專利名稱：植物成長調(diào)節(jié)劑組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物成長調(diào)節(jié)劑組合物。
背景技術(shù)：
在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域中，控制植物的成長是用于提高生產(chǎn)率的重要技術(shù)。目前，以抑制植物 的成長為目的的種類繁多的植物成長調(diào)節(jié)劑被實(shí)用化，對作物的產(chǎn)量、生產(chǎn)物的品質(zhì)提高 作著貢獻(xiàn)。但是，促進(jìn)根須發(fā)達(dá)的植物成長調(diào)節(jié)劑，其數(shù)量少，效果也不充分，進(jìn)而具有不適 宜作用的情況多。例如，目前作為生根劑被廣泛使用的植物生長素(Auxin)類化合物，由于 根據(jù)植物的種類、狀態(tài)、施用的濃度有時會引起葉的偏上成長、莖的扭轉(zhuǎn)、莖斷裂、根瘤的誘 發(fā)、進(jìn)而枯死等不適宜的作用，因此使用方法、使用量等受到限制，而且促進(jìn)根須發(fā)達(dá)的作 用也不能得到充分滿足。此外，小麥、稻等禾本科植物即使開花、受精正常進(jìn)行，若因受到此后的氣象條件 等的影響而不能充分成熟，則會導(dǎo)致產(chǎn)量的降低，因此成為問題，改善這種現(xiàn)象的植物成長 調(diào)節(jié)劑的數(shù)量少，效果也不充分。雖然已知苯乳酸具有促進(jìn)植物生根的作用(非專利文獻(xiàn)1)，但由于其作用弱， 所以單獨(dú)作為植物成長調(diào)節(jié)劑尚未達(dá)到實(shí)用化。而且，報道了乳酸菌(Enterococcus faecalis)所產(chǎn)生的苯乳酸具有抗菌性(專利文獻(xiàn)1)。此外，報道了色氨酸在特定植物的特定組織中，作為植物荷爾蒙一吲哚乙酸的前 體起作用(非專利文獻(xiàn)2)，但一般看不到這樣的效果，作為植物成長調(diào)節(jié)劑尚未被實(shí)用化。專利文獻(xiàn)1 日本特開2000-300284號公報非專禾丨J 文獻(xiàn) 1 :Mikami et al. 1970. Several synthetic hydroxy-acids as plantgrowth regulators. Agricultural and Biological Chemistry 34:977—979.非專禾Ij 文獻(xiàn) 2 :Law 1987. Gibberellin-enhanced indole-3-acetic acid biosynthesis :D-Tryptophan as the precursor of indole-3-acetic acid. Physiol. Plant. 70 :626_632.

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的目的是提供具有促進(jìn)植物生根的作用、促進(jìn)禾本科植物成熟的作 用的植物成長調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明人等為了解決所述問題，潛心研究后，結(jié)果意外地發(fā)現(xiàn)通過并用苯乳酸 與色氨酸，促進(jìn)植物生根的效果、促進(jìn)禾本科植物成熟的效果被大幅增強(qiáng)，從而完成了本發(fā) 明。因此，本發(fā)明提供含有苯乳酸或其鹽、和色氨酸或其鹽的植物成長調(diào)節(jié)劑組合物。此外，本發(fā)明提供一種植物成長調(diào)節(jié)方法，其特征在于，將苯乳酸或其鹽、和色氨 酸或其鹽施用于植物。
本發(fā)明的植物成長調(diào)節(jié)劑組合物，由于促進(jìn)植物生根的活性高，且葉的偏上成長 促進(jìn)作用這樣的副作用極弱，因而可以作為植物的成長調(diào)節(jié)劑、特別是生根促進(jìn)劑在整個 生長期間使用。作為育苗期、移植時的生根促進(jìn)劑尤其有用。此外，還可用作促進(jìn)禾本科植 物的子實(shí)發(fā)育的成熟促進(jìn)劑。另外，促進(jìn)植物生根的活性高，因而可用作農(nóng)藥、肥料添加劑， 而且其本身也可用作肥料。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的植物成長調(diào)節(jié)劑組合物的有效成分(以下稱為“植物成長調(diào)節(jié)物質(zhì)”)為 苯乳酸或其鹽、和色氨酸或其鹽。本發(fā)明中使用的植物成長調(diào)節(jié)物質(zhì)中，色氨酸可以是D型、L型、或兩者的混合物， 但優(yōu)選L型。