專利名稱：一種魚用免疫增強劑的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種魚用免疫增強劑的制備方法，屬于水產配合飼料技術領域。
背景技術：
近些年來，隨著我國水產養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，水產養(yǎng)殖的病害問題卻日趨嚴重，常 見疾病依舊十分普遍，新的疾病不斷發(fā)生，診斷和監(jiān)控技術缺乏，養(yǎng)殖水域生態(tài)環(huán)境惡化嚴 重，濫用藥物問題突出，水產品質量安全隱患凸現(xiàn)，據(jù)統(tǒng)計水產養(yǎng)殖品種的病害頻繁發(fā)生， 全國每年水產養(yǎng)殖病害發(fā)生率達50%以上，損失率20%左右，每年因水產養(yǎng)殖病害問題而 造成的直接經濟損失就達百億元之巨。為了防治病原，環(huán)境改良劑、消毒劑、殺蟲驅蟲藥、抗 生素等等藥物的濫用、錯用，可能對養(yǎng)殖動物造成毒性損傷，長期濫用藥物還可能會誘發(fā)基 因突變或轉移，使部分病原生物產生抗藥性，對人體產生致殘、致畸、致突變等，影響我國水 產養(yǎng)殖業(yè)的健康和可持續(xù)發(fā)展。 隨著抗生素、抗菌藥物的逐漸禁用，一些綠色、安全、高效飼料添加劑的開發(fā)與應 用應運而生。植物提取物具有天然、高效、毒副作用少、資源豐富等優(yōu)點，含有與動物的免疫 功能密切相關的生物堿、茶多酚、皂甙、低聚糖、黃酮類、揮發(fā)油類等，能促進機體健康，減少 抗生素在動物生產中的使用，是我國傳統(tǒng)的防病治病藥物。 在水產上研究，天然植物可促進水產動物機體代謝和蛋白質及酶的合成，促進機
體的生長發(fā)育，并通過影響非特異性免疫系統(tǒng)，激活和誘生多種細胞因子等途徑提高水產
動物機體免疫力，如傳統(tǒng)中草藥大黃、黃芪、甘草、陳皮、魚腥草、黃芩、當歸等能提高中國
對蝦、南美白對蝦、尼羅羅非魚、異育銀鯽等免疫能力，抵抗病原菌感染。 地錦草為大戟科植物地錦(Euphorbia humifusa willd)或班地錦
(Euphorbiamacilata L.)干燥的全草，主要成分為黃酮類化合物、沒食子酸、內消旋肌醇
等，具有抗氧化、抗菌、治療腸炎、清熱解毒等功能。 仙鶴草(Agrimonia pilosa ledeb.)為薔薇科多年生草本植物龍牙草的全草，主 要成分含有仙鶴草素、仙鶴草內酯、鞣質、甾醇、有機酸、皂苷等，具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗 腫瘤等功能。 辣蓼(Polygonum hydropipre L )屬蓼禾斗(Polygonaceae)蓼屬(Polygonum L )
的一年生草本植物，含有水寥二醛、異水寥二醛、水寥素、槲皮素、槲皮黃甙、金絲桃甙等，具 有抗氧化、抗菌、抗病毒等功能。 谷氨酰胺是L-谷氨酸的Y _羧基酰胺化物，是體液中最豐富的氨基酸之一，可增 強魚體免疫功能、維持酸堿平衡、增加細胞的吞噬作用和淋巴細胞的增殖、增加細胞體積、 增強肌肉細胞內蛋白質的合成等，是一種極有發(fā)展前景的新型藥物和動物營養(yǎng)性飼料添加 劑。目前已有一些關于地錦草、仙鶴草、辣寥的在水產養(yǎng)殖的使用，但是有關與大黃蒽醌提 取物、谷氨酰胺的配伍使用，還未見報道。因此研制一種魚用免疫增強劑，提高魚體抗病能 力，抗應激能力，對水產養(yǎng)殖的健康發(fā)展和可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于克服上述的一些不足之處，從而提供一種魚用免疫增強劑的制
備方法，其能耗低、工藝簡單、生產成本低，能提高魚體免疫與抗氧化能力，提高魚體抗高密
度以及抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力，且可促進魚體生長的免疫增強劑。 按照本發(fā)明提供的技術方案，一種魚用免疫增強劑的制備方法采用以下工藝步
