專(zhuān)利名稱(chēng)：一種復(fù)合酶蛋白的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種酶蛋白的制備方法，尤其涉及一種復(fù)合酶蛋白的制備方法。
背景技術(shù)：
將"酶"添加到飼料中提高飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和畜禽生產(chǎn)性能的設(shè)想和實(shí)踐，
已有數(shù)十年的歷史。早在20世紀(jì)50年代，Jensen等(1957)和Fry等(1958) 曾報(bào)道，添加粗制淀粉酶和蛋白酶，可顯著提高雞的生長(zhǎng)速度和飼料轉(zhuǎn)化率。 早期是從大麥芽中得到淀粉酶，以后用動(dòng)物來(lái)源的胃蛋白酶和胰蛋白酶；植物 來(lái)源的木瓜蛋白酶(papain);曲霉中制取了植酸酶，但在相當(dāng)長(zhǎng)的歷史時(shí)期內(nèi)， 由于生產(chǎn)成本高、活性低、穩(wěn)定性差等問(wèn)題， 一直未能進(jìn)入實(shí)用階段。20世紀(jì) 卯年代前后，由于生物工程特別是酶工程的迅猛發(fā)展，生產(chǎn)成本下降，活性和 穩(wěn)定性大幅度提高。到了20世紀(jì)末，在全國(guó)范圍內(nèi)，酶制劑在配合飼料中的 用量都有極大增加。二十世紀(jì)80年代末，酶制劑開(kāi)始引入我國(guó)， 一些國(guó)外企 業(yè)的飼用酶制劑陸續(xù)進(jìn)入我國(guó)市場(chǎng)，如美國(guó)建明公司、芬蘭詞料國(guó)際有限公司 的飼用酶制劑等。目前，除了進(jìn)口產(chǎn)品外，近年來(lái)也開(kāi)發(fā)出各種飼用酶制劑， 并已進(jìn)入飼料市場(chǎng)。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外大量的伺養(yǎng)實(shí)驗(yàn)和消化代謝實(shí)驗(yàn)都充分證 明添加各種飼用酶制劑不僅能有效地消除飼料抗?fàn)I養(yǎng)因子的有害作用，而且能 全面促進(jìn)養(yǎng)分的分解消化和吸收利用，提高畜禽的生長(zhǎng)速度、飼料轉(zhuǎn)化效率和 增進(jìn)畜禽健康。不僅如此，在應(yīng)用各種酶制劑提高氮、磷利用率的同時(shí)，還可 以減少與生態(tài)效益兼顧的重要科學(xué)技術(shù)措施，酶制劑在飼料工業(yè)中有廣闊的應(yīng) 用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種復(fù)合酶蛋白的制備方法，該方法制備的產(chǎn)物高動(dòng)物生產(chǎn)性能，發(fā)揮生產(chǎn)潛力，改善飼料轉(zhuǎn)化率，降低飼料成本，無(wú)殘毒， 無(wú)耐藥性。
本發(fā)明是這樣來(lái)實(shí)現(xiàn)的，其特征是制備方法為
1、 好氧發(fā)酵培養(yǎng)基配置將血粉、皮革粉、羽毛、麩皮按照l(shuí): 2: 1: 12 的重量比例混合，并將混合物與水按1.8: l的重量比例混合；
2、 厭氧發(fā)酵培養(yǎng)基配置將果渣、米糠、甘薯粉渣按照3: 1: 1的重量 比例混合，并將混合物與水按6: 4的重量比例混合；
3、 培養(yǎng)基滅菌將培養(yǎng)基放入滅菌器中高溫蒸汽滅菌；
4、 菌種激活①按各菌種要求配置基礎(chǔ)培養(yǎng)基；②分裝將配好的培養(yǎng) 基分裝于待接種三角瓶中，并塞上棉塞；③滅菌在O.lMPa下滅菌15min, 其后讓其自然降壓至常壓，冷卻，待接種；④接種待培養(yǎng)基冷卻至4(TC接種， 接種量為0.5%;⑤培養(yǎng)將接種后的試管放入恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)完畢 后備用；
5、 擴(kuò)增龜養(yǎng)將母發(fā)酵劑擴(kuò)大培養(yǎng)得到所需量的工作發(fā)酵劑，培養(yǎng)結(jié)束放 入4'C的冰箱中保存?zhèn)溆茫?br> 6、 接種在無(wú)菌條件下，以一定的接種量向物料中加入生產(chǎn)發(fā)酵劑，好氧
發(fā)酵菌種的接種量為1%-2%，厭氧發(fā)酵菌種的接種重量為3%，其中好氧發(fā)酵菌
種包括米曲霉、棲土曲霉、黑曲霉、扣囊擬內(nèi)孢酶，厭氧發(fā)酵菌種包括蘇氨酸
高產(chǎn)菌、植物乳桿菌、糞鏈球菌、酵母菌；
