塑料袋30在本實施狀態(tài)采用600mmX300mmX80um(長寬厚)，可裝入6Kg的小麥培養(yǎng)基，帶有2個35mmX35mm呼吸膜32或495X320mmX60um(長寬厚)，可裝入3Kg的小麥培養(yǎng)基，帶有1個35mmX35mm呼吸膜32。正式培養(yǎng)過程中，首先，要對裝入呼吸塑料袋30的小麥培養(yǎng)基進行調制，圖4表示旋轉蒸煮鍋構造，這個過程要在旋轉蒸煮鍋34內完成，通過進料口36往旋轉蒸煮鍋34加入旋轉蒸煮鍋34容積40%的小麥培養(yǎng)基(其中按照質量份小麥8291份，膨脹珍珠巖510份，輕質碳酸鈣24份和石膏24份)。然后關閉進料口36，讓旋轉蒸煮鍋34旋轉五分鐘，讓各種材料混合均勻后，再通過進料口36注入水(旋轉蒸煮鍋34體積的20%)。最后再關閉進料口36,打開進汽閥門42,通入高壓蒸汽，由出汽噴頭44對旋轉蒸煮鍋34內小麥培養(yǎng)基進行蒸煮，通過觀察溫度計38和壓力表40，來對進汽閥42進行高壓蒸汽調節(jié)，本實施狀態(tài)中蒸煮溫度11(TC，壓力0.08MPa，維持1520分鐘，整個蒸煮過程的時間大概在40分鐘，蒸煮結束后小麥由出料口46倒出進行攤晾冷卻，冷卻時室溫后裝入呼吸塑料袋30。步驟S6是對裝入呼吸塑料袋30的小麥培養(yǎng)基進行滅菌的步驟。該滅菌步驟采用的是高壓滅菌。本實施狀態(tài)中，使用如具體實施方式中描述的改進的高壓滅菌鍋，在高壓滅菌鍋中推入裝著呼吸塑料袋30的殺菌車72，對呼吸塑料袋30進行高壓滅菌。本實施狀態(tài)中，在126。C/0.15MPa進行120150分鐘的滅菌處理。步驟S7是使滅菌后的呼吸塑料袋30冷卻至室溫的步驟。該冷卻步驟中，如圖5所示，最好在滅菌結束后，將小麥培養(yǎng)基在所述高壓滅菌鍋體48中按照常規(guī)高壓滅菌操作進行滅菌處理，滅菌結束后，關閉蒸汽進氣閥門54，停止通入蒸汽，立即啟動真空泵68，同時打開真空泵處閥門70，通過真空泵68直接排出濕熱空氣，當鍋體的壓力表64上的示數(shù)降到0.05MPa，立即關閉真空泵68和真空泵處閥門70，同時后動空壓機52，打開空壓機處閥門51和空氣過濾器處閥門56，通過空氣過濾器50向高壓鍋鍋體48內吹入潔凈空氣，防止雜菌進入鍋體，進而進入呼吸塑料袋中，再緩緩打開排氣孔處閥門60，通過排氣孔62直接排出濕熱空氣，保持鍋體48的壓力表64為正壓；冷卻至室溫，通過鍋體48上的溫度計66觀察溫度，進入隨后的栽培種接種階段。步驟S8為冷卻后，將預培養(yǎng)步驟制得的原種接種到呼吸塑料袋30的小麥培養(yǎng)基中的步驟。接種栽培種時，為了不混入雜菌，必須十分小心。本實施狀態(tài)中，在潔凈度為10000級的緩沖間、潔凈度為IOOO級的接種室里，放入潔凈度為IOO級超凈工作臺進行接種操作。本實施狀態(tài)中，接種量為每個呼吸塑料袋(6Kg)接入180230mL的原種或者每個呼吸塑料袋(3Kg)接入90120mL的原種，接種后，呼吸塑料袋30馬上用封口機進行熱熔封口，并將原種和小麥培養(yǎng)基在呼吸塑料袋30里進行翻袋混合，本實施狀態(tài)中，翻袋次數(shù)1015次。步驟S9為接種原種的小麥培養(yǎng)基進行培養(yǎng)的步驟。46為裝著接種過原種的培養(yǎng)基的呼吸塑料袋，且原種和小麥培養(yǎng)基完全混合。本實施狀態(tài)中培養(yǎng)溫度為2025°C，培養(yǎng)1316天，待呼吸塑料袋長滿菌絲正式培養(yǎng)結束，該步驟稱為正式培養(yǎng)步驟。步驟S10為正式培養(yǎng)后的大袋栽培種裝箱后移入冷庫保藏，大袋蘑燕栽培種制作完成。權利要求1.一種采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種的方法，其特征在于采用呼吸塑料袋作為正式培養(yǎng)的容器，經過母種的活化培養(yǎng)步驟、制備原種的預培養(yǎng)步驟以及將原種接種于大袋栽培種的正式培養(yǎng)步驟制作出大袋蘑菇栽培種。