驟，其組分配比以重量份數(shù)計 取谷氨酰胺二肽為0.25 0.75份、大黃提取物為0.3 0.9份、地錦草為 30. 0 40. 0份、仙鶴草為25. 0 33. 0份、辣蓼為13. 0 17. 0份、磷酸二氫鉀1. 0-3. 0 份、載體為8. 45-27. 35份; 將上述各組份充分混合后粉碎，制成160 200目干粉的免疫增強劑。粉碎轉速 為:400-500轉/分。 所述載體選自玉米粉或麩皮或小麥粉或大豆粉或米糠或沸石粉等。所述大黃提取 物，主要成分為45%大黃素，由巨邦植物原料有限公司提供。所述谷氨酰胺二肽，由浙江安 木化工有限公司提供。上述免疫增強劑在魚飼料中的添加量為1%_5%。免疫增強劑的添 加量與使用的周期有關，當使用周期在30d以上，在飼料中添加量為1%_2% ;當使用周期 在7d以內，在飼料中添加量為3 % -5 % 。 此免疫增強劑可用于鯉魚、鯽魚、青魚、草魚、鳊魚、翹嘴紅舶等常規(guī)淡水魚類養(yǎng)殖 中，直接地清除機體內的自由基，消除自由基對機體組織器官正常功能的負面影響，加快修 復被破壞的免疫系統(tǒng)，減緩機體對應激條件的反應，能提高魚體的免疫與抗氧化能力、抗高 密度以及抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力，改善飼料適口性，促進魚體生長。
本發(fā)明與已有技術相比具有以下優(yōu)點 1、使用本添加劑后，大黃提取物、地錦草、仙鶴草、辣寥等含有豐富黃酮類化合物、 沒食子酸、仙鶴草素、仙鶴草內酯、鞣質、水蓼二醛、水蓼素、槲皮素、大黃素、大黃酸等，具有 抗氧化、抗菌、抗病毒等功能，提高魚體飼料利用率，促進魚體生長。
2、本發(fā)明原料來源穩(wěn)定，制備簡單，取材廣泛，成本低廉。 3、本發(fā)明從魚體免疫的機理出來，免疫增強劑既補充中草藥，又補充西藥谷氨酰 胺二肽；從中西結合藥物對魚體的應激調理，并適當補充應激造成的Na+、 K+流失來防治魚 體應激。 4、本發(fā)明免疫增強劑通過動物試驗，表明免疫增強劑能提高魚體免疫與抗氧化能 力，提高魚體抗高密度以及抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力，促進魚體生長。
具體實施例方式
下面本發(fā)明將結合實施例作進一步描述 實施例一本發(fā)明一種魚用免疫增強劑的制備方法采用以下工藝步驟，其組份配 比以重量份數(shù)計 取谷氨酰胺二肽為0.75份、大黃提取物為0.9份、地錦草為30.0份、仙鶴草 為25. 0份、辣寥為13. 0份、磷酸二氫鉀3. 0份、載體選玉米為27. 35份；將上述各組分
充分在混合機(V型混合機，溧陽市匯達機械有限公司)內混勻；后超微粉碎機(ZNC-300小 型超微粉碎機，北京興時利和科技發(fā)展有限公司)粉碎，并通過160目的篩網制成免疫增強
4劑；超微粉碎機粉碎速度400轉/分；混合機投料轉速18轉/分； 生長實驗鯽魚由中國水產科學院淡水漁業(yè)研究中心漁場提供。試驗選擇健康、規(guī)格、重量基本一致的鯽魚，個體初均重約50g。隨機分組，設有對照組與對照組，每組設3個平行試驗，每平行組50尾試驗魚，共6個網箱(規(guī)格為250cmX 150cmX 100cm)。鯽魚馴化30d后投喂0、1. 0%等不同劑量免疫增強劑56d，測定其生長的影響。 應激試驗飼養(yǎng)試驗結束后，選取個體基本一致的魚進行應激試驗。采用高密度(100g/L)應激，每個劑量組分三個平行組，每個平行組均為20尾左右，放養(yǎng)于同樣規(guī)格容積為40L塑料桶中。采用流水系統(tǒng)，水溫25± 1°C ，流速為2L/min，并保證充足的氧氣，減少人為干擾，保持安靜，防止額外應激。每6h觀察魚體死亡情況，觀察2d，統(tǒng)計死亡率，采集血液、肝臟樣品等。 攻毒實驗飼養(yǎng)試驗結束后，每個劑量組分三個平行組，每個平行組均為10尾魚。病原菌采用淡水魚類細菌_嗜水性氣單胞菌，將兩次活化后的嗜水性氣單胞菌用無菌生理鹽水稀釋，使終濃度約為lX107cellS/ml。按每100g魚重腹腔注射菌液1.0ml，后放養(yǎng)于同樣規(guī)格容積的水泥池網箱中(規(guī)格為100cmX100cmX100cm)，并保證充足的氧氣，每天觀察魚體死亡情況，觀察7d，統(tǒng)計死亡率。 結果表明與對照組相比，1. 0%免疫增強劑增重率顯著(P < 0. 