專利名稱：蛹蟲草固體菌種培育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蛹蟲草固體菌種培育方法。
背景技術(shù)：
蟲草是一種珍稀的中藥材，具有很高的藥用和滋補(bǔ)功效。野生蟲草資源有限，過(guò)量開(kāi)采 會(huì)破壞環(huán)境。人工培育的蟲草，有效成分與野生蟲草相近，部分成分甚至超過(guò)野生蟲草，現(xiàn) 在普遍采用人工培育蛹蟲草的方法獲取蟲草。
在蛹蟲草的人工培育中，性能優(yōu)良的菌種是蛹蟲草高產(chǎn)和高質(zhì)量的保證。因此，固體菌 種的培育是蛹蟲草人工培育中一個(gè)至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。現(xiàn)在普遍采用的固體菌種培育方法是 接種完成后，在20 25。C恒溫條件下，交替自然光照培養(yǎng)至孢子成熟。這樣培育的蛹蟲草固 體菌種孢子較小，活性低，對(duì)雜菌的抵抗力差，由此蛹蟲草固體菌種擴(kuò)增的液體菌種，單位 液體培養(yǎng)基中菌絲含量，活性一般，長(zhǎng)期靜置容易發(fā)生分層，接種時(shí)難以保證接種量的一致 性，液體菌種接種到生產(chǎn)培養(yǎng)基后，菌落生長(zhǎng)慢，轉(zhuǎn)色所用時(shí)間長(zhǎng)。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服上述問(wèn)題，本發(fā)明提供一種具有高活性和抗性的蛹蟲草固體菌種培育方法。 本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是
蛹蟲草固體菌種培育方法，其培育過(guò)程包括以下步驟
1) 制備普通斜面固體培養(yǎng)基；
2) 接種蛹蟲草菌種；
3) 暗激發(fā)培養(yǎng)將接種好的菌種在23 25。C下遮光培養(yǎng)3天，將溫度降低至20 23。C，
繼續(xù)遮光培養(yǎng)4天；
4) 光激發(fā)將經(jīng)過(guò)暗激發(fā)培養(yǎng)的菌種在自然散光下培養(yǎng)24小時(shí)，孢子成熟，完成蛹蟲
草固體菌種的培育。
本發(fā)明的有益效果是與普通方法培育的蛹蟲草固體菌種相比，經(jīng)過(guò)暗激發(fā)培養(yǎng)的蛹蟲 草固體菌種氣生菌絲更發(fā)達(dá)，菌苔更結(jié)實(shí)、肥厚，顏色鮮黃；孢子個(gè)體更大；氣生菌絲粗大 1.5倍以上，且分枝更多，不易斷裂；菌種的活性高，對(duì)雜菌的抵抗力更強(qiáng)。使用經(jīng)過(guò)暗激
發(fā)培養(yǎng)的蛹蟲草固體菌種擴(kuò)增的液體菌種，單位液體培養(yǎng)基中菌絲含量更高，活性高，長(zhǎng)期
靜置不易分層，靜置120 140h沒(méi)有出現(xiàn)分層現(xiàn)象，分布性好。使用該液體菌種接種量均勻，方便了液體菌種的使用。液體菌種接種到生產(chǎn)培養(yǎng)基后，菌落生長(zhǎng)快，轉(zhuǎn)色所用時(shí)間短， 能縮短生產(chǎn)周期。


圖l是實(shí)施例l和對(duì)照例l的氣生菌絲對(duì)比圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)例，進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。 實(shí)施例l
選用的蛹蟲草菌種為Cm001，購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)生物學(xué)院食用菌研究室，培育過(guò)程包括以 下步驟
1) 制備普通斜面固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的配比為
水7500g馬鈴薯1400g葡萄糖180g磷酸氫二鉀15g硫酸鎂5g蛋白胨20g 蠶蛹粉18g瓊脂粉75g，將配制好的培養(yǎng)基分裝好，在121'C，壓力1.05kg/cm2條件下滅
菌40分鐘，冷卻至常溫，備用；