該色氨酸可以是市售品，也可以使用通過有機(jī)合成、微生物發(fā)酵而制造的色氨酸。 另外，可以使用含有色氨酸或其鹽的組合物，例如，可以列舉含有色氨酸的微生物發(fā)酵培養(yǎng) 液、以色氨酸為構(gòu)成成分的蛋白質(zhì) 肽(所謂的蛋白態(tài))或其分解物等，其中，特別優(yōu)選不 是蛋白態(tài)，而是色氨酸或其鹽、或含有色氨酸或其鹽的培養(yǎng)液。作為色氨酸的制造方法，例如，通過大木等人的方法以工業(yè)方式合成DL型，進(jìn)而 通過將其進(jìn)行光學(xué)分離而得到D型和L型[大木等(編).《化學(xué)辭典》東京化學(xué)同人]。 另外，通過使用了微生物的發(fā)酵法、微生物轉(zhuǎn)化法、使用了來源于微生物的酶的酶法也可以 得到L型[椎尾勇1986.色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸發(fā)酵.相田等(編).《氨基酸發(fā)酵》 343-360頁.學(xué)會出版中心]。本發(fā)明中使用的植物成長調(diào)節(jié)物質(zhì)中，苯乳酸(3-苯基乳酸)可以是D型、L型、 或兩者的混合物，但優(yōu)選D型。該苯乳酸可以是市售品，也可以使用通過有機(jī)合成、微生物發(fā)酵而制造的苯乳酸。另外，作為植物成長調(diào)節(jié)物質(zhì)，也可以使用含有苯乳酸或其鹽的組合物，例如可以 列舉食醋等，如后述實(shí)施例所記載，由于明確了苯乳酸生產(chǎn)性微生物的培養(yǎng)液、例如玉米漿 中含有苯乳酸，它們也可以用作植物成長調(diào)節(jié)物質(zhì)，因此也可以將它們原樣使用，另外也可 以將它們濃縮、稀釋或懸浮后使用。此時，當(dāng)然希望在制造玉米漿時預(yù)先接種苯乳酸生產(chǎn)能 力高的乳酸菌株。苯乳酸可以通過使重氮鹽在酸性水溶液中進(jìn)行熱分解而得到，所述重氮鹽是通過 將苯丙氨酸重氮化而得到的[Kimura and Tamura 1973. Isolation ofL-β-phenyllactic acid and tyrosol as plant growth regulators from Gloeosporium laeticolor. Agricultural and Biological Chemistry 37:2925]。另外，也可以通過將苯丙氨酸溶解 于硫酸中，并添加亞硝酸鈉的所謂van Slyke法而得到[Koga et al. 1971. Examinations on the neighboring aryl group participation in nitrous acid deaminations of L-phenylalanine and its p-nitro and p-methoxy derivatives. Tetrahedron Lett. 25 2287-2290.]。另外，苯乳酸也可以通過在通常使用的培養(yǎng)基中培養(yǎng)苯乳酸生產(chǎn)性的微生物而得 到。此時，作為培養(yǎng)基，除了可以使用通常使用的培養(yǎng)基(MRS培養(yǎng)基、GYP培養(yǎng)基等)之外， 還可以使用玉米提取液。另外，如果在培養(yǎng)基中增加作為苯乳酸底物的苯丙氨酸[日本化學(xué)會(編)1997.《細(xì)胞機(jī)能與代謝圖(I)》東京化學(xué)同人]的添加量，則也可以使苯乳酸的
量增大。作為該微生物，例如可以列舉乳酸菌屬菌、腸球菌屬菌等的乳酸菌等，優(yōu)選為 乳酸菌屬菌。具體而言，作為乳酸菌屬菌，可以列舉例如鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum) [Valerio et al. 2004. Production of phenyllactic acid by lactic acid bacteria :an approach to the selection of strains contributing to food quality and preservation. FEMS Microbiol. Lett. 233 289-295.]，作為腸球菌屬菌，可以列舉糞腸球菌(Enterococcus faecalis)[日本特開 2000-300284號公報]，其中，優(yōu)選鼠李糖乳桿菌和植物乳桿菌，特別優(yōu)選鼠李糖乳桿菌 (FERM P-13245)株、植物乳桿菌(FERMP-18930)株、以及植物乳桿菌N株，在這些菌株中，前 2株分別于平成4(1992)年11月6日及平成14(2002)年7月9日保藏在產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研 究所專利生物保藏中心(地址茨城縣筑波市東1-1-1中央第6)。