05)分別提高了7. 36X;病原菌感染魚體7d，對照組死亡率為95. 0%， 1. 0%免疫增強劑魚死亡率為32. 0%;高密度應激ld試驗后，與對照組相比，1.0X免疫增強劑顯著(P < 0.05)降低血液皮質醇濃度8. 11 % ，血糖水平4. 56 %及丙二醛濃度9. 22 % ，增加了血液過氧化氫酶11. 34 % 、超氧化物歧化酶活性8. 78%以及應激蛋白HSP70濃度4. 77%，因此，該免疫增強劑能提高魚體免疫與抗氧化能力，提高魚體抗高密度以及抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力，提高魚體抗應激能力，促進魚體生長。 實施例二本發(fā)明一種魚用免疫增強劑的制備方法采用以下工藝步驟，其組分配比以重量份數(shù)計 取谷氨酰胺二肽為0. 5份、大黃提取物為0. 6份、地錦草為35. 0份、仙鶴草為
28.0份、辣寥為15.0份、磷酸二氫鉀2.0份、載體選麩皮為20.9份；將上述各組分充分在混合機(V型混合機，溧陽市匯達機械有限公司)內混勻；后超微粉碎機(ZNC-300小型超微
粉碎機，北京興時利和科技發(fā)展有限公司)粉碎，并通過180目的篩網制成免疫增強劑；超微粉碎機粉碎速度450轉/分；混合機投料轉速19轉/分； 生長實驗鯽魚由中國水產科學院淡水漁業(yè)研究中心漁場提供。試驗選擇健康、規(guī)
格、重量基本一致的鯽魚，個體初均重約50g。隨機分組，設有對照組與對照組，每組設3個平行試驗，每平行組50尾試驗魚，共6個網箱(規(guī)格為250cmX 150cmX 100cm)。鯽魚馴化30d后投喂0、2. 0%等不同劑量免疫增強劑56d，測定其生長的影響。 應激試驗飼養(yǎng)試驗結束后，選取個體基本一致的魚進行應激試驗。采用高密度(100g/L)應激，每個劑量組分三個平行組，每個平行組均為20尾左右，放養(yǎng)于同樣規(guī)格容積為40L塑料桶中。采用流水系統(tǒng)，水溫25± 1°C ，流速為2L/min，并保證充足的氧氣，減少人為干擾，保持安靜，防止額外應激。每2h觀察魚體死亡情況，觀察2d，統(tǒng)計死亡率，采集血液、肝臟樣品等。 攻毒實驗飼養(yǎng)試驗結束后，每 劑量組分三個平行組，每個平行組均為10尾魚。病原菌采用淡水魚類細菌_嗜水性氣單胞菌，將兩次活化后的嗜水性氣單胞菌用無菌生理 鹽水稀釋，使終濃度約為lX107cellS/ml。按每lOOg魚重腹腔注射菌液l.Oml，后放養(yǎng)于 同樣規(guī)格容積的水泥池網箱中(規(guī)格為lOOcmXIOOcmX 100cm)，并保證充足的氧氣，每天 觀察魚體死亡情況，觀察7d，統(tǒng)計死亡率。 結果表明與對照組相比，2. 0%免疫增強劑增重率顯著(P < 0. 05)分別提高了 9. 76X;病原菌感染魚體7d，對照組死亡率為96. 0%，2. 0%免疫增強劑魚死亡率為28. 0%; 高密度應激ld試驗后，與對照組相比，2.0X免疫增強劑顯著(P < 0.05)降低血液皮質醇 濃度9. 34%，血糖水平5. 67%及丙二醛濃度9. 87%，增加了血液過氧化氫酶9. 78%、超氧 化物歧化酶活性7. 65%以及應激蛋白HSP70濃度5. 76 % ，因此，該免疫增強劑能提高魚體 免疫與抗氧化能力，提高魚體抗高密度以及抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力，提高魚體抗應 激能力，促進魚體生長。 實施例三本發(fā)明一種魚用免疫增強劑的制備方法采用以下工藝步驟，其組分配 比以重量份數(shù)計 取谷氨酰胺二肽為0. 25、大黃提取物為0. 3份、地錦草為40. 0份、仙鶴草為 33.0份、辣寥為17.0份、磷酸二氫鉀1.0份、載體選米糠為8. 45份；將上述各組分充分在
混合機(V型混合機，溧陽市匯達機械有限公司)內混勻；后超微粉碎機(ZNC-300小型超微
粉碎機，北京興時利和科技發(fā)展有限公司)粉碎，并通過200目的篩網制成免疫增強劑；超 微粉碎機粉碎速度500轉/分；混合機投料轉速20轉/分； 生長實驗鯽魚由中國水產科學院淡水漁業(yè)研究中心漁場提供。試驗選擇健康、規(guī)