2) 接種無(wú)菌條件下，在冷卻至常溫的培養(yǎng)基中接入Cm001菌種；
3) 暗激發(fā)培養(yǎng)將接種好的菌種在23。C下遮光培養(yǎng)3天，將溫度降低至2(TC，繼續(xù)遮光
培養(yǎng)4天；
4) 光激發(fā)將經(jīng)過(guò)暗激發(fā)培養(yǎng)的菌種在自然散光下培養(yǎng)24小時(shí)，孢子成熟，完成蛹蟲
草固體菌種的培育。
經(jīng)檢驗(yàn)，該蛹蟲草固體菌種氣生菌絲的平均直徑為12 13ym，孢子的平均大小為6. 5 7. 5y m。
將培養(yǎng)完成的蛹蟲草固體菌種接種到液體培養(yǎng)基中，每160ml液體培養(yǎng)基中加入約2. 5g 固體菌種(鮮重)，擴(kuò)增成液體菌種。液體培養(yǎng)基的配比為
水9000ml馬鈴薯1700g葡萄糖200g磷酸氫二鉀20g硫酸鎂7g蛋白胨32g，避 光條件下，23-25°C， 150轉(zhuǎn)/min搖床培養(yǎng)48h，液體菌種培養(yǎng)完成。
經(jīng)檢驗(yàn)，液體菌種培養(yǎng)完成后，每100ml液體菌種中的干物質(zhì)量為12.8g，靜置122h后出 現(xiàn)分層。
將培養(yǎng)完成的液體菌種接種到生產(chǎn)培養(yǎng)基中，52h后出現(xiàn)直徑3mm的菌落，給與光照12h 后，培養(yǎng)基轉(zhuǎn)色。 對(duì)照例l
斜面固體培養(yǎng)基的制備和接種的菌種同實(shí)施例l，接種后在25"C下，交替自然光照培養(yǎng)7天，完成蛹蟲草固體菌種的培育。
經(jīng)檢驗(yàn)，該蛹蟲草固體菌種菌絲的平均直徑為7. 5 8 y m，孢子的平均大小為5. 5 6 ym。
將培養(yǎng)完成的蛹蟲草固體菌種按實(shí)施例l中所述的條件擴(kuò)增成液體菌種，經(jīng)檢驗(yàn)每 100ml培養(yǎng)液中和干物質(zhì)量為8. 7g，靜置84h后分層。
將培養(yǎng)完成的液體菌種接種到生產(chǎn)培養(yǎng)基中，77h后出現(xiàn)直徑2.5mm的菌落，給與光照 15h后，培養(yǎng)基轉(zhuǎn)色。
實(shí)施例2
選用的蛹蟲草菌種為北蟲草C-2，購(gòu)自山東省魚臺(tái)縣食用菌研究所，培育過(guò)程包括以下步
驟
1) 制備普通斜面固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的配比為
水9000g馬鈴薯1700g葡萄糖200g磷酸氫二鉀20g硫酸鎂7g蛋白胨26g 蠶蛹粉20g瓊脂粉90g;將配制好的培養(yǎng)基分裝好，在121。C，壓力1. 05kg/ci/條件下滅
菌40分鐘，冷卻至常溫，備用；
2) 接種無(wú)菌條件下，在冷卻至常溫的培養(yǎng)基中接入北蟲草C-2菌；
3) 暗激發(fā)培養(yǎng)將接種好的菌種在24'C下遮光培養(yǎng)3天，將溫度降低至2rC，繼續(xù)遮光
培養(yǎng)4天；
4) 光激發(fā)將經(jīng)過(guò)暗激發(fā)培養(yǎng)的菌種在自然散光下培養(yǎng)24小時(shí)，孢子成熟，完成蛹蟲
草固體菌種的培育。
經(jīng)檢驗(yàn)，該蛹蟲草固體菌種氣生菌絲的平均直徑為11.5 12um，孢子的平均大小為 6. 0 6. 5 y m。
將培養(yǎng)完成的蛹蟲草固體菌種接種到液體培養(yǎng)基中，每160ml液體培養(yǎng)基中加入約2. 5g 固體菌種(鮮重)，擴(kuò)增成液體菌種。液體培養(yǎng)基的配比為水7500gml馬鈴薯1400g葡 萄糖180g磷酸氫二鉀15g硫酸鎂5g蛋白胨28g，避光條件下，23-25°C， 150轉(zhuǎn)/min 搖床培養(yǎng)48h，液體菌種培養(yǎng)完成。
經(jīng)檢驗(yàn)，液體菌種培養(yǎng)完成后，每100ml液體菌種中的干物質(zhì)量為12.3g，靜置126h后出 現(xiàn)分層。
