專(zhuān)利名稱(chēng)：對(duì)于糖尿病的動(dòng)物模型的制作方法
對(duì)于糖尿病的動(dòng)物模型本發(fā)明涉及產(chǎn)生一種糖尿病小鼠的方法，這種小鼠可以用在鑒別可以逆轉(zhuǎn)糖尿 病并且適合用于糖尿病及其并發(fā)癥的介入治療的化合物的方法中。在過(guò)去的幾十年中已經(jīng)見(jiàn)證了，肥胖癥(obesity)和2型糖尿病 (type-2-diabete) (T2D)的流行劇烈增長(zhǎng)，主要在美國(guó)并且還有在歐洲和發(fā)展中國(guó) 家發(fā)展。在世界各地，T2D代表了 85-90 %的所有糖尿病例(遺傳的胰島素依賴(lài) 性糖尿病(inherited insulin-dependent diabete)或TlD以及非胰島素依賴(lài)性糖尿病 (non-insulin-dependent-diabetes Mellitus)或 T2D)。雖然一些突變影響了 瘦蛋白途徑， 已經(jīng)鑒別了胰島素分泌物或其受體、或GLUT4(對(duì)胰島素敏感的葡萄糖運(yùn)輸)，肥胖癥和 T2D的大多數(shù)情況是非遺產(chǎn)來(lái)源的并且由生活方式(身體活動(dòng)的減少，高卡路里飲食等 等)引起。T2D和肥胖癥兩者都關(guān)聯(lián)了高的發(fā)病率、死亡率以及醫(yī)療保健成本，這是由 于它們的微血管以及大血管并發(fā)癥。T2D的主要特征是胰島素抗性以及胰島素分泌缺陷。胰島素是由胰島β細(xì)胞合 成并且分泌的關(guān)鍵激素，這種激素刺激了葡萄糖在各種器官(特別是肌肉、肝臟、以及 脂肪組織)中的吸收。胰島素通過(guò)控制編碼葡萄糖-6-磷酸酶的基因的表達(dá)還調(diào)節(jié)了肝 糖生成(HGP)，并且抑制了脂肪組織中的脂肪分解。當(dāng)目標(biāo)組織不能對(duì)正常濃度胰島素 作出反應(yīng)時(shí)，發(fā)生受損的胰島素功能(即胰島素抗性)。

一旦開(kāi)始了這種失調(diào)并且在缺少治療下，β細(xì)胞分泌了增加量的胰島素(=血 胰島素過(guò)多癥)以維持血糖正常(正常循環(huán)的葡萄糖水平)。然而，在缺少治療下，β細(xì) 胞不能產(chǎn)生足夠的胰島素，導(dǎo)致了循環(huán)葡萄糖的增加(高血糖癥(hyperglycaemia))。只 要足夠的β細(xì)胞是有生存力的，并且會(huì)分泌適當(dāng)速率的胰島素以維持血糖正常，T2D不 會(huì)發(fā)生。很多集團(tuán)在過(guò)去的幾十年中已經(jīng)廣泛探究了導(dǎo)致胰島素抗性的機(jī)制。所廣泛接 受的是，游離脂肪酸(FFA)在胰島素敏感的非脂肪組織(肝臟&肌肉)中的積累可以損 害在這些組織中的胰島素介導(dǎo)的葡萄糖吸收。而且，通過(guò)肝臟的增加的脂類(lèi)產(chǎn)生增強(qiáng)了 脂肪酸氧化作用，降低了肝臟葡萄糖產(chǎn)生的胰島素依賴(lài)性抑制并且因此增加了糖異生作 用(gluconeogenesis) (GNG)，進(jìn)一步惡化了高血糖癥。T2D的發(fā)展與其他代謝紊亂相關(guān)聯(lián)。胰島素抗性簇、受損的葡萄糖耐受、動(dòng)脈 高血壓、腹部肥胖以及血脂障礙(dyslipidemia)，稱(chēng)為代謝性綜合征(綜合征X)，已經(jīng) 被成人治療組IlKAdult Treatment Panel III) (ATPIII)定義為構(gòu)成主要的心血管危險(xiǎn)的基礎(chǔ) 的一組因素。許多臨床前研究顯示出胰島素在T2D患者中的高血壓的發(fā)展中起到主要作 用。然而，臨床護(hù)理的首要焦點(diǎn)是診斷并且治療在葡萄糖代謝中的異常情況。