格、重量基本一致的鯽魚，個體初均重約50g。隨機分組，設有對照組與對照組，每組設3個 平行試驗，每平行組50尾試驗魚，共6個網箱(規(guī)格為250cmX 150cmX 100cm)。鯽魚馴化 30d后投喂0、3. 0%等不同劑量免疫增強劑56d，測定其生長的影響。 應激試驗飼養(yǎng)試驗結束后，選取個體基本一致的魚進行應激試驗。采用高密度 (100g/L)應激，每個劑量組分三個平行組，每個平行組均為20尾左右，放養(yǎng)于同樣規(guī)格容 積為40L塑料桶中。采用流水系統(tǒng)，水溫25± 1°C ，流速為2L/min，并保證充足的氧氣，減少 人為干擾，保持安靜，防止額外應激。每2h觀察魚體死亡情況，觀察2d，統(tǒng)計死亡率，采集血 液、肝臟樣品等。 攻毒實驗飼養(yǎng)試驗結束后，每個劑量組分三個平行組，每個平行組均為10尾魚。 病原菌采用淡水魚類細菌_嗜水性氣單胞菌，將兩次活化后的嗜水性氣單胞菌用無菌生理 鹽水稀釋，使終濃度約為lX107cellS/ml。按每100g魚重腹腔注射菌液l.Oml，后放養(yǎng)于 同樣規(guī)格容積的水泥池網箱中(規(guī)格為100cmX100cmX100cm)，并保證充足的氧氣，每天 觀察魚體死亡情況，觀察7d，統(tǒng)計死亡率。 結果表明與對照組相比，3.0%免疫增強劑增重率顯著(P<0.05)分別提高 了 10.43% ;病原菌感染魚體7d，對照組死亡率為96.0%， 3.0%免疫增強劑魚死亡率為 25.0% ;高密度應激ld試驗后，與對照組相比，3.0X免疫增強劑顯著(P<0.05)降低血 液皮質醇濃度10. 31 %，血糖水平6. 43%及丙二醛濃度9. 24%，增加了血液過氧化氫酶 9. 56% 、超氧化物歧化酶活性8. 45%以及應激蛋白HSP70濃度6. 23% ，因此，該免疫增強劑 能提高魚體免疫與抗氧化能力，提高魚體抗高密度以及抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力，提 高魚體抗應激能力，促進魚體生長。
權利要求
一種魚用免疫增強劑的制備方法，其特征是采用以下工藝步驟，其組份配比以重量份數(shù)計取谷氨酰胺二肽為0.25～0.75份、大黃提取物為0.3～0.9份、地錦草為30.0～40.0份、仙鶴草為25.0％～33.0份、辣蓼為13.0％～17.0份、磷酸二氫鉀1.0-3.0份、載體為8.45％-27.35份；將上述各組份充分混合后粉碎，制成160～200目干粉，粉碎轉速為400-500轉/分。
2. 根據(jù)權利要求1所述的一種魚用免疫增強劑的制備方法，其特征在于所述載體選用 玉米粉或麩皮或小麥粉或大豆粉或米糠或沸石粉。
3. 根據(jù)權利要求1述一種魚用免疫增強劑的制備方法，其特征在于所述免疫增強劑在 魚飼料中的添加量為1% _5%。
4. 根據(jù)權利要求1述一種魚用免疫增強劑的制備方法，其特征在于所述免疫增強劑用 于鯉魚、鯽魚、青魚、草魚或鳊魚魚飼料中。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種魚用免疫增強劑的制備方法，屬于水產配合飼料技術領域。特征是取大黃提取物、地錦草、仙鶴草、辣蓼、谷氨酰胺、磷酸二氫鉀等及載體；將上述各組份充分混合后粉碎，制成干粉。本發(fā)明原料來源穩(wěn)定，制備簡單，取材廣泛，成本低廉；從魚體免疫的機理出來，免疫增強劑既補充中草藥，又補充西藥谷氨酰胺二肽；從中西結合藥物對魚體的應激調理，并適當補充應激造成的Na+、K+流失來防治魚體應激。使用時能提高魚體免疫與抗氧化能力，提高魚體抗高密度以及抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力，且可促進魚體生長。
文檔編號A23K1/16GK101720869SQ20091023236
公開日2010年6月9日 申請日期2009年12月7日 優(yōu)先權日2009年12月7日
發(fā)明者何義進, 劉波, 周群蘭, 徐跑, 戈賢平, 王慶, 王愛民, 謝駿, 高啟平, 鮑倩 申請人:中國水產科學研究院淡水漁業(yè)研究中心;鹽城工學院;通威股份有限公司;無錫弘康生化技術有限公司