另外，玉米漿是制造玉米淀粉時的副產(chǎn)物之一，是在制造工序中進(jìn)行乳酸發(fā)酵而 得到的(三輪泰造1979.玉米加工工業(yè)副產(chǎn)物.《配合飼料講座(下卷) 265-269頁.畜 產(chǎn)出版社.)。另外，已知食醋中含有苯乳酸，因此可以利用食醋。另外，還可以通過離子交換樹脂、多孔合成吸附劑、溶劑萃取等從上述含有苯乳酸 的培養(yǎng)液中將苯乳酸部分純化或純化分離后使用。例如，玉米漿的部分純化物可以通過如下方式得到將玉米漿水溶液的PH調(diào)節(jié)到 中性區(qū)域(pH5 8)后，使其吸附于強(qiáng)堿性離子交換樹脂或弱堿性離子交換樹脂后，用含酸 的醇水溶液洗脫而得到。此時，優(yōu)選將吸附前的離子交換樹脂置換為甲酸型或乙酸型等。作為該溶液的酸濃度，優(yōu)選為0. 01 4N，更優(yōu)選1 3N。作為該酸，可以列舉甲
酸、乙酸、鹽酸、硫酸等。作為該溶液的醇濃度，優(yōu)選為0 80容量％，更優(yōu)選10 30容量％。作為該醇， 可以列舉甲醇、乙醇、丁醇、異丙醇等。另外，例如，玉米漿的部分純化物可以通過如下方式得到將玉米漿水溶液的PH 調(diào)節(jié)到酸性區(qū)域(pHl 4)后，使其吸附于聚苯乙烯系合成吸附劑、苯乙烯-二乙烯基苯系 吸附劑或甲基丙烯酸系合成吸附劑后，用醇水溶液或酮水溶液洗脫而得到。作為該溶液的醇或酮濃度，優(yōu)選為0 99容量％，更優(yōu)選10 30容量％。作為 該醇，可以列舉甲醇、乙醇、丁醇、異丙醇等。作為該酮，可以列舉丙酮等。另外，當(dāng)苯乳酸生產(chǎn)性微生物的培養(yǎng)液中含有色氨酸或其鹽時，可以將該培養(yǎng)液 直接作為本發(fā)明的植物成長調(diào)節(jié)劑組合物使用。但是，當(dāng)培養(yǎng)液中色氨酸或其鹽的含量少 時，可以進(jìn)一步添加色氨酸或其鹽。另外，作為苯乳酸或色氨酸的鹽，沒有特別限定，可以列舉鈉、鉀等堿金屬類；鈣、 鎂等堿土金屬類；氨；檸檬酸、酒石酸、草酸、乳酸、乙酸等的有機(jī)酸鹽；磷酸、碳酸、硝酸、硫 酸、鹽酸等的無機(jī)酸鹽等。本發(fā)明的植物成長調(diào)節(jié)劑組合物中的苯乳酸或其鹽、和色氨酸或其鹽的含有比， 從通過并用這2種成分而得到的植物成長調(diào)節(jié)效果、增強(qiáng)效果的方面看，按質(zhì)量比計，優(yōu)選 為1 700 99 1，更優(yōu)選1 600 99 1，進(jìn)一步優(yōu)選1 500 99 1，格外優(yōu)選1 200 9 1，特別優(yōu)選1 50 9 1。此時，制成溶液時，苯乳酸或其鹽優(yōu)選含 有0. Ippm以上，另外色氨酸或其鹽優(yōu)選含有Ippm以上。本發(fā)明的植物成長調(diào)節(jié)劑組合物可以通過將上述植物成長調(diào)節(jié)物質(zhì)和其他的任 意成分按照常規(guī)方法混合、攪拌等而制造。本發(fā)明的植物成長調(diào)節(jié)劑組合物可以是上述植物成長調(diào)節(jié)物質(zhì)的混合物本身，也 可以用通常的植物成長調(diào)節(jié)劑中使用的載體制劑化成可濕性粉劑、乳劑、粒劑、粉劑等。制劑的形狀也沒有限制，可以成型為粉劑、顆粒劑、粒劑、可濕性粉劑、流動劑 (flowable agent)、乳劑和貼劑等所有制劑形態(tài)。作為固體載體，例如，可以使用礦物粉末(高嶺土、膨潤土、粘土、蒙脫石、滑石、硅 藻土、云母、蛭石、石膏、碳酸鈣、磷石灰等)、植物粉末(大豆粉、小麥粉、木粉、煙草粉、淀 粉、結(jié)晶纖維素等)、高分子化合物(石油樹脂、聚乙烯醇樹脂、聚乙酸乙烯酯樹脂、聚氯乙 烯、酮樹脂等)、以及氧化鋁、蠟類等。另外，作為液體載體，例如，可以使用醇類(甲醇、乙 醇、丙醇、丁醇、乙二醇、芐醇等)、芳香烴類(甲苯、苯、二甲苯等)、氯化烴類(氯仿、四氯化 碳、單氯苯等)、醚類(二P悉烷、四氫呋喃等)、酮類(丙酮、甲基乙基酮、環(huán)己烷等)、酯類 (乙酸乙酯、乙酸丁酯等)、酸酰胺類(N，N-二甲基乙酰胺等)、醚醇類(乙二醇乙基醚等)、 或水等。作為以乳化、分散、擴(kuò)散等為目的而使用的表面活性劑，可以使用非離子性、陰離 子性、陽離子性和兩離子性中的任一種。若列舉可以在本發(fā)明中使用的表面活性劑的例 子，則有聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯烷基芳基醚、聚氧乙烯脂肪酸酯、失水山梨糖醇脂肪酸 酯、聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、氧化 乙烯聚合物、氧化丙烯聚合物、聚氧乙烯烷基磷酸酯、脂肪酸鹽、烷基硫酸酯鹽、烷基磺酸 鹽、烷基芳基磺酸鹽、烷基磷酸鹽、烷基磷酸酯鹽、聚氧乙烯烷基硫酸酯、季銨鹽、氧烷基胺 (oxyalkyl amine)、卵磷脂、皂角苷等。