2.根據(jù)權利要求1所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種的方法，其特征在于所述制作步驟為(1)母種的活化培養(yǎng)步驟由保存菌株進行活化培養(yǎng)獲得母種；(2)原種的預培養(yǎng)步驟將母種進行預培養(yǎng)獲得原種；(3)正式培養(yǎng)步驟將呼吸塑料袋裝入高壓滅菌鍋中，對袋內小麥培養(yǎng)基進行高壓滅菌，高壓滅菌后，待塑料袋和小麥培養(yǎng)基冷卻至常溫，然后將步驟(2)預培養(yǎng)獲得的原種接種于所述呼吸塑料袋中小麥培養(yǎng)基進行正式培養(yǎng)，培養(yǎng)過程培養(yǎng)室溫度保持20~25'C，培養(yǎng)1316天待呼吸塑料袋長滿菌絲，正式培養(yǎng)完畢，將裝有菌種的呼吸塑料袋移入3士rc冷庫保藏，大袋蘑菇栽培種制作完成。3.根據(jù)權利要求2所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種的方法，其特征在于所述母種的活化培養(yǎng)步驟為菌株保存于液氮保藏罐中的安瓿管中，將安瓿管中的菌株接種于PDA培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，PDA培養(yǎng)基為常用的真菌培養(yǎng)基200g馬鈴薯切片加入lOOOmL水煮沸20分鐘，過濾后加入20g葡萄糖和1518g瓊脂加熱溶解，再次過濾最終體積為1000mL，后經12rC/0.1MPa進行20分鐘高壓滅菌而成；培養(yǎng)溫度為2224°C;當菌絲長滿PDA培養(yǎng)基時，培養(yǎng)完畢，將活化培養(yǎng)完的母種切成1215mm的小塊切片，備制備原種的預培養(yǎng)步驟使用。4.根據(jù)權利要求2所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種的方法，其特征在于所述原種的預培養(yǎng)步驟中采用的原種培養(yǎng)基為，均按照質量份數(shù)；21份的新鮮棉籽殼、8份牛糞、0.03份石膏、0.07份石灰加70份水發(fā)酵14-16天后，曬干后，3436份發(fā)酵棉籽殼加入12份蛭石、12份膨脹珍珠巖、1份CAC03和1份石灰加60份水混合均勻即成為原種培養(yǎng)基；將裝有原種培養(yǎng)基的容器在高壓滅菌鍋內進行高壓滅菌，在126'C/0.15MPa進行80120分鐘的滅菌處理，滅菌后，使其冷卻至常溫，將母種的活化培養(yǎng)后的切片投入預培養(yǎng)容器進行接種；預培養(yǎng)溫度為2224。C，預培養(yǎng)1822天。5.根據(jù)權利要求4所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑薛栽培種的方法，其特征在于所述預培養(yǎng)容器采用1000mL的帶過濾呼吸蓋的塑料廣口瓶，并按照1000mL的原種培養(yǎng)容器中裝入900mL的原種培養(yǎng)基，每個預培養(yǎng)容器中接種13個母種切片。6.根據(jù)權利要求2所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種的方法，其特征在于所述正式培養(yǎng)步驟培養(yǎng)過程為a)小麥培養(yǎng)基的調質所述小麥培養(yǎng)基調質的整個過程在旋轉蒸煮鍋中進行，往旋轉蒸煮鍋加入占旋轉蒸煮鍋容積40%的小麥培養(yǎng)基按重量份，其中小麥8291傷、膨脹珍珠巖510份，輕質碳酸鈣24份和石膏24份；關閉進料口，讓旋轉蒸煮鍋旋轉五分鐘，讓各種材料混合均勻后，再通過進料口注入占旋轉蒸煮鍋容積20%的水；最后再關閉進料口，打開進汽閥門，通入高壓蒸汽，對旋轉蒸煮鍋