的確，如 由英國(guó)前瞻性糖尿病研究(UKProspective Diabetes Study) (UKPDS, 1998)所報(bào)道，高血 糖是微脈管系統(tǒng)并發(fā)癥的一個(gè)主要危險(xiǎn)因素。顯示出，在T2D患者中，接近正常的葡萄 糖水平的維持預(yù)防了如神經(jīng)病變(neuropathy)(發(fā)生在50%至60%的T2D患者中)、視網(wǎng) 膜病(retinopathy)以及腎病(nephropathy)(糖尿病在美國(guó)是盲和末期腎功能衰竭的最重要 原因)的缺陷的發(fā)作。來(lái)自噻唑烷二酮(thiazolidinediones) (TZDs)類(lèi)(自從I"7，在美國(guó)可得)(現(xiàn)在由羅格列酮(Rosiglitazone) ( Avandia )、吡格列酮(Pioglitazone) ( Actos )、以 及曲格列酮(Troglitazone) (Rezulin )代表)的抗糖尿病藥物在提高外周的胰島素介 導(dǎo)的葡萄糖吸收中是有效的藥物。TZDs是過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR-Y)的 藥理學(xué)激動(dòng)劑，過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體是核激素受體家族的轉(zhuǎn)錄因子，其控制了 在葡萄糖和脂類(lèi)代謝中的基因表達(dá)。PPAR-Y藥物通過(guò)增加前脂肪細(xì)胞分化并增殖成 為成熟的脂肪細(xì)胞，減少了高血糖癥、高血脂癥(hyperlipidemia)以及血胰島素過(guò)多癥 (hyperinsulinemia)并且改進(jìn)了胰島素敏感性，尤其在外周脂肪貯藏所。因此，PPAR-Y 激活增加了外周脂肪細(xì)胞中的脂肪酸貯藏，降低了循環(huán)的脂肪酸并且減少了肌肉和肝臟 中的甘油三酯。PPAR-Y藥物改變了一些循環(huán)因子的表達(dá)，所述循環(huán)因子如脂連蛋白、 TNFa以及抵抗素，它們的水平與胰島素抗性以及治療響應(yīng)高度相關(guān)。T2D以及胰島素抗性的適當(dāng)動(dòng)物模型是用于表征治療劑體內(nèi)療效的基本臨床前 工具。在過(guò)去的20年中已經(jīng)開(kāi)發(fā)的大部分T2D動(dòng)物模型是基于遺傳突變。在藥物發(fā)現(xiàn) 中，自發(fā)糖尿病(或胰島素抗性和肥胖)嚙齒動(dòng)物模型如db/db以及ob/ob小鼠，GK， ZDF以及fa/fa大鼠在世界范圍內(nèi)是最通常使用的。由于這種快速的代謝惡化，在ZDF大鼠中T2D的主要特征的復(fù)原不能通過(guò)市場(chǎng) 化的抗糖尿病藥(羅格列酮(Rosiglitazone) (PPAR- Y )以及 Raziglitazar (PPAR α γ))來(lái) 達(dá)到的。然而，顯示出，在慢性治療下的ZDF大鼠(13周)(Shibata etal.，2000)中或在 非常幼小的并且僅僅適度糖尿病動(dòng)物(Brand etal.，2003 ； Pickavance etal., 2005)中達(dá)到 了 T2D的預(yù)防。一個(gè)團(tuán)隊(duì)報(bào)道了，在被使用DPPIV抑制劑的介入治療使用的輕微不同 的 T2D 模型(稱(chēng)為 VDF 大鼠(Vancouver Diabetic Fatty,源于 Zucker 和 fa/fa 品系)中， 能夠部分地改進(jìn)葡萄糖耐受、外周胰島素敏感度、以及β細(xì)胞功能。