7、 好氧發(fā)酵條件發(fā)酵溫度28-35'C，時(shí)間2天，自動(dòng)控溫，間歇通風(fēng)， 通風(fēng)量為1. 2立方米/ min;
8、 厭氧發(fā)酵條件厭氧發(fā)酵為自然堆積發(fā)酵，時(shí)間為7天；
9、 低溫干燥采用低溫氣流干燥，物料溫度在65"C以?xún)?nèi)，水分控制在14%以?xún)?nèi)；
10、 混合將好氧條件和厭氧條件下產(chǎn)生的酶蛋白按4: 1比例混合得到 復(fù)合酶蛋白；
11、 包裝即可。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是1、菌種優(yōu)良，傳代穩(wěn)定性強(qiáng)；2、各菌種在發(fā)酵過(guò)程中 起協(xié)同作用，各菌生長(zhǎng)、代謝旺盛，產(chǎn)酶能力增強(qiáng)；3、好氧發(fā)酵和厭氧發(fā)酵 菌分開(kāi)分別進(jìn)行發(fā)酵，讓每個(gè)菌株最大產(chǎn)酶性能發(fā)揮出來(lái)；4、原料中不易被 動(dòng)物吸收的蛋白轉(zhuǎn)化成容易消耗吸收的菌體單細(xì)胞蛋白，使產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值得到 提高。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一
1、 好氧發(fā)酵培養(yǎng)基配置將血粉、皮革粉、羽毛、麩皮按照l(shuí): 2: 1: 12 的重量比例混合，并將混合物與水按1.8: 1的重量比例混合；
2、 厭氧發(fā)酵培養(yǎng)基配置將果渣、米糠、甘薯粉渣按照3: 1: 1的重量 比例混合，并將混合物與水按6: 4的重量比例混合；
3、 培養(yǎng)基滅菌將培養(yǎng)基放入滅菌器中高溫蒸汽滅菌；
4、 菌種激活①按好氧發(fā)酵菌種和厭氧發(fā)酵菌種配置基礎(chǔ)培養(yǎng)基；②分 裝將配好的培養(yǎng)基分裝于待接種三角瓶中，并塞上棉塞；③滅菌在O.lMPa 下滅菌15min，其后讓其自然降壓至常壓，冷卻，待接種；④接種待培養(yǎng)基 冷卻至40'C接種，接種量為0.5%;⑤培養(yǎng)將接種后的試管放入恒溫培養(yǎng)箱 內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)完畢后備用；
5、 擴(kuò)增培養(yǎng)將母發(fā)酵劑擴(kuò)大培養(yǎng)得到工作發(fā)酵劑，培養(yǎng)結(jié)束放入4t:的
冰箱中保存?zhèn)溆茫?br> 6、 接種在無(wú)菌條件下，以好氧發(fā)酵菌種的接種量為1%_2%和厭氧發(fā)酵菌 種的接種量為3%向物料中加入生產(chǎn)發(fā)酵劑，其中好氧發(fā)酵菌種包括米曲霉、棲土曲霉、黑曲霉、扣囊擬內(nèi)孢酶，厭氧發(fā)酵菌種包括蘇氨酸高產(chǎn)菌、植物乳桿 菌、糞鏈球菌、酵母菌；
7、 好氧發(fā)酵條件發(fā)酵溫度28。C，時(shí)間2天，自動(dòng)控溫，間歇通風(fēng)，通 風(fēng)量為1. 2立方米/ min;
8、 厭氧發(fā)酵條件厭氧發(fā)酵為自然堆積發(fā)酵，時(shí)間為7天；
9、 低溫干燥采用低溫氣流干燥，物料溫度為5CTC，水分控制在14%以
內(nèi)；
10、 混合將好氧條件和厭氧條件下產(chǎn)生的酶蛋白按4: 1比例混合得到 復(fù)合酶蛋白；
11、 包裝即可。 實(shí)施例二
1、 好氧發(fā)酵培養(yǎng)基配置將血粉、皮革粉、羽毛、麩皮按照l(shuí): 2: 1: 12 比例混合，并將混合物與水按1.8: l混合；
2、 厭氧發(fā)酵培養(yǎng)基配置將果渣、米糠、甘薯粉渣按照3: 1: 1混合， 并將混合物與水按6: 4混合；
3、 培養(yǎng)基滅菌將培養(yǎng)基放入滅菌器中高溫蒸汽滅菌；
4、 菌種激活①按各菌種要求配置基礎(chǔ)培養(yǎng)基；②分裝將配好的培養(yǎng) 基分裝于待接種三角瓶中，并塞上棉塞；(D滅菌在O.lMPa下滅菌15min, 其后讓其自然降壓至常壓，冷卻，待接種；④接種待培養(yǎng)基冷卻至4(TC接種，
接種量為0.5%;⑤培養(yǎng)將接種后的試管放入恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)完畢
后備用；