將培養(yǎng)完成的液體菌種接種到生產(chǎn)培養(yǎng)基中，58h后出現(xiàn)直徑2.5mm的菌落，給與光照 llh后，培養(yǎng)基轉(zhuǎn)色。 對(duì)照例2斜面固體培養(yǎng)基的制備和接種的菌種同實(shí)施例l，接種后在25"C下，交替自然光照培養(yǎng)7 天，完成蛹蟲草固體菌種的培育。
經(jīng)檢驗(yàn)，該蛹蟲草固體菌種氣生菌絲的平均直徑為7 7.5ym，孢子的平均大小為4. 5 5 y m。
將培養(yǎng)完成的蛹蟲草固體菌種按實(shí)施例l中所述的條件擴(kuò)增成液體菌種，經(jīng)檢驗(yàn)每 100ml培養(yǎng)液中和干物質(zhì)量為8. 8g，靜置92h后分層。
將培養(yǎng)完成的液體菌種接種到生產(chǎn)培養(yǎng)基中，74h后出現(xiàn)直徑2.5mm的菌落，給與光照 16h后，培養(yǎng)基轉(zhuǎn)色。
實(shí)施例3
選用的菌種為C311，購(gòu)自華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院石木標(biāo)教授，培育過(guò)程包括以下步驟
1) 制備普通斜面固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的配比為
水8500g馬鈴薯1650g葡萄糖195g磷酸氫二鉀19g硫酸鎂6. 5g蛋白胨25g 蠶蛹粉21g瓊脂粉87. 5g;
2) 配制好的培養(yǎng)基分裝好，在121。C，壓力1.05kg/ci/條件下滅菌40分鐘，冷卻至常溫 ，備用；
3) 接種無(wú)菌條件下，以常規(guī)方法在冷卻至常溫的培養(yǎng)基中接入C311菌；
4) 暗激發(fā)培養(yǎng)將接種好的菌種在25'C下遮光培養(yǎng)3天，將溫度降低至23'C，繼續(xù)遮光
培養(yǎng)4天；
5) 光激發(fā)將經(jīng)過(guò)暗激發(fā)培養(yǎng)的菌種在自然散光下培養(yǎng)24小時(shí)，孢子成熟，完成蛹蟲
草固體菌種的培育。
經(jīng)檢驗(yàn)，該蛹蟲草固體菌種氣生菌絲的平均直徑為ll 11.5ym，孢子的平均大小為6 6. 5 y m。
將培養(yǎng)完成的蛹蟲草固體菌種接種到液體培養(yǎng)基中，每160ml液體培養(yǎng)基中加入約2. 5g 固體菌種(鮮重)，擴(kuò)增成液體菌種。液體培養(yǎng)基的配比為水8500g馬鈴薯1650g葡萄 糖195g磷酸氫二鉀19g硫酸鎂6. 5g蛋白胨31g，避光條件下，23-25°C， 150轉(zhuǎn)/min 搖床培養(yǎng)48h，液體菌種培養(yǎng)完成。
經(jīng)檢驗(yàn)，液體菌種培養(yǎng)完成后，每100ml液體菌種中的干物質(zhì)量為12.4g，靜置132h后出 現(xiàn)分層。
將培養(yǎng)完成的液體菌種接種到生產(chǎn)培養(yǎng)基中，49h后出現(xiàn)直徑2mm的菌落，給與光照13h 后，培養(yǎng)基轉(zhuǎn)色。對(duì)照例3
斜面固體培養(yǎng)基的制備和接種的菌種同實(shí)施例l，接種后在25"C下，交替自然光照培養(yǎng)7天，完成蛹蟲草固體菌種的培育。
經(jīng)檢驗(yàn)，該蛹蟲草固體菌種氣生菌絲的平均直徑為7 7.5ym，孢子的平均大小為5. 5 6 y m。
將培養(yǎng)完成的蛹蟲草固體菌種按實(shí)施例l中所述的條件擴(kuò)增成液體菌種，經(jīng)檢驗(yàn)每100ml培養(yǎng)液中和干物質(zhì)量為9. 2g，靜置94h后分層。
將培養(yǎng)完成的液體菌種接種到生產(chǎn)培養(yǎng)基中，68h后出現(xiàn)直徑2mm的菌落，給與光照15h后，培養(yǎng)基轉(zhuǎn)色。
由以上各實(shí)施例中，與普通方法培養(yǎng)的蛹蟲草固體菌種相比，經(jīng)過(guò)本發(fā)明培養(yǎng)的蛹蟲草固體菌種，肉眼可見(jiàn)菌苔更結(jié)實(shí)、肥厚、顏色鮮黃；普通方法培養(yǎng)的蛹蟲草固體菌種，菌苔較稀疏，單薄、顏色蒼白；二者對(duì)比如圖l所示；顯微鏡下觀察，與普通方法培養(yǎng)的蛹蟲草固體菌種相比，本發(fā)明培養(yǎng)的蛹蟲草固體菌種氣生菌絲平均要粗大1.5倍以上，且分枝更多，不易斷裂；孢子個(gè)體平均要大1.09倍以上，這些情況表明，經(jīng)過(guò)本發(fā)明培養(yǎng)后，蛹蟲草固體菌種的活性更強(qiáng)，對(duì)雜菌的抵抗力高。