已經(jīng)注意到，這種 模型不是糖尿病的，其特征在于不存在高血糖癥、弱的葡萄糖無(wú)耐受力并且沒(méi)有外周胰 島素抗性。本發(fā)明的目標(biāo)在于開(kāi)發(fā)對(duì)于胰島素抗性、肥胖癥、2型糖尿病及其并發(fā)癥的動(dòng)物 模型，所述動(dòng)物模型克服了在現(xiàn)有技術(shù)中描述的動(dòng)物模型的至少一些缺點(diǎn)，主要是突變 的途徑對(duì)目標(biāo)途徑的潛在干擾，即瘦蛋白途徑或其他。本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供產(chǎn)生對(duì)于胰島素抗性、肥胖癥、2型糖尿病的非人動(dòng) 物模型的方法。所述方法包括以下步驟用高脂肪高糖飲食飼養(yǎng)大約9周齡的小鼠大約 20周。 在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述小鼠是雄性小鼠。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述小鼠是C57BL/6J小鼠。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，高脂肪高糖飲食的飼養(yǎng)進(jìn)行了大約22周。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該小鼠處于正常食物飲食直到開(kāi)始飼養(yǎng)高脂肪高 蔗糖飲食。在又一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述食物飲食包括KLIBA 3436飲食。圖4中給出了 KLIVA 3436飲食的詳細(xì)組成。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述高脂肪高糖飲食是定制的SSNIFFD12492改 進(jìn)的60%千卡脂肪飲食。圖5中給出了 SSNIFF D12492改進(jìn)的60%千卡飲食的詳細(xì)組 成。
在第二個(gè)方面，本發(fā)明提供了用于產(chǎn)生對(duì)于2型糖尿病并發(fā)癥的非人動(dòng)物模型 的方法，所述方法包括用高脂肪高糖飲食飼養(yǎng)大約9周齡的小鼠大約30周。用高脂肪高 糖飲食飼養(yǎng)了大約30周的小鼠是對(duì)于胰島素抗性、肥胖癥、2型糖尿病以及2型糖尿病并 發(fā)癥的合適的動(dòng)物模型。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，高脂肪高糖飲食的飼養(yǎng)進(jìn)行了大約32周。在第二個(gè)方面，本發(fā)明提供了鑒別和/或測(cè)試用于治療2型糖尿病和/或其并發(fā) 癥的化合物的方法。所述方法包括向由本發(fā)明的方法產(chǎn)生的小鼠給予目的化合物并且確 定糖尿病和/或至少一種2型糖尿病并發(fā)癥是否由所述化合物逆轉(zhuǎn)的步驟。術(shù)語(yǔ)“2型糖尿病并發(fā)癥”包括疾病如心血管病、視網(wǎng)膜病、神經(jīng)病變、腎病以 及NAFLD (非酒精性脂肪肝病)。在用于鑒別和/或測(cè)試用于治療2型糖尿病的化合物的方法的示例性實(shí)施方案 中，向根據(jù)本發(fā)明產(chǎn)生的小鼠給予候選化合物，任何在所述小鼠中測(cè)量與胰島素抗性、 肥胖和/或2型糖尿病相關(guān)的指示值(例如，血糖水平、或在血液或其他組織中的胰島 素水平)。此后，將得到的指示值與對(duì)照動(dòng)物的指示值相比?；诒容^的結(jié)果，證實(shí)所 述候選化合物是否能夠緩解或消除2型糖尿病的癥狀。具體地，測(cè)量被給予了候選化合 物的本發(fā)明的小鼠的血糖水平。