另外，根據(jù)需要可以將明膠、酪蛋白、藻酸鈉、淀粉、 瓊脂、聚乙烯醇等作為輔助劑使用。將本發(fā)明的植物成長調(diào)節(jié)劑組合物制成水溶液或懸浮液時的pH(25°C)，優(yōu)選為 2 8，作為調(diào)節(jié)該pH的緩沖劑，可以列舉乙酸、檸檬酸、富馬酸、蘋果酸、乳酸、葡糖酸、酒石 酸等的有機(jī)酸鹽、磷酸、鹽酸、硫酸等的無機(jī)鹽、氫氧化鈉等氫氧化物、氨或氨水等，也可以 將這些物質(zhì)單獨(dú)使用或組合2種以上使用，進(jìn)而也可以與其他的pH調(diào)節(jié)劑適當(dāng)?shù)亟M合。本發(fā)明的植物成長調(diào)節(jié)劑組合物具有使根的量增加的作用、促進(jìn)整個生長過程的 作用等，但特別優(yōu)選作為生根促進(jìn)劑、禾本科植物的成熟促進(jìn)劑使用。另外，由于本發(fā)明的植物成長調(diào)節(jié)劑組合物含有氨基酸，因而也可以將其直接用 作肥料。將本發(fā)明的植物成長調(diào)節(jié)劑組合物施用于植物時，可以直接原樣使用，或者也可 以用水稀釋或懸浮到規(guī)定濃度后使用。另外，也可以將苯乳酸或其鹽、和色氨酸或其鹽制備成各個不同的制劑，將它們同 時用于植物。施用于植物時，可以作為土壤處理劑、莖葉處理劑、播種前的種子處理劑、移植前 植物的處理劑和對移植時的植物的處理劑等使用。另外，在水耕栽培中，可以混合在水耕液 中來使用，在組織培養(yǎng)中，可以使其懸浮或溶解在培養(yǎng)基中來使用。
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將本發(fā)明的植物成長調(diào)節(jié)劑組合物用作撒播用途時的使用濃度，以苯乳酸或 其鹽、和色氨酸或其鹽的合計濃度計，可以優(yōu)選為0.01 lOOOOOppm，更優(yōu)選為1 lOOOOppm，特別優(yōu)選為5 IOOOppm的范圍。特別是用于育苗期的苗時，優(yōu)選每IL培養(yǎng)土 撒播50 200mL上述濃度的稀釋液。另外，作為禾本科植物的成熟促進(jìn)劑使用時，優(yōu)選每 Iha 土地面積撒播200 2000L。在這些情況下，可以使用擴(kuò)展劑(spreading agent)，對于 所用的擴(kuò)展劑的種類和使用量沒有特別限制。作為包括與肥料混合時的、直接施用于土壤時的使用量，以苯乳酸或其鹽、和色氨 酸或其鹽的合計濃度計，優(yōu)選為每1公頃使用100 lOOOOg，特別優(yōu)選使用500 5000g。 特別是用于育苗期的苗時，優(yōu)選每IL培養(yǎng)土使用0. 001 10g。這種情況下，可以在播種前 的培養(yǎng)土里預(yù)先混合，也可以在育苗期間撒播。作為播種前的種子處理用途而使用時，也可以以在水、醇類(甲醇、乙醇等)、酮類 (丙酮等)、醚類(二乙基醚等)、酯類(乙酸乙酯等)等液體載體中苯乳酸或其鹽、和色氨 酸或其鹽的合計濃度為0. 01 lOOOOOppm的方式進(jìn)行稀釋或懸浮，然后對干燥種子噴霧， 或?qū)⒏稍锓N子浸漬于稀釋液中使種子吸收。作為浸漬時間，沒有特別限制，優(yōu)選為1秒 30 分鐘。另外，處理后的種子也可以通過風(fēng)干、減壓干燥、加熱干燥、真空干燥等使液體載體蒸 發(fā)。另外，也可以使使用粘土等礦物粉末的固體載體制劑化而成的物質(zhì)附著于種子表面來 使用。另外，也可以混合到通常使用的種衣劑、種子包衣膜中而包覆種子。在用于組織培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)時的情況下，作為在通常使用的植物組織培養(yǎng)用的培 養(yǎng)基(MS培養(yǎng)基、White培養(yǎng)基、Gamborg的B5培養(yǎng)基等)中的濃度，可以溶解或懸浮到以 苯乳酸或其鹽、和色氨酸或其鹽的合計濃度計優(yōu)選為0. 01 lOOOOppm、特別優(yōu)選0. 1 IOOOppm的范圍來使用。這種情況下，如通常所進(jìn)行的那樣，可以適當(dāng)添加作為碳源的糖類 (蔗糖、葡萄糖等)、作為各種植物荷爾蒙的細(xì)胞分裂素(芐基腺嘌呤、激動素等)、植物生長 素(吲哚乙酸、萘乙酸等)、赤霉素(GA3、GA4等)、脫落酸等。使移植前的植物直接吸收時，可以將植物的根部或整體浸漬在稀釋或懸浮到以苯 乳酸或其鹽、和色氨酸或其鹽的合計濃度計為0. 