5、 擴(kuò)增培養(yǎng)將母發(fā)酵劑擴(kuò)大培養(yǎng)得到所需量的工作發(fā)酵劑，培養(yǎng)結(jié)束放 入4"C的冰箱中保存?zhèn)溆茫?br> 6、 接種在無(wú)菌條件下，以一定的接種量向物料中加入生產(chǎn)發(fā)酵劑，好氧發(fā)酵菌種的接種量為2%，厭氧發(fā)酵菌種的接種重量為3%，其中好氧發(fā)酵菌種 包括米曲霉、棲土曲霉、黑曲霉、扣囊擬內(nèi)孢酶，厭氧發(fā)酵菌種包括蘇氨酸高
產(chǎn)菌、植物乳桿菌、糞鏈球菌、酵母菌；
7、 好氧發(fā)酵條件發(fā)酵溫度35t:，時(shí)間2天，自動(dòng)控溫，間歇通風(fēng)，通 風(fēng)量為1.2立方米/ min;
8、 厭氧發(fā)酵條件厭氧發(fā)酵為自然堆積發(fā)酵，時(shí)間為7天；
9、 低溫干燥采用低溫氣流干燥，最高物料溫度為65。C，水分控制在14% 以?xún)?nèi)；
10、 混合將好氧條件和厭氧條件下產(chǎn)生的物質(zhì)按4: l比例混合；
11、 包裝即可。
權(quán)利要求
1、一種復(fù)合酶蛋白的制備方法，其特征是制備方法為(1)好氧發(fā)酵培養(yǎng)基配置將血粉、皮革粉、羽毛、麩皮按照1∶2∶1∶12的重量比例混合，并將混合物與水按1.8∶1的重量比例混合；(2)厭氧發(fā)酵培養(yǎng)基配置將果渣、米糠、甘薯粉渣按照3∶1∶1的重量比例混合，并將混合物與水按6∶4的重量比例混合；(3)培養(yǎng)基滅菌將培養(yǎng)基放入滅菌器中高溫蒸汽滅菌；(4)菌種激活①按好氧發(fā)酵菌種和厭氧發(fā)酵菌種配置基礎(chǔ)培養(yǎng)基；②分裝將配好的培養(yǎng)基分裝于待接種三角瓶中，并塞上棉塞；③滅菌在0.1MPa下滅菌15min，其后讓其自然降壓至常壓，冷卻，待接種；④接種待培養(yǎng)基冷卻至40℃接種，接種量為0.5％；⑤培養(yǎng)將接種后的試管放入恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)完畢后備用；(5)擴(kuò)增培養(yǎng)將母發(fā)酵劑擴(kuò)大培養(yǎng)得到工作發(fā)酵劑，培養(yǎng)結(jié)束放入4℃的冰箱中保存?zhèn)溆茫?6)接種在無(wú)菌條件下，以好氧發(fā)酵菌種的接種量為1％-2％和厭氧發(fā)酵菌種的接種量為3％向物料中加入生產(chǎn)發(fā)酵劑，其中好氧發(fā)酵菌種包括米曲霉、棲土曲霉、黑曲霉、扣囊擬內(nèi)孢酶，厭氧發(fā)酵菌種包括蘇氨酸高產(chǎn)菌、植物乳桿菌、糞鏈球菌、酵母菌；(7)好氧發(fā)酵條件發(fā)酵溫度28-35℃，時(shí)間2天，自動(dòng)控溫，間歇通風(fēng)，通風(fēng)量為1.2立方米/min；(8)厭氧發(fā)酵條件厭氧發(fā)酵為自然堆積發(fā)酵，時(shí)間為7天；(9)低溫干燥采用低溫氣流干燥，物料溫度低于65℃，水分控制在14％以?xún)?nèi)；(10)混合將好氧條件和厭氧條件下產(chǎn)生的酶蛋白按4∶1比例混合得到復(fù)合酶蛋白；(11)包裝即可。
全文摘要
一種復(fù)合酶蛋白的制備方法，其特征是制備方法為好氧發(fā)酵培養(yǎng)基配置、厭氧發(fā)酵培養(yǎng)基配置、培養(yǎng)基滅菌、菌種激活、擴(kuò)增培養(yǎng)、接種、好氧發(fā)酵條件、厭氧發(fā)酵條件、低溫干燥、混合、包裝即可。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是1.菌種優(yōu)良，傳代穩(wěn)定性強(qiáng)；2.各菌種在發(fā)酵過(guò)程中起協(xié)同作用，各菌生長(zhǎng)、代謝旺盛，產(chǎn)酶能力增強(qiáng)；3.好氧發(fā)酵和厭氧發(fā)酵菌分開(kāi)分別進(jìn)行發(fā)酵，讓每個(gè)菌株最大產(chǎn)酶性能發(fā)揮出來(lái)；4.原料中不易被動(dòng)物吸收的蛋白轉(zhuǎn)化成容易消耗吸收的菌體單細(xì)胞蛋白，使產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值得到提高。
文檔編號(hào)A23K1/165GK101507469SQ20091011507
公開(kāi)日2009年8月19日 申請(qǐng)日期2009年3月16日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月16日
發(fā)明者濤 楊 申請(qǐng)人:江西普潤(rùn)藥業(yè)有限公司