內小麥培養(yǎng)基進行蒸煮，蒸煮溫度11(TC，壓力0.08MPa，維持1520分鐘，蒸煮結束的小麥培養(yǎng)基倒出進行攤晾冷卻，冷卻至室溫；b)小麥培養(yǎng)基的裝袋、滅菌將小麥培養(yǎng)基裝入呼吸塑料袋，所述呼吸塑料袋長寬厚規(guī)格為630mmX360mmX80um，帶有2個35mmX35mm呼吸膜，裝入6Kg的小麥培養(yǎng)基或495X320mmX60um，帶有1個35mmX35mm呼吸膜，裝入3Kg的小麥培養(yǎng)基；并采用高壓滅菌鍋在126°C/0.15MPa下進行滅菌處理，高壓滅菌時間為120150分鐘；并在高壓滅菌鍋中冷卻至室溫；c)小麥培養(yǎng)基接種在潔凈度為10000級的緩沖間、潔凈度為IOOO級的接種室里，放入潔凈度為100級超凈工作臺進行接種操作；接種量為每個呼吸塑料袋，6Kg接入180230mL的原種或者每個呼吸塑料袋，3Kg接入90120mL的原種，接種后，用封口機將呼吸塑料袋封口，并進行翻袋混合，翻袋次數(shù)1015次；在培養(yǎng)溫度為2025'C下培養(yǎng)1316天，待呼吸塑料袋長滿菌絲，正式培養(yǎng)完畢移入3土rC冷庫保藏，大袋蘑菇栽培種制作完成。7.—種如權利要求2、3、4、5或6所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑燕栽培種中用到的高壓滅菌鍋，包括整個常規(guī)的臥式高壓滅菌鍋，其特征在于所述臥式高壓滅菌鍋的鍋體上還設置有抽真空系統(tǒng)和空氣凈化系統(tǒng)。8.根據(jù)權利要求7所述的采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種中用到的高壓滅菌鍋，其特征在于所述鍋體上設置的抽真空系統(tǒng)包括真空泵，所述真空泵通過閥門由三通管道一端連接鍋體，該三通管道的另一端設置一閥門作為排氣孔；所述空氣凈化系統(tǒng)包括空壓機，所述空壓機通過一閥門由管道連接一空氣過濾器；所述空氣過濾器通過一閥門由管道連接鍋體，該閥門與鍋體間的管道上設置有一安全閥。9.一種如權利要求8所述的高壓滅菌鍋在采用呼吸塑料袋制作大袋蘑恭栽培種中的使用方法，其特征在于將小麥培養(yǎng)基在所述高壓滅菌鍋中按照常規(guī)高壓滅菌操作進行滅菌處理，滅菌結束后，關閉蒸汽進氣閥門，停止通入蒸汽，立即啟動真空泵，同時打開真空泵處閥門，通過真空泵直接排出濕熱空氣，當鍋體的壓力表降到0.05MPa，立即關閉真空泵和真空泵處閥門，同時啟動空壓機，打開空壓機處閥門和空氣過濾器處閥門，通過空氣過濾器向高壓鍋鍋體吹入潔凈空氣，防止雜菌進入鍋體，進而進入呼吸塑料袋中，再緩緩打開排氣孔處閥門，通過排氣孔直接排出濕熱空氣，保持鍋體的壓力表為正壓；冷卻至室溫，通過鍋體上的溫度計觀察溫度。全文摘要本發(fā)明的目的是提供一種采用呼吸塑料袋制作大袋蘑菇栽培種技術采用呼吸塑料袋作為正式培養(yǎng)的容器，經過母種的活化培養(yǎng)步驟、制備原種的預培養(yǎng)步驟以及將原種接種于大袋栽培種的正式培養(yǎng)步驟培養(yǎng)出大袋蘑菇栽培種；制作過程中使用改進的高壓滅菌鍋進行滅菌冷卻處理。本發(fā)明采用呼吸塑料袋并結合本發(fā)明特殊的制作步驟和設備，可大量迅速生產蘑菇大包裝栽培種，同時可降低制造成本，使操作達到自動化并節(jié)省人力的可靠的蘑菇菌種制作方法；在制作過程中實現(xiàn)高壓滅菌、無菌冷卻一體化，保證了菌種制作的質量，又節(jié)約了時間成本，操作簡便，易于機械化生產，節(jié)省勞動力；成品率高；具有顯著的經濟效率。文檔編號A01G1/04GK101536647SQ20091011158公開日2009年9月23日申請日期2009年4月28日優(yōu)先權日2009年4月28日發(fā)明者盧政輝,廖劍華,戴建清,輝曾,王澤生,翊程,軍陳,陳美元申請人:福建省蘑菇菌種研究推廣站