當(dāng)所測(cè)量的血糖水平比對(duì)照動(dòng)物(沒(méi)有與所述候選化合 物接觸)的血糖水平低時(shí)，所述候選化合物可以被選定為用于治療2型糖尿病的一種治療 劑。而且，可以測(cè)量被給予候選化合物的本發(fā)明的小鼠的胰島素水平，作為與胰島 素抗性、肥胖癥和/或2型糖尿病相關(guān)的指示值。當(dāng)所測(cè)量的胰島素水平比對(duì)照動(dòng)物(沒(méi) 有與所述候選化合物接觸)的胰島素水平低時(shí)，所述候選化合物可以被選定為用于治療2 型糖尿病的治療劑。本發(fā)明的動(dòng)物模型允許測(cè)試化合物治療與2型糖尿病相關(guān)的并發(fā)癥(例如腎毒性 以及NAFLD)的能力，原因在于本發(fā)明的小鼠發(fā)展了與2型糖尿病相關(guān)的并發(fā)癥(例如 腎毒性以及NAFLD)。例如，通過(guò)確定化合物是否能恢復(fù)和/或減輕由本發(fā)明的動(dòng)物發(fā) 展的2型糖尿病并發(fā)癥(例如腎毒性和NAFLD)，可以檢測(cè)測(cè)試化合物治療如上所述2型 糖尿病的能力以及它治療與2型糖尿病相關(guān)的并發(fā)癥的能力。候選化合物的實(shí)例包括肽、蛋白質(zhì)、非肽化合物、合成的化合物、發(fā)酵產(chǎn)物、 細(xì)胞提取物、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、植物提取物、組織提取物以及哺乳動(dòng)物(例如小鼠、大 鼠、豬、牛、綿羊、猴子、人等等)的血漿。這些化合物可以是新的化合物或已知的化 合物。這些候選化合物可以形成鹽。候選化合物的這些鹽的實(shí)例包括與生理上可接受的 酸(例如有機(jī)酸以及無(wú)機(jī)酸等)或與堿(例如金屬鹽等)的鹽。特別地，生理上可接受 的酸式加成鹽是優(yōu)選的。這些鹽的例子包括與無(wú)機(jī)酸(例如鹽酸、磷酸、氫溴酸、硫酸 等)的鹽、或與有機(jī)酸(例如乙酸、甲酸、丙酸、富馬酸、馬來(lái)酸、琥珀酸、酒石酸、檸 檬酸、蘋(píng)果酸、草酸、苯甲酸、甲磺酸、苯磺酸等等)的鹽。在第三個(gè)方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的小鼠用于鑒別和/或測(cè)試用于治療2型糖 尿病和/或其并發(fā)癥的化合物的用途。附圖簡(jiǎn)述


圖1展示了用高脂肪/蔗糖(HF-HS飲食)飼養(yǎng)的小鼠的體重相對(duì)于用食物飲食飼養(yǎng)的小鼠的體重?？梢钥闯龈咧?蔗糖飼養(yǎng)的小鼠發(fā)展了肥胖癥，圖2展示了高脂肪/蔗糖(HF-HS飲食)飼養(yǎng)的小鼠的血糖濃度相對(duì)于食物飲食 飼養(yǎng)的小鼠的血糖濃度?？梢钥闯龈咧?蔗糖(HF-HS飲食)飼養(yǎng)的小鼠發(fā)展了空腹 高血糖，圖3展示了在19-22周特殊飲食后相對(duì)于在食物飲食下對(duì)比的小鼠空腹血漿胰島 素水平(DIO =飲食誘導(dǎo)的肥胖癥)。可以看出高脂肪/蔗糖(HF-HS飲食)飼養(yǎng)的小鼠 發(fā)展了空腹血胰島素過(guò)多癥(hyperinsulinemia)，圖4展示了 KLIBA 3436飲食的組成，圖5展示了 SSniff EF M D12492mod.60%脂肪能量飲食的組成，圖6a展示了 42周齡DIO小鼠(高脂肪飲食)的肝臟的H&E染色。