1 IOOOppm的液體中而使用。另外，只要 是插穗、插芽、插條等，則可以將基部或整體浸漬后使用。此時的浸漬時間為1秒 1周，特 別優(yōu)選1分鐘 3天。另外，可以使使用礦物粉末的固體載體制劑化而成的物質(zhì)附著于根 部，或者在插穗、插芽、插條等時使其附著于莖基部。作為本發(fā)明的植物成長調(diào)節(jié)劑組合物的給藥時期，雖然在生長期中的任一時期都 可以使用，但特別是作為生根促進(jìn)劑應(yīng)用的時候，是在播種前、播種時、苗培育時，移植等伴 隨耕種斷根的作業(yè)的前后、由于氣象原因等導(dǎo)致根發(fā)育受阻或根產(chǎn)生障礙等情況下特別有 效。另外，作為禾本科植物的成熟促進(jìn)劑使用時，開花期以后至黃熟期的期間為有效。如果將本發(fā)明的植物成長調(diào)節(jié)劑組合物作為生根促進(jìn)劑應(yīng)用于植物，則通過側(cè)根 數(shù)、不定根數(shù)等根數(shù)的增加而使根的量、根密度增加，因此可以得到苗移植時的存活率提 高、壯苗育成、生長促進(jìn)、吸水力提高、吸肥力提高、肥料成分利用率提高、綠色的保持、光合 成能力提高、缺水耐受力提高、倒伏的防止、產(chǎn)量增加等效果。另外，如果作為禾本科植物的 成熟促進(jìn)劑使用時，由于每一粒子實(shí)的重量增加，因而可以得到產(chǎn)量增加等效果。作為成為本發(fā)明的植物成長調(diào)節(jié)劑組合物的應(yīng)用對象的植物，沒有特別限定，例 如可以列舉西紅柿、青椒、辣椒、茄子等茄果類；黃瓜、南瓜、白蘭瓜、西瓜等瓜類；芹菜、歐芹、萵苣等生菜_香辛菜類；大蔥、洋蔥、大蒜等蔥類；大豆、花生、菜豆、豌豆、小豆等豆類； 草莓等其他果菜類；蘿卜、蕪菁、胡蘿卜、牛蒡等直根類；芋頭、木薯、馬鈴薯、甘薯、家山芋 等薯芋類；蘆筍、菠菜、鴨兒芹等葉菜(柔菜)類；土耳其桔梗、紫羅蘭、康乃馨、菊等花卉 類；稻、小麥、大麥、燕麥、玉米等谷物類；剪股穎、溝葉結(jié)縷草等草類；菜籽、向日葵等油料 作物類；甘蔗、甜菜等糖料作物類；棉、燈心草等纖維料作物類；三葉草、高粱、白齒形(頂 陷)玉米等飼料作物類；蘋果、梨、葡萄、桃等落葉性果樹類；溫州蜜柑、檸檬、葡萄柚等柑橘 類；杜鵑、映山紅、杉等木本類。其中，用作生根促進(jìn)劑時，對西紅柿、青椒、辣椒、茄子、黃瓜、南瓜、白蘭瓜、西瓜、 芹菜、歐芹、萵苣、大蔥、洋蔥、蘆筍、土耳其桔梗、紫羅蘭、稻、剪股穎、溝葉結(jié)縷草、甜菜、燈 心草等在栽培中進(jìn)行移植的植物、對菊、康乃馨、杜鵑、映山紅、葡萄等通過折枝、插穗而使 之發(fā)根從而進(jìn)行增殖的植物特別有效。另外，作為禾本科植物的成熟促進(jìn)劑使用時，對小 麥、稻、大麥、燕麥等子實(shí)未被包皮覆蓋的植物特別有效。另外，以提高本發(fā)明的效果為目的，可以與其他的植物成長調(diào)節(jié)劑并用，根據(jù)情況 也能期待協(xié)同效果。例如，作為生根促進(jìn)劑使用時，在高栽植密度、高濕度、日照不足等極易 徒長的條件下的育苗時，以地上部分和地下部分的重量比小的優(yōu)質(zhì)苗的育成為目的，也可 以與具有強(qiáng)的莖伸長抑制作用的赤霉素抑制劑(多效唑、烯效唑、環(huán)丙嘧啶醇等)、成長抑 制劑(丁酰胼等)、乙烯產(chǎn)生劑(乙烯利等)并用。另外，在插穗、插芽、插條、組織培養(yǎng)時， 以增強(qiáng)生根促進(jìn)效果為目的，也可以與植物生長素類化合物(吲哚乙酸、吲哚丁酸、萘基乙 酰胺、萘乙酸等)并用。另外，在播種前的種子處理時，也可以與具有發(fā)芽促進(jìn)作用的赤霉 素劑并用。另外，作為禾本科植物的成熟促進(jìn)劑使用時，也可以與土菌消、稻瘟靈等其他成 熟比例提高劑并用。這些僅僅是例示，可以與本發(fā)明的植物成長調(diào)節(jié)劑并用的其他植物成 長調(diào)節(jié)劑并不限于這些。另外，本發(fā)明的植物成長調(diào)節(jié)劑組合物，也可以與各種殺蟲劑、殺菌劑、微生物農(nóng) 藥、肥料等混用或并用。特別是，作為生根促進(jìn)劑使用時，與報道除具有殺菌作用以外還具 有生根促進(jìn)作用的土菌消、磺菌威、甲霜靈等并用是有效的。另外，與育苗期使用的殺蟲殺 菌劑混用是特別有效的。另外，與肥料并用時，在與以壯苗育成為目的的育苗用肥料并用、 與以促進(jìn)存活為目的的即將移植前施用肥料并用是特別有效的。另外，在與以使本發(fā)明的 植物成長調(diào)節(jié)劑組合物的效力長期持續(xù)、提高肥料成分利用率為目的的緩效性肥料混用也 特別有效。另外，作為禾本科植物的成熟促進(jìn)劑使用時，與尿素、磷酸銨、氨基酸等其他葉面 撒播用肥料混用也是有效的。