相同條件下，由本發(fā)明培養(yǎng)的蛹蟲草固體菌種擴(kuò)增的液體菌種，每100ml液體菌種內(nèi)的干物質(zhì)量在12.3 12.8g之間，靜置分層時(shí)間在120h以上；而經(jīng)普通方法培養(yǎng)的蛹蟲草固體菌種擴(kuò)增的液體菌種，每100ml液體菌種內(nèi)的干物質(zhì)量?jī)H為8. 7 9. 2g之間，靜置分層時(shí)間不超過(guò)100h;通過(guò)本發(fā)明培養(yǎng)的蛹蟲草固體菌種擴(kuò)增的液體菌種，單位體積內(nèi)的干物質(zhì)含量更多，意味著其中的菌絲含量更高，菌絲增殖更快，活性更高。與此同時(shí)，該液體菌種的穩(wěn)定性更好，更有利于操作。
以上兩種液體菌種分別接種到生產(chǎn)培養(yǎng)基后，相同培養(yǎng)條件下，由本發(fā)明培養(yǎng)的蛹蟲草固體菌種擴(kuò)增的液體菌種在生產(chǎn)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)更快，表現(xiàn)在出現(xiàn)同樣大小的菌斑時(shí)，本發(fā)明培養(yǎng)的蛹蟲草固體菌種擴(kuò)增的液體菌種所用的時(shí)間更短， 一般為49 58h，相比而言，普通方法培養(yǎng)的蛹蟲草固體菌種擴(kuò)增的液體菌種需要更長(zhǎng)的時(shí)間， 一般為68 77h，可見(jiàn)，經(jīng)本發(fā)明培養(yǎng)的蛹蟲草固體菌種，能夠縮短蛹蟲草培養(yǎng)的周期。
以上的優(yōu)點(diǎn)表明，經(jīng)過(guò)本發(fā)明培養(yǎng)的蛹蟲草固體菌種，性能有了很大的提高，有利于蛹蟲草的人工培養(yǎng)，本發(fā)明是一種值得推廣的蛹蟲草固體菌種培養(yǎng)方法。
權(quán)利要求
1.蛹蟲草固體菌種培育方法，其特征在于其培育過(guò)程包括以下步驟1)制備普通斜面固體培養(yǎng)基；2)接種蛹蟲草菌種；3)暗激發(fā)培養(yǎng)將接種好的菌種在23～25℃下遮光培養(yǎng)3天，將溫度降低至20～23℃，繼續(xù)遮光培養(yǎng)4天；4)光激發(fā)將經(jīng)過(guò)暗激發(fā)培養(yǎng)的菌種在自然散光下培養(yǎng)24小時(shí)，孢子成熟，完成蛹蟲草固體菌種的培育。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種蛹蟲草固體菌種培育方法。本發(fā)明中，蛹蟲草菌種接種到斜面固體培養(yǎng)基中后，在23～25℃下遮光培養(yǎng)3天，將溫度降低至20～23℃，繼續(xù)遮光暗激發(fā)培養(yǎng)4天，再在自然散光照射下培養(yǎng)24小時(shí)。根據(jù)本發(fā)明方法培育的蛹蟲草固體菌種，氣生菌絲更發(fā)達(dá)，氣生菌絲較普通方法培育的粗大1.5倍以上，且分枝更多，不易斷裂；菌苔更結(jié)實(shí)、肥厚，顏色鮮黃；孢子個(gè)體更大，菌種的活性高，對(duì)雜菌的抵抗力更強(qiáng)。由經(jīng)擴(kuò)增成液體菌種，單位液體培養(yǎng)基中菌絲含量更高，活性高，長(zhǎng)期靜置不易分層，分布性好，使用方便。液體菌種接種到生產(chǎn)培養(yǎng)基后，菌落生長(zhǎng)快，轉(zhuǎn)色所用時(shí)間短，能縮短生產(chǎn)周期。
文檔編號(hào)A01G1/04GK101627700SQ20091030563
公開(kāi)日2010年1月20日 申請(qǐng)日期2009年8月14日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月14日
發(fā)明者呂尚廉, 鄭杰輝, 坤 項(xiàng) 申請(qǐng)人:鄭杰輝;項(xiàng) 坤