可以看出 高脂肪/蔗糖(HF-HS飲食)飼養(yǎng)的小鼠發(fā)展了嚴(yán)重的肝脂肪變性(steatosis)，圖6b展示了 25周齡的食物飲食飼養(yǎng)的小鼠(對(duì)照)的肝臟的H&E染色，圖7a展示了 42周齡DIO小鼠(高脂肪飲食)的肝臟的天狼星紅染色(Sirius red staining),圖7b展示了 25周齡的食物飲食飼養(yǎng)的小鼠(對(duì)照)的肝臟的天狼星紅染色，可 以看出高脂肪/蔗糖(HF-HS飲食)飼養(yǎng)的小鼠發(fā)展了嚴(yán)重的肝纖維化，圖7c展示了 42周齡DIO小鼠(高脂肪飲食)的肝臟的馬森三色染色(Trichrome Masson staining)?？梢钥闯龈咧?蔗糖(HF-HS飲食)飼養(yǎng)的小鼠發(fā)展了嚴(yán)重的肝脂 肪變性，圖8a展示了 42周齡DIO小鼠(高脂肪飲食)的腎臟的H&E染色?？梢钥闯龈?脂肪/蔗糖(HF-HS飲食)飼養(yǎng)的小鼠發(fā)展了嚴(yán)重的腎小球肥大(glomerular hypertophy) 以及系膜膨脹(mesangial expansion),圖8b展示了 25周齡的食物飲食飼養(yǎng)的小鼠(對(duì)照)的腎臟的H&E染色，圖8c展示了 42周齡DIO小鼠(高脂肪飲食)的腎臟的H&E染色?？梢钥闯?高脂肪/蔗糖(HF-HS飲食)飼養(yǎng)的小鼠發(fā)展了嚴(yán)重的腎小球硬化，圖8d展示了 25周齡的食物飲食飼養(yǎng)的小鼠(對(duì)照)的腎臟的H&E染色，圖8e展示了 42周齡DIO小鼠(高脂肪飲食)的腎臟的馬森三色染色?？梢钥?出高脂肪/蔗糖(HF-HS飲食)飼養(yǎng)的小鼠發(fā)展了嚴(yán)重的腎臟炎癥，并且圖8f展示了 25周齡的食物飲食飼養(yǎng)的小鼠(對(duì)照)的腎臟的馬森三色染色。實(shí)驗(yàn)部分在小鼠中引入糖尿病以及肥胖癥-小鼠的供應(yīng)商CharlesRiver Germany-背景雄性C57BL/6J小鼠-居住條件標(biāo)準(zhǔn)的-12小時(shí)光周期，-飲食正常的食物飲食直到9周齡，然后動(dòng)物處于高脂肪高蔗糖(HF-HS)(能 量60%來(lái)自脂肪，20%來(lái)自糖-SSNIFF Dl2492mod.)下持續(xù)14周并且在23周齡轉(zhuǎn)移 至丨J Roche。-適應(yīng)周期在Roche的6-20周中，動(dòng)物維持HF-HS飲食-痩的對(duì)照動(dòng)物10只動(dòng)物的組保持在標(biāo)準(zhǔn)食物飲食KLIBA3436下
-對(duì)于實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備好的29-31周齡的或42周齡的動(dòng)物用于糖尿病并發(fā)癥的研究-在實(shí)驗(yàn)階段維持HF-HS飲食在DIO小鼠中的NASH非酒精性脂肪肝病(NAFLD)估計(jì)影響了至少四分之一美國(guó)人群并且是異常肝 功能的最常見(jiàn)原因。NAFLD可能起因于作為代謝綜合征的成員的肝脂類(lèi)代謝的調(diào)節(jié)異 常，它共同地表示為內(nèi)臟肥胖、血脂障礙(dyslipidemia)、動(dòng)脈硬化(atherosclerosis)、 以及胰島素抗性。雖然對(duì)于多種情況下的良性預(yù)后，NAFLD可以進(jìn)展至非酒精性 脂肪性肝炎(NASH)、肝纖維化(liver fibrosis)、肝硬化(cirrhosis)、以及肝細(xì)胞癌 (hepatocellularcarcinoma)，并且NAFLD-至-NASH的轉(zhuǎn)變機(jī)制的理解尚是難懂的。伴隨 慢性炎癥的脂類(lèi)代謝的異常是動(dòng)脈硬化和NASH的發(fā)展的中心途徑。的確，已經(jīng)提出了