實(shí)施例下面，示出實(shí)施例，更詳細(xì)地說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不限于以下的實(shí)施例。制造例1<采用使用了合成培養(yǎng)基的乳酸菌培養(yǎng)的制造法>將乳酸菌-鼠李糖乳桿菌FERM P-13245株和植物乳桿菌FERM P-18930株接 種到在 Morishita 等設(shè)計的培養(yǎng)基[Morishita et al. 1981. Multiple nutritional requirements of Lactobacilli :genetic lesions affecting amino acid biosynthetic pathways. J. Bacteriol. 148 64-71.]中加入了若干改變而成的合成培養(yǎng)基(將葡萄糖
810g、乙酸鈉6g、檸檬酸銨lg、磷酸一鉀3g、磷酸二鉀3g、硫酸鎂七水合物0. 5g、硫酸鐵七水 合物0. 02g、硫酸錳七水合物0. 05g,Tween-80 (注冊商標(biāo))lg、吡哆醛2mg、泛酸鈣lmg、核黃 素lmg、煙酸lmg、對氨基苯甲酸0. 2mg、生物素0. Olmg、葉酸0. lmg,L-精氨酸0. lg、L_天冬 氨酸0. 2g、L-半胱氨酸0. 2g、L-谷氨酸0. 2g、L-異亮氨酸0. lg、L-亮氨酸0. lg、L-賴氨 酸0. lg、L-蛋氨酸0. lg、L-絲氨酸0. lg、L-蘇氨酸0. lg、L-色氨酸0. lg、L_酪氨酸0. lg、 L-纈氨酸0. Ig和L-苯丙氨酸5g溶解于IL蒸餾水中，在121°C采用高壓釜進(jìn)行10分鐘滅 菌而調(diào)制)上，在27°C培養(yǎng)3天。粗純化如下進(jìn)行。S印Pak PS-2 (Waters公司制)預(yù)先用99%甲醇清洗，接著用 pH3. 0乙酸水進(jìn)行環(huán)境適應(yīng)(順化)。將培養(yǎng)液各30mL用稀鹽酸調(diào)節(jié)到pH 3. 0，以6500rpm 進(jìn)行離心分離30分鐘，使上清液IOmL通過進(jìn)行了調(diào)整的柱子，將苯乳酸吸附。接著，用5mL 的IN乙酸水清洗柱子后，用40%甲醇20mL進(jìn)行洗脫。將洗脫液用蒸發(fā)器濃縮至約500mL， 用氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)到PH8. 0，用乙酸乙酯進(jìn)行3次萃取，廢棄乙酸乙酯層。將剩余的水 相用鹽酸調(diào)成PH2. 5，進(jìn)行3次乙酸乙酯萃取。將得到的乙酸乙酯層用無水硫酸鎂進(jìn)行脫水 后，在減壓下除去溶劑。將殘渣用少量的10%甲醇溶解，使其通過以流過10%甲醇而進(jìn)行 了調(diào)整的S印Pak C18柱子(Waters公司制)，進(jìn)而，用20mL的10%甲醇進(jìn)行洗脫。將洗脫 液在減壓下進(jìn)行干燥固化。該樣品用HPLC (柱、Puresil C18內(nèi)徑4. 6mmX長度250mm(Waters公司制)；柱溫 為40°C;流動相為含乙酸的40%甲醇；流速為0. SmL/分鐘)進(jìn)行分析。在10. 22分鐘 看到峰，這與試劑苯乳酸(Sigma-Aldrich Japan)大體一致。測定該峰的紫外線吸收光譜， 結(jié)果在259nm看到最大吸光，與試劑苯乳酸一致。將在260nm處測定的峰面積與用試劑苯 乳酸制成的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，結(jié)果算出培養(yǎng)液中的苯乳酸濃度在乳酸菌-鼠李糖乳桿菌 FERM P-13245株接種區(qū)為78mg/L、在植物乳桿菌FERM P-18930株接種區(qū)為147mg/L。于是，將這些培養(yǎng)液制成乳酸菌培養(yǎng)液本身，在該乳酸菌培養(yǎng)液本身中加入L-色 氨酸(和光純藥(株))并使其濃度為苯乳酸濃度的10分之1，將如此調(diào)制成的物質(zhì)作為乳 酸菌培養(yǎng)液和L-色氨酸的混合物。制造例2<采用使用了玉米提取液的乳酸菌培養(yǎng)的制造法>將玉米粉(Sigma-Aldrich Japan) 50g加入IL蒸餾水中，將在85°C進(jìn)行1小時提 取而得的物質(zhì)以6500rpm進(jìn)行離心分離30分鐘，得到上清液。將該上清液用高壓釜進(jìn)行滅 菌，接種植物乳桿菌FERM P-18930株，在27°C培養(yǎng)4天。將培養(yǎng)液與制造例1同樣地進(jìn)行 分析，結(jié)果苯乳酸濃度為0. 25mg/L。于是，將這些培養(yǎng)液制成玉米乳酸菌培養(yǎng)液本身，在每IL該培養(yǎng)液中加入 0. 