“二次打擊”理論，并且在NAFLD患者中促成NASH的與脂類(lèi)和膽固醇代謝以及炎癥有 關(guān)的第二敏感性因素的識(shí)別在這種疾病的治療中是一個(gè)重要步驟。對(duì)NAFLD和NASH 進(jìn)展的敏感性可以包括遺傳變異、傳染、環(huán)境暴露、以及飲食貢獻(xiàn)，它可以導(dǎo)致慢性炎 癥和/或氧化應(yīng)激。通過(guò)組織學(xué)評(píng)價(jià)在42周齡DIO小鼠對(duì)25周齡DIO小鼠以及25周齡食物飼養(yǎng)的 瘦小鼠的肝臟中觀察到以下?lián)p傷(參見(jiàn)圖6和7):·中等程度至嚴(yán)重?cái)U(kuò)散性大血管肝細(xì)胞性空泡化，它與擴(kuò)散性大血管脂類(lèi)沉積 相關(guān)(通過(guò)脂肪染色而證實(shí))(圖6a對(duì)圖6b)·最小至輕微膽管以及肝巨噬細(xì)胞增生(圖6a對(duì)圖6b)·最小至顯著的單核炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)(圖6a對(duì)圖6b)·最小至中等纖維化(由天狼星紅和馬森三色染色而證實(shí))(圖7a和7c對(duì)7b)表 1
42周齡DIO小鼠中的NASH 在DIO小鼠中的相關(guān)肝臟變化的發(fā)生25周齡 食物25周齡 DIO42周齡 DIO膽管增生0/100/107/10肝巨噬細(xì) 胞增生0/100/105/10脂類(lèi)沉積， 大血管的， 擴(kuò)散0/108/107/10浸潤(rùn)，單核 的5/107/108/10纖維化1/102/1010/10
在DIO小鼠中的糖尿病性腎病糖尿病性腎病是由腎小球中的毛細(xì)管的血管病引起的進(jìn)行性腎病。其特征在于 腎病綜合征以及結(jié)節(jié)性腎小球硬化(glomerulosclerosis)。它是由于長(zhǎng)期的糖尿病，并且在 許多西方國(guó)家是對(duì)于透析的首要原因。由于2型糖尿病現(xiàn)今會(huì)在較小的年齡發(fā)生，同樣 預(yù)期患者在通常的較大年齡(50歲與70歲之間)之前會(huì)發(fā)展腎病。該病是進(jìn)行性的并且 可能在初始損傷后2或3年引起死亡，并且在男性中是更頻繁的。糖尿病性腎病在美國(guó)是 慢性腎功能衰竭以及末期腎病的最常見(jiàn)原因?；加?型和2型糖尿病兩者的人是處于危 險(xiǎn)的。如果血糖水平被較差地控制，這種危險(xiǎn)是更大的。另外，一旦腎病發(fā)展了，進(jìn)行 的最大速率見(jiàn)于他們的血壓受到不足控制的患者中。同樣地，在他們的血液中具有高膽 固醇水平的人比其他人具有更大的危險(xiǎn)。糖尿病性腎病繼續(xù)變得逐漸更重。當(dāng)由糖尿病 引起時(shí)，比起其他原因，慢性腎功能衰竭的并發(fā)癥更可能更早出現(xiàn)，并且進(jìn)行更快。一 旦發(fā)展了末期腎病，透析可能是必要的。在這個(gè)時(shí)期，必須考慮腎移植。甚至在開(kāi)始透 析之后或在移植之后，患有糖尿病的人比不患糖尿病的人傾向于情況更嚴(yán)重。治療的目標(biāo)是放慢腎損傷的進(jìn)行并且控制相關(guān)的并發(fā)癥。一旦確定了蛋白尿， 主要可用的治療是ACE抑制劑以及血管緊張肽受體阻滯劑，它們通常降低了蛋白尿水平 并且放慢了疾病的進(jìn)展，但是具有一些問(wèn)題。關(guān)鍵問(wèn)題是，雖然是有效的治療，在患有 糖尿病性腎病的患者中對(duì)于ESRD(末期腎病)的剩余風(fēng)險(xiǎn)還是高的(大約16%)。如果 一種新藥通過(guò)延遲腎小球硬化可以提供一種實(shí)質(zhì)上相對(duì)的風(fēng)險(xiǎn)減小，這還會(huì)導(dǎo)致主要的 絕對(duì)風(fēng)險(xiǎn)減小。