025mg的L-色氨酸(和光純藥(株))，將如此調(diào)制成的物質(zhì)作為玉米乳酸菌培養(yǎng)液和 L-色氨酸的混合物。制造例3<使用玉米漿的制造法>在玉米漿(和光純藥)1. 5L中加入等量的蒸餾水，用氫氧化鈉調(diào)成pH7。使其流 過調(diào)整為甲酸型的強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂Diaion (注冊商標(biāo))PA418柱(內(nèi)徑45mmX長度 550mm)，從而將苯乳酸和色氨酸吸附，用蒸餾水IL清洗后，用含有2N甲酸30%的異丙醇溶液2L進(jìn)行洗脫。洗脫液通過減壓濃縮餾去異丙醇，使用氫氧化鈉調(diào)節(jié)為PH3.0。另外，將 苯乙烯-二乙烯基苯系合成吸附樹脂Diaion(注冊商標(biāo))HP-20用甲醇清洗后，填充于柱 (內(nèi)徑45mmX長度550mm)中，流過pH3. O乙酸水進(jìn)行調(diào)整。通過使上述的濃縮液流過該 柱，將苯乳酸吸附。將柱用PH3.0乙酸水IL清洗后，用20%異丙醇2L洗脫苯乳酸。將洗 脫液用蒸發(fā)器濃縮至約500mL，用氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)為pH8. 0，用乙酸乙酯進(jìn)行3次萃取， 將乙酸乙酯層廢棄。將剩余的水相用鹽酸調(diào)成pH2. 5，進(jìn)行3次乙酸乙酯萃取。將得到的 乙酸乙酯層用無水硫酸鎂脫水后，進(jìn)行減壓干燥固化。將該樣品供于硅膠柱(內(nèi)徑20mmX 長度250mm)，用正己烷乙酸=99 1的混合液清洗后，用正己烷乙酸乙酯乙酸= 39 60 1的混合液進(jìn)行洗脫。將洗脫液減壓濃縮，將殘渣用少量的10%甲醇溶解，使其 通過以流過10%甲醇而進(jìn)行了調(diào)整的S印Pak C18柱子(Waters公司制)，進(jìn)而，用20mL的 10%甲醇進(jìn)行洗脫。將洗脫液在減壓下進(jìn)行干燥固化。該樣品用HPLC(柱、YMC C8內(nèi)徑20_Χ長度250_(YMC公司制)；柱溫為室溫； 流動相為含有乙酸50%的甲醇；流速為6mL/分鐘)進(jìn)行純化，分離取出相當(dāng)于苯乳酸 的部份(保留時間20 25分鐘)。進(jìn)而將分離取出的部份用HPLC(柱、YMC ODS-A內(nèi)徑 IOmmX長度250mm(YMC公司制)；柱溫為室溫；流動相為含有乙酸45%的甲醇；流速為 2mL/分鐘)進(jìn)行純化，分離取出相當(dāng)于苯乳酸的部份(保留時間19 22分鐘)。進(jìn)而將 分離取出的部份用HPLC(柱、YMC Phe內(nèi)徑IOmmX長度250mm(YMC公司制)；柱溫為室溫； 流動相為含有乙酸40%的甲醇；流速為2mL/分鐘)進(jìn)行純化，分離取出相當(dāng)于苯乳酸 的部份(保留時間17 20分鐘)。進(jìn)而將分離取出的部份用HPLC(柱、YMC ODS-A內(nèi)徑 IOmmX長度250mm(YMC公司制)；柱溫為室溫；流動相為含有1 %乙酸40 %的乙腈；流速 為2mL/分鐘)進(jìn)行純化，分離取出作為單峰的相當(dāng)于苯乳酸的部份(保留時間10 12分 鐘)。測定該峰的紫外線吸收光譜，結(jié)果在259nm看到最大吸光，與試劑苯乳酸一致。將得 到的部份在減壓下濃縮后，在五氧化二磷存在的條件下，在干燥器內(nèi)進(jìn)行減壓干燥，結(jié)果得 到44. 4mg苯乳酸的結(jié)晶。對該結(jié)晶用甘油進(jìn)行質(zhì)量分析(MS-FAB)，結(jié)果檢測出(M+H)+為 167. 0、添加NaCl的(M+Na)+為188. 9，與試劑苯乳酸一致。由該結(jié)果算出該玉米漿中苯乳 酸濃度為29. 6mg/L。于是，將該玉米漿制成玉米漿本身，添加L-色氨酸(和光純藥(株))并使其濃度 為15g/L，將如此調(diào)制成的物質(zhì)作為玉米漿和L-色氨酸的混合物。制造例4<采用用離子交換樹脂對玉米漿進(jìn)行部分純化的制造法>在玉米漿(Oji Cornstarch Co.，Ltd.制)IL中加入IL蒸餾水，用氫氧化鈉調(diào)成 PH7。使其流過調(diào)整為甲酸型的強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂PA418柱(Diaion(注冊商標(biāo))、內(nèi) 徑45mmX長度550mm)，從而將苯乳酸吸附，用蒸餾水IL清洗后，用含有2N甲酸30%的異 丙醇溶液2L進(jìn)行洗脫。將洗脫液濃縮為IOOmL后，加入氫氧化鈉調(diào)節(jié)為pH3。將該濃縮液與制造例1同樣地進(jìn)行純化、分析，結(jié)果苯乳酸濃度為747mg/L。于是，將該玉米漿制成玉米漿部分純化濃縮液(濃縮液)，添加L-色氨酸(和光純 藥(株))并使其濃度為75mg/L，將如此調(diào)制成的物質(zhì)作為玉米漿部分純化濃縮液和L-色 氨酸的混合物。制造例5