對(duì)于以更有效地方式預(yù)防或減慢糖尿病性腎病的發(fā)生的藥物以及對(duì)于被更好地 耐受的并且具有更少的不良作用的治療存在極大的醫(yī)學(xué)需要。通過(guò)組織學(xué)評(píng)價(jià)在42周齡DIO小鼠對(duì)25周齡DIO小鼠以及25周齡食物飼養(yǎng)的 瘦小鼠的腎臟中觀察到以下?lián)p傷(參見(jiàn)圖8)·最小至輕微的腎小球肥大(圖8a對(duì)圖8b)·最小至顯著的系膜膨脹(圖8c對(duì)圖8d)·最小至輕微的腎小球硬化(圖8c對(duì)圖8d)·最小至中等的單核炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)(圖8e對(duì)8f)表2
DIO小鼠中的糖尿病性腎病 相關(guān)腎臟變化的發(fā)生25周齡 食物25周齡 DIO42周齡 DIO腎小球肥 大0/103/104/10
8
系膜膨脹3/108/1010/10腎小球硬 化0/100/104/10浸潤(rùn)，單核 的4/107/109/10 雖然在此展示并且描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，所清楚地理解的是，本發(fā)明 不限于此并且另外地在以下權(quán)利要求的范圍內(nèi)可以是不同地實(shí)施并實(shí)踐的。
權(quán)利要求
1.產(chǎn)生關(guān)于胰島素抗性、肥胖癥以及2型糖尿病的非人動(dòng)物模型的方法，包括用高脂 肪高糖飲食飼養(yǎng)大約9周齡的小鼠大約20周。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述小鼠是雄性小鼠。
3.權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述小鼠是C57BL/6J小鼠。
4.權(quán)利要求1至3所述的方法，其中高脂肪高糖飲食的飼養(yǎng)進(jìn)行大約22周。
5.權(quán)利要求1至4所述的方法，其中所述小鼠處于正常食物飲食直到開(kāi)始飼養(yǎng)高脂肪 高蔗糖飲食。
6.權(quán)利要求5所述的方法，其中所述食物飲食包括KLIBA3436飲食。
7.權(quán)利要求1至6所述的方法，其中所述高脂肪高糖飲食是定制的SSNIFFD12492改 進(jìn)的60%千卡脂肪飲食。
8.權(quán)利要求1至7的方法，用于產(chǎn)生關(guān)于2型糖尿病并發(fā)癥的非人動(dòng)物模型，所述方 法包括用高脂肪高糖飲食飼養(yǎng)小鼠大約30周。
9.權(quán)利要求8所述的方法，其中高脂肪高糖飲食的飼養(yǎng)進(jìn)行大約32周。
10.鑒別和/或測(cè)試用于治療2型糖尿病和/或其并發(fā)癥的化合物的方法，包括向由 權(quán)利要求1至9中所述的方法產(chǎn)生的小鼠給予目的化合物和確定糖尿病和/或至少一種其 并發(fā)癥是否由所述化合物逆轉(zhuǎn)的步驟。
11.權(quán)利要求1至9所述的小鼠用于鑒別和/或測(cè)試治療2型糖尿病和/或治療與2 型糖尿病相關(guān)的并發(fā)癥的化合物的用途。
12.如前所描述的發(fā)明。
全文摘要
本發(fā)明提供了產(chǎn)生糖尿病小鼠的方法及其在藥物開(kāi)發(fā)中的用途。
文檔編號(hào)A01K67/027GK102014614SQ200980115972
公開(kāi)日2011年4月13日 申請(qǐng)日期2009年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月6日
發(fā)明者斯特凡妮·托佐 申請(qǐng)人:霍夫曼-拉羅奇有限公司