〈粉劑的制造法〉用與制造例4同樣的方法調(diào)制玉米漿部分純化濃縮液和L-色氨酸的混合物5L，將 膨潤土粉末 Kunigeru VA (夕二 m VA) (KUNIMINE INDUSTRIES 制)5kg 作為載體，使用連 續(xù)流動涂布機(jī)FBS-0. 5 (大川原制作所制)進(jìn)行吹送干燥，得到粉劑。此時，器內(nèi)溫度為50°C，添加速度為每分鐘40mL。實(shí)施例1<采用小豆切口浸漬處理進(jìn)行的苯乳酸和色氨酸混合物的生根促進(jìn)作用>調(diào)制DL-苯乳酸(Sigma-Aldrich Japan)和L-色氨酸(和光純藥)的合計濃度 為400ppm的水溶液，用鹽酸調(diào)成pH7，供于小豆生根促進(jìn)測試分析(Itagaki et al. 2003. Biological activities and structure-activity relationship of substitution compounds of N-[2-(3-indolyl)ethyl]succinamic acid and N-[2- (1-naphthyl)ethyl] succinamic acid、 derived from a new category of root-promoting substance、 N-(phenethyl) succinamic acid analogs. Plant Soil 255) 。 >|#/]、1 貞>t 白勺
在被檢液中浸漬72小時，計數(shù)7日后產(chǎn)生的不定根數(shù)。重復(fù)數(shù)為5棵。試驗以不同濃度進(jìn)行2次，將其結(jié)果示于表1和表2。另外，如表3所示地調(diào)整DL-苯乳酸(0，20ppm)和L-色氨酸(0，400，1200ppm)，與
上述同樣地進(jìn)行試驗，將其結(jié)果示于表3。從表1可以明確，即使是單獨(dú)的DL-苯乳酸，也可看到若干發(fā)根促進(jìn)作用，但以 DL-苯乳酸L-色氨酸=9 1 1 9的方式混合L-色氨酸時，生根促進(jìn)作用得到大幅 增強(qiáng)。另外，從表2可以明確，即使L-色氨酸相對于DL-苯乳酸的混合比率降低至 1 99，也顯示出大幅的協(xié)同作用。另外，從表3可以明確，即使L-色氨酸相對于DL-苯乳酸的混合比率增加到 600 1，也顯示出協(xié)同作用。[表 1]
權(quán)利要求
一種植物成長調(diào)節(jié)劑組合物，含有苯乳酸或其鹽、和色氨酸或其鹽。
2.如權(quán)利要求1所述的植物成長調(diào)節(jié)劑組合物，其中，苯乳酸或其鹽、和色氨酸或其鹽 的含有質(zhì)量比為1 600 99 1。
3.如權(quán)利要求1或2所述的植物成長調(diào)節(jié)劑組合物，其中，植物成長調(diào)節(jié)是促進(jìn)植物生根。
4.如權(quán)利要求1或2所述的植物成長調(diào)節(jié)劑組合物，其中，植物成長調(diào)節(jié)是促進(jìn)禾本科 植物成熟。
5.如權(quán)利要求1 4中任一項所述的植物成長調(diào)節(jié)劑組合物，其中，所述組合物含有苯 乳酸生產(chǎn)性微生物的培養(yǎng)液、和色氨酸或其鹽。
6.如權(quán)利要求5所述的植物成長調(diào)節(jié)劑組合物，其中，苯乳酸生產(chǎn)性微生物為乳酸菌。
7.如權(quán)利要求5或6所述的植物成長調(diào)節(jié)劑組合物，其中，苯乳酸生產(chǎn)性微生物的培養(yǎng) 液為玉米漿。
8.一種植物成長調(diào)節(jié)方法，其特征在于，將苯乳酸或其鹽、和色氨酸或其鹽施用于植物。
9.一種植物成長調(diào)節(jié)方法，其特征在于，將苯乳酸生產(chǎn)性微生物的培養(yǎng)液、和色氨酸或 其鹽施用于植物。
全文摘要
本發(fā)明提供植物成長調(diào)節(jié)劑組合物。所述植物成長調(diào)節(jié)劑組合物含有苯乳酸或其鹽、和色氨酸或其鹽。
文檔編號A01N37/36GK101951765SQ200980105448
公開日2011年1月19日 申請日期2009年2月19日 優(yōu)先權(quán)日2008年2月19日
發(fā)明者副島洋, 北村亨, 本間滿, 杉山民二, 桂川尚彥, 田中秀俊 申請人:雪印種苗株式會社